抗菌组合物的制作方法

专利名称：：抗菌组合物的制作方法抗菌组合物本发明涉及含有噬菌体(“噬菌体(phage)“)的制剂和使用高浓度的噬菌体和/或含有噬菌体K和/或P68的制剂治疗细菌感染，或对表面消毒的方法。特别地，本发明利用被称为"外溶菌作用"的现象。基于化学上的抗生素形式的抗菌剂(即，非病毒药剂)，诸如青霉素或四环素是众所周知的。这类抗生素的问题在于对其的耐药性变得日益普遍。赋予抗生素耐药性的突变或编码抗生素耐药性酶(诸如青霉素酶)的基因的突变在全世界的病原菌中也日益普遍。例如，甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)细菌是一种日益普遍的感染形式，其通常在医院在由于其它原因的手术过程中获得。使用常规的抗生素极难治疗MRSA感染。一种治疗细菌感染的替代方法是用被称为噬菌体的病毒感染细菌。这种"噬菌体治疗"在最初二十世纪初产生，但是在二十世纪四十年代自从出现抗生素后在西方很少使用。在东欧已经进行了更广泛的工作。噬菌体(还称作"噬菌体(phage)“)针对于细菌细胞的具体种类。它们不能感染更复杂的生物体的细胞，其原因在于在关键细胞内的结构以及细胞表面组成的重大差异。大多数噬菌体具有诸如尾丝的结构，该结构确保噬菌体结合到它们的靶细菌表面的特定的分子之上。随后噬菌体内的病毒DNA或某些噬菌体内的RNA被注入，其通常通过尾部进入宿主细胞，然后直接产生子代噬菌体。发现感染不同细菌的不同种类的噬菌体。一般而言，它们可以从其中特定细菌生长的环境中(例如从污水或粪便中)分离。噬菌体在样本中的百分比可通过使样本通过滤器来测定，该滤器具有足够小的孔径从而防止细菌通过。所述过滤的提取物通常与生长培养基相混合，加入合适的宿主细菌，然后将其铺到例如琼脂平板上。在所得的细菌菌苔上所存在的亮点(被称为噬斑)表明存在一种或多种噬菌体，该噬菌体引起细菌溶解。仅仅杀死细菌的噬菌体被称作"专性溶解"噬菌体。专性溶解噬菌体以核酸物质(通常为DNA)的形式存在于细菌细胞的外部，其被蛋白质外壳围绕。所述蛋白质外壳通常含有一个或多个连接它的分子，使得噬菌体在细菌的表面上连接至特定的分子。一旦与细菌结合，所述DNA获得进入细菌宿主的入口，在该细菌宿主中它被转录并且翻译成用于新噬菌体复制和组装所需的不同蛋白质。所述DNA也被复制并且被包装进入新噬菌体，其在细菌细胞溶解时被释放。除了专性溶解噬菌体之外，存在可溶性噬菌体或温性噬菌体。这些温性噬菌体具有两个生命周期，在其中一个生命周期它们溶解感染的细胞，并且在另一个生命周期它们进入原噬菌体状态。专性溶解噬菌体总是不得不从外部感染，重编宿主细胞并且通过拆开或溶解感染的细胞突然释放噬菌体。“温性"噬菌体可以将它们的DNA整合进入宿主细菌DNA，从而导致作为原噬菌体在特定的细菌和它们的子代内实质上永久的关联。某些原噬菌体在物理上并不整合进入染色体，但是其作为自主复制子存在。原噬菌体指导阻遏物的合成，该阻遏物阻断了其自身基因的表达并且也阻断了任何紧密相关的温性噬菌体的表达。偶尔，原噬菌体可以逃脱其阻遏物的调控。然后，原噬菌体DNA可通过位点专一的重组从基因组中切割、复制，并且子代在大多数情况下通过溶菌从宿主细胞中释放。专性溶解噬菌体已经被用于治疗细菌感染。分离的专性溶解噬菌体已经被施用于伤口或静脉注射，从而它们杀死细菌。噬菌体的益处在于它们是自我复制的，使用像一百个左右的那么少的噬菌体能够杀死像一亿个的那么多的细菌。噬菌体通过杀死细菌一直简单地复制自己直到它们将细菌从个体或环境中清除。例如，WO01/51066公开了用一种或多种专性溶解噬菌体治疗患者的方法。类似地，US4，957，686公开了用噬菌体治疗龋齿的方法。使用噬菌体的一个可能的问题是患者自己的身体通常对噬菌体具有免疫应答并且将噬菌体从血液中清除。US5，660，812、US5，688，501和US5，766，892均显示为了改善噬菌体在待治疗患者血液中的半衰期选择噬菌体的方法。US5，811，093讨论了选择编码一种病毒壳体(外壳)蛋白(病毒壳体E)的修饰基因使得噬菌体在动物的循环系统中存活更长。在近来的患者的病例中，修饰被确定为在基因内的点突变。与现有技术用于消毒或处理细菌污染物或疾病相关的问题在于噬菌体通常是菌株特异的。例如，在细菌内存在的原噬菌体可阻断来自感染的噬菌体的基因表达，从而阻止感染的噬菌体的复制并且阻止溶菌和杀死细菌。原噬菌体也可引起新来的噬菌体DNA的破坏。这在以前一直意味着噬菌体需要与细菌匹配，通常需要复杂的细菌基因分析，或者需要组合使用许多不同的噬菌体。在WO03/080823中公开了生产一组不同的噬菌体，诸如一组衍生自温性噬菌体的vir突变体。自从二十世纪三十年代后期和四十年代初期以来，被称作"外溶菌作用"的现象已经为公众所知。DelbruckM.(J.Gen.Physiol.,(1940)，第643-660页)讨论了两个概念“内溶菌作用"和"外溶菌作用"。“内溶菌作用"是其中细菌细胞被噬菌体感染，该噬菌体在细胞内繁殖，并且所述细胞溶解，释放新噬菌体并杀死该细菌。这是专性溶解噬菌体通常所使用的过程。在另一方面，"外溶菌作用"不涉及噬菌体在细菌细胞内的复制。Delbrilck注意到噬菌体被细菌细胞吸附，但是并未释放子代噬菌体。这导致进入球形体的细菌细胞的变性并且通过溶菌杀死细菌。值得注意的是，需要高于阈值的高浓度的噬菌体以诱导这一现象。我们现在知道这是(至少部分是)由于细菌细胞壁被以溶解形式存在的酶或附着于噬菌体颗粒的酶消化(Stent.G.S.，MolecularBiologyofBacterialParticles,W.H.Freeman&Co.(1963)，第71-87页)。已经进行了分离和表征被称作"溶解素"的溶菌酶的大量工作。溶解素还被称作胞壁质水解酶。例如，RalstonD.J.，等(J.Gen.Physiol.(1957)，41(2):343_358)研究了噬菌体和病毒溶解素(virolysin)对细菌的作用。病毒溶解素已经从噬菌体-感染的细胞的裂解物中获得。同一研究小组继续报道了这一现象。在1964年他们报道了外溶菌作用似乎需要通过噬菌体的促进感受性，随后通过溶解素消化细胞壁(RalstonD.，等，J.Bacteriol.(1964)，88676-681)。科学界将分离的溶解素的用途集中于潜在的治疗应用。还研究了其它分离的溶菌-相关的酶和蛋白质，诸如穴蛋白(holin)。穴蛋白涉及细胞膜的透化作用。例如，NelsonD.，等(PNAS,(2001),98:4107_4112)公开了纯化的溶解素用于治疗细菌感染的用途。使用经口引入纯化的溶解素能够治疗在上呼吸道的链球菌感染。WO01/19391和US2002/0094319还公开了纯化的专性溶解酶，诸如溶解素的用途。甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)特别是在有病的、年长的或缺乏免疫力的患者中可以引起系统感染或脓肿和溃疡。它日益成为在医院中死亡的主要原因或促进在医院中死亡。MRSA可存在于医生或来访者的鼻腔，而没有任何明显的疾病症状。但是，细菌可通过人与人之间，包括患者之间传播。因此，杀死细菌有助于预防疾病。在WO03/080823中给出的一个可能的方法是使用一组噬菌体。但是，存在着许多不同的MRSA菌株。因此，所述组通过细菌的专性溶解感染可能不杀死所有的MRSA。本发明人目前已经意识到提供足以诱导外溶菌作用的高浓度噬菌体提供了一种快速杀死细菌，而无需为了引起内溶菌作用而感染细菌的方法。这扩大了可用噬菌体进行治疗的菌株的数量，同时仍在噬菌体的易感菌株中提供了内溶菌作用。其它细菌，诸如艰难梭菌(C.difficile)也成为医院中的难题，并且其通过与其它患者、健康的工作人员或来访者接触而传播或从外周环境中传播。目前，医院利用酒精洗手以帮助防止MRSA传染。但是，这种酒精洗涤通常不适合在鼻腔或皮肤破损区域的敏感内层使用。因此，需要生产适用于杀死细菌，诸如MRSA或艰难梭菌的组合物。本发明人出人意料地确认采用外溶菌作用提供了制备更简单、成本有效的制剂。外溶菌作用提供了一种快速杀死细菌的方法。它允许在不需要抗生素或有害的或刺激性的化学制品的情况下杀死耐抗生素的细菌。此外，利用全部的噬菌体具有下述益处如果噬菌体经由内溶菌作用能够感染细菌，那么制剂可能具有双重的进攻模式；通过外溶菌作用和内溶菌作用杀死，即使制剂的浓度被体液(诸如，粘液)所稀释。此外，已经发现本发明人所使用的优选的噬菌体，即噬菌体K和/或噬菌体P68—起或单独地具有对抗范围广泛的细菌菌株的活性和下述的其它益处。噬菌体K先前已经被表征为抗-MRSA的噬菌体。0'FlahertyS.0.，等，(Appl.Environ.Microbiol.(2005),71(4):1836_1842)研究了噬菌体K对不同的金黄色葡萄球菌耐药菌株的作用。例如，TakacM.和BlasiU.研究了噬菌体P68(Antimicrob.AgentsandChemo.(2005)=2934-2940)本发明人已经发现噬菌体K和/或P68的感染的MRSA菌株谱互相补充，使得这两个毒株的组合特别是适用于抗-MRSA组合。噬菌体K具有其它的益处。革兰式阴性细菌的菌壁主要由肽多糖组成，同时另外革兰式阳性细菌含有大量的磷壁酸(一种阴离子多元醇磷酸盐聚合物)。已知自从二十世纪七十年代以来对噬菌体K抵抗的金黄色葡萄球菌突变体缺乏核糖醇壁酸(ShawD.R.D.等(1970)J.Biol.Chem.245(19)5101-5106)。噬菌体K通过磷壁酸结合至细菌细胞。已经发现缺乏细胞壁的磷壁酸减少与内皮细胞的相互作用，而磷壁酸需要附着于鼻细胞(WeidenmaierC等Int.J.MedicalMicrobiol(2008)298，505-513)。因此，如果存在磷壁酸，噬菌体K将结合至细菌。如果细菌通过减少细胞壁内的磷壁酸突变为对噬菌体K抵抗的话，那么这将降低该细菌结合鼻细胞的能力。这将有助于减少噬菌体K治疗后所残留的任何细菌的毒力。本发明人的实验还发现，例如，高浓度的噬菌体K及其宿主范围变化的衍生物仍然能杀死金黄色葡萄球菌，即使它们突变为对专性溶解感染抵抗的。本发明的第一个方面提供用于对表面消毒的含有载体和至少一种类型的噬菌体的消毒剂组合物，其特征在于当细菌存在于待消毒的表面时，在组合物中以足够高的浓度提供噬菌体从而在细菌中诱导外溶菌作用，其中该噬菌体是该细菌的病原体。引起外溶菌作用所需的噬菌体的浓度可在实验上测定，例如，通过在正常生长温度将细菌细胞与不同浓度的所述噬菌体温孵并且在所述噬菌体的浓度观察如培养物松散浊度(cultureloosingturbidity)所示的细菌细胞溶解。在组合物中的噬菌体通常来自预先确定的特定的细菌种类。在本文所使用的术语"病原体"意旨能够特定结合至一种细菌的表面上的噬菌体，并且当在高浓度时能够诱导外溶菌作用。噬菌体不必具有诱导内溶菌作用的能力。如上所述，在相同细菌种类的不同的菌株中存在不同的原噬菌体是指特定的噬菌体经由内溶菌作用机制可以或不可以诱导细菌的溶菌。但是，该噬菌体仍然可以结合至该细菌的表面并且仍然经由外溶菌作用机制诱导溶菌。优选地，噬菌体的浓度是噬菌体的噬菌斑形成单位(pfu)细菌的集落形成单位(Cfu)为至少41、51、61、71、81、9UlO1、至少201、401、501，至少1001。所述噬菌体的噬菌斑形成单位在细菌上测定，该细菌能够经由内溶菌作用被噬菌体溶解。可以理解的是，不同类型的噬菌体能够在不同的细菌上诱导外溶菌作用的效力将随着噬菌体的不同而变化。诱导这种现象所需的浓度可以由常规实验测定。有可能地，可以对任何表面进行处理，其中在所述表面上施用消毒剂组合物以产生足够高浓度的噬菌体从而产生所需的外溶菌作用。因此，所述表面可以是例如，医院内的医疗设备、被褥、家具、墙壁或地板。但是，最优选地，待处理的表面是哺乳动物的外部皮肤，例如哺乳动物的鼻腔或创伤表面或表面内的切口。优选地，所述哺乳动物是人类。消毒剂组合物可以喷雾剂或洗液的形式用于表面。所述组合物可以是洗手液。优选地，所述组合物是用于局部施用的制剂，它可以采用洗剂、霜剂、软膏剂、糊剂、凝胶剂、泡沫剂的形式或众所周知的作为用于局部给药的载体的其它物理形式。这种增稠的局部制剂是特别有益的，其原因是该制剂粘附于材料所放置的皮肤区域，从而允许将集中的高浓度的噬菌体引入待消毒的特定区域。例如，基于石蜡-和羊毛脂的霜剂特别适用于施用于鼻腔的产品是本领域众所周知的。但是，也可以使用其它增稠剂，诸如聚合物增稠剂。所述制剂还包括下述的一种或多种水、防腐剂、表面活性剂(activesurfactants)、乳剂、抗氧化剂或溶剂。可以使用两种或多种不同的噬菌体。例如，相同细菌种类的不同的菌株的表面外壳有时会变化。因此，为了增加特定制剂可以在特定的表面上的特定种类的细菌种群中诱导外溶菌作用的可能性，优选使用能够感染相同细菌种类的不同菌株的两种或多种不同的噬菌体。这还增加了内溶菌作用还可用作在特定的表面上杀死细菌的辅助方法的可能性。可选择地或另外地，可使用两种或多种不同类型的噬菌体，噬菌体各自可以特定用于不同细菌种类。这允许在特定的表面上可能存在许多不同细菌的情境下将要使用的特定制剂作为对照。优选地，所述噬菌体是选自下述细菌的病原体葡萄球菌属、螺杆菌属、克雷伯氏菌属、利斯特氏菌属、分枝杆菌属、埃希氏菌属、脑膜炎双球菌、弯曲杆菌属、链球菌属、肠球菌属、志贺氏菌属、假单胞菌属、伯克霍尔德氏菌属、梭菌属、军团菌属、不动杆菌属(Acetinobacter)或沙门氏菌属。优选地，所述噬菌体是金黄色葡萄球菌、特别是MRSA或艰难梭菌的病原体。实际上，可以以在高浓度和更低浓度下使用噬菌体K和/或噬菌体P68或其突变体的组合，在高浓度下诱导不允许噬菌体繁殖的细菌菌株外溶菌作用，在较低浓度下基本上仅仅发生内溶菌作用。本发明人已经发现，在消毒剂制剂中单独使用噬菌体K或与噬菌体P68组合使用使得感染或杀死范围广泛的MRSA菌株。噬菌体K和噬菌体P68的宿主范围互相补充。因此，本发明的另一方面提供用于对表面消毒的消毒剂组合物，其含有载体、噬菌体K和/或噬菌体P68或其突变体。噬菌体K或噬菌体P68可单独使用或优选地互相组合使用或与其它噬菌体组合使用。可在无噬菌体P68或在有其它噬菌体的情况下单独使用噬菌体K。除了噬菌体K和/或噬菌体P68之外，所述组合物可包括其它类型的噬菌体。噬菌体K或P68的突变体可为点突变、缺失突变或添加突变。相对于最初的噬菌体K或P68序列，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个碱基可发生变化。这种突变体优选具有变化的宿主范围。在0‘Flaherty等的文章中详细讨论了噬菌体K(J.Bacteriol.(2004)2862-2871)，其全文被并入本文。它是含有127，395bp的DNA基因组的多价噬菌体。典型地噬菌体K基本上缺乏GATC和GGNCC位点。它典型地包含具有与利斯特氏菌属噬菌体A511同源性的大片区域。该基因组在基本噬菌体功能中还典型地包含多个内含子，其中两个在聚合酶中以及一个在溶解素基因中。在VybiralD.等的文章中表示了P68的核苷酸序列(FEMSMicrobiol·Lett(2003)，219，275-283)，其全文被并入本文。P68包含18277bp(GenbankNoAF513033)。优选地，噬菌体K或噬菌体P68的突变至少90%，最优选地至少92%、94%、96%、98%或99%与噬菌体的天然序列相同。如上所述，噬菌体可以以足够高浓度存在以诱导外溶菌作用。但是，两种噬菌体之一或两者还可以以低于诱导外溶菌作用所需的浓度存在。例如，噬菌体K和噬菌体P68各自以Pfu噬菌体cfu细菌低于51的比例存在，其中细菌的浓度是表面上的其中噬菌体K或噬菌体P68是所述细菌的病原体的所述细菌的浓度。所述组合物可局部施用于，例如哺乳动物，诸如人类的皮肤上。例如，皮肤可以是鼻腔或手上。其它表面可如上定义。组合物的形式、组合物的组分和用途可如上定义。特定用于不同细菌种类，并且实际上用于细菌的不同菌株的噬菌体是本领域众所周知的。例如，所述组合物可包含一种或多种众所周知的噬菌体，该噬菌体能够感染MRSA，包括噬菌体K和/或噬菌体P68。本发明还提供在表面上杀死细菌的方法，该方法包括将根据本发明第一方面的消毒剂组合物施用至所述表面。这可作为消毒剂来使用，例如为了防止特定细菌传播。它还可作为抑制表面上例如皮肤表面上细菌感染的方法来使用。优选地，表面是哺乳动物，诸如人类的皮肤。特别地，所述表面可以是哺乳动物的鼻腔或人类手上的皮肤。还提供了治疗细菌感染的方法，该方法包括将本发明组合物施用至感染的表面。本发明还另一方面提供用于治疗细菌感染的根据本发明第一方面的组合物。所述消毒剂组合物可施用至绷带或创伤敷料。本发明的还另一方面提供含有至少一种类型的噬菌体的绷带或创伤敷料，其特征在于当与细菌接触时在绷带或创伤敷料上以足够高的浓度提供所述噬菌体从而诱导细菌内的外溶菌作用，其中所述噬菌体是所述细菌的病原体。本发明的还另一方面提供含有噬菌体K和/或噬菌体P68或其突变体的绷带或创伤敷料。噬菌体K或P68可单独或组合使用。所述创伤敷料可以是衬垫或粘性石膏类型敷料。所述噬菌体和/或使用的浓度优选地如在本发明的前一个方面中所定义的。在施用至创伤敷料或绷带之前，所述噬菌体可作为消毒剂制剂或局部霜剂应用至创伤敷料或绷带。可选择地，所述创伤敷料或绷带可浸泡在含有噬菌体的载体中并且干燥以留下在敷料或绷带中浸透的噬菌体。使用本领域众所周知的技术，还可将噬菌体吸附于绷带或创伤敷料的表面上。这种方法的优点在于所述绷带或创伤敷料允许引入噬菌体从而使其与含有细菌的伤口接触。通过将绷带或创伤敷料施用至患者，还提供了抑制或治疗细菌的方法。在本发明的组合物中优选使用噬菌体K和/或噬菌体P68以及衍生自它们的噬菌体。这些在范围广泛的MRSA菌株中诱导外溶菌作用。所述两种噬菌体是本领域众所周知的。例如，噬菌体K可从ATCC(ATCC19685-B1)获得和/或P68可从Laval大学的细菌病毒Felixd'HerelleReferenceCenter(HER49)获得。还可使用其它噬菌体。对本文讨论的噬菌体的专性溶解感染不敏感的金黄色葡萄球菌细菌在生长培养基LB培养基中生长至浓度为约2xl08个集落形成单位(cfu)/ml。向在培养基中的悬浮细菌的不同等分部分中加入不同浓度的噬菌体并在37°C温孵过夜。测定培养物的浊度。浊度的降低表明细胞的外溶菌作用。将噬菌体的浓度计算为细菌细胞上的噬菌斑形成单位(pfu)，其中已知在该细菌细胞上噬菌体感染和诱导内溶菌作用以形成噬斑。噬菌体和细菌细胞的Pfu的计算是标准技术。可选择地，提供固体生长培养基(Luria-Bertani培养基)的培养皿。将对本文讨论的噬菌体的专性溶解感染不敏感的细菌与液体低密度琼脂混合，然后铺到固体生长培养基上。然后，将噬菌体制备物的不同的稀释物的等分部分(20μ1)点种到培养皿的表面上。温孵所述培养皿以使得细菌生长。对应于任何噬菌体稀释物点种位置的无细菌生长的区域表明外溶菌作用。噬菌体诱导内溶菌作用的能力可通过多种技术测定。典型地，提供固体生长培养基(Luria-Bertani培养基)的培养皿。将细菌与噬菌体和液体低密度琼脂混合，然后铺到固体生长培养基上。温孵所述培养皿以使得细菌生长。在内溶菌作用出现的地方，观察到细菌生长中的噬斑。MM表1显示噬菌体K和噬菌体P68在甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌株(MRSA)的一系列不同菌株内诱导内溶菌作用(噬斑)的能力。SAI653已经被作为标准使用。它是从ATCC(ATCC号码19685)可以公众获得的，并且是金黄色葡萄球菌金黄亚种(StaphylococcusaureussubspaureusRosenbach。剩余的菌株是分离自英国禾口海夕卜医院的患者的MRSA菌株。所述表还显示在更高浓度所述噬菌体可用于在菌株中诱导外溶菌作用，所述菌株包括经内溶菌作用所述噬菌体不形成噬斑的菌株。通过增加不同细菌菌株的数目大大增加含有噬菌体的制剂的效力，因此含有噬菌体的制剂可用于感染。关于噬菌体K，观察到在不能诱导噬斑形成的噬菌体上诱导外溶菌作用所需的噬菌体K的最小浓度是噬斑pfu对细胞为51。鍾謝本趣抵抛■細贿辨侧夕卜·側金黄色葡萄球菌噬菌体K、K*和K*710(来源于最初母体K的自发宿主范围突变体)和噬菌体P68可以引起大部分受试的金黄色葡萄球菌菌株的外溶菌作用。为了研究对专性溶解感染(内溶菌作用)抵抗的金黄色葡萄球菌突变体是否仍然对外溶菌作用敏感而进行实验。分离对噬菌体Κ*710抵抗的金黄色葡萄球菌菌株SAI669(EMRSA-15分离物)的五种独立的突变体，同样分离对噬菌体Ρ68抵抗的另外的五种突变体。对通过噬菌体Κ*710的专性溶解感染抵抗的所分离的全部突变体还表现出对通过噬菌体K和K*的专性溶解感染的抵抗性。对通过Κ/Κ*/Κ*710的专性溶解感染抵抗的突变体对通过噬菌体Ρ68的专性溶解感染敏感，并且反之亦然对通过噬菌体Ρ68的专性溶解感染抵抗的突变体仍然对通过Κ/Κ*/Κ*710的专性溶解感染敏感。测试了每个个体噬菌体-抵抗的突变体对外溶菌作用的敏感性。如下述方法进行所述测试通过在Luria培养基琼脂(1.5%w/v)的平板上的3mlLuria培养基顶层琼脂(0.7%w/v)中的金黄色葡萄球菌菌株的菌苔上接种，然后在顶层琼脂上点种20μ1的每个噬菌体的10-倍系列稀释液(最初浓度5xIO9噬斑形成单位/ml)，随后在37°C温孵20小时。在高噬菌体浓度细菌菌苔中的区域透明，但是在低噬菌体浓度没有单个噬斑，用来表明外溶菌作用。全部十个突变体对通过噬菌体K，K*和K*710的外溶菌作用敏感。但是，对Ρ68抵抗的突变体对通过Ρ68的外溶菌作用不敏感。分离了最初十个突变体的每一个的自发双重突变株，其目前对Κ*710和Ρ68均是抵抗的。筛选这些双重突变株对外溶菌作用的敏感性。所有的所述双重突变株均对通过噬菌体K，K*和Κ*710的外溶菌作用敏感，但是对通过噬菌体Ρ68的外溶菌作用不敏感。从这些结果可得出下述结论对通过噬菌体K和衍生自噬菌体K的自发宿主范围突变体的专性溶解感染抵抗的金黄色葡萄球菌的突变体仍然对外溶菌作用敏感。因此，在噬菌体治疗的上下文中，即使噬菌体K和它的宿主范围突变体衍生物突变为对专性溶解感染具有抵抗性，使用足够高浓度的噬菌体K和它的宿主范围突变体衍生物仍将杀死金黄色葡萄球菌菌株。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>权利要求用于对表面消毒的消毒剂组合物，含有载体和至少一种类型的噬菌体，其特征在于当细菌存在于待消毒的表面上时，在所述组合物中以足够高的浓度提供噬菌体，从而在细菌中诱导外溶菌作用，其中所述噬菌体是该细菌的病原体。2.根据权利要求1的组合物，所述组合物包含噬菌体K和/或P68或其突变体。3.根据权利要求1或2的组合物，其中所述噬菌体的浓度是pfu噬菌体cfu细菌为至少51。4.根据前述任一项权利要求的组合物，所述组合物是用于施用于哺乳动物的皮肤的局部施用。5.根据权利要求4的组合物，其中所述皮肤是在鼻腔内部，或人手上的皮肤。6.根据权利要求4或权利要求5的组合物，其中所述组合物是霜剂、洗剂、软膏剂、糊剂、凝胶剂或泡沫剂的形式。7.根据权利要求4-6中任一项的组合物，其中所述载体包括羊毛脂或石蜡。8.根据前述任一项权利要求的组合物，所述组合物包括两种或更多种不同的噬菌体。9.根据前述任一项权利要求的组合物，其中所述噬菌体是选自下述细菌的病原体葡萄球菌属、螺杆菌属、克雷伯氏菌属、利斯特氏菌属、分枝杆菌属、埃希氏菌属、脑膜炎双球菌、弯曲杆菌属、链球菌属、肠球菌属、志贺氏菌属、假单胞菌属、伯克霍尔德氏菌属、梭菌属、军团菌属、不动杆菌属(Acetinobacter)或沙门氏菌属。10.根据权利要求9的组合物，其中所述噬菌体是金黄色葡萄球菌的病原体。11.用于对表面消毒的消毒剂组合物，含有载体、噬菌体K和/或噬菌体P68或其突变体。12.根据权利要求11的组合物，其中当细菌存在于待消毒的表面上时在组合物中以足够高的浓度提供所述噬菌体从而在细菌中诱导外溶菌作用，其中所述噬菌体是所述细菌的病原体。13.根据权利要求11的消毒剂制剂，其中所述噬菌体的浓度低于51的pfu噬菌体cfu细菌。14.根据权利要求11-13中任一项的组合物，所述组合物用于局部施用于哺乳动物的皮肤。15.根据权利要求14的组合物，其中所述皮肤是在鼻腔内部，或人类手上的皮肤。16.根据权利要求14-15中任一项的组合物，其中所述组合物是霜剂、洗剂、软膏剂、糊剂、凝胶剂或泡沫剂的形式。17.根据权利要求14-16中任一项的组合物，其中所述载体包括羊毛脂或石蜡。18.在表面上杀死细菌的方法，所述方法包括将根据权利要求1-17中任一项的消毒剂组合物施用至所述表面。19.根据权利要求18的方法，其中所述表面是哺乳动物的皮肤。20.根据权利要求19的方法，其中所述表面是哺乳动物的鼻腔。21.治疗细菌感染的方法，所述方法包括将根据权利要求1-17中任一项的组合物施用至所述感染的表面。22.根据权利要求1-11中任一项的组合物，用于治疗细菌感染。23.含有至少一种类型的噬菌体的绷带或创伤敷料，其特征在于，当与细菌接触时在绷带或创伤敷料上以足够高的浓度提供所述噬菌体从而在细菌中诱导外溶菌作用，其中所述噬菌体是所述细菌的病原体。24.根据权利要求23的绷带或创伤敷料，所述绷带或创伤敷料包含噬菌体K和/或噬菌体P68。全文摘要本发明涉及抗菌组合物，其含有足够高的浓度的噬菌体，以在细菌中诱导外溶菌作用。公开了所述组合物的用途。特别优选噬菌体K和/或P68。文档编号A61K35/76GK101835384SQ200880110119公开日2010年9月15日申请日期2008年10月3日优先权日2007年10月4日发明者贾莹申请人:诺沃莱蒂克斯有限公司