针对过敏原去敏化的肽的制作方法

专利名称：：针对过敏原去敏化的肽的制作方法
技术领域：
：本发明涉及包括用于预防或治疗房尘螨过敏症的肽的组合物，并且特别涉及用于预防或治疗所述过敏症的肽的最佳组合。
背景技术：
：T细胞抗原识别需要抗原呈递细胞(APC)在其细胞表面上呈递与主要组织相容性复合物(MHC)的分子缔合的抗原片段(肽)。T细胞使用其抗原特异性T细胞受体(TCR)来识别由APC呈递的抗原片段。这样的识别作为免疫系统的触发器起作用来产生一系列应答以根除已被识别的抗原。生物体如人类的免疫系统对外部抗原的识别可在某些情况下造成疾病，其被称作特应性疾患。后者的实例是过敏性疾病，包括哮喘、特应性皮炎和过敏性鼻炎。在这一组疾病中，B淋巴细胞产生对外源产生的抗原结合的IgE类抗体(在人类中)，所述抗原在本文称为过敏原，因为这些分子引发过敏响应。过敏原特异性IgE的产生依赖于也被过敏原活化(并对其有特异性)的T淋巴细胞。借助于诸如嗜碱性细胞和肥大细胞等细胞对IgE表面受体的表达，过敏原特异性的IgE抗体结合到这些细胞表面。过敏原对结合在表面的IgE分子的交联造成这些效应细胞脱粒，导致炎症介质诸如组胺、5-羟色胺和脂质介质如硫桥白三烯(sulphidoleukotriene)的释放。除了IgE依赖性事件，某些过敏性疾病诸如哮喘的特征为IgE独立性事件。目前用提供症状缓解或预防的剂来治疗IgE介导的过敏性疾病。这种剂的实例是抗组胺剂、β2激动剂和糖皮质类固醇。此外，通过包括过敏原成分或提取物的定期注射的去敏化程序来治疗一些IgE介导的疾病。去敏化治疗可诱导与IgE竞争过敏原的IgG响应，或可诱导阻断针对过敏原的IgE的合成的特定抑制性T细胞。这种形式的治疗不是总有效，并且具有激起严重副作用特别是一般过敏性休克的风险。这可以是致命的，除非立即意识到并用肾上腺素治疗。将减少或消除针对特定过敏原的不想要的过敏-免疫应答而不改变对其它外来抗原的免疫反应性或触发本身过敏响应的治疗性处理将对过敏个体大有益处。普遍认为，房尘螨是包括哮喘、过敏性鼻炎和过敏性皮炎在内的人类和动物过敏性疾病的主要原因。两种近亲种类的螨在全世界造成大多数的房尘螨过敏症。这两种是JM尘_(Dermatophagoidespteronyssinus)(主要在欧沙H)禾口㈣尘_(Dermatophagoidesfarinae)(主要在美洲)。房尘螨过敏原主要衍生自螨肠道内壁的蛋白，该蛋白存在于排泄物中，并通常被称为Derρ(对于屋尘螨)或Derf(对于粉尘螨)蛋白。普通的螨在其生命中的每天将产生大约20个粪粒其为自身体重的两倍。一克尘土通常可包含多达500只螨，而床垫可容纳多于两百万只。存在的螨物质的量随着时间增加。六年的枕头的十分之一重量可由螨和螨残骸构成。地毯中，每平方米通常将有1，000至10，000只螨。过敏性疾病尤其是哮喘，在世界的工业化国家中是个巨大的并正在扩大的问题。已计算获得，主要工业化国家的5-10%人群患有哮喘。其中大约五分之一具有严重哮喘，需要经常住院。据计算，美国的哮喘费用为每年126亿美元(79亿英镑)。欧洲的数字更高。加拿大的一项研究估计，主要工业化国家人群的每个成员的哮喘费用是每年平均21英镑。仅在英国，每年因为哮喘死亡2，OOO人。哮喘是由过敏反应和呼吸系统中的刺激造成的慢性疾病。对空气传播物质有反应的哮喘患者的50%至90%对尘螨过敏原敏感，而且在英国的一项研究中，10%的普通人群对尘螨过敏原有反应。大约两亿美国人居住在被房尘螨侵染严重影响的区域。对这种物质的敏化发生在幼年，主要在三个月到六个月之间的年龄，但哮喘是终生的。因此，治疗性或预防性治疗对于患有房尘螨过敏症或处于患房尘螨过敏症风险中的人们将大有益处。发明概述本发明人已经发现，衍生自第1组尘螨过敏原(DerpUDerfl)、第2组尘螨过敏原(Derp2、Derf2)和第3组尘螨过敏原(Derp7、Derf7)的某些肽片段组合对于去除个体对这些过敏原的敏感性特别有用。已经筛选了本发明的多肽组合在来自一组房尘螨过敏个体的受治疗者中高比例地诱导细胞因子响应的能力。本发明的多肽最初被选择为T细胞表位，其经由使用肽-MHC结合特征的计算机模拟和体外评估。参见例如表3，其显示在II类MHC结合测定中衍生自上述过敏原的一系列肽结合多个DR类型的能力。通过同源性来鉴定另外的表位。随后进一步筛选这些候选多肽在免疫耐受作用(tolerisation)方面的潜在应用。与基于肽免疫的去敏化方法相关的困难在于如何选择过敏原的合适的大小和区域作为用于免疫的肽的基础。所选择的肽的大小是关键的。如果肽太小，疫苗将不能有效引起免疫应答。如果肽太大，或如果将完整抗原引入个体，则存在引起副作用诸如过敏反应的风险，这可能是致命的。已经选择本发明的多肽以保持T细胞特异性，同时所述多肽的尺寸足够小以不具备将使其保留完整分子的IgE结合表位的构象的显著三级结构。因此，本发明的多肽不引起细胞诸如肥大细胞和嗜碱性细胞上相邻的特异性IgE分子的显著交联，并因此不导致显著的组胺释放。本发明的优势是肽广泛地靶向主要组织相容性复合物(MHC)分子的能力。T细胞受体(TCR)在其特异性方面是高度可变的。如同抗体分子一样，经由细胞中的基因重组事件产生差异性。TCR识别结合到由主要组织相容性复合物(MHC)的基因所编码的分子的短肽形式的抗原。这些基因产物是产生用于移植中的“组织型”的相同分子，并且还被称为人类白细胞抗原分子(HLA)，该术语可被互换地使用。单独的MHC分子具备肽结合沟，由于它们的形状和电荷其只能够结合有限的一组肽。被一个MHC分子结合的肽可能不一定被其它MHC分子结合。当蛋白分子诸如抗原或过敏原被抗原呈递细胞诸如B淋巴细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞吸收时，该分子在细胞中被酶促降解。降解过程产生所述分子的肽片段，如果它们具有合适的大小、电荷和形状，则可能结合到某些MHC分子的肽结合沟之内，并随后展示在抗原呈递细胞表面上。如果肽/MHC复合物以足够数量呈递在抗原呈递细胞表面上，则它们可能活化带有合适的肽/MHC特异性T细胞受体的T细胞。由于MHC的多态性质，远系繁殖群体诸如人类中的个体将在其细胞表面上表达不同组合的MHC分子。由于不同MHC分子可基于肽的大小、电荷和形状而结合来自同一分子的不同肽，不同个体将展示与其MHC分子结合的不同库的肽。鉴定远系繁殖群体诸如人类中的通用MHC-结合肽表位比在近亲繁殖的动物(诸如实验小鼠的某些品系)中更困难。基于个体之间MHC的差异表达以及其带来的肽结合与呈递的固有差异，不太可能鉴定可用于人类去敏化治疗的单种肽。然而，本发明的肽组合通过靶向多种不同MHC分子而提供对人类群体覆盖面广泛的效力。因此，以本发明的肽配制的疫苗将具有广泛的应用。本发明人的工作产生了具有以下特征的肽组合_该组合在来自一组房尘螨过敏个体的受治疗者中高比例诱导细胞因子响应；-组合中的肽是可溶的。因此，本发明提供用于通过免疫耐受作用预防或治疗房尘螨过敏症的组合物，包括选自HDM203B(SEQID83)、HDM201(SEQID80)、HDM205(SEQID85)、HDM203A(SEQID82)、HDM202(SEQID81)、SEQIDNOl至79、84、或86至104(即SEQIDNO1至104的任一个)或其变体的至少一种多肽。通常，该组合物包括至少四种多肽，其中所述多肽独立地选自以下任一种(i)SEQIDNO1至104的多肽；或(ii)根据⑴的多肽的变体，其中所述变体是长度9至30个氨基酸的多肽，包含由以下组成的区域-⑴的任何序列；或-与(i)的任何序列具有至少65%同源性的序列，该序列能够使得个体免疫耐受(i)的任何序列，或(iii)根据⑴的多肽的变体，其中所述变体是长度9至30个氨基酸的多肽，包含由表示以下任一个的序列组成的区域-(i)的任何序列的片段；或-(i)的任何序列的片段的同系物，该序列能够使得个体免疫耐受(i)的任何序列并具有至少9个氨基酸的长度，而且其中所述同系物与(i)的任何序列中任何9个连续氨基酸具有至少65%的同源性。附图描述图I-Derpi相对DerΠ(图1Α),Derρ2相对Derf2(图1B)和Derρ7相对Derf7(图1C)的序列比较。包含表位的区域以灰色突出显示。本发明的特定肽的位置以序列之上或之下的线条表示。Derpi的序列是具有NCBI登记号P08176的公众可获得的序列。Derp2和Derp7(表6)的相应序列分别是NCBI登记号P49278和P49273。Derf1的序列从NCBI登记号P16311获得，Derf2的序列从NCBI登记号Q00855获得，而Derf7从NCBI登记号Q26456获得。图2显示由IL13或IFN-γ的产生测量的对本发明的不同肽响应的个体百分比。图3和4显示由IL13或IFN-γ的产生测量的对本发明的不同肽组合响应的个体百分比。本文提及的序列的描述SEQIDNO:1至104提供如表3至8列出的本发明的多肽序列。SEQIDNO.105及其后提供另外的序列。发明详述本发明涉及可用于免疫耐受作用的肽和肽组合。这样的肽可包括以下显示的序列、由以下显示的序列组成或基本上由以下显示的序列组成HDM203B(SEQID83)、HDM201(SEQID80),HDM205(SEQID85),HDM203A(SEQID82),HDM202(SEQID81)、SEQIDNO1至79、84、或86至104的任一个(即SEQIDNO1至104的任一个)。还可使用这些特定肽的变体。所述变体可包括序列、由序列组成或基本上由序列组成，所述序列是SEQIDNO1至104任一个的片段或SEQIDNO1至104任一个的同系物的片段。在一个实施方案中，本发明涉及用于预防或治疗房尘螨过敏症的组合物。组合物通常包括至少四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种或十二种、最多达十三种多肽，或由其组成。换言之，组合物包括四种至十三种多肽。多肽独立地选自以下任一种(i)SEQIDNO1至104的多肽；或(ii)根据⑴的多肽的变体，其中所述变体是长度9至30个氨基酸的多肽，包含由以下组成的区域-⑴的任何序列；或-与(i)的任何序列具有至少65%同源性的序列，该序列能够使得个体免疫耐受(i)的任何序列，或(iii)根据⑴的多肽的变体，其中所述变体是长度9至30个氨基酸的多肽，包含由表示以下的序列组成的区域-(i)的任何序列的片段；或-(i)的任何序列的片段的同系物，该序列能够使得个体免疫耐受(i)的任何序列并具有至少9个氨基酸的长度，而且其中所述同系物与(i)的任何序列中任何9个连续氨基酸具有至少65%的同源性。本发明还提供包括本发明的多肽的产物和制剂以及包括能够表达用于通过免疫耐受作用预防或治疗房尘螨过敏症的本发明的多肽的多核苷酸的组合物、产物和载体。这种免疫耐受作用通常将是针对存在于SEQIDNO1至104任一个中的表位(例如II类MHC表位)O第1组、第2组和第7组尘螨过敏原的肽片段房尘螨的主要过敏原包括第1组尘螨过敏原(DerρUDerfl)、第2组尘螨过敏原(Derp2、Derf2)和第3组尘螨过敏原(Derp7、Derf7)，其中Derρ“X”和Derf“X”分别表示蛋白“X”是衍生自屋尘螨和粉尘螨的同系物。如图1所示，每种Derρ蛋白与其相应的Derf蛋白高度同源。包含结合II类MHC的T细胞表位的区域在给定蛋白的Derρ和Derf同系物之间是尤其高度保守的。因此，衍生自例如屋尘螨或粉尘螨的蛋白1的相关区域的肽适于用于通过对第1组尘螨过敏原的免疫耐受作用来预防或治疗房尘螨过敏症。类似地，衍生自屋尘螨或粉尘螨的蛋白2的相关区域的肽适于用于通过对第2组尘螨过敏原的免疫耐受作用来预防或治疗房尘螨过敏症，而且衍生自屋尘螨或粉尘螨的蛋白7的相关区域的肽适于用于通过对第7组尘螨过敏原的免疫耐受作用来预防或治疗房尘螨过敏症。第1组过敏原是与木瓜蛋白酶同源的半胱氨酸蛋白酶。已发现这种酶裂解闭合蛋白(occludin)，即细胞间紧密连接的一种蛋白成分。这揭示了某些酶的变应原性的一种可能原因。通过破坏上皮细胞之间的紧密连接的完整性，Derpi和Derfl可能获得对上皮下的抗原呈递细胞、居留肥大细胞和嗜曙红细胞的异常进入。第2组过敏原的功能未知，虽然Derp2和Derf2显示与脂结合蛋白家族的远的同源性。已经显示对体内Derp2刺激响应的血清IgE水平代表对完整螨提取物刺激的总血清IgE响应的大约三分之一。第7组过敏原的功能也未知。已经显示对体内Derp7刺激响应的血清IgE水平代表对完整螨提取物刺激的总血清IgE响应的大约五分之一。本发明的肽衍生自第1组、第2组和第3组尘螨过敏原，如表3至8所示。术语“肽”和“多肽”在本文互换地使用。以上蛋白在本文还称为“过敏原”。表3至8列出本发明的肽的序列，指出了每种肽所衍生自的亲本蛋白。表4至6中的序列成对排列。在每对中，上方的序列已经通过使用肽-MHC结合测定被选作T细胞表位。已经通过在给定的尘螨过敏原组中可选择的蛋白的序列中的同源性搜索选择了下方的序列。例如，表4中的肽HDMOl衍生自Derpl，它下方的同源序列衍生自DerΠ。肽组合组合物通常包括本发明的至少四种、最多达十三种不同多肽的组合。因此，本发明的组合物可由四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种、十二种或十三种肽组成。本发明的组合物通常可包括选自衍生自每种Derpl、Derp2和Derp7(或Derf等价物)的肽的至少一种多肽或其变体(例如功能变体)。选择本发明的组合物中的多肽组合以提供对人类群体尽可能广泛的覆盖面，即，本发明的组合物将在尘螨过敏个体中高比例地产生免疫应答，优选地一组或一群这样的个体中的多于30%、40%、45%、50%、60%或70%尘螨过敏个体。尘螨过敏个体的群体中的个体数目可以是任何适当的数目，通常为至少20、30、40、50、60、70、80或至少100个体。优选地该群体具有在白种人群体中有代表性的频率范围内的MHC等位基因频率。11个常见DRBl等位基因家族的参考群体等位基因频率显示在表1中(数据来自HLAFactsBook,Parham和Barber)。本发明的组合物通常包括选自HDM203B(SEQID83)、HDM202(SEQID81)、HDM201(SEQID80)、HDM205(SEQID85)、HDM203A(SEQID82)的多肽或其变体的至少一种多肽。组合物优选地包括独立地选自HDM203B(SEQID83)、HDM202(SEQID81)、HDM201(SEQID80)、HDM205(SEQID85)、HDM203A(SEQID82)的多肽或其变体的至少两种、三种或四种多肽，条件是SEQIDNO82和83的多肽或变体中不多于一种被选择。HDM202(SEQID81)的具体变体是HDM202D(SEQID102;FKNRFLMSAEA)、HDM202E(SEQID103;FKNRFLMSAE)和HDM202H(SEQID104;EFKNRFLMSAE)，它们是HDM202序列的截短形式。预料这些序列的每种可被修饰以在N和/或C末端添加选自R、K、H、E和D的至少一个(并且最多6个)残基。任选地，组合物可另外包括选自SEQIDNO:5、51、52、100、101、72、73、74的任何多肽或其变体的至少一种另外的多肽。所述至少一种另外的多肽优选地是SEQIDN0:51、73、100和101的任何多肽。任选地，组合物可另外包括选自SEQIDNO:1、9、21、24、48、54、56、57、62、63、65、76、84和86的任何多肽或其变体的至少一种另外的多肽。所述至少一种另外的多肽优选地是SEQIDNO63和65的任何多肽或其变体。更具体地，在一个实施方案中，本发明因此提供包括四种至十三种多肽的组合物，该多肽由以下组成a)SEQIDNO.83和82的多肽或其变体的至少一种，优选地SEQIDN0.83；b)SEQIDNO.80、81和85的多肽或其变体的至少两种；和任选地c)SEQIDNO:5、51、52、100、101、72、73和74的任何多肽或其变体的至少一种，优选地SEQIDNO:51、73、100和104或其变体；禾口/或d)SEQIDNO:1、9、21、24、48、54、56、57、62、63、65、76、84和86的任何多肽或其变体的至少一种，优选地SEQIDNO:63和65或其变体。换言之，本发明的一个具体的实施方案提供用于通过免疫耐受作用来预防或治疗尘螨过敏症的包括四种至十三种肽序列的组合物，其中该组合物由以下组成a)至少一种具有以下序列的多肽HDM203BDLRQMRTVTPIRMQGGSGS(SEQIDNO.83)禾口HDM203ADLRQMRTVTPIRMQGGCGS(SEQIDNO.82)；或其变体，和；b)至少两种具有以下序列的多肽HDM201ESVKYVQSNGGAI(SEQIDNO.80)；HDM202DEFKNRFLMSAEAFE(SEQIDN0.81)；禾口HDM205SYYRYVAREQS(SEQIDN0.85)或其变体，和任选地；c)至少一种具有以下序列的多肽HDM09AREALAQTHSAIAVI(SEQIDN0.5)；HDM03DRNQSLDLAEQELVDSASQH(SEQIDN0.51)；HDM03ERNQSLDLAEQELVDBASQH*(SEQIDN0.52)；HDM03VEQELVDSASQHG(SEQIDN0.100)；HDM03WELVDSASQHG(SEQIDN0.101)；HDM101NYCQIYPPNVNKIREA(SEQIDN0.72)；HDM10IANYSQIYPPNVNKIREA(SEQIDN0.73)；禾口HDM10IBNYBQIYPPNVNKIREA*(SEQIDN0.74)或其变体，和/或；d)至少一种具有以下序列的多肽HDM01IDLRQMRTVTPIR(SEQIDNO.1)；HDM21AKPFQLEAVFEANQNTK(SEQIDNO.9)；HDM48TAIFQDTVRAEMTK(SEQIDNO.21)；HDM51AVDFKGELAMRNIEAR(SEQIDNO.24)；HDM01AIDLRQMRTVTPIRMQGGSG(SEQIDNO.48)；HDM06ARYVAREQSSRRP(SEQIDNO.54)；HDM07PNVNKIREALAQT(SEQIDNO.56)；HDM19ADQVDVKDSANHEIKK(SEQIDNO.57)；HDM23CGLEVDVPGIDPNASH(SEQIDNO.62)；HDM26BGVLASAIATHAKIR(SEQIDNO.63)；HDM35ARGLKQMKRVGDANV(SEQIDNO.65)；HDM102ANAQRFGISNYSQI(SEQIDNO.76)；HDM204SAYLAYRNQSLDLA(SEQIDNO.84)；禾口HDM206DNGYGYFAANIDLMMIEE(SEQIDNO.86)或其变体。*B=氨基丁酸。将理解的是，以上的(a)到(d)代表用于鉴定本发明的合适组合的严格性和高度选择性标准。例如，如果想要从本发明序列随机地选择八种肽，将有将近1000亿个可能组合可以选择。相比之下，考虑在其中应用上述标准的八种多肽的组合的一种实例是有用的。例如，考虑一种组合，其中选择以下多肽i)SEQIDNO.80、81和85的多肽的任何两种和SEQIDN0.82和83的多肽的至少一种；和ii)选自SEQIDNO:5、51、52、72、73、74、100和101的任何多肽的两种另外多肽；以及最后iii)选自SEQIDNO:1、9、21、24、48、54、56、57、62、63、65、76、84和86的任何多肽的两种另外多肽。基于这样的选择，可能的组合的数目占不应用本发明人确定的标准的情况下总的可能组合的少于0.0006%。基于上述，本发明特别优选的组合包括HDM201(SEQID80)、HDM203B(SEQID83)、HDM205(SEQID85)、HDM03W(SEQID101)、HDM101A(SEQID73)、HDM26B(SEQID63)、HDM35A(SEQID65)和任选地SEQIDNO.24的多肽或其变体，或者由其组成。本发明的另一优选组合包括HDM201(SEQID80)、HDM203B(SEQID83)、HDM205(SEQID85)和HDM03W(SEQID101)的多肽，或者由其组成。取决于上述，组合物可任选地包括另外的多肽，最多总共十三种独特多肽。这些另外的多肽与其它序列相关(即，通常是所述其他序列的同系物和/或片段)，其中所述其他序列即不在已经选择的多肽中的SEQIDNO:1至104。另外的肽通常是SEQIDNO1至104的肽之一的功能变体。另外的多肽可以与SEQIDNO:1至104任一个相同。因此，组合物可包括多达十三种不同的、SEQIDNO:1至104中任一个提供的多肽。然而，任选的另外的多肽不必与SEQIDNO:1至104任一个100%相同。它们优选地与未在此前选择的多肽中选择的SEQIDNO:1至104任一个中至少9个(例如至少10、11、12或13)或更多个连续氨基酸至少65%相同。这些连续的氨基酸可包括II类MHC表位，例如结合于本文提及的任何MHC分子的II类MHC表位。换言之，该组合物可任选地包括另外的多肽，最多总共十三种独特多肽，其中所述另外的多肽(i)包括与在以上(a)至(d)中未被选择的以上SEQIDNO1至104任一个中至少9个或更多个连续氨基酸具有至少65%的序列同一性的序列；并且(ii)长度是9至30个氨基酸。其中每种不同多肽是为了同时、分别或顺序地用于通过免疫耐受作用预防或治疗尘螨过敏症。1至104因此更具体地，为了同时、分别或顺序地用于通过免疫耐受作用预防或治疗尘螨过敏症，本发明提供含有如以上(a)至(d)定义的四种至十三种多肽的产物；和任选地(e)—种多肽(i)包含与在以上a)至d)中未被选择的SEQIDNO:1至104任一个中至少9个或更多个连续氨基酸具有至少65%序列同一性的序列；并且(ii)长度是9至30个氨基酸；和任选地(f)如e)中定义，但另外地在d)中未被选择的多肽；和任选地(g)如e)中定义，但另外地在以上e)至f)中未被选择的多肽；和任选地(h)如e)中定义，但另外地在以上e)至g)中未被选择的多肽；和任选地(i)如e)中定义，但另外地在以上e)至h)中未被选择的多肽；和任选地(j)如e)中定义，但另外地在以上e)至i)中未被选择的多肽；和任选地(k)如e)中定义，但另外地在以上e)至j)中未被选择的多肽；和任选地(1)如e)中定义，但另外地在以上e)至k)中未被选择的多肽；和任选地(m)如e)中定义，但另外地在以上e)至1)中未被选择的多肽；和任选地(η)如e)中定义，但另外地在以上e)至m)中未被选择的多肽；和任选地(ο)如e)中定义，但另外地在以上e)至η)中未被选择的多肽；和任选地(ρ)如e)中定义，但另外地在以上e)至ο)中未被选择的多肽。本发明的另一实施方案是用于通过免疫耐受作用预防或治疗房尘螨过敏症的，包括一种或多种多肽的组合物，其中所述多肽选自以下任一种(i)HDM203B(SEQID83)、HDM202(SEQID81)、HDM201(SEQID80)、HDM205(SEQID85)、HDM203A(SEQID82)、SEQIDNO1至79、84、或86至104的任一个(即SEQIDNO1至104的任一个)多肽；或(ii)根据(i)的多肽的变体，其中所述变体是长度9至30个氨基酸的多肽，其包含由以下组成的区域-⑴的任何序列；或-与(i)的任何序列具有至少65%同源性的序列，该序列能够使得个体免疫耐受(i)的任何序列，或(iii)根据(i)的多肽的变体，其中所述变体是长度9至30个氨基酸的多肽，所述多肽包含由表示以下任一个的序列组成的区域-⑴的任何序列的片段；或-⑴的任何序列的片段的同系物，该序列能够使得个体免疫耐受(i)的任何序列并具有至少9个氨基酸的长度，而且其中所述同系物与(i)的任何序列中任何9个连续氨基酸具有至少65%的同源性。本发明的组合物或产物可包括以上定义的任何序列的变体。所述变体通常包括SEQIDNO1至104的相应肽中存在的1、2、3或更多个II类MHC表位。本文提及了功能变体。这样的变体可能能够使个体免疫耐受SEQIDNO:1至104的相应肽中存在的II类MHC表位，并因此通常将包括结合到相同II类MHC分子的和/或被识别SEQIDNO1至104的多肽中相应的表位的T细胞所识别的序列。SEQIDNO1至104的变体可以是由截短所衍生的片段。截短是指从SEQIDNO.1至104的多肽的N和/或C-末端除去一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个氨基酸。为了示意的目的，在实施例5中提供了适合的截短的实例。特别地，SEQIDNO.81的截短被提供为SEQIDNO102至104。类似地，HDM03的若干优选变体(SEQIDN0:89至101)是截短形式。HDM03的特别优选的截短形式是HDM03V和HDM03ff(SEQID100和101)。还可通过一个或多个内部缺失来产生片段，条件是构成T细胞表位的核心9个氨基酸基本未被破坏。例如，SEQIDNO1的变体可包括SEQIDNO1的片段，即较短的序列。这可包括从SEQIDNO:1的N-末端或从SEQIDNO1的C-末端缺失一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个氨基酸。这样的缺失可从SEQIDNO:1的两端进行。SEQIDNO:1的变体可包括延伸超出SEQIDNO:1的末端的另外的氨基酸(例如来自衍生肽的亲本蛋白的序列)。变体可包括以上讨论的缺失和添加的组合。例如，可从SEQIDNO1的一端缺失氨基酸，但可在SEQIDNO:1的另一端添加来自全长亲本蛋白序列的另外的氨基酸。以上变体的相同讨论还适用于SEQIDNO2至104。变体肽可包括SEQIDNO:1至104任一个或其片段的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代。变体肽可包括与SEQIDNO:1至104任一个中至少9个或更多个连续氨基酸具有至少65%序列同一性的序列。更优选地，合适的变体可包括与SEQIDNO:1至104任一个的至少9个连续氨基酸至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%的氨基酸同一性。这一水平的氨基酸同一性可见于肽的任何区段，尽管它优选地是核心区域。氨基酸同一性的水平是超出至少9个连续氨基酸，但它可以是至少10、11、12、13、14、15或至少16或17个氨基酸，这取决于比较的肽的大小。因此，任何以上指明的同一性水平可跨越序列的完整长度。关于氨基酸序列，“序列同一性”是指当使用ClustalW(Thompson等人，NucleicAcidsRes.1994Nov11；22(22)=4673-80)用以下参数评价时具有指定值的序列成对的比对参数_方法准确，矩阵PAM，缺口开放罚分10.00，缺口延伸罚分0.10；多比对参数-矩阵PAM，缺口开放罚分10.00，％延迟同一性30，处罚末端缺口开，缺口间距0，负矩阵不，缺口延伸罚分0.20，残基特异性缺口罚分开，亲水缺口罚分开，亲水残基GPSNDQEKR。在特定残基的序列同一性意在包括仅仅被衍生化的相同残基。变体肽可包括SEQIDNO:1至104任一个中的1、2、3、4、5或更多个或者多达10个氨基酸取代。取代变体优选地包括用相同数目的氨基酸代替一个或多个氨基酸并进行保守的氨基酸取代。例如，可用具有相似特征的替代性氨基酸例如，另一碱性氨基酸、另一酸性氨基酸、另一中性氨基酸、另一带电荷氨基酸、另一亲水氨基酸、另一疏水氨基酸、另一极性氨基酸、另一芳香族氨基酸或另一脂肪族氨基酸来取代氨基酸。可用于选择合适的取代基的20种主要氨基酸的一些特征如下<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>另外的变体包括在其中出现在序列中的氨基酸而非天然存在的氨基酸是其结构类似物的那些。用于序列中的氨基酸还可被修饰例如被标记，条件是肽的功能未显著地受到不利影响。当肽具有与SEQIDNO:1至104任一个或其片段的序列不同的序列时，取代可沿着序列的全长发生，其在SEQIDNO:1至104的任何序列之内或SEQIDNO:1至104的任何序列之外。例如，本文所述的变化诸如添加、缺失、取代和修饰可发生在SEQIDNO1至104的任何序列之内。变体肽可包括在其中已经进行了一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代的SEQIDNO:1至104的任何氨基酸序列，或者基本上由其组成。变体肽可包括比SEQIDNO:1至104任一个大的亲本蛋白片段。在该实施方案中，本文所述的变化诸如取代和修饰可发生在SEQIDNO:1至104的任何序列之内和/或之外。本发明的变体肽长度是9至30个(含)氨基酸。优选地，它们的长度可以是9至20个氨基酸或更优选地13至17个氨基酸。所述肽可与SEQIDNO:1至20的任何一种中的肽序列具有相同的长度。所述肽可化学地例如通过蛋白水解裂解衍生自多肽过敏原，或者可以有意方式从多肽过敏原衍生，例如通过利用多肽过敏原的氨基酸序列并基于该序列合成肽。可使用本领域公知方法合成肽。当多肽包括通常难以在制造过程中保留的残基时，这些残基可被代替。例如，谷氨酸在溶液中自发地形成焦谷氨酸，特别是当存在于肽的N末端时。因此，对应于天然过敏原蛋白序列的序列中的谷氨酸的本发明的肽的残基可被本发明的肽中的焦谷氨酸代替，当这样的残基存在于肽的N末端时。术语“肽”不仅包括在其中氨基酸残基被肽(-C0-NH-)键连接的分子，还包括在其中肽键被倒转的分子。这样的逆反(retro-inverso)模拟肽可使用本领域已知的方法制备，例如诸如Meziere等人(1997)J.Immunol.159，3230-3237中描述的那些。该方法包括制备包含骨架变化而非侧链定向的拟肽。Meziere等人(1997)显示，至少对于II类MHC和T辅助细胞响应，这些拟肽是有用的。包含NH-CO键而非CO-NH肽键的逆反肽对蛋白水解的抵抗要多得多。类似地，可完全不需要肽键，条件是使用保持氨基酸残基的碳原子之间间距的合适的连接部分；如果所述连接部分具有与肽键大致上相同的电荷分布和大致上相同的平面性，它是特别优选的。还应理解的是，可方便地在其N-或C-末端封闭所述肽，以帮助减少对外蛋白水解消化的敏感性。例如，可通过与羧酸反应而保护肽的N-末端氨基，而且可通过与胺反应而保护肽的C-末端羧基。修饰的其它实例包括糖基化和磷酸化。另外的潜在修饰是R或K侧链胺上的氢可被亚甲基代替(-NH2—-NH(Me)或-N(Me)2)。根据本发明的肽的类似物还可包括增加或减少肽的体内半衰期的肽变体。能够增长按照本发明使用的肽的半衰期的类似物的实例包括肽的类肽类似物、肽的D-氨基酸衍生物和肽_类肽杂合体。按照本发明使用的变体多肽的另外的实施方案包括多肽的D-氨基酸形式。使用D-氨基酸而非L-氨基酸制备多肽大大减少正常代谢过程对这种药剂的任何不想要的破坏，减少待施用的药剂的量以及施用频率。本发明提供的肽可衍生自由编码亲本蛋白链的原始转录子的可变剪接产生的mRNA所编码的亲本蛋白的剪接变体。肽还可衍生自亲本蛋白的保持过敏原的至少MHC结合性质的氨基酸突变体、糖基化变体和其它共价衍生物。示例性衍生物包括这样的分子，其中本发明的肽通过取代、化学、酶促或其它合适手段被除了天然存在的氨基酸以外的部分共价修饰。还包括不同螨中发现的亲本蛋白的天然存在的变体。这样的变体可被等位变体编码或代表可变剪接变体。可在肽的合成期间或通过生产后修饰，或当肽是重组形式时，使用定点诱变、随机诱变或酶促裂解和/或核酸连接的已知技术来制备如上所述的变体。根据本发明，组合物可包括的另外的肽优选地是SEQIDNO:1至104任一个的功能变体。也就是说，肽优选地能够引起免疫应答。特别地，肽优选地能够在房尘螨过敏个体中诱发细胞因子的产生。因此，通常本发明的组合物将包括在房尘螨过敏个体群体中超过30%、35%、40%，优选地45%或50%的个体中产生细胞因子响应的至少一种多肽或其变体。一组尘螨过敏个体中的个体数目可以是超过1的任何数目，例如至少20、30、40、50、80或至少100个体。优选地，组合物包括至少两种、三种或最优选地四种这样的肽。优选地，细胞因子响应是产生IL13或IFN-γ。可通过任何合适的方法测量细胞因子的产生。如果在肽存在时产生的细胞因子水平比刺激物不存在时产生的所述细胞因子背景水平(即，不存在肽或任何其它刺激物时相同个体产生的水平)高至少2、3、4或5倍，通常认为发生了响应于肽的细胞因子的产生。可选地，通常在250μ1中大约1.25XIO6个细胞的样品中，如果产生细胞因子的量超过通常是90、95或优选地100pg/ml的公认限值，则可以认为发生了细胞因子的产生。用于测量细胞因子产生的合适的方法通常包括测量从受治疗者获取的样品中外周血单核细胞(PBMC)的细胞因子释放。样品通常是血液或血清。在给定肽存在时孵化细胞之后，测量PBMC的细胞因子释放。随后使用任何合适的测定例如ELISA、ELISP0T测定或流式细胞测定来检验来自孵化混合物的上清液中细胞因子的存在。特别优选的方法包括在例如dejager等人；ClinicalandDiagnosticLaboratoryImmunology(临床禾口诊断性实验免疫学)，2003，第10(1)卷第133-139页中描述的多重微珠阵列测定。通常，组合物可包括不在已经选择的多肽中的、在房尘螨过敏个体群体中超过20%、25%、优选地30%、35%或40%的个体中产生细胞因子响应的至少一种另外的肽或其变体，最多总共十三种不同肽。组合物还可包括不在已经选择的多肽中的、在房尘螨过敏个体群体中多于10%、15%、优选地10%的个体中产生细胞因子响应的一种或多种另外的肽或其变体，最多总共十三种不同肽。能够结合TCR的合适的变体可根据经验衍生或根据已知标准选择。在单个肽中，存在有助于MHC抗原结合沟中的结合的某些残基，以及与T细胞受体的高变区相互作用的其它残基(Allen等人(1987)Nature327:713-5)。在有助于T细胞受体相互作用的残基中，已经证明了与取代指定肽残基时T细胞活化的依赖性的相关的层次(hierarchy)。使用已经含有用不同氨基酸取代的一个或多个T细胞受体接触残基的肽，多个研究组已经证明了对T细胞活化过程的深远作用。Evavold&Allen(1991)Nature252:1308_10证明了T细胞增殖和细胞因子产生之间不相关。在该体外模型中，用其中已经进行了天冬氨酸保守取代谷氨酸的肽类似物来攻击对血红蛋白的残基64-76(在I-Ek环境中)有特异性的T细胞克隆。该取代不显著影响类似物结合I-Ek的能力。用该类似物体外攻击T细胞克隆后，未检测到增殖，尽管保持了IL-4分泌，也保持了该克隆辅助B细胞响应的能力。在随后的研究中，同一组证明了T细胞介导的细胞溶解与细胞因子产生之间的分离。该情况中，前者保持不变而后者受损。McDevitt和同事最初在EAE(实验性过敏性脑脊髓炎)的鼠模型中证明了改变的肽配体在体内的效力(Smilek等人(1991)ProcNatlAcadSciUSA88:9633-9637)。在这一模型中通过用MBP(髓磷月旨碱性蛋白)的致脑炎的肽Acl-Il免疫来诱发EAE。在位置四(赖氨酸)用丙氨酸残基的取代产生了与其限制性元件(AauAiiu)结合良好的肽，但其在易感的PL/JxS几Fl品系中是非免疫原性的，而且其在用致脑炎的肽免疫之前或之后施用时还阻止EAE发作。因此，可鉴定肽中影响该肽诱发T细胞各种功能的能力的残基。有利地，可设计肽以利于T细胞增殖和诱发去敏化。Metzler和Wraith已经证明了在其中已经进行了增加肽-MHC亲和力的取代的肽的致耐受能力提高(Metzler&ffraith(1993)IntImmunol1159-65)。Sloan-Lancaster等人(1993)Nature363156-9证明，改变的肽配体可在克隆的T细胞导致长期和深远的无反应性。本发明的组合物能够在对过敏原敏感的个体中诱发晚期响应。术语“晚期响应”包括列在AllergyandAllergicDisease(过敏症和过敏性疾病)(1997)Α.B.Kay(编辑)，BlackwellScience，第1113-1130页中的含义。晚期响应可以是任何晚期响应(LPR)。优选地，肽能够引起晚期哮喘性响应(LAR)或晚期鼻炎性响应或晚期皮肤响应或晚期眼部响应。可使用本领域公知方法确定特定的肽是否能够产生LPR；特别优选的方法被描述于Cromwell0，DurhamSR,ShawRJ,MackayJ和KayAB.Provocationtestsandmeasurementsofmediatorsfrommastcellsandbasophilsinasthmaandallergicrhinitis(哮喘和过敏性鼻炎中来自肥大细胞和嗜碱性细胞的介质的激发测试和测量).于HandbookofExperimentalImmunology(实验免疫学手册)(4)第127章，编辑WeirDM,BlackwellScientificPublications,1986。因此，优选地，本发明的单独肽能够在已经对过敏原敏感的个体中诱发LPR。可通过公知程序确定个体是否已经对过敏原敏感，诸如使用过敏原提取物的溶液的皮肤穿刺测试、皮肤LPR的诱发、临床史、过敏原攻击和用于测量过敏原特异性的IgE的放射性过敏原吸附测试(RAST)。可由医师基于例如这样的测试来确定特定个体是否被预期得益于治疗。使得个体去敏化或免疫耐受过敏原表示在适当地敏化的个体中抑制或阻挠由过敏原诱发的过敏组织反应。已显示，可选择性地活化T细胞，并随后使之无响应性。此外，使这些T细胞无应答或将其消除导致患者对特定的过敏原去敏化。去敏化表现为在第二次或进一步施用该过敏原或过敏原衍生的肽时减少或优选地消除对过敏原或过敏原衍生的肽的响应。第二次施用可在经过允许去敏化发生的合适时间段后进行；这优选地为一天到数周之间的任何期间。大约两周的间隔是优选的。尽管本发明的组合物能够在尘螨过敏个体中诱发LPR，应理解的是，当组合物被用于治疗患者时，优选地使用足够低浓度的组合物以致不发生可观察到的LPR，但响应将足以部分地将T细胞去敏化以致可给予下一(优选地更高的)剂量，如此继续。以这种方式，建立剂量以提供完全的去敏化但通常从来不在患者中诱发LPR。然而，该组合物或肽能够在比所施用的较高的浓度下这样做。本发明的组合物优选地能够在群体的一组尘螨过敏个体的50%或更多中诱发晚期响应。更优选地，组合物能够在一组敏化的个体的55%或更多、60%或更多、65%或更多、70%或更多、75%或更多、80%或更多、85%或更多或者90%或更多中诱发LPR。可通过本领域公知方法确定组合物是否能够在一组受治疗者的某一百分比中诱发LPR。将理解的是，本发明的肽包括由作为II类MHC结合所需要的最少必需序列的核心的9个氨基酸所组成的T细胞表位。然而，该肽还可包括在核心的9个氨基酸侧翼的另外残基。因此该肽可包括包含T细胞表位的区域，其中一些残基可被修饰而不影响表位的功能。因此，如上定义的肽的功能变体包括被改进以相对于肽的天然序列提高溶解度的肽。提高的溶解度对于受治疗者对衍生本发明的肽的过敏原的免疫耐受作用是有益的，因为对受治疗者施用难溶剂导致不期望的、非免疫耐受的炎性响应。通过改变在包含T细胞表位的区域侧翼的残基，可提高肽的溶解度。可改造本发明的肽以使其可溶性更高，以致其包括i)T细胞表位侧翼的肽的残基的N末端与刚好在衍生所述肽的蛋白序列中所述残基的N末端的两个至六个连续氨基酸相对应的一个至六个连续氨基酸；和/或ii)T细胞表位侧翼的肽的残基的C末端与刚好在衍生所述肽的蛋白序列中所述残基的C末端的一个至六个连续氨基酸相对应的一个至六个连续氨基酸；或iii)T细胞表位侧翼的肽的残基的N末端和C末端，选自精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸和天冬氨酸的至少一个氨基酸。任选地，可另外地改造该肽为可溶性更高的，以使i)所述肽天然序列中的任何半胱氨酸残基被丝氨酸或2_氨基丁酸代替；和/或ii)缺失了在所述肽的天然序列的N末端或C末端的、不包含在T细胞表位中的任何残基；和/或iii)缺失了在所述肽的天然序列的N末端或C末端的最多四个氨基酸中包含序列Asp-Gly的、不包含在T细胞表位中的任何两个连续氨基酸。核酸和载体组成本发明的组合物和产物的单独肽可被直接施用，或可通过从编码序列来表达而被间接施用。例如，可提供编码本发明的肽诸如上述任何肽的多核苷酸。因此本发明的肽可从编码并能够表达它的多核苷酸产生或以该形式递送。本文对使用、递送或施用本发明的肽的任何提及意在包括经由从编码它的多核苷酸表达而间接使用、递送或施用这样的肽。术语“核酸分子”和“多核苷酸”在本文可互换使用，并且指的是任何长度的核苷酸即脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物的聚合形式。多核苷酸的非限制性实例包括基因、基因片段、信使RNA(mRNA)、cDNA、重组多核苷酸、质粒、载体、分离的任何序列的DNA、分离的任何序列的RNA、核酸探针和引物。本发明的多核苷酸可以以分离的或纯化的形式被提供。“编码”所选择的多肽的核酸序列是当被置于合适的调节序列控制下时，在体内被转录(在DNA的情形下)和翻译(在mRNA的情形下)为多肽的核酸分子。编码序列的边界是由在5’(氨基)末端的起始密码子和在3’(羧基)末端的翻译终止密码子所决定的。为了本发明的目的，这样的核酸序列可包括但不限于来自病毒、原核或真核mRNA的cDNA，来自病毒或原核DNA或RNA的基因组序列，和甚至合成的DNA序列。转录终止序列可位于编码序列的3’可根据本领域公知的方法合成本发明的多核苷酸，如例如在Sambrook等人(19104,MolecularCloning-alaboratorymanual(分子克隆实验手册)；ColdSpringHarborPress)中描述的方法。可以以表达盒的形式提供本发明的多核苷酸分子，其包括可操作地连接于插入序列的控制序列，从而允许本发明的肽在目标受治疗者中体内表达。反过来，这些表达盒通常在适于用作核酸免疫的试剂的载体(如，质粒或重组病毒载体)中被提供。这样的表达盒可被直接施用于宿主受治疗者。可选地，包含本发明的多核苷酸的载体可被施用于宿主受治疗者。优选地，使用遗传载体制备和/或施用该多核苷酸。合适的载体可以是能够携带足够量的遗传信息并允许本发明的肽的表达的任何载体。因此，本发明包括包含这样的多核苷酸序列的表达载体。因此，本发明提供用于通过免疫耐受作用预防或治疗尘螨过敏症的载体，其包含编码本发明的不同多肽的四种或更多种多核苷酸序列以及任选地编码本文定义的不同多肽的一种或多种另外的多核苷酸序列。载体可包含编码本发明的不同多肽的4、5、6或7种多核苷酸序列。此外，将理解的是，本发明的组合物和产物可包括多肽和多核苷酸的混合物。因此，本发明提供本文所定义的组合物或产物，其中代替任何一种多肽的是能够表达所述多肽的多核苷酸。以分子生物学技术常规地构建表达载体，而且其可例如包括使用质粒DNA和可能是必要的并以正确方向放置的合适的起始因子、启动子、增强子和其它元件，诸如例如多聚腺苷酸化信号，以允许表达本发明的肽。其它合适的载体对于本领域技术人员是明显的。在这一方面作为另外的实例，我们参考Sambrook等人。因此，通过将这样的载体递送到细胞并允许发生从载体的转录，可提供本发明的多肽。优选地，载体中本发明的或用于本发明的多核苷酸被可操作地连接于能够提供宿主细胞对编码序列的表达的控制序列，即，该载体是表达载体。“可操作地连接”是指元件的排列，其中如此描述的组分被设置以进行其通常的功能。因此，当存在适当的酶时，可操作地连接于核酸序列的指定的调节序列诸如启动子能够实现该序列的表达。启动子不必与序列连续，只要它起作用来指导序列表达。因此，例如，未翻译但被转录的干预序列可存在于启动子序列和核酸序列之间，并且仍可认为该启动子序列被“可操作地连接”于编码序列。本领域中已描述了若干表达系统，其中每一种通常由包含可操作地连接于表达控制序列的目标基因或核苷酸序列的载体所组成。这些控制序列包括转录启动子序列以及转录起始和终止序列。本发明的载体可以是例如拥有复制起点即任选地用于表达所述多核苷酸的启动子和任选地启动子的调节子的质粒、病毒或噬菌体载体。“质粒”是染色体外遗传元件形式的载体。载体可包含一种或多种可选择的标记基因，例如在细菌质粒情况下的氨苄西林抗性基因或用于真菌载体的抗性基因。载体可被用于体外例如产生DNA或RNA，或者用于转染或转化宿主细胞例如哺乳动物宿主细胞。载体还可适于体内使用，例如以允许多肽的体内表达。“启动子”是起始并调节编码多肽的多核苷酸的转录的核苷酸序列。启动子可包括诱导型启动子(其中可操作地连接于启动子的多核苷酸序列的表达由分析物、辅因子、调节蛋白等所诱发)、阻抑型启动子(其中可操作地连接于启动子的多核苷酸序列的表达由分析物、辅因子、调节蛋白等所阻抑)和组成型启动子。术语“启动子”或“控制元件”预期包括全长启动子区域和这些区域的功能(如，控制转录或翻译的)区段。根据本发明的多核苷酸、表达盒或载体可另外地包括信号肽序列。信号肽序列通常被插入到与启动子可操作地连接以使信号肽被表达并促进还与启动子可操作地连接的编码序列所编码的多肽的分泌。通常，信号肽序列编码10至30个氨基酸例如15至20个氨基酸的肽。通常这些氨基酸主要是疏水的。在典型情况下，信号肽将带有信号肽的生长中的多肽链靶向于表达细胞的内质网。信号肽在内质网中被切除，允许经高尔基体分泌多肽。因此，通过从个体中的细胞表达并从这些细胞分泌，可向个体提供本发明的肽。可选地，本发明的多核苷酸可以以合适的方式表达以允许本发明的肽被II类MHC分子呈递在抗原呈递细胞表面。例如，本发明的多核苷酸、表达盒或载体可靶向于抗原呈递细胞，或在这样的细胞中可优先刺激或诱发被编码的肽的表达。目标多核苷酸可用于在体外、活体外或体内产生本发明的肽。可施用这样的多核苷酸或通过免疫耐受作用将其用于过敏症的预防或治疗。用于基因递送的方法是本领域已知的。参见例如美国专利第5，399，346、5，580，859和5，5104，466号。核酸分子可直接引入接受的受治疗者，诸如通过标准的肌内或皮内注射；经皮的颗粒递送；吸入；局部，或通过口服、鼻内或粘膜施用方式。可选地，分子可活体外引入已从受治疗者取出的细胞。例如，本发明的多核苷酸、表达盒或载体可活体外引入个体的APC。将包含目标核酸分子的细胞再次引入受治疗者以致可针对核酸分子编码的肽建立免疫应答。用于这种免疫的核酸分子在本文通常称为“核酸疫苗”。本发明的多肽、多核苷酸、载体或细胞可以以基本上分离的形式存在。它们可以与不干扰其预期用途的运载体或稀释剂混合，并仍被认为是基本上分离的。它们还可以是基本上纯化的形式，在该情况下它们通常将占制剂的蛋白、多核苷酸、细胞或干物质的至少90%，如至少95%、98%或99%。抗原呈递细胞(APC)本发明包括产生在其表面上呈递本发明的肽的APC群体的方法的体外使用，该APC群体随后可用于治疗。可对从患者获得的细胞样品在活体外进行这样的方法。因此以这种方式产生的APC形成可用于通过免疫耐受作用治疗或预防尘螨过敏症的药剂。细胞应被个体的免疫系统接受，因为它们衍生于该个体。将以这种方式产生的细胞递送到最初获得细胞的个体，从而形成本发明的治疗实施方案。制剂和组合物本发明的肽、多核苷酸、载体和细胞可单独或组合地提供给个体。本发明的每种分子或细胞可以以分离的、基本上分离的、纯化的或基本上纯化的形式提供给个体。例如，可对个体提供基本上不含其它肽的本发明的肽。尽管根据本发明的肽、多核苷酸或组合物可能以原料形式被呈现，但优选地作为药物制剂将它们呈现。因此，根据本发明的另一方面，本发明提供用于通过免疫耐受作用预防或治疗尘螨过敏症的药物制剂，其包含根据本发明的组合物、载体或产物连同一种或多种药学上可接受的运载体或稀释剂和任选地一种或多种其它治疗成分。运载体必须在与制剂的其它成分相容且不危害其接受者的意义上是“可接受的”。通常，用于注射和最终制剂的运载体是无菌和无热原的。配制包含本发明的肽、多核苷酸或细胞的组合物可使用标准的药物配制化学和方法学进行，所有这些对于普通技术人员都易于获得。例如，包含本发明的一种或多种分子或细胞的组合物可与一种或多种药学上可接受的赋形剂或媒介物合并。辅助物质诸如润湿剂或乳化剂、PH缓冲物质和诸如此类可在赋形剂或媒介物中存在。这些赋形剂、媒介物和辅助物质通常是在接受组合物的个体中不诱发免疫应答的药剂，而且其可被施用而没有不当毒性。药学上可接受的赋形剂包括但不限于液体诸如水、盐水、聚乙二醇、透明质酸和乙醇。其中还可包括药学上可接受的盐，例如，无机酸盐诸如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐和诸如此类；以及有机酸盐诸如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐和诸如此类。关于药学上可接受的赋形剂、媒介物和辅助物质的完全讨论可在Remington，sPharmaceuticalSciences(雷氏药学原理)(MackPub.Co.，N.J·1991)中获得。可以以适于弹丸施用或连续施用的形式制备、包装或销售这样的组合物。可以以单位剂量形式制备、包装或销售注射组合物，诸如在安瓿或含有防腐剂的多剂量容器中。组合物包括但不限于悬液、溶液、油性或水性媒介物中的乳剂、糊剂和可植入的缓释或可生物降解的制剂。这样的组合物还可包括一种或多种另外的成分，其包括但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外施用的组合物的一个实施方案中，以干燥(如粉末或颗粒)形式提供活性成分以便在肠胃外施用重构的组合物之前用合适的媒介物(如无菌无热原的水)进行重构。可以以无菌可注射的水性或油性悬液或溶液形式制备、包装或销售药物组合物。这种悬液或溶液可根据已知技术配制，并且除了活性成分以外，可包括另外的成分诸如本文所述的分散剂、润湿剂或悬浮剂。例如，可使用无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂诸如水或1，3-丁二醇来制备这样的无菌注射制剂。其它可接受的稀释剂和溶剂包括但不限于林格氏溶液、等渗氯化钠溶液和不挥发油诸如合成的单或二甘油酯。有用的其它的可肠胃外施用的组合物包括包含微晶形式的、在脂质体制品中的或作为可生物降解的聚合物系统的组成部分的活性成分的那些。用于缓释或植入的组合物可包括药学上可接受的聚合或疏水物质诸如乳液、离子交换树脂、微溶聚合物或微溶盐。可选地，可将本发明的肽或多核苷酸包被，吸附或与连接到微粒运载体。合适的微粒运载体包括衍生自聚甲基丙烯酸甲酯聚合物的那些，以及衍生自聚(丙交酯)和丙交酯-乙交酯共聚物的PLG微粒。参见例如，Jeffery等人(1993)Pharm.Res.10:362_368。还可使用其它颗粒系统和聚合物，例如聚合物诸如聚赖氨酸、聚精氨酸、聚鸟氨酸、精胺、亚精胺以及这些分子的轭合物。本文提到的任何肽、多核苷酸或细胞的制剂将取决于诸如物质的性质和递送方法等因素。可以以多种剂型施用任何这样的物质。可以以口服(如，作为片剂、糖锭剂、锭剂、水性或油性悬液、可分散的粉末或颗粒)、肠胃外、表皮、皮下、吸入、静脉内、肌内、胸骨内、经皮、皮内、舌下、鼻内、含服或输注技术进行施用。物质还可作为栓剂被施用。医师将能够确定每个特定个体需要的施用途径。本发明制剂的组合物将包括有效而不导致副作用的合适浓度的每种肽/多核苷酸/细胞。通常，组合物中每种肽的浓度将在0.03至200nmOl/ml的范围中。更优选地在0.3至200nmol/ml、3至180nmol/ml、10至150nmol/ml或30至120nmol/ml的范围中。组合物或制剂应具有大于95%或98%的纯度或至少99%的纯度。因此在一个实施方案中，本发明的肽、多核苷酸、细胞或组合物与一种或多种其它治疗剂一起用于治疗。这些剂可被分别、同时或顺序地施用。它们可以在相同或不同组合物中被施用。因此，在本发明的方法中，还可用另外的治疗剂来治疗受治疗者。因此，可配制一种组合物，其包括本发明的分子和/或细胞以及一种或多种其它治疗分子。可选地，本发明的组合物可与作为组合治疗的一部分的一种或多种其它治疗组合物同时、顺序或分别地使用。治疗方法和待治疗的个体本发明涉及能够使得人类个体去敏化或免疫耐受上述过敏原并因此可用于预防或治疗尘螨过敏症的肽、多核苷酸、载体和细胞。本发明提供用于通过免疫耐受作用预防或治疗尘螨过敏症的组合物、产物、载体和制剂。本发明还提供使得尘螨过敏个体免疫耐受或去敏化的方法，其包括单独或组合地施用上述本发明的多肽/多核苷酸/细胞。将用本发明的组合物或制剂治疗或提供的个体优选地是人类。应理解的是，待治疗的个体可以是已知对过敏原敏感的个体，即处于被敏化或怀疑被敏化的风险中。可使用本领域公知和本文所述的技术来测试个体的敏化作用。可选地，个体可具有尘螨过敏症的家族史。可能不必测试个体对尘螨的敏化作用，因为当暴露于尘螨时个体可展现过敏症的症状。暴露表示接近例如未在高于50°C洗涤超过大约1周的衣物、床垫、枕头、枕套、床单、毯子或其它寝具，或未真空清洁超过大约1周的地毯、窗帘或家具的装饰覆盖物(upholstereditem)。接近表示距离上述物品10米或更少、5米或更少、2米或更少、1米或更少或者0米。过敏症的症状可包括眼睛痒、流鼻涕、呼吸困难、皮肤红痒或皮疹。待治疗的个体可以是任何年龄。然而，优选地，该个体可处于1至90、5至60、10至40或更优选地18至35的年龄组。优选地，待治疗的个体来自具有在白种人群体中有代表性的频率范围内的MHC等位基因频率的群体。11个常见DRBl等位基因家族的参考群体等位基因频率被显示在表1中(数据来自HLAFactsBook(HLA事件簿)，Parham和Barber)。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>通过分析报告频率的多个研究来获得参照频率，而所示附图是平均值。因此优选地，待治疗的个体来自具有与表1所指的等位基因(诸如至少1、2、3、4、5种或所有等位基因)的参照群体相等的MHC等位基因频率的群体，例如在图中范围加或减1、2、3、5、10、15或20%的范围内。优选地，个体来自这样的群体，其中如下DRBl等位基因的等位基因频率是4-至少9%7-至少10%11-至少8%。个体可能已具有尘螨过敏症达至少2周、1月、6月、1年或5年。个体可患有过敏症导致的皮疹、鼻充血、流鼻涕和/或咳嗽。个体可能已被或未被施用治疗尘螨过敏症的其它组合物/化合物。个体可能生活在每天经历大于50%、优选地55%、60%、65%、70%、75%、80%或90%的平均相对湿度的地理区域中。个体可能生活在已知滋生尘螨群体的地理区域中，例如美国东半部(和美国的主要西海岸城市)、加拿大的人口密集区、西欧、日本、韩国以及南美、澳大利亚和南非的海岸区。组合免疫疗法因为许多个体对多种多肽抗原过敏或可能需要对多种多肽抗原去敏化，本发明还提供为对多种抗原过敏的个体去敏化的手段。在个体中诱发的对第一多肽抗原或过敏原的“耐受”可在个体中产生“致耐受环境”，其中可下调对其它抗原不适当的免疫应答以提供对其它抗原的耐受。该发现是指，对多种过敏原过敏的个体可以在大大减少的时间段中被治疗，而且对一些过敏原(如花生)严重过敏但对其它过敏原(如猫皮屑)中度过敏的个体可从这样的治疗受益，在所述治疗中建立对较温和的过敏原的耐受，并随后将这种致耐受环境用于提供对其它更极端过敏原的耐受。此外，患有自身免疫性疾病且另外地对无关抗原或过敏原过敏(或以其他方式免疫)的个体可从这样的治疗方案受益，在所述治疗方案中首先建立对无关抗原或过敏原的耐受，并随后将这种致耐受环境用于提供对与自身免疫性疾病相关的自身抗原的耐受。因此提供了用于使尘螨过敏个体对上述尘螨过敏原和一种或多种另外的不同多肽抗原去敏化的方法。该方法要求，在第一步中向个体施用上述的根据本发明的组合物/产物/制剂(主要组合物)，其中所述施用是以足以产生针对尘螨过敏原的低反应状态的方式进行。一旦建立了针对尘螨过敏原的低反应状态，或至少发生朝向去敏化的转变，该方法要求施用包含个体将对其敏化的第二不同的多肽抗原的第二组合物。以这样的方式进行第二组合物的施用以利用通过使用主要组合物建立的致耐受环境，其中现在可能建立对第二不同多肽抗原的耐受性。将第二组合物与第一主要组合物或Feldl的较大片段共施用。“共施用”是指同时或共同施用，例如，当两种物质存在于同一组合物中，或在不同组合物中以几乎相同时间但在不同部位施用，以及在不同时间不同组合物中的多肽抗原递送。例如，可在递送第一组合物之前或之后在相同或不同部位递送第二组合物。递送之间的时间安排可以从间隔约数秒变化到间隔约数分钟、间隔数小时或甚至间隔数天。此外，可采用不同的递送方法。第二多肽抗原优选地是与尘螨过敏原不同的过敏原。当然，用于本发明方法的合适的过敏原可使用已知方法获得和/或产生。合适的过敏原的类别包括但不限于其它尘螨过敏原、花粉、动物皮屑(尤其是猫皮屑)、草、霉菌、灰尘、抗生素、针昆虫毒液和多种环境(包括化学品和金属)、药物和食物过敏原。常见的树过敏原包括来自三角叶杨、杨树、白蜡树、桦树、枫树、橡树、榆树、山核桃树和美国山核桃树的花粉；常见的植物过敏原包括来自艾蒿、豕草、英国车前草、酸模和藜的那些；植物接触性过敏原包括来自毒栎、毒叶藤和荨麻的那些；常见的草过敏原包括黑麦草、梯牧草、约翰逊草、百慕大草、羊茅草和蓝草过敏原；常见的过敏原还可从霉菌或真菌获得，诸如链格孢属、镰孢菌属、着色芽生菌属、曲霉属、小多孢菌属、毛霉属和嗜热放线菌；表皮过敏原可从房屋或有机灰尘(通常来源于真菌)获得或从动物来源诸如羽毛和狗皮屑获得；常见的食品过敏原包括牛奶和奶酪(乳制品)、鸡蛋、小麦、果仁(如花生)、海产品(如贝壳)、豌豆、大豆和麸质过敏原；常见的环境过敏原包括金属(镍和金)、化学品(甲醛、三硝基苯酚和松节油)、乳胶、橡胶、纤维(棉或羊毛)、粗麻布、染发剂、化妆品、去垢剂和香料过敏原；常见的药物过敏原包括局部麻醉和水杨酸盐过敏原；抗生素过敏原包括青霉素、四环素和磺胺过敏原；而常见的昆虫过敏原包括蜜蜂、黄蜂和蚂蚁毒液以及蟑螂萼器过敏原。特别充分表征的过敏原包括但不限于主要的猫过敏原Feldl、蜜蜂毒液磷脂酶A2(PLA)(Akdis等人(1996)J.Clin.Invest.981676-1683)、桦树花粉过敏原Betν1(Bauer等人(1997)Clin.Exp.Immunol.107536~541)和多表位的重组的草过敏原rKBG8.3(Cao等人(1997)Immunology巡46_51)。这些和其它合适的过敏原是商业上可获得的和/或可作为提取物按照已知技术容易地制备。优选地，第二多肽过敏原选自以下过敏原序列和数据库登记号(NCBIEntrez登记号)列表。NCBI是美国国家生物技术信息中心并且是美国国家卫生研究院的分支机构。可获取进入数据库的NCBI网址是誦.ncbi.nlm.nih.gov八过敏原序列和数据库登记号(NCBIEntrez登记号)房尘螨屋尘螨DerpiMKIVLAIASLLALSAVYARPSSIKTFEEYKKAFNKSYATFEDEEAARKNFLESVKYVQSNGGAINHLSDLSLDEFKNRFLMSAEAFEHLKTQFDLNAETNACSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCffAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQHNGVVQESYYRYVAREQSCRRPNAQRFGISNYCQIYPPNVNKIREALAQTHSAIAVIIGIKDLDAFR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75；250525；551047；515377；510911；939932；439950；2718；168316；168314；485371；2388664；2832717；2828273；548867。橄榄树橄榄序列416610OleelEDIPQPPVSQFHIQGQVYCDTCRAGFITELSEFIPGASLRLQCKDKENGDVTFTEVGYTRAEGLYSMLVERDHKNEFCEITLISSGRKDCNEIPTEGWAPSLKFKLNTVNGTTRTVNPLGFFKKEALPKCAQVYNKLGMYPP匪墙草属(parietaria)墙草属序列2497750ParjP2MRTVSMAALVVIAAALAWTSSAEPAPAPAPGEEACGKVVQDIMPCLHFVKGEEKEPSKECCSGTKKLSEEVKTTEQKREACKCIVRATKGISGIKNELVAEVPKKCDIKTTLPPITADFDCSKIQSTIFRGYY1352506ParjP5MVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTVGVVPRQPQLPVSLRHGPVTGPSDPAHKARLERPQIRVPPPAPEKA1532056ParjP8MRTVSMAALVVIAAALAWTSSAELASAPAPGEGPCGKVVHHIMPCLKFVKGEEKEPSKSCCSGTKKLSEEVKTTEQKREACKCIVAATKGISGIKNELVAEVPKKCGITTTLPPITADFDCSKIESTIFRGYY1532058ParjP9MRTVSAPSAVALVVIVAAGLAWTSLASVAPPAPAPGSEETCGTVVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGLQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTLGVVPRQPQLPVSLRHGPVTGPSDPAHKARLERPQIRVPPPAPEKA.2497749ParjP9MRTVSARSSVALVVIVAAVLVWTSSASVAPAPAPGSEETCGTVVGALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTLGVLHYKGN1086003Parj1MVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTVGVVPRQPQLPVSLRHGPVTGPSRSRPPTKHGWRDPRLEFRPPHRKKPNPAFSTLG另外的墙草属序列(NCBIentrez登记号)543659；1836011；1836010；1311513；1311512；1311511；1311510；1311509；240971。梯牧草(timothygrass)梯牧草属(phleum)序列PhlpiMASSSSVLLVWLFAVFLGSAYGIPKVPPGPNITATY⑶KWLDAKSTWYGKPTGAGPKDNGGACGYKDVDKPPFSGMTGCGNTPIFKSGRGCGSCFEIKCTKPEACSGEPVVVHITDDNEEPIAPYHFDLSGHAFGAMAKIffiDEQKLRSAGELELQFRRVKCKYPEGTKVTFHVEKGSNPNYLALLVKYVNGDGDVVAVDIKEKGKDKWIELKESWGAIffRIDTPDKLTGPFTVRYTTEGGTKTEAEDVIPEGWKADTSYESKPhlpiMASSSSVLLWALFAVFLGSAHGIPKVPPGPNITATY⑶KWLDAKSTWYGKPTAAGPKDNGGACGYKDVDKPPFSGMTGCGNTPIFKSGRGCGSCFEIKCTKPEACSGEPVWHITDDNEEPIAAYHFDLSGIAFGSMAKKGDEQKLRSAGEVEIQFRRVKCKYPEGTKVTFHVEKGSNPNYLALLVKFSGDGDVVAVDIKEKGKDKWIALKESWGAIffRIDTPEVLKGPFTVRYTTEGGTKARAKDVIPEGWKADTAYESKPhlp2MSMASSSSSSLLAMAVLAALFAGAWCVPKVTFTVEKGSNEKHLAVLVKYEGDTMAEVELREHGSDEWVAMTKGEGGVWTFDSEEPLQGPFNFRFLTEKGMKNVFDDVVPEKYTIGATYAPEEPhlp5ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPADKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAFTAMSEAQKAAKPATEATATATAAVGAATGAATAATGGYKVPhlp5ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPADKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPATEATATATAAVGAATGAATAATGGYKVPhlp5bAAAAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAAAAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKVPhlp5aADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAGAGVQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKVPhlp5MAVQKYTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVSYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKVPhlp5MAVQKYTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEDPAffPKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTATGAASGAATVAAGGYKVPhlp5ADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKVPhlp5SVKRSNGSAEVHRGAVPRRGPRGGPGRSYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKVPhlp5MAVHQYTVALFLAVALVAGPAGSYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGAEPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVPPADKYRTFVATFGAASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATVSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKVPhlp5ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPADKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAFTAMSEAQKAAKPATEATATATAAVGAATGAATAATGGYKVPhlp5bAAAAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAAAAKAPGLVPK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5616；293902；485371；455288；166447；166445；166443；166435；162551；160780；552080；156719；156715；515957；515956；515955；515954；515953；459163；166953；386678；169865。特别优选的过敏原/抗原包括猫皮屑蛋白Feldl；房尘螨蛋白DerPl、DerP2和DerP7；豕草蛋白ambal.Ual.2、al.3或al.4；黑麦草蛋白Iolpl和Iolp5；梯牧草蛋白phipi和phip5;百慕大草蛋白Cynd5；交链孢霉(Alternariaalternate)蛋白Altal、Alta2和烯醇酶(Alta6)；桦树蛋白Betvl和P14；德国蟑螂蛋白Blagl、Blag2、Blag3、Blag4、Blag5和Blag6；艾蒿(mugwort)蛋白Artvl；俄国蓟(russianthistle)蛋白Salkl和Salk2；花生ArahUArah2、Arah3、Arah4、Arah5、Arah6、植物抑制蛋白或脂转移蛋白或人类白细胞抗原。递送方法配制之后，可使用多种已知途径和技术将本发明的组合物在体内递送到受治疗者。例如，可作为注射溶液、悬液或乳液提供组合物，并使用常规针头和注射器或使用液体喷射注射系统通过肠胃外、皮下、表皮、皮内、肌内、动脉内、腹膜内、静脉内注射施用。组合物还可局部施用于皮肤或粘膜组织，诸如鼻内、气管内、肠内、直肠或阴道，或作为适于呼吸道或肺部施用的细碎的喷雾而被提供。其它施用方式包括口服施用、栓剂、舌下施用、主动或被动的经皮递送技术。当将施用本发明的肽时，优选地将肽施用到身体中的部位，在那里该肽将具有接触合适的抗原呈递细胞的能力，并且在那里该肽将具有接触个体的T细胞的能力。当将施用APC时，优选地将APC施用到身体中的部位，在那里APC将具有接触并活化个体的合适的T细胞的能力。递送方案可通过上述任何合适的方法施用肽/多核苷酸/细胞(诸如包含多种肽的组合物)。可由经验确定肽的合适量，但其通常是在以下提供的范围中。单次施用每种肽可足以对患者产生有益的作用，但将理解的是，如果肽施用多于一次那么它可能是有益的，在这种情况下典型的施用方案可以是，例如，每6个月中每周一次或两次持续2-4周，或每四到六个月中每天一次持续一周。将被理解的是，每种肽或多核苷酸或者肽和/或多核苷酸的组合可被单独或组合地施用于患者。用于施用的剂量将取决于若干因素，包括组合物的性质、施用途径和施用方案的时间表和时间安排。本发明的分子的合适剂量可以在每次施用中多达15μg、多达20μg、多达25μg、多达30μg、多达50μg、多达100μg、多达500μg或更多的量级。合适的剂量可少于15μg，但至少lng、或至少2ng、或至少5ng、或至少50ng、或至少lOOng、或至少500ng、或至少1μg、或至少10μg。对于本发明的一些分子，使用的剂量可更高，例如，多达lmg、多达2mg、多达3mg、多达4mg、多达5mg或更高。这样的剂量可以以液态制剂提供，其浓度适于允许由所选途径施用适当体积。试剂盒本发明还涉及本文所述的适于用于本发明的治疗的成分的组合，其以试剂盒的形式被包装在容器中。这样的试剂盒可包括允许本发明的治疗的一系列成分。例如，试剂盒可包括本发明的一种或多种不同肽、多核苷酸和/或细胞，或本发明的一种或多种肽、多核苷酸或细胞和适于同时施用或者用于顺序或分别施用的一种或多种另外的治疗剂。试剂盒可任选地包含其它合适的试剂或说明书和类似物。本发明由以下实施例阐释实施例1II类MHC结合搜索本研究的目的是为了鉴定对七种最常见的人类II类MHCHLA-DRB1*同种异型(覆盖普通白种人群体中发现的同种异型的总共约63%)具有强亲和力的一组独特的肽。为了鉴定房尘螨(HDM)过敏原Derpi、Derp2和Derp7中的结合肽，对来自这些过敏原性蛋白的一亚组的肽进行体外结合测定。结合测定中用于测试的肽最初由称作“肽穿线(peptidethreading)”白勺if胃丰几^^去^胃(Biovation,Ltd.，Aberdeen,Scotland,UK进行)。这是对来自一条序列的连续肽被II类MHCHLA-DR分子的结合沟容纳的潜力的生物信息学分析。预先筛选这一亚组的肽在酸性水环境中的溶解度，并最终选择具有44条肽的组用于体外II类MHC结合测定中的测试。方法采用的测定是竞争性II类MHC结合测定，其中分析每种肽代替来自所研究的每种人类II类MHC同种异型的已知对照结合物的能力。本研究中使用的同种异型和对照肽显示在表2中同种异型对照肽Hf^ijDRB1*0101流感血凝素307-319PKYVKQNTLKLATDRB1*0301结核分支杆菌/麻风杆菌hsp652-16AKTIAYDEEARRGLEDRB1*0401流感血凝素307-319PKYVKQNTLKLATDRB1*0701流感血凝素307-319PKYVKQNTLKLATDRB1*1101流感血凝素307-319PKYVKQNTLKLATDRB1*1301HLA-DQBl*060321-36TERVRLVTRHIYNREEDRB1*1501人类髓磷脂碱性蛋白85-99ENPVVHFFKNIVTPRDQB1*0602人类胰岛素Bl-15FVNQHLCGSHLVEAL表2.用在体外结合测定中的对照肽在竞争测定中分析了每种44HDM肽(其被显示在表3A和3B中)并筛选了与对照肽相比的相对结合。由于竞争性测定的性质，每种肽的数据被表示为其自身的IC50与对照肽的IC50的比值。因此，具有与对照肽类似的IC50值的肽具有相同的结合亲和力，而具有少于1的比值的肽具有较高的亲和力，而具有大于1的比值的肽具有较低的亲和力。结果在水溶液中的溶解度是肽作为有效治疗剂的基本标准。因此，作为溶解度筛选结果，我们将排除在多个结合记录(bindingregisters)中具有高频率的大疏水氨基酸残基的非常疏水的肽。这是杂乱的HLA-DRB1*结合物的特征。结合测定的数据显示在表3B中。显示了每种肽对研究中的每种同种异型的相对结合。数据显示，被测试的44种肽中的24种结合到一种或多种II类MHC同种异型。观察到一定范围的交叉反应性，即5种肽仅结合一种同种异型，8种肽结合两种同种异型，9种肽结合三种同种异型，以及两种肽结合四种不同的II类MHC同种异型(红色)。还预期这样的肽将具有对未经由MHC结构的同源性进行测试的相似同种异型结合的能力。这可以在这里若干情况下肽对DRB1*0101、*0401、*0701和*1101的交叉反应性中观察到。还显示了最高浓度的肽在结合测定的水溶液中的溶解度状况。数值表示观察到不溶白色沉淀的最低浓度。在测定中看上去不存在沉淀形成的显著的非特异性作用。在高浓度下沉淀的几种肽还结合于II类MHC；然而，几种肽还未显示与对照肽竞争的能力。因为存在许多疏水残基，预期容易形成沉淀的肽可表现高亲和力和杂乱的结合。肽的％纯度被表示在表3A中。这是有意义的，因为观察到纯度从60-90%变化。如果肽相对不纯，这将对肽竞争的能力有相当大的影响。例如，HDM23A和HDM32显示低亲和力的结合；然而，与其它HDM肽相比它们具有降低的纯度(分别为66.7%和68.7%)。因此，如果考虑到纯度，它们实际上可具有与较高纯度的肽相等的亲和力。可观察到，一些II类MHC同种异型比其它结合更多肽；这是很可能预料到的，因为不同II类MHC结合沟中的袋位置之间有差异性。然而，各种对照肽的亲和力之间还存在若干充分表征的差异。显然，高亲和力的对照肽将更难被竞争性HDM肽代替，导致更少结合肽的鉴定。这可以由本文呈现的数据阐释。例如，根据同种异型，流感血凝素307-319对照肽具有不同亲和力，其中DRB1*0101>*0401>*0701>*1101。这反映在每种同种异型的结合物数目上，其中DRB1*0101具有最低数目的结合物(5个)而DRB1*1101具有最高数目(14个)。此外，对DRB1*1501的结合测定是非常严格的，这是由于髓磷脂碱性蛋白85-99对这种同种异型的高亲和力。在高严格性筛选中，在此前的研究中被测试的Feldl肽EQVAQYKALPWLENA给出了0.97的比值，这表示可在这种严格性下鉴定高亲和力结合物。此外，为了鉴定较低亲和力的结合物，还在较不严格的条件下进行测定。观察到所有Derρ结合肽在针对该同种异型被测试时具有高比值，这显示与对照肽相比它们是低亲和力的结合物。DQA1*0102/DQB1*0602结合测定使用来自人类胰岛素的B链的肽，其与DR测定中使用的那些相比具有较低的亲和力。这表示DQ测定是非常敏感的，而且对该II类MHC同种异型的最强结合物趋于产生非常低的比值。这种敏感性还是所筛选的组中DQ结合肽的相对较高数目的原因。最终，在进一步分析时，发现被鉴定为DRB1*0101、*0401、*0701超家族的配体的肽包括对这一同种异型家族的杂乱结合物特有的基序，其中P1=Y、F、W、L、I、V或M(大的芳香族或疏水残基)，P6=S、T、C、A、P、V、I、M(小的、不带电荷的残基)。鉴定为这3种同种异型的所有或组合的结合物的16种肽(如，HDM21BRGKPFQLEAVFEANQNT)中，14(87.5%)种包含这种基序，这说明这些是对1-4-7同种异型具有一定范围亲和力的杂乱结合物。结论已显示一系列的肽具有结合被检测的II类MHC同种异型的能力，并可测试其刺激CD4+T细胞体外增殖和刺激T细胞分泌细胞因子的能力。表3A<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表3B<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>的尘螨过敏原组中可选蛋白的序列。例如，表3A中的肽HDMOl来自Derpl，因此HDMOl的序列被用来探测Derfl中的同源性序列。对如上鉴定的所有24种肽进行相同操作。实施例1和实施例2中鉴定的肽被显示在表4至6中。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>表6<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>在表4中，衍生“亲本中的残基”位置的Derpi的序列是公众可获得的序列，其NCBI登记号是P08176。Derp2(表5)和Derp7(表6)的相应序列分别是NCBI登记号P49278和P49273。Derfl的序列从NCBI登记号P16311获取，Derf2的序列从NCBI登记号Q00855获取，Derf7的序列从NCBI登记号Q26456获取。实施例3II类MHC结合搜索本研究的目的是为了鉴定对七种最常见的人类II类MHCHLA-DRB1*同种异型(覆盖普通白种人群体中发现的同种异型的总共约63%)具有强亲和力的一组独特的肽。为了鉴定主要的房尘螨过敏原Derpi、Derp2和Derp7中的结合肽。使用市场上可获得的EpiMatrix算法(EpiVaxInc.)通过称作“肽穿线”的计算机方法对肽进行鉴定。这是对来自一条序列的肽被II类MHCHLA-DR分子的结合沟容纳的潜力的生物信息学分析。EpiMatrix是一种基于矩阵的算法，其将长为10个氨基酸的区段进行排序，通过结合于所选择的每种MHC分子的估计概率而将来自任何多肽序列的9个氨基酸进行重叠。(DeGroot等人，AIDSResearchandHumanRetroviruses13:539-41(1997))。建立矩阵基序的程序被发表在Schafer等人，16Vaccine(疫苗)1998(1998)中。在该实施例中，评价了对HLADRl、DR2、DR3、DR4、DR7、DR8、DRl1、DRl3和DRl5的结合潜力。通过对蛋白序列中每个10聚体框架评分来选择推定的MHC配体。通过将10聚体的序列与已知结合每种MHC等位基因的10个氨基酸序列的矩阵进行比较来得出这一分数。回顾性研究已证明，EpiMatrix准确地预测了所发表的MHC配体(Jesdale等人，在Vaccines(疫苗)，97中(ColdSpringHarborPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,1997))还已证实对结合多种MHC分子的肽的成功预测。由EpiMatrix如下计算对所选的MHC分子结合的估计概率。通过对与指定MHC等位基因的已知MHC结合物相比之下每个氨基酸对结合的相对促进或抑制进行估计来对肽评分。将横跨该肽的该信息加和，并将汇总分数(EMX分数)指定给整个肽。在比较EMX分数与已知MHC配体的分数后，EpiMatrix得到“估计结合概率”(缩写为EBP，但并不严格地是概率)。EBP描述具有与将结合指定MHC分子的肽一样高或更高的EpiMatrix分数的肽的比例。EBP从100%(非常可能结合)变化到少于(非常不可能结合)。对NCBI数据库中公开的Derpi(NCBI登记号P08176)的完整序列进行EpiMatrix分析。该分析鉴定了核心肽(和其侧翼序列)，其衍生自以上被预测为具有良好II类MHC结合的序列。这些序列显示在下面的表7A中。表7B和7C分别显示用于等价分析Derp2和Derρ7(NCBI登记号Ρ49278和Ρ49273)的已知序列的序列。表7A-C中“序列中的残基”提供被分析的序列中肽的位置。核心肽(中间的粗体氨基酸)界定分析中所鉴定的实际结合序列。包括了稳定化侧翼(N-末端和C-末端，非粗体)以与核心序列一起使用，而且通常需要所述稳定化侧翼来帮助制造肽。“击中数(numberofhits)”是指序列中预测的对被测试的所有MHC类型的高结合亲和力的数目。"EpiMatrix串分数”衍生自对串长度标准化的击中数。因此串分数是预测的总MHC结合性质相对于随机肽标准物的过量或不足。10或更高的分数被认为是表示宽的MHC结合性质。Epivax还分析了包含表位的肽的疏水性。大于1的分数被认为不适于施用和/或制造。表7A-Derpi<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>表7B_Derp2<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>表7C_Derp7<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>实施例4用于进一步测试的肽的选择基于实施例1至3中鉴定的肽和表位，发明人选择表8中所示的肽用于进一步测试。所选择的一些肽可被认为是实施例1至3的肽的变体，但也被认为是本发明的肽。特别地，表8中粗体的残基表示对亲本蛋白天然序列中相应残基的改变。这些改变减少肽二聚体的形成并增进溶解度而不减少肽作为T细胞表位的功能性。所显示的改变是如所示地用丝氨酸(S)或5-氨基丁酸(B)，或者胱氨酸代替天然序列中的半胱氨酸(C)。另外，当与实施例1至3的肽序列相比时，一些序列可包括衍生它们的亲本蛋白的更多或更少的残基。因此，可认为这样的序列代表实施例1至3的肽的截短变体或延伸变体。例如,肽HDM03F对应于Derpi的残基149-165。HDM03E对应残基149-167。因此，可认为HDM03F是HDM03E的截短变体，其是通过除去HDM03E的N末端2个残基而形成的。表8中的“亲本中的残基”位置是指表4至7中所用的DerpUDerp2和Derp7的序列。表8中表示的具有N末端谷氨酸(E)残基例如HDM03K、L、V和W的那些肽中，谷氨酸可被焦谷氨酸代替以改进制造过程中的稳定性而不影响肽的功能。通常使用其中已发生这样的替换的肽来获得来自对这些肽的进一步测试的数据(实施例5)。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>实施例5细胞因子释放测定和肽组合的选择使用实施例3的肽来分析PBMC响应于肽刺激的细胞因子分泌概况。使用ELISA测定来测试来自细胞因子释放测定的上清液中2种细胞因子IFN-Y和IL-13的存在。使用所示的肽来分析PBMC响应于肽刺激的细胞因子分泌概况。使用ELISA测定或多重微珠阵列测定来测试来自细胞因子释放测定的上清液中2种细胞因子IFN-γ和IL-13的存在。典型的细胞因子释放测定需要每个受治疗者的40XIO6个PBMC。更详细地，将250μ1的具有适当抗原或肽浓度的200μg/ml溶液分配到48孔板的适当孔中。将板在37°C下加湿的5%CO2培养箱中孵化最多4小时。随后向每孔添加250μ1的5XIO6个细胞/ml的PBMC悬液，并将板送回培养箱孵化5天。刺激后，收集培养上清液的样品以根据标准实验方案通过ELISA或多重微珠测定来测试。11-13和IFN-γ对每种肽的响应被评分为阳性T细胞表位，条件是该肽的孔中产生的细胞因子的量超过100Pg/ml，即，100pg/1.25X106个细胞。因此，如果来自某个体的细胞产生超过100pg/ml的11-13或IFN-γ响应，则认为该个体对肽响应。对每种肽的响应者的百分比显示在图2中。具有超过100pg/ml的11_13或IFN-γ响应的个体的百分比的前五种肽是HDM203B、HDM201、HDM205、HDM203A和HDM202(SEQIDNO.83、80、85、82和81)。HDM203A和203B是与被修饰以使丝氨酸代替半胱氨酸(在C末端的第三个残基)而实现更好的可制造性和稳定性的203B具有相同序列的变体。因此，肽的优选组合应该包括这些肽或其变体的至少一种。接下来最有效的肽是HDM09A、HDM03D、HDM03E、HDMlOUHDMlO1A,HDM10IB(SEQIDN0:5、51、52、72、73和74)。优选的肽组合通常可包括选自该组的至少一种另外的肽。该组中HDM03D和HDM03E是彼此的序列变体，其中丝氨酸和氨基丁酸(分别地)代替半胱氨酸(在Derpi天然序列C末端的第五个残基)以实现更好的可制造性和稳定性。这些序列被认为是等价的。还认为HDM03的另外变体，即HDM03V和HDM03ff(SEQIDNO.100和101)是合适的。这些变体是包含直到HDM03D的最后11个或10个(分别地)C末端残基为止的截短的片段。这些肽不包括在上述测定中，但在测试时被认为至少与HDM03D等价(数据未显示)。HDM10UHDM10IA和HDM101B也是彼此的序列变体，其中HDM101A以丝氨酸而HDM101B以氨基丁酸来代替HDM101中的半胱氨酸(从N末端数的第三个残基)。所有三种HDM101系列肽被认为是等价的，其中HDM101A或HDM101B因可制造性和稳定性而被优选。在被测试的其余肽中，下列的在被测试的个体的>25%中具有响应HDM01[Derpi]、HDM01A[Derpi]、HDM06A[Derp2]、HDM07[Derpi]、HDM19A[Derp2]、HDM21A[Derp2]、HDM23C[Derp2]、HDM26B[Derp2]、HDM35A[Derp7]、HDM48[Derp7]、HDM51A[Derf7]、HDM102A[Derpi]、HDM204[Derpi]禾口HDM206[Derpi](分别为SEQIDNO.1、48、54、56、57、9、62、63、65、21、24、76、84和86)。优选的肽组合通常可包括选自该组的至少一种另外的肽。在考虑向混合物中加入哪种另外的肽时，这最后一组的代表应优选地选自取自Derp2和Derp7的表位，因为之前的组主要是Derpi。HDM26B[Derp2]和HDM35A[Derp7]是特别优选的。另外的研究(数据未显示)证明，这些是分别来自Derp2和Derp7的表现最佳的肽。图3显示对HDM201、HDM202、HDM203B和HDM205的核心混合物响应的个体数目。还显示了加入HDM03D和HDM10IA的增量作用，和加入HDM26B和HDM35A的进一步的增量作用。清楚地显示了加入来自第二组和第三组肽的表位的益处。重要地，向核心混合物加入肽03D、26B、35A、101A将4个个体从非响应者转变为响应者。还明显的是，从混合物除去肽201、202、203B或205中的一种将不减少针对所提出的混合物的总响应者的数目，因为大多数人对这一组肽具有三种或四种响应。这在图4中被证明，其对HDM201、HDM203B和HDM205的核心混合物显示相似的结果。权利要求一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗房尘螨过敏症的组合物，该组合物包括至少四种多肽，其中所述多肽独立地选自以下任一种(i)HDM203B(SEQID83)、HDM201(SEQID80)、HDM205(SEQID85)、HDM203A(SEQID82)、HDM202(SEQID81)、SEQIDNO1至79、84、或86至104中任一个的多肽(即SEQIDNO1至104的任一个)；或(ii)根据(i)的多肽的变体，其中所述变体是长度9至30个氨基酸的多肽，包含由以下所组成的区域-(i)的任何序列；或-与(i)的任何序列具有至少65％同源性的序列，所述序列能够使得个体免疫耐受(i)的任何序列，或(iii)根据(i)的多肽的变体，其中所述变体是长度9至30个氨基酸的多肽，包含由表示以下任一个的序列所组成的区域-(i)的任何序列的片段；或-(i)的任何序列的片段的同系物，所述序列能够使得个体免疫耐受(i)的任何序列并具有至少9个氨基酸的长度，而且其中所述同系物与(i)的任何序列中任何9个连续氨基酸具有至少65％的同源性。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物a)能够使得一组尘螨过敏个体的群体中至少50%或至少60%免疫耐受；和/或b)包括至少四种选自权利要求l(i)的多肽或权利要求l(ii)或(iii)中定义的其变体，和/或c)包括至少一种另外的多肽，最多总共十三种独特的/不同的多肽，其中所述另外的多肽-包含与以上SEQIDNO:1至104中任一个的至少9个或更多个连续氨基酸具有至少65%的序列同一性、在(a)中未被选择的序列；且-长度是9至30个氨基酸；和/或d)包括最多达十三种多肽。3.根据权利要求1或2所述的组合物，包括至少一种根据权利要求2(c)的多肽，所述多肽长度是9至20或13至17个氨基酸，和/或其中所述多肽与SEQIDNO:1至104中任一个的至少9个或更多个连续氨基酸具有至少70%的序列同一性。4.根据前述权利要求任一项所述的组合物，包括选自SEQIDN0:80、81、82、83和85的多肽或权利要求l(ii)或(iii)定义的其变体的至少一种多肽。5.根据权利要求4所述的组合物，包括独立地选自SEQIDNO:80、81、82、83和85的多肽或权利要求l(ii)或(iii)定义的其变体的至少两种、三种或四种多肽，条件是SEQIDNO82和83的多肽或变体中不多于一种被选择。6.根据前述权利要求任一项所述的组合物，包括选自SEQIDNO:5、51、52、100、101、72、73和74中任一个的多肽或权利要求l(ii)或(iii)定义的其变体的至少一种另外的多肽。7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述至少一种另外的肽选自SEQIDN0:51、73、100和101中任一个的多肽或权利要求l(ii)或(iii)定义的其变体。8.根据权利要求6或7所述的组合物，包括选自SEQIDNO:1、9、21、24、48、54、56、57、62、63、65、76、84和86中任一个的多肽或权利要求1(ii)或(iii)定义的其变体的至少一种另外的多肽。9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述至少一种另外的肽选自SEQIDN0:63和65中任一个的多肽或权利要求l(ii)或(iii)定义的其变体。10.根据前述权利要求任一项所述的组合物，由以下组成a)SEQIDNO.83和82的多肽或权利要求1(ii)或(iii)定义的其变体的至少一种；和b)SEQIDNO.80,81和85的多肽或权利要求1(ii)或(iii)定义的其变体的至少两种；和任选地c)SEQIDNO:51、73、100和101的多肽或权利要求1(ii)或(iii)定义的其变体的至少一种；和d)SEQIDNO:63和65的多肽或权利要求1(ii)或(iii)定义的其变体的至少一种。11.根据权利要求10所述的组合物，其中(c)的至少一种多肽是SEQIDN0.101的多肽。12.根据前述权利要求任一项所述的组合物，其中一种或多种所述多肽具有选自以下的一种或多种修饰(i)N末端乙酰化；(ii)C末端酰胺化；(iii)精氨酸和/或赖氨酸侧链胺上的一个或多个氢被亚甲基代替；(iv)糖基化；和(ν)磷酸化。13.根据前述权利要求任一项所述的组合物，其中所述肽的至少一种已被改造为可溶以使其包含i)所述肽的T细胞表位侧翼的残基的N末端与刚好在衍生所述肽的蛋白序列中所述残基的N末端的两个至六个连续氨基酸相对应的一个至六个连续氨基酸；和/或ii)所述肽的T细胞表位侧翼的残基的C末端与刚好在衍生所述肽的蛋白序列中所述残基的C末端的一个至六个连续氨基酸相对应的一个至六个连续氨基酸；或iii)所述肽的T细胞表位侧翼的残基的N末端和C末端，选自精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸和天冬氨酸的至少一个氨基酸，其中所述多肽具有至少3.5mg/ml的溶解度，而且所述T细胞表位具有少于3.5mg/ml的溶解度。14.根据前述权利要求任一项所述的组合物，其中所述肽的至少一种已被改造为可溶以使另外地i)所述肽天然序列中的任何半胱氨酸残基被丝氨酸或2-氨基丁酸代替；和/或ii)缺失了在所述肽天然序列的N末端或C末端的最多三个氨基酸中、不包含在T细胞表位中的任何疏水残基；和/或iii)缺失了在所述肽天然序列的N末端或C末端的最多四个氨基酸中包含序列Asp-Gly的、不包含在T细胞表位中的任何两个连续氨基酸。15.根据前述权利要求任一项所述的组合物，其中每种多肽具有在0.03至200nmol/ml、0.3至200nmol/ml或30至120nmol/ml的范围内的浓度。16.一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗尘螨过敏症的组合物，包括至少三种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列在被表达时导致权利要求1至14任一项定义的组合物的产生。17.根据权利要求16所述的组合物，其中能够表达不同多肽的每种多核苷酸序列存在于相同或不同的多核苷酸载体中。18.一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗尘螨过敏症的载体，所述载体包括各自编码权利要求1定义的不同多肽的至少三种多核苷酸序列和任选地编码权利要求2定义的不同多肽的一种或多种另外的多核苷酸序列。19.一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗尘螨过敏症的载体，所述载体包括各自编码权利要求1或2定义的不同多肽的四种到十三种不同的多核苷酸序列，其中至少四种所述多核苷酸序列各自编码选自SEQIDN0.80、81、82、83和85的不同多肽，条件是SEQIDNO82和83的多肽中不多于一种被选择。20.一种包括四种到十三种多肽的产物，其中至少一种、两种、三种或四种多肽独立地选自SEQID而80、81、82、83和85的多肽或权利要求1(士士)或(iii)定义的其变体，条件是SEQIDNO:82和83的多肽或变体中不多于一种被选择，其中每种不同多肽将同时、分别或顺序地用于通过免疫耐受作用预防或治疗房尘螨过敏症。21.一种包括各自编码权利要求1或2定义的不同多肽的四种到十三种多核苷酸序列的产物，其中至少四种所述多核苷酸序列各自编码选自SEQIDN0:80、81、82、83和85的不同多肽，条件是SEQIDNO:82和83的多肽中不多于一种被选择，而且其中每种不同多肽将同时、分别或顺序地用于预防或治疗人类尘螨过敏症。22.一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗尘螨过敏症的药物制剂，所述药物制剂包括根据权利要求1至17任一项的组合物；根据权利要求18或19任一项的载体；或根据权利要求20或21任一项的产物；和药学上可接受的运载体或稀释剂。23.根据权利要求22的组合物、载体或产物，被配制为用于口服施用、鼻内施用、表皮施用、皮下施用、舌下施用、皮内施用、口腔施用或用于通过吸入或通过注射施用。24.如权利要求1至17任一项定义的组合物或如权利要求20或21定义的产物，另外地包括另外的多肽过敏原，用于使得个体免疫耐受所述另外的多肽过敏原。25.一种确定T细胞是否识别权利要求1定义的多肽的体外方法，所述方法包括将所述T细胞与所述多肽接触并检测所述T细胞是否被所述多肽刺激。26.一种确定个体是否患有疾患或处于疾患风险中的体外方法，其中所述疾患以响应于房尘螨过敏原的过敏症状为特征，所述方法包括测试个体是否具有对权利要求1至17任一项定义的组合物响应的T细胞，从而确定所述个体是否患有疾患或处于疾患风险中。27.根据权利要求26所述的方法，其中针对所述组合物的T细胞免疫应答通过如下来测量在允许所述组合物与所述T细胞相互作用的条件下将所述组合物与从受治疗者获取的样品中的T细胞接触；并确定是否有任何T细胞被刺激了，从而确定是否存在T细胞免疫应答。全文摘要本发明涉及包括用于预防或治疗房尘螨过敏症的肽的组合物，并且特别涉及用于预防或治疗所述过敏症的肽的最佳组合。文档编号A61K39/35GK101820907SQ200880111612公开日2010年9月1日申请日期2008年8月15日优先权日2007年8月15日发明者保罗·莱德勒,罗德里克·彼得·哈夫纳,马克·拉尔什申请人:切尔卡西亚有限公司