抗rg-1抗体之偶联物的制作方法

专利名称：：抗rg-1抗体之偶联物的制作方法
技术领域：
：本发明提供与配偶体分子偶联的抗RG-I抗体以用于治疗诸如癌症的疾病，其中无论被结合的RG-I是否被内化在靶细胞内，所述配偶体分子均发挥其作用。
背景技术：
：与细胞毒性化合物偶联的抗体_配偶体分子已经被开发用于治疗包括癌症在内的疾病。常规上，该技术限于这样的抗原靶，其中抗体/抗原复合物被内化进入靶细胞，然后配偶体分子(partnermolecule)在细胞内被释放和/或活化。此类偶联物(conjugate)通称为抗体_药物偶联物，或ADC。可以使用该“基于内化”的体系治疗的疾病的一个例子是前列腺癌。前列腺癌系男性之常见疾病，影响约三分之一年龄在45岁以上之男性。有证据表明同时存在遗传和环境因素，而绝大多数的病例有可能系这两种因素结合之结果。前列腺癌通常通过身体检查和前列腺特异性抗原(PSA)的血清水平进行诊断。根治性前列腺切除术对于局部疾病而言是首选治疗方式。晚期的转移疾病目前通过雄激素消融疗法或采用GnRH(促性腺激素释放激素)的治疗以及通过抗雄激素疗法进行治疗。然而，晚期疾病几乎总是会产生激素抗性，无法治愈进行性疾病。此外，根治性前列腺切除术和雄激素消融疗法均伴有严重的副作用。尽管基于内化的体系有希望成为这些治疗方法的替代性方法，然而对用于早期和晚期前列腺癌的新型治疗方法仍然存在相当大的需要。多肽RG-I是细胞外基质蛋白的Mindin/F-spondin家族的同源物(US5，871，969)。该物质在前列腺组织中被高度表达(W098/45442)，因而它应当是用于诊断和治疗前列腺癌和表达该物质的其它癌症(例如膀胱癌)的有用的靶标。Harkins等(US7，335，748)公开了人抗-RG-I抗体及其在检测和治疗癌症中的用途。我们已经出乎意料地发现RG-I抗体和配偶体分子的偶联物能够有效治疗与异常的RG-I表达有关的病症，即使抗体结合时RG-I是不内化的。
发明内容本公开提供分离的抗-RG-I抗体-配偶体分子偶联物，该偶联物以高亲和性(affinity)特异性地结合RG_1。本公开还提供使用该偶联物治疗诸如前列腺癌和膀胱癌等癌症的方法。在一个实施方式中，抗体_配偶体分子偶联物包含与配偶体分子偶联的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分可结合人RG-1，并且所述偶联物显示出以下性质中的至少一种(优选为两种)性质(a)以1XICT8M或更小的Kd与人RG-1结合；或(b)抑制RG-I表达细胞的体内生长。优选的是，所述偶联物的抗体部分是人抗体，更优选是人单克隆抗体。还优选的是，该抗体或其抗原结合部分交叉竞争结合人RG-I上的由参考抗体识别的表位，所述参考抗体包含(a)包含SEQIDNO13氨基酸序列的重链可变区(Vh)和包含SEQIDNO15氨基酸序列的轻链可变区(\)；或(b)包含SEQIDNO14氨基酸序列的Vh和包含SEQIDNO16氨基酸序列的Vl。在一个优选的实施方式中，所述参考抗体包括含有SEQIDNO:13氨基酸序列的Vh和含有SEQIDN0:15氨基酸序列的\。在另一优选的实施方式中，所述参考抗体包括含有SEQIDNO14氨基酸序列的Vh和含有SEQIDNO16氨基酸序列的\。本发明的偶联物的特别优选的抗体或其抗原结合部分包括(a)包含SEQIDNO1的VhCDRl；(b)包含SEQIDNO3的VhCDR2；(c)包含SEQIDNO5的VhCDR3；(d)包含SEQIDNO7的VlCDRl；(e)包含SEQIDNO9的VlCDR2；禾口(f)包含SEQIDNO11的VlCDR3。本发明的偶联物的另一特别优选的抗体或其抗原结合部分包括(a)包含SEQIDNO2的VhCDRl；(b)包含SEQIDNO4的VhCDR2；(c)包含SEQIDNO6的VhCDR3；(d)包含SEQIDNO8的VlCDRl；(e)包含SEQIDNO10的VlCDR2；禾口(f)包含SEQIDNO12的VlCDR3。在另一方面中，本发明的偶联物的单克隆抗体或其抗原结合部分包括(a)包含选自SEQIDNO13或14的氨基酸序列的Vh；和(b)包含选自SEQIDNO15或16的氨基酸序列的\；其中该抗体特异性结合人RG-1。前述的优选组合包括(a)包含SEQIDNO13氨基酸序列的Vh；和(b)包含SEQIDNO15氨基酸序列的Vl。前述的另一优选组合包括(a)包含SEQIDNO14氨基酸序列的Vh；和(b)包含SEQIDNO16氨基酸序列的Vl。该抗体可以是全长抗体，例如IgGl或IgG4同种型抗体，或者是抗体片段，例如Fab、Fab，或Fab，2片段，或者是单链抗体。在另一方面中，本发明涉及一种抑制表达RG-I的肿瘤细胞生长的方法，该方法包括使所述细胞与本公开的抗体-配偶体分子偶联物接触，由此抑制所述RG-I肿瘤细胞的生长。在另一方面中，本发明涉及一种治疗需要该治疗的受试者体内癌症的方法，该方法包括给所述受试者施用有公开的本披露的抗体_配偶体分子偶联物，以治疗该受试者体内的癌症。优选的是，所述癌症是以表达RG-I的细胞为特征的癌症。附图简要说明图IA显示19G9人单克隆抗体的Vh的核苷酸序列(SEQIDNO17)和氨基酸序列(SEQIDNO:13)。该图示出CDRl(SEQIDNO1)、CDR2(SEQIDNO3)和CDR3(SEQIDNO:5)区域。图IB显示19G9人单克隆抗体的\的核苷酸序列(SEQIDNO19)和氨基酸序列(SEQIDN0:15)。该图示出CDRl(SEQIDNO:7)、CDR2(SEQIDNO9)和CDR3(SEQIDNO:11)区域。图2A显示34E1人单克隆抗体的Vh的核苷酸序列(SEQIDNO18)和氨基酸序列(SEQIDN0:14)。该图示出CDRl(SEQIDNO:2)、CDR2(SEQIDNO4)和CDR3(SEQIDNO:6)区域。图2B显示34E1人单克隆抗体的\的核苷酸序列(SEQIDNO20)和氨基酸序列(SEQIDNO16)。该图示出CDRl(SEQIDNO8)、CDR2(SEQIDNO10)和CDR3(SEQIDNO12)区域。图3A和3B分别显示某些抗体-配偶体分子偶联物对LNCaP和786_0细胞的体外肿瘤活化活性的EC5tl值。图4A-4D和5A-5D显示体内LNCaP/前列腺基质细胞异种移植小鼠模型的结果，示出了中值肿瘤体积(图4A-4D)和中值体重的变化数据(图5A-5D)。图6A-6D和7A-7D显示体内LNCaP异种移植小鼠模型的结果，示出了中值肿瘤体积(图6A-6D)和中值体重的变化数据(图7A-7D)。实施方式本发明涉及抗体、抗体片段和抗体模拟物，它们与RG-I特异性结合且对RG-I具有高亲和性，并且被偶联于配偶体分子，这些配偶体分子不需要偶联物的内化即可发挥它们的效能。诸如RG-I等非内化抗原保持在肿瘤部位并且在抗体结合时不会快速内化。据报导偶联物的功效取决于细胞表面抗体-抗原相互作用引发活性细胞毒素载荷的内化、运输和随后的释放(Sutherlandetal.，J.Biol.Chem.281，10540-10547(2006))。然而，在本发明中我们证明了抗体药物偶联物在肿瘤部位的保持足以对肿瘤产生细胞毒素效果，即使被靶向的抗原不被内化，或者可能不存在于这些肿瘤细胞本身上，而是存在于周围的细胞外基质、基质细胞、肿瘤血管细胞，或是侵入性炎症细胞(如肿瘤相关的巨噬细胞)上。或者，当抗原从肿瘤细胞脱离但通过其与肿瘤细胞、细胞外基质、基质细胞、侵入性炎症细胞或肿瘤血管细胞的关联性而保持在肿瘤部位时，保持仍可发生。诸如RG-I等非内化抗原保持在肿瘤部位并且在抗体结合时不被内化。该抗原在肿瘤部位的保持可以通过靶抗原与肿瘤细胞、周围基质细胞或肿瘤血管细胞的外部原生质膜的附着来介导。或者，当抗原从肿瘤细胞脱离下来但通过其与细胞外基质或肿瘤细胞、基质细胞或肿瘤血管细胞的缔合而保持在肿瘤部位时，可发生保持。就抗体-配偶体分子偶联物而言，它将通过抗原结合而被固定在疾病部位，使配偶体分子能够进行趋向于肿瘤的释放。一旦配偶体分子被释放(例如，通过以下说明的接头基团(linkergroup)的断裂)，它就可自由地进入附近的细胞，变成活化形式，并发挥其作用。连接基团的断裂可以利用肿瘤的较低的细胞外pH(pHe)，该值一般约为6.8，或者比正常组织的值低大约0.5单位(在诸如腙等PH敏感性接头的场合)。或者，所述接头可以被肿瘤的细胞外基质中、或肿瘤内的细胞的表面上的蛋白酶所断裂，所述蛋白酶例如CD10、组织蛋白酶、基质金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶。为了可以更容易理解本发明，首先对一些术语进行定义。其它定义则在整个详细说明中阐明。术语“RG-1”包括人RG-I的变体、同种型和物种同源物。因此，本公开的人抗体可能在一些情况下与来自人之外的其它物种的RG-I产生交叉反应。在某些实施方式中，这些抗体、抗体片段或抗体模拟物可以对一种或更多的人RG-I具有完全的特异性，并且可能不显示非人类交叉反应性的物种或其它类型。术语“免疫应答”是指诸如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞和由以上细胞或肝脏制造的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，该作用可导致侵入性病原体、被病原体感染的细胞或组织、癌细胞，或者(在自身免疫炎症和病理炎症情况下)正常的人细胞或组织的选择性损害、破坏或从人体清除。“信号转导途径”系指各种信号转导分子之间的生物化学作用，所述分子在信号由细胞的一部分传输至细胞的另一部分时发挥作用。短语“细胞表面受体”包括能够接收信号和使该信号通过细胞的原生质膜进行传输的分子或分子的复合物，例如RG-I受体。术语“抗体”系指完整抗体和其任何抗原结合片段(“抗原结合部分”)或单链。“全长抗体”系指包含通过二硫键而互连的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的蛋白。每条重链包含一重链可变区(缩写为％)和一重链恒定区。该重链恒定区包含三个域(domain)，ChI、CH2*Ch3。每条轻链包含轻链一可变区(缩写为VJ和一轻链恒定区。该轻链恒定区包含一个域，Q。V1^Pt区域还可再细分为具有高可变性的多个区，被称为互补决定区(CDR)，其间散布有更为保守的被称为框架区(FR)的多个区域。每个V1^nt均由三个CDR和四个FR构成，按照以下顺序从氨基端至羧基端排布FR1、⑶Rl、FR2、⑶R2、FR3、⑶R3、FR4。重链和轻链的这些可变区包含与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主的组织或因子结合，包括免疫系统的各种细胞(如效应细胞)和经典补体系统的第一成分(Clq)。术语“抗体片段(antibodyfragment)，，和抗体的“抗原结合部分”(或简称为“抗体部分”)系指抗体的一种或多种保留与抗原(如RG-1)特异性结合的能力的片段，已经证明抗原结合功能可通过全长抗体的片段来执行。此类结合片段的实例包括(i)Fab片段，即由八、VH、Q和ChI功能域构成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，即包括由一个二硫桥在铰链区连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fab’片段，它本质上是具有一部分铰链区的Fab(参见FUNDA-MENTALIMMUNOLOGY(Pauled.，3rded.1993)；(iv)Fd片段，由Vh和ChI功能域构成；(ν)Fv片段，由抗体的一条单臂的\和Vh域构成；(vi)dAb片段，由Vh域构成(Wardetal.，(1989)Nature341544-546)；(vii)分离的互补决定区(CDR)；和(viii)纳米抗体(nanobody)，即包含单一可变域和两个恒定域的VH。尽管Fv片段的两个功能域，八和VH，是由分开的基因编码的，但可以使用重组方法借助合成的接头将它们连接起来，该接头使得这两个域能够成为单一蛋白链，其中\和Vh区域配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；例如参见Bird等(1988)Science242423~426；和Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85=5879-5883)0此类单链抗体也应包含在术语抗体的“抗原结合部分”中。“分离的抗体”系指这样的抗体，它基本上不含(substantiallyfreeof)其它的具有不同抗原特异性的抗体(例如，特异性结合RG-I的分离的抗体基本上不含特异性结合RG-I之外的其它抗原的抗体)。然而，特异性结合RG-I的分离的抗体对于其它抗原，例如来自其它物种的RG-I分子可具有交叉反应性。此外，分离的抗体可基本上不含其它细胞材料和/或化学物质。术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”系指具有单一分子组成的抗体分子的制备物。单克隆抗体组合物显示出对于特定表位的单一结合特异性和亲和性。术语“人抗体”包括这样的抗体，其具有多个可变区，这些可变区中的框架区和⑶R区均来自人类种系免疫球蛋白序列。此外，如果该抗体包含恒定区，则该恒定区也来自人类种系免疫球蛋白序列。本发明的人抗体可包含不是由人类种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，由体外随机诱变或定点诱变引入的突变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，此处使用的术语“人抗体”并非旨在包括以下抗体其中来自另一哺乳动物物种(如小鼠)的种系的CDR序列被移植到人框架区序列上。术语“人单克隆抗体”系指显示出单一结合特异性的抗体，该抗体具有这样的可变区，其中的框架区和CDR区均来自人类种系免疫球蛋白序列。在一个实施方式中，该人单克隆抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤包括由转基因非人动物(例如转基因小鼠，它的基因组包含人重链转基因和轻链转基因)得到的B细胞，及与之融合的永生化细胞。术语“重组人抗体”包括所有通过重组方法制备、表达、产生或分离的人抗体，例如(a)从转入了人免疫球蛋白基因的转基因或转染色体的动物(如小鼠)或由该动物制备的杂交瘤细胞(下面进一步说明)分离的抗体，(b)从经转化以表达人抗体的宿主细胞分离的抗体，例如由转染瘤分离的抗体；(c)由重组的、组合的人抗体库分离的抗体，和⑷通过任何其它涉及将人免疫球蛋白基因序列拼接到其它DNA序列上的手段制备、表达、产生或分离的抗体。这样的重组人抗体的可变区中的框架区和⑶R区均来自人类种系免疫球蛋白序列。然而，在某些实施方式中，也可对该重组人抗体进行体外诱变(或者，当使用含人Ig序列的转基因动物时，体内体细胞突变)，因而所述重组抗体的Vh和\区的氨基酸序列尽管衍生自人类种系Vh和\序列和与这些序列相关，但有可能并非天然存在于体内的人类抗体种系表达谱之中。此处使用的“同种型”系指由重链恒定区基因编码的抗体种类(例如IgM或IgGl)。短语“识别抗原的抗体”和“对抗原具有特异性的抗体”此处可以与术语“特异性结合抗原的抗体”互换使用。术语“人源化抗体”系指以下抗体，其中来自另一哺乳动物物种(如小鼠)的种系的CDR序列被移植到人框架区序列上。可以在人框架区序列中进行额外的框架区修饰。术语“嵌合抗体”系指以下抗体，其中的可变区序列来自一物种而恒定区序列来自另一物种，例如可变区序列来自小鼠抗体而恒定区序列来自人抗体的抗体。术语“抗体模拟物”系指能够模拟抗体与抗原结合的能力的分子，然而它们并不限于天然抗体结构。此类抗体模拟物的实例包括但不限于Affibodies、DARPins、Anticalins、AvimersjPVersabodies0术语“配偶体分子”系指在抗体-配偶体分子偶联物中与抗体偶联的实体。配偶体分子的实例包括药物、细胞毒素、标记分子(包括但不限于肽和小分子标记物如荧光染料标记物，以及单原子标记物如放射性同位素)、蛋白质和治疗剂。此处使用的“特异性结合人RG-I，，的抗体指这样的抗体，它以1XICT7M或更小，更优选为5X10_8M或更小，更优选为3X10_8M或更小，更优选为1X10_8M或更小，甚至更优选为5XICT9M或更小的Kd结合人RG-I。术语“基本上不结合”蛋白质或细胞，是指抗体不以高亲和性结合到蛋白质或细胞，也就是说，以1XIO-6M或更大，更优选为1XIO-5M或更大，更优选为1X10_4M或更大，更优选为1X10_3M或更大，甚至更优选为1X10_2M或更大的Kd结合蛋白质或细胞。此处使用的术语“Kass。。”或“Ka，，，意指特定的抗体_抗原相互作用的结合速率，而此处使用的术语"Kdis”或“Kd，”意指特定的抗体-抗原相互作用的解离速率。此处使用的术语“KD，”意指解离常数，它由Kd与Ka之比(即Kd/Ka)得到，并表示为摩尔浓度(M)0抗体的Kd值可使用本领域的已良好确认的方法测定。测定抗体的Kd的优选方法是使用表面等离子体共振，优选使用生物传感器系统，如Biaeorc系统。对于IgG抗体的术语“高亲和性”指抗体对于靶抗原的Kd为1XICT7M或更小，更优选为5XIO-8M或更小，甚至更优选为1XIO-8M或更小，甚至更优选为5X10_9M或更小，甚至更优选为IXlO-9M或更小。然而，对于其它的抗体同种型，“高亲和性”结合可以有所不同。例如，对于IgM同种型而言“高亲和性”结合指抗体的Kd为ICT6M或更小，更优选为IO-7M或更小，甚至更优选为10_8M或更小。此处使用的术语“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，如哺乳动物和非哺乳动物，例如非人灵长类、绵羊、犬类、猫类、马类、牛类、家禽类、两栖类、爬行类、等等。除非另作说明，术语“烃基”(alkyl)就其自身或作为另一取代基的一部分，在没有另外说明时，系指具有指定的碳原子数(例如，C1-Cltl系指一至十个碳原子)的直链或支链，或环状的碳氢化合物基团，或者它们的组合，它可以是完全饱和的、单不饱和的或多不饱和的，并且可以包括二价和多价基团。饱和烃基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、等等，以及它们的同系物和异构体。不饱和烃基是具有一个或多个双键或三键的基团。不饱和烃基的实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4_戊二烯基、3-(1，4_戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基，以及高级同系物和异构体。除非另作说明，术语“烃基”还包括将在下面更详细定义的烃基的衍生物，如“杂烃基”(heteroalkyl)。限于碳氢化合物基团的烃基被称为“同烃基(homoalkyl)，，。术语“亚烃基”(alkylene)就其自身或作为另一取代基的一部分系指来自烃(alkane)的二价基团，例如但不限于-CH2CH2CH2CH2-,并且还包括下文中作为“杂亚烃基”(heteroalkylene)说明的那些基团。通常，烃基(或亚烃基)具有1_24个碳原子，其中具有10个或更少碳原子的基团在本发明中是优选的。除非另作说明，术语“杂烃基”就其自身或结合其他术语时，是指稳定的直链或支链，或环状碳氢化合物基团，或者它们的组合，由给定数目的碳原子和选自0、N、Si和S中的至少一种杂原子构成，且其中氮原子、碳原子和硫原子任选可以被氧化，并且氮杂原子任选可以被季铵化。一或多个杂原子0、N、S和Si可位于杂烃基内部的任何位置，也可以位于烃基与分子的其余部分连接的位置。其实例包括但不限于-a^-a^-o-CHp-a^-a^-NH-CHy-c^-a^-May-CHy-a^-s-CHfCHp-a^-CHyK=0)-CH3、-CH2-CH2-S(=0)2-CH3、-CH=CH-O-CH3>-Si(CH3)3、-CH2-CH=N-OCH3和-CH=CH-N(CH3)-CH3。可以连续有多达两个杂原子,例如-CH2-NH-OCH3和-CH2-O-Si(CH3)3。类似地，术语“杂亚烃基”(heteroalkylene)，就其自身或作为另一取代基的一部分，系指由杂烃基衍生的二价基团，例如-CH2-CH2-S-CH2-CH2-和-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-,但并不限于此。对于杂亚烃基，杂原子可占据链末端的任一端或两端(例如，亚烃氧基、亚烃二氧基、亚烃基氨基和亚烃基二氨基等)。术语“杂烃基”和“杂亚烃基”包括聚(乙二醇)及其衍生物(例如，参见ShearwaterPolymersCatalog,2001)。进而，对于亚烃基和杂亚烃基连接基团，书写连接基团的分子式的方向并不暗示连接基团的方向，例如分子式-CO2R'-同时表示-CO2R'-和-R’CO2-0与术语“烃基”、“亚烃基”、“杂烃基”等联用的术语“低级”是指具有1-6个碳原子的部分。术语“烃氧基”(alkoxy)、“烃基氨基”(alkylamino)、“烃基磺酰基”(alkylamino)和“烃硫基”(alkylthio)(或硫代烃氧基(thioalkyl))此处使用它们的常用含义，指的是那些与分子的其余部分分别通过氧原子、氨基、SO2基团或硫原子连接的烃基。术语“芳基磺酰基”指的是与分子的其余部分通过SO2基团连接的芳基，术语“巯基”指的是SH基团。术语“酰基取代基”系指与羰基碳连接并满足其价位的基团，羰基碳与本发明的化合物的多环核直接或间接相连。“酰基取代基”的取代基部分可以从以上所列的基团中选择。除非另作说明，术语“环烃基”和“杂环烃基”，就其自身或结合其它术语时，分别指的是被取代的或未被取代的“烃基”的环形变体以及被取代的或未被取代的“杂烃基”的环形变体。另外，对于杂环烃基，杂原子可占据杂环与分子其余部分连接处的位置。环烃基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基、等等。杂环烃基的实例包括但不限于1-(1，2，5，6-四氢吡啶基)、1_哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基、等等。环结构的杂原子和碳原子可以任选被氧化。术语“卤”或“卤素”，就其自身或作为另一取代基的一部分，是指氟、氯、溴或碘原子。另外，术语诸如“卤代烃基”包括单卤代烃基和多卤代烃基。因此“卤代(C1-C4)烃基”包括但不限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基、等等。除非另作说明，术语“芳基”系指被取代的或未被取代的多不饱和芳香碳氢化合物取代基，它可为单环或为稠合在一起或共价连接在一起的多个环(优选1-3个环)。术语“杂芳基”系指包含一至四个选自N、0和S的杂原子的芳基(或环)，其中，氮原子、碳原子和硫原子任选被氧化，并且氮原子任选被季铵化。杂芳基可通过杂原子与分子的其余部分连接。芳基和杂芳基的非限制性实例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、批嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4_嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基(purinyl)、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。以上提到的每一芳基和杂芳基环体系的取代基选自下述的可接受的取代基的组。“芳基”和“杂芳基”也包括以下环体系其中一个或多个非芳香环体系与芳基或杂芳基体系稠合或以其他方式结合。为了简便，术语“芳基”在结合其它术语(例如芳氧基、芳基硫氧基、芳基烃基)使用时，包括如上定义之芳基和杂芳基环。因此，术语“芳基烃基”(arylalkyl)包括芳基与烃基连接的基团(如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，所述烃基包括碳原子(如亚甲基)已经被例如氧原子取代的那些烃基(如苯氧基甲基、2-吡啶氧基甲基和3-(1_萘氧基)丙基等)。以上每一个术语(如“烃基”、“杂烃基”、“芳基”和“杂芳基”)都包括所指明的基团被取代和未被取代的形式。以下提供每一类型基团的优选取代基。用于烃基和杂烃基(包括常称为亚烃基、烯基、杂亚烃基、杂烯基、炔基、环烃基、杂环烃基、环烯基和杂环烯基的那些基团)的取代基通常分别称为“烃基取代基”和“杂烃基取代基”，它们可以是多种基团中的一种或多种，这些基团选自但不限于-OR，、=0、=NR，、=N-OR，、-NR，R”、-SR，、卤素、-SiR，R”R”，、-OC(=0)R，、-C(=0)R，、-CO2R',-CONR'R，，、-OC(=0)NR，R，，、_NR，，C(=0)R，、-NR，_C(=0)NR”R”，、-NR”C02R，、-NR-C(NR，R”R”，)=NR””、-NR-C(NR，R”)=NR”，、-S(=0)R，、_S(=0)2R，、-S(=0)2NR，R”、-NRSO2R，、-CN和-NO2取代基数目的范围从0到(2m，+1)，其中111，为该基团中的碳原子的总数。R’、R”、R”’和R””各自优选独立地表示氢、被取代的或未被取代的杂烃基、被取代的或未被取代的芳基如被1-3个卤素取代的芳基、被取代的或未被取代的烃基、烃氧基或硫代烃氧基、或者芳基烃基。当本发明的化合物包含多于一个R基团时，例如，这些R基团中的每一个均独立地选择，R’、R”、R”’和R””基团中的每一个也是如此(当这些基团存在一个以上时)。当R’和R”与同一氮原子相连时，它们可以与氮原子结合以形成5、6或7元环。例如，_NR’R”包括但不限于1-吡咯烷基和4-吗啉基。从以上对取代基的讨论，本领域的技术人员可以理解术语“烃基”包括含有与氢基团之外的基团连接的碳原子的基团，例如卤代烃基(如-CF3和-CH2CF3)和酰基(如_C(=0)CH3、-C(=0)CF3、-C(=0)CH20CH3、等)。类似于对烃基说明的取代基，芳基取代基和杂芳基取代基通常分别被称为“芳基取代基”和“杂芳基取代基”，它们变化并选自，例如卤素、-OR’、=0、=NR，、=N-OR，、-NR，R，，、-SR，、-卤素、-SiR，R，，R，”、-OC(=0)R，、_C(=0)R，、-CO2R',-CONR'R，，、-OC(=0)NR，R，，、-NR"C(=0)R，、-NR，-C(=0)NR，，R，，，、-NR，，CO2R，、-NR-C(NR，R，，)=NR，”、_S(=0)R，、_S(=0)2R，、_S(=0)2NR，R，，、-NRSO2R，、-CN禾口-NO2、-R，、-N3、_CH(Ph)2、氟(C1-C4)-烃氧基、和氟(C1-C4)烃基，数目的范围从0至该芳环体系上开放价数的总数；其中R’、R”、R”’和R””优选独立地选自氢、(C1-C8)烃基和杂烃基、未被取代的芳基和杂芳基、(未被取代的芳基P(C1-C4)烃基、和(未被取代的芳基)氧-(C1-C4)烃基。当本发明的化合物包含多于一个R’、R”、R”’或R””基团时，其中每一个该基团可以独立于其它基团变化。芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选被替换为具有式-T_C(=0)-(CRR，)q-U-的取代基，其中T和U独立地为-NR-、-0-、-CRR，-或单键，q为0-3的整数。或者，此类取代基中的两个可以任选被替换为具有式-A-(CH2)r-B-的取代基，其中A和B独立地为-CRR，-、-0-、-NR-、-S-、-S(=0)-、_S(=0)2-、_S(=0)2NR，-、或单键，并且r为1-4的整数。由此形成的新环的单键中的一个可以任选替换为双键。作为替代，两个此14类取代基可以替换为具有式_(CRR’)S-X_(CR”R”’)d-的取代基，其中s和d独立地为从0到3的整数，并且X为-0-、-NR，-、-S-、-S(=0)-、-S(=0)2-j-S(=0)2NR，-。取代基R、R’、R”和R”’优选独立地选自氢和被取代的或未被取代的(C1-C6)烃基。此处使用的术语“二磷酸酯(或盐)”(diphosphate)包括但不限于含有两个磷酸根基团的磷酸的酯。术语“三磷酸酯(或盐)”(disphosphate)包括但不限于含有三个磷酸根基团的磷酸的酯。此处使用的术语“杂原子”包括氧(0)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。符号“R”是通用的缩写，它表示选自下列的取代基被取代的或未被取代的烃基、被取代的或未被取代的杂烃基、被取代的或未被取代的芳基、被取代的或未被取代的杂芳基和被取代或未被取代的杂环基团。在以下各部分中详细说明本发明的不同方面。抗RG-I抗体本发明的偶联物中的抗体的特征在于特异性结合人RG-1。优选的是，该抗体以高亲和力结合RG-1，例如，以1X10_7M或更小的KD。抗RG-I抗体优选显示以下特性的一或多种(a)以1XICT7M或更小的Kd结合人RG-1；(b)结合被RG-I转染的CHO细胞；和(c)抑制表达RG-I细胞的体内生长。在一个优选的实施方式中，该抗体显示性质(a)、(b)和(C)中的至少两种性质。在一个更优选的实施方式中，该抗体显示性质(a)、(b)和(c)中的全部三种。优选的是，该抗体以5X10、或更小的Kd结合人RG-I，以2XKT8M或更小的Kd结合人RG-I，以5XICT9M或更小的Kd结合人RG-I，以4X10_9M或更小的Kd结合人RG-I，以3X10_9M或更小的Kd结合人RG-I，或以2XICT9M或更小的Kd结合人RG-I。该抗体优选结合RG-I中不存在于其它蛋白中的抗原表位。该抗体优选结合RG-I而不结合其它蛋白，或者以较低的亲和力结合其它蛋白，例如以IXIO-6M或更大的KD，更优选1X10_5M或更大，更优选1X10_4M或更大，更优选1X10_3M或更大，甚至更优选1X10_2M或更大的Kd结合。评价所述抗体对RG-I的结合能力的标准测定方法在本领域中是已知的，例如包括ELISA、Western印迹、RIA和流式细胞术分析。结合也可以通过标准测定来评价，例如通过Biaeore系统分析。为了评价与Raji或DaudiB细胞肿瘤细胞的结合，Raji(ATCCDepositNo.CCL-86)或Daudi(ATCCD印ositNo.CCL-213)细胞可由AmericanTypeCultureCollection获得。单克隆抗体19G9和34E1优选用于本公开的偶联物中的抗体为人单克隆抗体19G9和34E1，在US2004/0152139和US7，335，748B2中对它们进行了说明，其内容通过引用并入本文。19G9和34E1的Vh氨基酸序列分别显示在SEQIDNO:13(图1A)和SEQIDNO:14(图2A)中。19G9和34E1的Vl氨基酸序列分别显示在SEQIDNO:15(图1B)和SEQIDNO:16(图2B)中。相应的编码核苷酸序列也显示在前述图中用于抗体19G9的Vh的SEQIDNO:17(图1A)、用于抗体19G9的Vl的SEQIDNO:19(图1B)、用于抗体34E1的Vh的SEQIDN0:18(图2A)、和用于抗体34E1的Vl的SEQIDNO:20(图2B)。在另一方面中，这些抗体可包括19G9或34E1的重链和轻链⑶R1、⑶R2和⑶R3，或它们的组合。19G9和34E1&VhCDRl的氨基酸序列分别显示在SEQIDN0:l_2中。19G9和34E1的VhCDR2的氨基酸序列分别显示在SEQIDNO:3_4中。19G9和34E1的VhCDR3的氨基酸序列分别显示在SEQIDNO5~6中。19G9和34E1的VlCDRI的氨基酸序列分别显示在SEQIDNO7-8中。19G9和34E1的VLCDR2的氨基酸序列分别显示在SEQIDN0:9-10中。19G9和34E1的VlCDR3的氨基酸序列分别显示在SEQIDN0:ll_12中。CDR区系用Kabat系统进行说明(Kabat，E.A.，etal..(1991).SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242；以下称之为“Kabat‘3242”)。因为抗原结合特异性主要系由⑶R1、⑶R2和⑶R3区提供，所以Vh⑶R1、⑶R2和⑶R3序列以及\CDR1、⑶R2和⑶R3序列可以“混合并匹配”(即，来自不同抗体的⑶R可以混合并匹配，尽管每个抗体必须包括Vh⑶R1、⑶R2和⑶R3以及Vl⑶R1、⑶R2和⑶R3)从而产生其它的抗RG-I结合分子。优选的是，在进行混合和匹配时，来自特定VH/\配对的Vh序列被结构类似的Vh序列代替。同样，来自特定VH/VL配对的\序列优选地被结构类似的\序列代替。该“混合和匹配”的抗体的RG-I结合可使用上述的结合测定法进行测试。优选的是，当Vh⑶R序列被混合和匹配时，来自特定Vh序列的⑶R1、⑶R2和/或⑶R3序列被结构类似的CDR序列代替。同样，当\CDR序列被混合和匹配时，来自特定八序列的⑶R1、⑶R2和/或⑶R3序列优选地被结构类似的⑶R序列代替。对于本领域普通技术人员而言非常清楚的是，可以用来自本文公开的单克隆抗体19G9和34E1的CDR序列的结构类似序列代替一个或多个Vh和/或\CDR区序列，从而产生新的Vh和\序列。因此，在另一方面中，本发明的偶联物中的抗体或其抗原结合部分包括(a)包含SEQIDNO:1或SEQIDNO2的重链可变区CDRl；(b)包含SEQIDNO3或SEQIDNO4的重链可变区CDR2；(c)包含SEQIDNO5或SEQIDNO6的重链可变区CDR3；(d)包含SEQIDNO7或SEQIDNO8的轻链可变区CDRl；(e)包含SEQIDNO9或SEQIDNO10的轻链可变区CDR2；禾口(f)包含SEQIDNO11或SEQIDNO12的轻链可变区CDR3。人们熟知，⑶R3域，独立于⑶Rl和/或⑶R2域，可以单独决定抗体对相关抗原的结合特异性，并且可预测，基于共同的CDR3序列能生成具有相同的结合特异性的多种抗体。例如，参见Klimkaetal,,BritishJ.ofCancer83(2)252~260(2000)；Beiboeretal.,J.Mol.Biol.296833-849(2000)；Raderetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.Α.958910-8915(1998)；Barbasetal,J.Am.Chem.Soc.116,2161-2162(1994)；Barbasetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.Α.922529-2533(1995)；Ditzeletal.，J.Immunol.157739-749(1996)；Berezovetal.,BIAjournal8=ScientificReview8(2001)；Igarashietal.,J.Biochem(Tokyo)117452~7(1995)；Bourgeoisetal.,J.Virol72807-10(1998)；Levietal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.M4374-8(1993)；PolymenisandStolIer,J.Immunol.1525218~5329(1994)andXuandDavis,Immunity1337-45(2000)。还可参见US6，951，646；6，914，128；6，090，382；6，818，216；6，156，313；6，827，925；5,833，943；5,762，905和5，760，185。这些文献每一篇的全部内容均通过引用并入本文。因此，本发明提供了包含一个或多个来自人或非人动物的抗体的重链和/或轻链CDR3的单克隆抗体，其中该单克隆抗体能够特异性结合人RG-1。在一些方面中，本公开的偶联物可使用包含一个或多个来自非人抗体(如小鼠或大鼠抗体)的重链和/或轻链CDR3域的单克隆抗体，其中该单克隆抗体能够特异性地结合RG-1。或者，它们可包含一个或多个来自非人抗体的重链和/或轻链CDR3域，且它们(a)能够与相应的亲本非人抗体竞争结合；(b)保持相应的亲本非人抗体的功能性特征；(c)与相应的亲本非人抗体结合到相同的表位；和/或(d)具有与相应的亲本非人抗体类似的结合亲和力。具有特定种系序列的抗体在一些实施方式中，本发明的偶联物的抗体部分包括来自特定种系免疫球蛋白重链基因的Vh和/或来自特定种系免疫球蛋白轻链基因的\。如此处所用的，如果某个人抗体的可变区是由使用人类种系免疫球蛋白基因的系统获得的，则所述人抗体包含“产自”或者“衍生于”特定种系序列的重链或轻链可变区。该系统包括用所关注的抗原对携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠进行免疫或者用所关注的抗原对在噬菌体上展示的人免疫球蛋白基因文库进行筛选。该人抗体可以如下方式鉴定将其氨基酸序列和人类种系免疫球蛋白的氨基酸序列进行比较，然后选择在序列上最接近于(即，最高的同一性％)人抗体的序列的人类种系免疫球蛋白序列。“产自”或“源自”特定人类种系免疫球蛋白序列的人抗体可能含有与种系序列不同的氨基酸，这可能是由于例如自然产生的体细胞突变或有意引入的定点突变。然而，所选择的人抗体通常与由人类种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列相比具有至少90%的氨基酸序列同一性，而且将所述人抗体与其它物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如，鼠科种系序列)进行比较时，该人抗体含有标识该人抗体的人源身份的氨基酸残基。在一些情况中，人抗体与该种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列相比可以具有至少95%、至少96%、97%、98%或99%的氨基酸序列同一性。通常，源自特定人类种系序列的人抗体会显现不超过10个与由人类种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列的氨基酸差异。在一些情况中，人抗体可以显现不超过5个，乃至不超过4、3、2或1个与由人类种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列的氨基酸差异。同源抗体在另一实施方式中，本发明的偶联物的抗体部分中的抗体包括含有与此处说明的优选抗体的氨基酸序列同源的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区，其中，该抗体保留本发明所需的抗RG-I抗体的功能性质。例如，本公开提供包含Vh和\的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中(a)该Vh包括与选自SEQIDNO:13_14的氨基酸序列至少80%同源的氨基酸序列；(b)该Vl包括与选自SEQIDNO:15_16的氨基酸序列至少80%同源的氨基酸序列；和(C)该抗体特异性地结合人RG-I。在其它实施方式中，￥11和/或\氨基酸序列可以与前述序列具有85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的同源性。具有与前述序列的Vh和Vl区高度同源(S卩，80%或更高)的Vh和\区的抗体可以如下获得诱导编码SEQIDNO17-18或19-20的核酸分子发生突变(例如，定点突变或PCR介导的突变)，然后使用此处说明的功能测定方法测试被编码的改变的抗体的保留功能(即，上文所述的功能)。两条氨基酸序列的同源性的百分比等同于两条序列的同一性的百分比，此百分比为两序列共有的相同位置的数目的函数(即，同源性％=相同的位置数/位置总数X100)，并需要考虑空位(gap)数目，和每个空位的长度，这些空位需要被引入以实现两条序列的最优比对(alignment)。正如在以下的非限制性实例中所述，通过数学算法可以完成两条序列的序列比较和同一性百分比的确定。两条氨基酸序列的同一性百分比的确定可以运用E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci.,411-17(1988)的算法来进行，此算法已经整合在ALIGN程序中(版本2.0)，该算法采用PAM120权重残基表(weightresiduetable)、空位长度罚分(gaplengthpenalty)12、空位长度罚分4。此外，两条氨基酸序列的同一性百分比的测定还可使用Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48444-453(1970))算法进行，此算法已整合在GCG软件包的GAP程序中(可从http://www.gcg.com获得)，此算法应用Blossum62矩阵或PAM250矩阵，以及16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。并且/或者，本发明的蛋白质序列可被进一步用作“查询序列”以面向公开的序列数据库进行检索，以便(例如)鉴定相关序列。此检索可采用Altschul，etal.(1990)J.Mol.Biol.215403-10的XBLAST程序(版本2.0)进行。BLAST蛋白质检索可采用记分为50，字长为3的XBLAST程序进行，从而获得与本发明的抗体分子同源的氨基酸序列。为获得用于比较的带空位比对(gappedalignment)，可使用Altschuletal.((1997)NucleicAcidsRes.25(17)3389-3402)说明的空位BLAST(GappedBLAST)。当运用BLAST和空位BLAST程序时，可使用相应程序(例如XBLAST和NBLAST)的缺省参数。参见http://WWW.ncbi.nlm.nih.gov。具有保守修饰的抗体用于本发明的偶联物的抗体可包括包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的VH，和包含⑶Rl、⑶R2和⑶R3序列的八，其中，这些⑶R序列中的一个或多个包含规定的基于已知抗RG-I抗体的氨基酸序列，或其保守修饰序列，并且其中该抗体保持本公开的抗RG-I抗体的所需的功能性质。在本领域中人们理解，可以进行某些保守序列修饰而不致抗原结合性丧失。例如，参见Brummelletal.(1993)Biochem321180-8；deWildtetal.(1997)Prot.Eng.10835-41；Komissarovetal.(1997)J.Biol.Chem.27226864~26870；Halletal.(1992)J.Immunol.1491605-12；Kelley禾Π0，Connell(1993)Biochem.326862-35；Adib-Conquyetal.(1998)Int.Immunol.丛341_6以及Beersetal.(2000)Clin.Can.Res.6:2835-43。因此，本发明的偶联物可包含与人RG-I特异性结合的抗体或其抗原结合部分，其中(a)所述VhCDR3序列包含SEQIDNO:5_6的氨基酸序列；和(b)所述VlCDR3序列包含SEQIDNO11-12的氨基酸序列；Vh⑶R3和\⑶R3中的至少一个发生了一种或多种保守修饰。并且/或者，该抗体可具有一种或多种如上文所述的下列功能性质，例如对人RG-I的高亲和力结合、结合被RG-I转染的CHO细胞的能力、和/或与细胞毒素偶联时抑制表达RG-I肿瘤细胞的体内肿瘤生长的能力。在一个优选的实施方式中，所述Vh⑶R2序列包含选自SEQIDNO:3_4的氨基酸序列；所述&⑶R2序列包含选自SEQIDNO9-10的氨基酸序列；所述Vh⑶Rl序列包含选自SEQIDNO1-2的氨基酸序列；和/或所述\⑶Rl序列包含选自SEQIDNO:7_8的氨基酸序列，其中前述的Vh⑶R2、\⑶R2、Vh⑶Rl和\⑶Rl中的一个或多个可具有保守修饰。因此，在另一方面中，本发明的偶联物的抗体或其抗原结合部分包括(a)包含SEQIDNO:1或SEQIDNO2或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDRl；(b)包含SEQIDNO3或SEQIDNO4或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQIDNO5或SEQIDNO6或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQIDNO7或SEQIDNO8或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDRl；(e)包含SEQIDNO:9或SEQIDNO:10或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQIDNO:11或SEQIDNO12或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR3。术语“保守序列修饰”系指这样的氨基酸修饰，它不显著影响或改变包含该氨基酸序列的抗体的结合特性，该修饰包括氨基酸置换、增加和缺失。修饰可通过例如定点诱变和PCR介导的诱变等标准技术弓I入本发明的抗体中。保守氨基酸置换系其中的氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换的置换。在本领域中已经确定具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，具有酸性侧链的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸)，具有不带电的极性侧链的氨基酸(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，具有非极性侧链的氨基酸(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)，具有β_支化侧链的氨基酸(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、和具有芳香侧链的氨基酸(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，本发明的抗体的CDR区中的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同侧链家族的其他氨基酸残基替代，并且使可用此处说明的功能测定方法对经改变的抗体的保留功能(即，在以上(a)-(c)中陈述的功能)进行测试。优选的是，保守修饰在数目上不超过1个或2个。结合到与抗RG-I抗体相同的表位上的抗体在另一实施方式中，本发明的偶联物中的抗体可结合RG-I上被本公开的任一抗RG-I单克隆抗体所识别的表位(即，具有与本公开的单克隆抗体的任一进行交叉竞争结合人RG-I的能力的抗体)。在优选的实施方式中，用于交叉竞争研究的参考抗体为抗体19G9或抗体34E1。在标准的RG-I结合分析中，基于与抗体19G9或抗体34E1的交叉竞争能力可识别交叉竞争型抗体。例如，可采用ELISA测定，其中，将重组的人RG-I蛋白固定在测试板，将其中一组抗体用荧光标记，评价未标记抗体与标记抗体间的竞争能力。另外地或替代地，BIAcore分析也可以用于评价抗体的交叉竞争能力。在一优选的实施方式中，结合到人RG-I上与19G9或34E1识别的表位相同的表位的抗体是人单克隆抗体。所述的人单克隆抗体可以使用此处说明的方法和本领域中公知的方法制备并分离。工稈改造的和修饰的抗体本发明的偶联物中的抗体还可以这样制备以具有一个或多个已知的Vi^P/或八序列的抗体作为起始材料，进行工程改造以产生与起始抗体相比性质改变的修饰抗体。抗体的工程改造可以通过修饰一个或两个可变区中(例如在一个或多个VDR区和/或在一个或多个框架区中)的一个或多个氨基酸来进行。并且/或者，还可以通过修饰恒定区中的残基来对抗体进行改造，例如为了改变效应物功能。在某些实施方式中，⑶R移植可用于对抗体的可变区进行改造。抗体主要通过位于六个重链和轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基与靶抗原进行相互作用。为此原因，CDR中的氨基酸序列在各单独抗体之间的多样性比在CDR之外的序列更高。因为CDR序列负责绝大多数抗体-抗原相互作用，由此可以构建表达载体，使其包含将特异性天然抗体的CDR序列移植到来自具有不同性质的不同抗体的框架序列上而得到的序列，从而表达出模拟特异性天然抗体性质的重组抗体(参见，例如Riechmarm，L.etal.(1998)Nature332323-327Jones,P.etal.(1986)Nature321522~525；Queen,C.etal.(1989)Proc.Natl.Acad。参见U.S.Α.巡10029-10033；US5，225，539(授予Winter)和US5，530，101；5，585，089；5，693，762和6，180，370(授予Queen等人)。这样的框架序列可由通过公共DNA数据库或者包括种系抗体基因序列的已发表文献来获得。例如，用于人类重链和\基因的种系DNA序列可以通过“VBase”人类种系序列数据库找到(可从互联网址www,mrc-cpe.cam,ac.uk/vbase得到)，以及从Kabat‘3242；Tomlinson,I.M.,etal.(1992)"TheRepertoireofHumanGermlineVhSequencesRevealsaboutFiftyGroupsofV_HSegmentswithDifferentHypervariableLoops”J.Mol.Biol.^I:776-798；和Cox，J.P.L.etal.(1994)"ADirectoryofHumanGerm-lineVaSegmentsRevealsaStrongBiasintheirUsage"Eur.J.Immunol.24827-836找到；在此明确将各文献的内容通过引用并入本文。此外，用于人类重链和\基因的种系DNA序列可以从Genbank数据库获得。例如，下列在HCo7HuMAb小鼠体内发现的重链种系序列可从以下所附的Genbank登录号获得1_69(NG_0010109、NT_024637和BC070333)，3-33(NG_0010109和NT_024637)和3-7(NG_0010109和NT_024637)。作为另一实例，下列在HCol2HuMAb小鼠体内发现的重链种系序列可以从以下所附的Genbank登录号获得1-69(NG_0010109、NT_024637和BC070333)、5_51(NG_0010109和NT_024637)、4-34(NG_0010109和NT_024637)、3-30.3(CAJ556644)和(AJ406678)。使用称为“空位BLAST”的序列相似性检索方法(Altschuletal.(1997)NucleicAcidsResearch些3389_3402)将抗体蛋白序列和编制的蛋白质序列数据库进行比较。BLAST是一种探索式算法，因为抗体序列与数据库序列之间的具有统计学显著的比对有可能包括比对字符的高得分片段对(HSP)。其得分不能通过扩展或修整加以提高的片段对被称为命中记录(hit)。简目之，VBASE源白勺(http//vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbasel/list2.php)核苷酸序列可被翻译，并且FRl至FR3框架区之间的区域(包括FRl至FR3框架区)被保留。数据库序列的平均长度为98个残基。剔除在蛋白全长上精确匹配的重复序列。采用blastp程序，使用设为缺省值的标准参数(不包括被关闭的低复杂性滤器)和BL0SUM62的置换矩阵进行蛋白质BLAST检索，滤出前5个实现序列匹配的命中记录。以全部六个阅读框翻译核苷酸序列，将在数据库序列的匹配片段中不具有终止密码子的阅读框视为潜在的命中记录。接下来采用BLAST程序tblastx对此进行确认，该程序以全部六个阅读框翻译抗体序列，并且将这些翻译与以全部六个框动态翻译的VBASE核苷序列进行比较。“同一性”(identities)系在抗体序列和蛋白质数据库之间在序列全长上存在的精确的氨基酸匹配。阳性(同一性+取代匹配)并不是相同的，而是根据系由BL0SUM62取代矩阵指导的氨基酸取代。如果抗体序列以一样的同一性匹配数据库序列中的两条序列，则具有最多阳性的命中记录将被判定为匹配序列命中记录。本发明的抗体中使用的优选框架序列是那些结构上与已知的RG-I抗体使用的框架序列相似的框架序列。可将VhCDRl、CDR2和CDR3序列，以及VlCDRl、CDR2和CDR3序列，被移植到具有与框架序列所来源的种系免疫球蛋白基因中发现的序列相同的序列的框架区上，或者可将CDR序列移植到与种系序列相比包括一个或多个突变的框架区上。例如，已经发现在一些情况中，在框架结构区使残基突变从而保留或增强抗体的抗原结合能力是有益的(例如，参见Queen等人的US5，530，101；5,585,089；5，693，762和6，180,370)。另一类型的可变区修饰系使V1^P/或Vl⑶R1、⑶R2和/或⑶R3区中的氨基酸残基突变，从而改善一种或更多种结合性质。可以进行定点诱变或PCR介导的诱变以引入突变，其对抗体的结合或其它的受关注的功能性质的影响可以采用体外或体内测定进行评价。优选引入保守修饰。这些突变可以是氨基酸的置换、增加或缺失，然而优选的是置换。此外，通常在一个⑶R区中不超过1、2、3、4或5个残基被改变。因此，在另一实施方式中，本发明的偶联物中的抗体或其抗原结合部分包括(a)包含选自SEQIDNO1-2的氨基酸序列的VhCDRl区；(b)包含选自SEQIDNO:3_4的氨基酸序列的Vh⑶R2区；(c)包含选自SEQIDNO5~6的氨基酸序列的Vh⑶R3区；(d)包含选自SEQIDNO7-8的氨基酸序列的\CDRl区；(e)包含选自SEQIDNO:9_10的氨基酸序列的Vl⑶R2区；和(f)包含选自SEQIDNO:11_12的氨基酸序列的Vl⑶R3区；其中，前述的VhCDR1、CDR2和CDR3以及\CDR1、CDR2和CDR3中的至少一个与这些述及的SEQIDNO相比具有1个、2个、3个、4个或5个(优选1个或2个)氨基酸的置换、增加或缺失。工程化改造的抗体包括Vh和/或&中的框架残基已经被修饰(通常用于降低免疫原性)的那些抗体。例如，一种方法系使一个或多个框架残基进行“回复突变”而成为相应的种系序列。更具体而言，已经经历体细胞突变的抗体可包含与该抗体所来源的种系序列不同的框架残基。这样的残基可以通过将抗体框架序列与该抗体所来源的种系序列进行比较来鉴定。另一类框架修饰涉及使框架区内，或甚至一个或多个CDR区内的一个或多个残基突变，从而移除T细胞表位，以及降低免疫原性。该方法也被称为“去免疫化(deimmunization)”，在Carr等人的US2003/0153043中有说明。还可以对抗体进行工程化改造以使Fc区中包含修饰，通常用于改变诸如血清半衰期、补体结合(complementfixation)、Fc受体结合和/或抗原依赖的细胞毒性等性质。此外，同样为了改变该抗体的一种或多种功能性质，可以对本发明的抗体可以进行化学修饰(例如，可以将一个或多个化学物质部分与抗体连接)，或进行修饰以改变其糖基化作用。下面将对这些实施方式中的每一个进行更详细的说明。Fc区中的残基的编号系Kabat的EU索引的编号。在一个实施方式中，ChI的铰链区被修饰从而改变了(例如，增加或减少)铰链区中的半胱氨酸残基的个数。在Bodmer等人的US5，677，425中进一步说明了该方法。将ChI的铰链区中的半胱氨酸残基的个数加以改变，例如以便于组装轻链和重链或者增加或减小抗体的稳定性。在另一个实施方式中，使抗体的Fc铰链区突变以减小其生物半衰期。更具体而言，将一个或多个氨基酸变异引入Fc铰链域片段的CH2-CH3域的界面区域，以致该抗体与葡萄球菌蛋白A(StaphylococciproteinA,SpA)的结合相对于天然Fc铰链域的SpA结合变弱。Ward等人的US6，165，745更详细地说明了该方法。在另一个实施方式中，对该抗体进行修饰以增大其生物半衰期。有多种可能的途径。例如，可以引入下列突变中的一个或多个T252L、T254S、T256F，如Ward的US6，277，375中说明的。作为替代，为增大生物半衰期，可以对该抗体的CHl或Q区域进行改变以包含从IgG的Fc区域的CH2功能域的两个环获得的补救抗体(salvagereceptor)结合表位，如Presta等人的US5，869，046和6，121，022所述。在又一实施方式中，通过用不同的氨基酸残基取代至少一个氨基酸残基以改变Fc区，从而改变抗体的效应因子功能。例如，选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320和322的一个或多个氨基酸可以被不同的氨基酸残基取代，从而使抗体对于效应因子配体而言具有改变的亲和性，但仍保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力变化的效应子配体可以是，例如，Fc受体或补体的Cl成分。均为授予给Winter等人的US5，624，821和5，648，260更详细地说明了该方法。在另一实例中，选自氨基酸残基329、331和322中的一个或多个氨基酸残基可以被不同的氨基酸残基取代，以使抗体的Clq结合性改变并且/或者其补体依赖的细胞毒性(CDC)减少或消除。Idusogie等人的US6，194，551更详细地说明了该方法。在另一实例中，改变氨基酸位置231和239之内(within)的一个或多个氨基酸残基由此改变抗体结合(fix)补体的能力。Bodmer等人的WO94/29351中更详细地说明了该方法。在又一实例中，通过修饰处于下列位置的一或多个氨基酸来修饰Fc区，从而增大抗体对Fcγ受体的亲和力238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439。Presta的WO00/42072进一步说明了该方法。此外，人IgGl上针对FcγRl、FcγRII、FcYRIII和FcRn的结合位点已被定位，并且说明了具有增进的结合的各种变体(参见Shields，R.L.etal.(2001)J.Biol.Chem.2766591-6604)。位置256、290、298、333、334和339处的特定变异显示出能够增进与FcγRIII的结合。另外，下列组合突变体显示出能够增进FcγRIII结合T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A和S298A/E333A/K334A。在又一个实施方式中，如King等人的国际申请PCT/US2008/073569(其全部内容通过引用并入本文)所说明的，通过引入半胱氨酸残基来修饰本发明的抗体的C末端。这样的修饰包括但不限于在全长重链序列的C端处或附近取代现有的氨基酸残基，以及将包含半胱氨酸的延长序列(extension)引入至全长重链序列的C端。在优选的实施方式中，包含半胱氨酸的延长序列包括下列序列丙氨酸_丙氨酸_半胱氨酸(从N端至C端)。该C端半胱氨酸修饰可提供用于偶联配偶体分子的官能团(例如，经由二硫化物接头或马来酰亚胺基团)。抗体与配偶体分子按照该方式偶联可增强对具体连接位点的控制。此外，通过在C端或其附近引入连接位点，可以优化偶联从而减少或消除抗体-抗原结合的干扰，并实现分析的简化和质量的控制。在又一实施方式中，可以对抗体进行工程化改造以使其发生去糖基化作用(即，缺乏糖基化作用)，从而增强与抗原的结合。此类修饰可通过改变抗体序列中的一或多个糖基化位点而实现。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，从而消除一个或多个可变区框架糖基化作用位点，防止发生该位点的糖基化作用。Co等人的US5，714，350和6，350，861更详细地说明了该方法。Hanai等人的US7，214，775、Presta的US6，737，056、Presta的US2007/0020260、Dickey等人的WO2007/084926、Zhu等人的WO2006/089294和Ravetch等人的WO2007/055916说明了用于改变糖基化作用的其它方法，各所述文献的全部内容通过引用并入本文。可以制得具有改变的糖基化类型的抗体，如具有减少的岩藻糖残基量的低岩藻糖基化抗体或具有增多的截开型GlcNac结构的抗体。此类改变的糖基化方式已被证明可增大ADCC。此类修饰可通过利用具有改变的糖基化系统的宿主细胞表达抗体而实现。在本领域中已经说明了具有改变的糖基化系统的细胞，并且该细胞可以用作宿主细胞，其表达重组抗体以由此制得具有改变的糖基化作用的抗体。例如，细胞系Ms704、Ms705和Ms709缺乏岩藻糖转移酶基因FUT8(a(1,6)岩藻糖转移酶)，以致在这些细胞系中被表达的抗体在其碳水化合物上缺乏岩藻糖。这样的细胞是通过使用两个置换型载体对CHO/DG44细胞中的FUT8基因进行靶向破坏而产生的(参见Yamane等人的US20040110704和Yamane-Ohnukietal.(2004)BiotechnolBioeng§1:614—22))。作为另一实例，Hanai等人的EP1，176，195说明了一种细胞系，其具有功能被破坏的FUT8基因，该基因编码岩藻糖转移酶，以使在该细胞系中表达的抗体由于与α1，6键有关的酶的减少或消除而显示低岩藻糖基化作用。Hanai等还说明了这样的细胞系它具有低的将岩藻糖添加至结合抗体的Fc区域的N-乙酰基葡糖胺的酶活性，或者不具有该酶活性，例如大鼠骨髓瘤细胞系YB2/0(ATCCCRL1662)。Presta的WO03/035835说明了一种变体CHO细胞系，Lecl3细胞，它具有低的将岩藻糖连接至与Asn(297)相连的碳水化合物的能力，同时导致了在该宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(也参见Shieldsetal.,(2002)J.Biol.Chem.277=26733-26740)。Umana等人的WO99/54342说明了被改造成表达糖蛋白修饰性糖基(glycoprotein-modifyingglycosyl)的细胞系，以使在这些细胞系中表达的抗体显示出更多截开型乙酰氨基葡糖结构，由此导致抗体的ADCC活性的增大(也参见Umanaetal.(1999)Nat.Biotech.17176-180)0作为替代，抗体的岩藻糖残基可以使用岩藻糖苷酶切掉，如α-L-岩藻糖苷酶从抗体中除去岩藻糖残基(Tarentinoetal.(1975)Biochem.145516-23)。并且/或者，可以制得具有改变的唾液酸化水平的抗体，例如Dickey等人的WO2007/084926和Ravetch等人的WO2007/055916所说明，其全部内容均通过弓I用并入本文。例如，可以采用与唾液酸酶，例如产脲节杆菌(Arthrobacterureafacens)唾液酸酶的酶促反应。该反应的条件在US5，831，077中有一般性的说明，其全部内容通过引用而并入本文。合适的酶的其它非限制性实例有神经氨酸酶和N-糖苷酶F，分别如Schloemeretal.(J.Virology，15(4),882-893(1975))和Leibigeretal.(BiochemJ.，338，529-538(1999))所述。去唾液酸化抗体可以通过使用亲合色谱法进一步纯化。作为替代，可以采用各种方法(例如采用唾液酸转移酶)以提高唾液酸化的水平。该反应的条件总体上如Bassetetal.，(ScandinavianJournalofImmunology,51(3),307-311(2000))所说明。考虑对于此处使用的抗体的另一种修饰为聚乙二醇化(pegylation)。对抗体可进行聚乙二醇化来增大抗体的生物(如血清)半衰期。为使抗体聚乙二醇化，通常在一个或多个PEG基团连接上抗体或抗体片段的条件下，使抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)(例如PEG的反应性酯或醛衍生物)反应。优选的是，聚乙二醇化通过与具有反应性的PEG分子(或者类似的反应性的水溶性聚合物)的酰化反应或烃基化反应进行。此处使用的术语“聚乙二醇”包括任何已经被用于衍生化其它蛋白质的PEG形式，例如单(Cl-ClO)烃氧基-或芳氧基聚乙二醇或聚乙二醇_马来酰亚胺。在某些实施方式中，有待聚乙二醇化的抗体是无糖基化的抗体。聚乙二醇化蛋白质的方法在本领域中是公知的。例如，参见Nishimura等人的EP0154316和Ishikawa等人的EP0401384。抗体的物理性质用于本发明的抗体可以用各种物理性质进行表征。抗体可以在\或Vh中包含一或多个糖基化位点，由此使其具有增强的免疫原性或改变的pK(Marshalletal.(1972)AnnuRevBiochem41:673_702；Gala和Morrison(2004)JImmunol1725489-94；Wallicketal.(1988)JExpMed1681099-109；Spiro(2002)Glycobiology12:43R-56R；Parekhetal.(1985)Nature316452-7；Mimuraetal.(2000)MolImmunol37:697-706)。糖基化已知发生在包含N-X-S/T序列的基序中。可变区糖基化可使用Glycoblot分析法测试，其中将抗体切割以制得Fab，然后使用测定高碘酸盐氧化作用和锡夫氏碱(Schiffbase)形成的分析法测试糖基化。作为替代，可变区糖基化还可以使用Dionex薄层色谱法(Iightchromatography)(Dionex-LC)测试，其中将糖由Fab切割为单糖，然后分析各糖的含量。在一些情况中，优选的是具有不包含可变区糖基化的抗RG-I抗体。这可以通过选择在可变区中不包含糖基化基序的抗体或者使用标准技术使糖基化基序中的残基突变来实现。在一个优选的实施方式中，本公开的抗体不包含天冬酰胺异构位点。天冬酰胺的脱酰胺作用可发生在N-G或D-G序列上，并产生异天冬酰胺酸残基，这会向引入多肽链中引入节结(kink)并降低其稳定性(异天冬酰胺酸效应)。异天冬酰胺酸的存在可使用反相HPLC测试(等量分析法)测定。各种抗体将具有独特的等电点(pi)，通常落入6-9.5的pH范围。IgGl抗体的pi通常落入7-9.5的pH范围，IgG4抗体的pi通常落入6_8的pH范围。据推测，具有正常范围之外的Pl的抗体在体内的条件下具有一定的去折叠和不稳定性。因此，优选的是具有包含落入正常范围内的Pl值的抗间皮素抗体。通过选择具有正常范围内的Pl的抗体或者使带电的表面残基突变可以实现该目的。各抗体将具有特征性解链温度，较高的解链温度表示较大的体内总体稳定性(KrishnamurthyR和ManningMC(2002)CurrPharmBiotechnol3:361-71)。通常，优选使Tmi(初始去折叠温度)高于60°C，优选高于65°C，甚至更优选高于70°C。抗体的解链温度可以使用差示扫描量热法(Chenetal.(2003)PharmRes201952-60；Ghirlandoetal.(1999)ImmunolLett6847-52)或圆二色谱法(Murrayetal.(2002)J.ChromatogrSci40343-9)测定。在一个优选的实施方式中，选择不会迅速降解的抗体。抗RG-I抗体的片段化可以采用毛细管电泳(CE)和基质辅助激光解吸离子化质谱(MALDI-MS)测定，如本领域中公知的那样(AlexanderAJandHughesDE(1995)AnalChem67:3626_32)。在另一优选的实施方式中，选择具有最小凝集效应(可引发不需要的免疫应答和/或改变的或不利的药物代谢动力学性质)的抗体。通常，凝集为25%或更小，优选20%或更小，甚至更优选15%或更小，甚至更优选10%或更小，甚至更优选5%或更小的抗体是可接受的。凝集可以通过若干种技术测定，这些技术包括大小排阻层析柱(SEC)、高效液相色谱(HPLC)和光散射。抗体工稈化方法如上所述，可以通过修饰具有已知Vh和\序列的抗RG-I抗体的Vh和/或\序列或者与其连接的恒定区而产生新的抗RG-I抗体。因此，在本发明的另一方面中，利用已知的抗RG-I抗体的结构特征来产生结构相关的、保留有本发明抗体的至少一种功能性质(例如与人RG-I的结合)的抗RG-I抗体。例如，已知RG-I抗体或其突变体的一个或多个⑶R区可以与已知的框架区和/或其它的⑶R通过重组进行组合以生成本发明的另外的经工程改造的抗RG-I抗体，如上所述。其它类型的修饰包括在前一节中说明的那些修饰。工程化方法的起始材料系此处提供的一个或多个Vh和/或Vk序列，或其一个或多个CDR区。为产生工程化抗体，不必实际制备(即，表达为蛋白质)具有一个或多个已知的RG-I抗体Vh和/或\序列或其一个或多个CDR区的抗体。相反，将序列中所包含的信息用作起始材料以产生源自原始序列的“第二代”序列，然后制备出“第二代”序列并表达为蛋白质。可以沿着抗RG-I抗体的全部或部分编码序列随机地或选择性地引入突变，可针对所得的经修饰的抗RG-I抗体筛查其结合活性和/或其他如此处所说明的功能性质。现有技术已经说明了突变方法。例如，Short的W002/092780说明了使用饱和诱变、合成连接组装或二者的组合的方法产生并筛查抗体突变。作为替代，Lazar等人的WO03/074679说明了使用计算筛查法以优化抗体的理化性质的方法。抗体片段和抗体模拟物本发明的偶联物并不限于以传统抗体作为RG-I结合成分，可以通过使用抗体片段和抗体模拟物来实施。如今已经开发了多种抗体片段和抗体模拟物技术，且这些技术在现有技术中是广泛为人熟知的。单域抗体(domainantibody,dAb)系抗体的最小功能结合单位，分子量约为13kDa，相当于抗体的重链(VH)或轻链(VL)的可变区。关于单域抗体及其制造方法的更多的细节可在US6，291，158；6，582，915；6，593，081；6，172，197；和6，696，245；US2004/0110941；EP1433846、0368684和0616640;W02005/035572、2004/101790、2004/081026,2004/058821,2004/003019和2003/002609中找到，其全部内容均通过引用并入本文。纳米抗体(Nanobodies)系包含天然重链抗体的独特结构及功能性质的衍生自抗体的蛋白质。这些重链抗体包括单一可变域(VHH)和两个恒定域(CH2和CH3)。重要的是，克隆并分离的VHH域是携带原始重链抗体的全部抗原结合能力的稳定多肽。纳米抗体对人抗体的VH域具有高同源性，可进一步人源化而不会损失任何活性。重要的是，纳米抗体具有低免疫原潜力。纳米抗体将传统抗体的优点与小分子药物的重要特征相结合。与传统抗体类似，纳米抗体显示出很高的靶特异性和亲和性及较低的固有毒性。此外，纳米抗体极为稳定，可以通过注射之外的方法施用(例如，参见W02004/041867)，并且易于制造。纳米抗体的其它优点包括由于其尺寸小而能够识别罕见的或隐藏的表位，由于其独特的三维而能以高亲和性和选择性结合进入蛋白靶的空腔或活性部位，药物形式灵活，半衰期可调整，药物发现容易迅捷等。纳米抗体是由单基因编码的，并在几乎全部的原核宿主和真核宿主中以高效率产生，所述宿主例如为大肠杆菌(E.coli)(例如，参见US6，765，087，其全部内容通过引用并入本文)、霉菌(例如曲霉(Aspergillus)或木霉(Trichoderma))和酵母(例如酵母菌属(Saccharomyces)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、汉逊酵母属(Hansenula)或毕赤酵母属(Pichia))(例如，参见US6，838，254，其全部内容通过引用并入本文)。纳米克隆(nanoclone)方法(例如，参见WO06/079372，其全部内容通过引用并入本文)基于B细胞的自动高通量选择产生抗所需靶的纳米抗体，并且能够在本发明中应用。UniBodies是另一种抗体片段技术，基于移除IgG4抗体的铰链区。删除铰链区得到基本上为传统IgG4抗体一半尺寸的分子，并且该分子具有单价结合区而非二价结合区。此外，因为UniBodies较小，因此它们可以在较大的实体瘤上显示出更好的分布，具有潜在的有利功效。关于UniBodies的更多细节可通过参考WO2007/059782而获得，其全部内容通过引用并入本文。Affibody分子是亲和力蛋白，它是基于从葡萄球菌蛋白A的一个三螺旋束IgG结合性域衍生的58氨基酸残基蛋白域。该域已被用作构建组合噬菌体文库(combinatorialphagemidlibrary)的骨架，使用噬菌体展示技术可从这样的文库中选择针对目标靶分子^Affibody(Nordetal.,NatBiotechnol1997；15-.112-1；Ronmarketal.,EurJBiochem2002；269:2647_55)。Affibody分子的简单、坚固的结构和低分子量(6kDa)使得它们适于各种广泛的用途，如受体相互作用的检测试剂和抑制剂。关于AfTibody的更多的细节可在US5，831，012中找到，其全部内容通过引用并入本文。标记的也可用于检测Affibody同种型丰度的成像应用中。DARPin(人工设计的锚蛋白重复蛋白，DesignedAnkyrinRepeatProtein,DARPin)体现了DRP(人工设计的重复蛋白，DesignedRepeatProtein)抗体模拟技术，该技术利用非抗体多肽的结合能力。重复蛋白，例如锚蛋白和富含亮氨酸的重复蛋白，是普遍存在的结合分子，与抗体不同，它们在细胞内和细胞外均有出现。它们独特的模块结构以重复结构单元(重复子)为特征，这些单元堆叠在一起以形成伸长的延长重复域，这些重复域展示可变的、模块性(modular)的靶结合表面。基于该模块性，可以生成具有高度多样性的结合特异性的多肽的组合文库。该策略包括对展示可变表面残基自交亲和重复序列(self-compatiblerepeat)的共有设计(concensusdesign)和将它们随机组装成重复域。关于DARPin和其它DRP技术的更多信息可以在US2004/0132028和WO02/20565中找到，其全部内容均通过引用并入本文。Anticalins系另一种抗体模拟技术。在该情况中，结合特异性源自脂笼蛋白(lipocalin)，脂笼蛋白是一个在人体组织和体液中天然地丰富地表达的低分子量蛋白家族。脂笼蛋白经过进化而在体内执行与生理运输和化学敏感或不溶化合物的存储有关的各种功能。脂笼蛋白具有坚固的内在结构(intrinsicstructure)，包括一个高度保守的β-桶(β-barrel)，其在蛋白质的一端支持四个环(loop)。这些环形成结合口袋的入口，分子在这一部分中的构象差异解释了各种脂笼蛋白之间的结合特异性的不同。尽管由保守的片状结构支持的超可变环的整体结构能够让人联想起免疫球蛋白，然而脂笼蛋白与抗体在大小上存在显著差异，其由160-180个氨基酸的单一多肽链构成，在远大于单个免疫球蛋白域。可以克隆脂笼蛋白，工程化改造它们的环以产生Anticalin。结构多样性的Anticalin文库已经生成，Anticalin的展示允许对结合功能进行选择和筛查，随后在原核或真核体系中表达和生成可溶蛋白质以进行进一步的分析。研究表明可能开发出这样的Anticalin，它们几乎对于任何人类靶蛋白都具有特异性，可以获得纳摩尔或更高范围内的结合亲和性。关于Anticalin的其它信息可以在US7，250，297和WO99/16873中找到，其全部内容均通过引用并入本文。Avimer是另一类可用于本发明的抗体模拟技术。Avimer由人细胞外受体域的大家族通过体外的外显子重排和噬菌体展示发展而来，产生具有结合和抑制性质的多域蛋白。已经证明，通过将多个独立的结合域连接起来，可产生亲合力(avidity)，并且与传统的单表位结合蛋白比较，可产生更好的亲和性和特异性。其它潜在的优点包括在大肠杆菌中简单且有效地生成多靶特异性分子，提高的热稳定性和对蛋白酶的抵抗力。已经得到了针对多种靶的具有亚纳摩尔亲和性的Avimer。关于Avimer的其它信息可在US2006/0286603、2006/0234299、2006/0223114、2006/0177831、2006/0008844、2005/0221384、2005/0164301、2005/0089932、2005/0053973、2005/0048512、2004/0175756中找到，它们的全部内容均通过弓I用并入本文。Versabodies是另一种可用于本发明的抗体模拟技术。Versabodies是具有大于15%的半胱氨酸的小分子蛋白(3-5kDa)，这些半胱氨酸形成高二硫化物密度的构架结构来替代典型蛋白质所具有的疏水核。这种替代使得蛋白质分子更小且更加亲水(即，不易发生凝集和非特异性结合)，对于热和蛋白酶具有更大的抵抗力，具有较低密度的T细胞表位，这是因为对MHC的呈递贡献最多的残基是疏水性的。这些性质众所周知会影响免疫原性，而且预期它们综合在一起会导致免疫原性大幅度降低。考虑Versabodies的结构，这些抗体模拟物提供了多种多样的形式，包括多价、多特异性、多样化的半衰期机制、组织靶向性模块和抗体Fc区域的空缺等。此外，Versabodies是从大肠杆菌中以高产率获得的，由于它们的亲水性和小尺寸，Versabodies高度可溶，能够以高浓度配制。Versabodies极具热稳定性，并具有长的保质期。关于Versabodies的更多信息可在US2007/0191272中找到，其全部内容通过引用并入本文。以上并不意在提供关于抗体片段和模拟技术的全面说明。各种其它的技术，包括其他基于多肽的技术，如Qui等人(NatureBiotechnology,25(8)921-929(2007))概述的互补决定区的融合，以及基于核酸的技术，如US5,789，157；5，864，026；5，712，375；5，763，566；6，013，443；6，376，474；6，613，526；6，114，120；6，261，774和6，387，620中说明的RNA核酸适体技术都可用于本发明，这些文献均通过弓I用并入本文。编码本发明抗体的核酸分子本发明的另一方面涉及编码本发明抗体的核酸分子。核酸可存在于全部细胞、细胞裂解物中，或以部分纯或基本上纯的形式存在。当核酸从其它细胞成分或其它杂质(如其它的细胞核酸或蛋白质)中通过标准技术纯化时被称为被“分离”或“使得基本上纯”，所述标准技术包括碱性/SDS处理、CsCl区带化(CsClbonding)、柱色谱、琼脂糖凝胶电泳以及其它本领域公知的技术。参见F.Ausubel，etal.，ed.(1987)CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingandWileyInterscience,NewYork。本发明的核酸例如可以为DNA或RNA，可以包含或不包含内含子序列。在一个优选的实施方式中，所述核酸系cDNA分子。所述核酸可使用标准分子生物技术获得。对于由杂交瘤表达的抗体(例如，如下文所述之从携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤)，编码由杂交瘤所制得的抗体的轻链和重链的cDNA可通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得。对于从免疫球蛋白基因文库获得的抗体(例如，采用噬菌体展示技术)，编码抗体的核酸可从所述文库中回收获得。优选的核酸系编码19G9或34E1单克隆抗体的V1^P\序列的那些核酸。编码19G9和34E1的Vh序列的DNA序列分别显示在SEQIDNO17-18中。编码19G9和34E1DNA的Vl序列的DNA序列分别显示在SEQIDNO19-20中。一旦得到编码Vh和\的DNA片段，它们即可通过标准重组DNA技术进行处理，例如，将可变区基因转化为全长抗体链基因、Fab片段基因、或scFv基因。在这些处理当中，编码\或Vh的DNA片段可操作地连接到编码其它蛋白质(例如抗体恒定区或柔性接头)的另一条DNA片段。本文中使用的术语“可操作地连接”系指使两条DNA片段以这样的方式连接，以使由它们编码的氨基酸序列保持读框不变(in-frame)。分离出的编码Vh区域的DNA可通过将其可操作地连接于另一条编码重链恒定区ChUCh2和Ch3的DNA分子而转化为全长重链基因。人重链恒定区基因序列在本领域中是已知的(例如参见Kabat‘3242)，包括这些序列的DNA片段可通过PCR扩增获得。重链恒定区可以是IgGUIgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，然而最优选的是IgGl或IgG4的恒定区。对于Fab片段重链基因，可将Vh编码DNA可操作地连接到只编码重链ChI恒定区的DNA上。分离出的编码\区域的DNA可通过将其可操作地连接于另一条编码轻链恒定区Cl的DNA分子而转化为全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因序列在本领域中是已知的(例如参见Kabat‘3242)，包括这些序列的DNA片段可通过PCR扩增获得。在优选的实施方式中，轻链恒定区可为κ型或λ型恒定区。为产生scFv基因，可以将Vh-和编码DNA片段与另一条编码柔性接头(如编码氨基酸序列(Gly4-Ser3))的片段可操作连接，以使\和Vh序列可表达为相邻的单链蛋白，其中Vi^PVl区域通过该柔性接头连接(例如，参见Birdetal.(1988)ScienceM2423-426；Hustonetal.(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA855879-5883；McCaffertyetal.，(1990)Nature348552~554)。单克降抗体的制备用于本发明的单克隆抗体(mAb)可通过各种技术制造，这些技术包括传统单克隆抗体方法，如参见Kohler和Milstein(1975)Nature256495的体细胞杂交技术。尽管优选的是体细胞杂交技术，然而原则上也可以采用其它技术，例如B淋巴细胞的病毒性或致癌性转化。用于制备杂交瘤的优选动物体系系鼠科体系。在小鼠中制备杂交瘤是非常成熟的技术。用于分离融合用免疫脾细胞的免疫程序和技术在本领域中是已知的。融合对象(诸如鼠类骨髓瘤细胞)和融合方法也是已知的。嵌合或人源化抗体可基于上述制备的非人单克隆抗体的序列进行制备。编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA可由所关注的非人杂交瘤获得，并使用标准分子生物技术改造成包括非鼠(如，人)免疫球蛋白序列。例如，为生成嵌合抗体，可使用本领域中已知的方法将鼠可变区与人恒定区连接(例如参见Cabilly等人的US4，816，567)。为生成人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠⑶R区插入人框架区(例如参见US5，225，539(Winter)、和US5，530，101；5,585，089；5，693，762和6，180，370(Queen等人))。本发明的抗体优选系人单克隆抗体。该针对RG-I的人单克隆抗可使用携带部分人免疫系统而非小鼠系统的转基因或转染色体小鼠产生。这些转基因和转染色体小鼠包括此处被分别称为HuMAbMouse和KMMouse类型或株系小鼠的小鼠，并被统称为“人Ig小鼠”。HuMAbMouse株系(Medarex,Inc.)含有人免疫球蛋白基因的微基因座(miniloci)，其编码非重排的人重链(μ和γ)和κ轻链的人免疫球蛋白序列，还含有使内源性μ链和κ链座位失活的定向突变(例如，参见Lonbergetal.(1994)Nature368(6474)=856-859)因此，小鼠显示出对小鼠IgM或κ的减少的表达，并在响应免疫时，引入的人重链和轻链转基因经历类别转换和体细胞突变，以产生高亲和性人IgGK单克隆抗体(Lonbergetal.(1994),_t；^Lonberg(1994)HandbookofExperimentalPharmacology113:49_101中综述；Lonberg禾口Huszar(1995)Intern.Rev.Immunol.1365-93，以及Harding和Lonberg(1995)Ann.N.Y.Acad.Sci.764536~546)。HuMAbMouse株系的小鼠的准备和使用，以及由该小鼠携带的基因组修饰在Tayloretal.(1992)NucleicAcidsResearch206287-6295；Chenetal.(1993)InternationalImmunology5647-656；Tuaillonetal.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA903720-3724；Choietal.(1993)NatureGenetics4117-123；Chenetal.(1993)EMBOJ.1282**30Tuaillonetal.(1994)J.Immunol.1522912-2920；Tayloretal.(1994)InternationalImmunology6579-591以及Fishwildetal.(1996)NatureBiotehnology14845-851中有进一步的说明，这些文献的全部内容以引用的方式特别引入，更多请见US5，545，806；5，569，825；5，625，126；5，633，425；5，789，650；5，877，397；5，661，016；5，814，318；5，874，299；和5，770，429；所有的以上专利都授予Lonberg和Kay；授予Surani等人的US5,545，807；授予Lonberg和Kay的WO92/03918,WO93/12227,WO94/25585,WO97/13852，WO98/24884和WO99/45962；以及授予Korman等人的W001/14424。在另一实施方式中，可以使用在转基因和转染色体(如人重链转基因和人轻链转染色体)上携带人免疫球蛋白序列的小鼠来产生人抗体。该小鼠此处被称为"KMMouse”型，在Ishida等人的WO02/43478中有详细说明。此外，本领域中还有其他可供选择的表达人免疫球蛋白基因的转基因动物系统，并可用于产生本发明的抗RG-I抗体。例如，可以使用称为XenomouSe(AbgeniX，Inc.)转基因体系作为备选；这样的小鼠在例如US5,939,598；6,075,181；6,114，598；6,150，584和6，162，963(授予Kucherlapati等人)中有说明。另外，表达人免疫球蛋白基因的替代性的转染色体动物体系在本领域中系存在的，并可用于产生本发明的抗RG-I抗体。例如，可以使用同时携带人重链转染色体和人轻链转染色体的小鼠，其被称为"TC小鼠”；在Tomizukaetal.(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA21:722-727中有该小鼠的说明。此外，在本领域中已经说明有携带人重链和轻链转染色体的母牛((Kuroiwaetal.(2002)NatureBiotechnology20889-894)和W02002/092812)，并且可用于产生本发明的抗RG-I抗体。本发明的人单克隆抗体还可使用噬菌体展示法制备，以筛查人免疫球蛋白基因文库。例如参见US5，223，409；5，403，484；和5，571，698(授予Ladner等人)；US5，427，908和5，580，717(授予Dower等人)；US5，969，108和6，172，197(授予McCafferty等人)；和US5，885，793；6，521，404；6，544，731；6，555，313；6，582，915和6，593，081(授予Griffiths等人)。本发明的人单克隆抗体还可使用SCID小鼠制备，其中已经重构有人免疫细胞，使得人抗体响应可在免疫时产生。例如在Wilson等人的US5,476，996和5，698，767中说明了该小鼠。人Ig小鼠的免疫当人Ig小鼠用于产生人抗体时，可采用纯化或富集过的RG-I抗原和/或重组RG-I制备物、或表达RG-I的细胞、或RG-I融合蛋白来将它们免疫，如Lonbergetal.(1994)Nature368(6474)856-859；Fishwildetal.(1996)NatureBiotechnology14=845-851；和WO98/24884和WO01/14424中所述。优选的是，这些小鼠在第一次输注时将为6-16周龄。例如，RG-I抗原的纯化或重组制备物(5到50微克)可用于对人Ig小鼠进行腹膜内免疫。多种抗原研究经验积累显示，转基因小鼠在采用完全Freimd佐剂中的抗原的初始腹膜内免疫(IP)，随后每隔一周采用不完全Freimd佐剂中的抗原进行IP免疫(最多至一共6周)时可产生应答。然而发现Freimd佐剂之外的佐剂也是有效的。另外，不存在佐剂时的全细胞被发现具有高度免疫原性。可以使用由眼窝后采血获得的血浆样品在免疫过程中监测免疫应答。血浆可通过ELISA筛查，具有足够滴度的抗RG-I人免疫球蛋白的小鼠可用于融合。小鼠可在杀死和摘除脾脏之前的三天内用抗原进行静脉加强免疫。预期每次免疫可能需要2到3次融合。对每一抗原，通常对6到24只小鼠进行免疫。小鼠通常使用HCo7和HCol2品系。另外，HCo7和HCol2转基因可以一同培植到具有两个不同人重链转基因(HCo7/HCol2)的单一小鼠体内。或者/并且，可以使用KMMouse品系。制造人单克降抗体的杂交瘤的产牛为生成产生人单克隆抗体的杂交瘤，可从被免疫小鼠分离脾细胞和/或淋巴结细胞，然后融合至适宜的永生细胞系，例如小鼠骨髓瘤细胞系。对于得到的杂交瘤可筛查抗原特异性的抗体的生成。例如，可使用50%PEG将来自被免疫小鼠的脾脏淋巴细胞的单细胞悬浮液融合至六分之一数目的具有P3X63-Ag8.653非分泌小鼠骨髓瘤细胞(ATCC，CRL1580)。作为替代，也可采用基于电场的电融合法来融合被免疫小鼠的脾脏淋巴细胞的单细胞悬浮液，利用CytoPulse大容量细胞融合电穿孔仪(CytoPulseSciences,Inc.，GlenBurnieMaryland)进行融合。将细胞以约2XIO5铺于平底微滴定板，随后在包含20%胎克隆血清、18%的“653”条件培养基、5%Origen(IGEN)、4mML-谷氨酰胺、ImM丙酮酸钠、5mMHEPES、0.055mM2-巯基乙醇、50单位/ml青霉素、50mg/ml链霉素，50mg/ml庆大霉素和lXHAT(Sigma，HAT在融合后24小时添加)的选择培养基中培育2周。约两周后，将细胞培育在用HT替换HAT的培养基中。然后可利用针对人单克隆IgM和IgG抗体通过ELISA筛查各个孔。一旦有杂交瘤大量生长，则可以观察培养基(通常在10到14天后)。分泌抗体的杂交瘤可进行重新铺板，再次筛查，如果对人IgG仍呈阳性，即可通过有限稀释将单克隆抗体亚克隆至少两次。然后可将稳定的亚克隆在体外培养，以在组织培养培养基中产生少量抗体以供鉴定。为纯化人单克隆抗体，所选杂交瘤可在2升的转瓶内生长，以用于单克隆抗体纯化。可将上清液在过滤和浓缩后用蛋白A-s印harose亲和色谱(Pharmacia，Piscataway,N.J.)处理。经洗脱的IgG可以通过凝胶电泳和高效液相色谱检验以保证纯度。可将缓冲液交换成PBS，其浓度可通过0D280测定，使用的消光系数(extinctioncoefficient)为1.43。单克隆抗体可等分后于-80°C存储。制造单克隆抗体的转染瘤的产生用于本发明的抗体还可在宿主细胞转染瘤中制造，例如使用重组DNA技术与基因转染法的组合(例如Morrison，S.(1985)Science2291202)制造。为表达该抗体或其抗体片段，可通过标准技术(例如，PCR扩增或使用表达所关注的抗体的杂交瘤的cDNA克隆)获得编码部分或全长轻链和重链的DNA，并可将DNA插入表达载体中以使基因可操作地连接转录和翻译控制序列。术语“可操作地连接”是指抗体基因连接到载体中以使载体中的转录和翻译控制序列发挥其预期功能，即调节抗体基因的转录和翻译。选择与使用的表达宿主兼容的表达载体和载体控制序列。抗体轻链基因和抗体重链基因可插入不同的载体中，或更常见的是，两种基因同时插入同一表达载体中。通过标准技术(如，抗体基因片段和载体上的互补限制位点连接，或在不存在限制位点时通过平端连接)将抗体基因插入表达载体。此处说明的抗体的\和Vh可用于生成任何抗体同种型的全长抗体基因，其中通过将其插入已经编码所需同种型的重链恒定区和轻链恒定区的载体中，以使Vh片段可操作地连接于载体中的Ch片段，并使\片段可操作地连接于载体中的Q片段。并且/或者，重组表达载体可编码促进抗体链从宿主细胞中分泌的信号肽。抗体链基因可被克隆入载体以使所述信号肽与抗体链基因的氨基末端合框(in-frame)连接。所述信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即来自非免疫球蛋白的信号肽)。除了抗体链基因之外，本发明的重组表达载体还携带有调控序列，该序列控制抗体链基因在宿主细胞内的表达。术语“调控序列”包括控制抗体链基因的转录和翻译的启动31子、增强子和其它表达控制组件(如聚腺苷酸化信号)。例如，在Goeddel(GeneExpressionTechnology.MethodsinEnzymologyl85,AcademicPress,SanDiego,CA(1990))中说明有这些调控序列。本领域技术人员可以理解的是，表达载体的设计，包括调控序列的选择，可能取决于诸如待转化的宿主细胞的选择、所需的蛋白质的表达水平等因素。用于哺乳动物宿主细胞表达的优选的调控序列包括引导哺乳动物细胞内高水平的蛋白质表达的病毒组件，例如来自巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(如腺病毒主要晚期启动子)和多瘤病毒的启动子和/或增强子。作为替代，可以使用非病毒调控序列，例如泛素启动子或β-珠蛋白启动子。进而，调控组件由来自不同来源的序列构成，例如SRa启动子体系，其包含来自SV40早期启动子的序列和人T细胞1型白血病病毒的长末端重复序列(Takebe,Y.等(1988)Mol.Cell.Biol.8466-472)除了该抗体链的基因和调控序列之外，本发明的重组表达载体还可携带其它序列，如调节载体在宿主细胞中复制的序列(如复制起点)和选择标记基因。选择标记基因促进其中已经导入载体的宿主细胞的选择(例如，参见US4，399，216，4，634，665和5，179，017，均授予Axel等人)。例如，选择标记基因通常使其中已经导入载体的宿主细胞对药物具有抗性，所述药物例如为G418、潮霉素或甲氨蝶呤。优选的选择标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用在具有甲氨蝶呤选择/扩增的dhfr宿主细胞中)和neo基因(用于G418选择)。对于轻链和重链的表达，将所述编码重链和轻链的表达载体转染入宿主细胞。术语“转染”的各种形式包括常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞的各种技术，如电穿孔、磷酸钙沉淀法、DEAE葡聚糖转染等。尽管在原核或真核宿主细胞中表达本发明的抗体从理论上讲都是可行的，但是在真核细胞，最优选在哺乳动物宿主细胞中表达抗体最优选的，因为该真核细胞，尤其是哺乳动物细胞比原核细胞更可能组装并分泌正确折叠的、具有免疫活性的抗体。据报导，抗体基因的原核表达无法有效产生高产量的活性抗体(Boss和Wood(1985)ImmunologyToday6:12—13)。用于表达本发明的重组抗体的优选的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(ChineseHamsterOvary,CH0)细胞(包括dhfr-CHO细胞，说明在Urlaub和Chasin，(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216_4220中，与DHFR选择标记一起使用，如Kaufman和Sharp(1982)J.Mol.Biol.159601-621中所述)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。为了用于NSO骨髓瘤细胞，优选的表达体系是WO87/04462(授予Wilson)、WO89/01036(授予Bebbington)和EP338，841(授予Beb-bing-ton)中公开的GS基因表达体系。当编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞中时，通过培育宿主细胞足够的时间以容许抗体在宿主细胞中表达，或者更优选的是容许抗体分泌到培养该宿主细胞的培养基中，来制造抗体。可以使用标准的蛋白质纯化方法从培养基中回收获得抗体。抗体对抗原的结合的表征可通过标准的ELISA测试抗体与RG-I的结合。简而言之，用溶于PBS中浓度为0.25μg/ml的纯化RG-I包被微量滴定板，然后用PBS中5%牛血清白蛋白封闭。将抗体的稀释液(如来自RG-I免疫小鼠的血浆的稀释液)添加至各孔中并在37°C温育1-2小时。用PBS/吐温洗涤培养板，然后用偶联有碱性磷酸酶的二次试剂(如，对于人抗体，山羊-抗-人IgGFc特异性多克隆试剂)在37°C温育1小时。洗涤后，用pNPP底物(lmg/ml)对培养板进行显色，在405-650的OD分析。优选的是，显现出最高滴度的小鼠将用于融I=IO上述的ELISA分析可用于筛查显示与RG-I免疫原的阳性反应性的杂交瘤。对以高亲和力结合RG-I的杂交瘤进行亚克隆并加以进一步表征。可选择来自每个杂交瘤的一个保持亲本细胞的反应性(通过ELISA鉴定)的克隆，用于制备5-10小瓶细胞库并存储于_140°C，以及用于抗体纯化。为纯化抗RG-I抗体，所选杂交瘤可在2升的转瓶内生长，以用于单克隆抗体纯化。可将上清液进行过滤和浓缩，然后使用蛋白A-s印harose(Pharmacia，Piscataway，N.J.)进行亲和色谱分离。经洗脱的IgG可以通过凝胶电泳和高效液相色谱检验以保证纯度。缓冲液可交换成PBS，浓度可通过使用消光系数为1.43的0D280法测定。单克隆抗体可等分后于-80°C存储。为测定选择的抗RG-I单克隆抗体系否与独特表位结合，可以使用市售试剂(Pierce,Rockford,IL)使抗体生物素化。可以采用未标记的单克隆抗体和生物素化的单克隆抗体，使用RG-I包被的ELISA板进行竞争研究。生物素化的mAb结合可使用链亲和素-碱性磷酸酶探针检测。为测定纯化抗体的同种型，可使用对特定同种型的抗体具有特异性的试剂进行同种型ELISA。例如，为测定人单克隆抗体的同种型，可以将微量滴定板的板孔用lyg/ml抗人免疫球蛋白在4°C包被过夜。用的BSA封闭后，将板与1μg/ml或更少的测试单克隆抗体或纯化的同种型对照物在环境温度反应1-2小时。然后可将板与人IgGl或人IgM特异的碱性磷酸酶偶联的探针反应。如上所述将培养板显色并分析。可使用免疫印迹法进一步测试抗RG-I人IgGs与RG-I抗原的反应性。简而言之，制备RG-I并对其进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳。然后将分离的抗原转移至硝酸纤维素膜，用10%的胎牛血清封闭，并用待测试的单克隆抗体检测。人IgG结合可使用抗人IgG碱性磷酸酶检测并用BCIP/NBT底物片(SigmaChem.Co.，St.Louis,Mo.)显色。本发明的抗体的结合特异性还可以通过监测抗体与表达RG-I的细胞的结合而测定(例如通过流式细胞仪)。通常，可以用编码RG-I跨膜形式的表达载体来转染细胞系，如CHO细胞系。转染的蛋白可包含如myc标签等标签(优选在N末端)，用针对该标签的抗体进行检测。本发明抗体与RG-I的结合可通过将转染细胞与抗体孵育，并检测被结合的抗体而测定。抗体与转染蛋白上的标签的结合可用作阳性对照。可使用本发明的与测定RG-I结合的相同方法，通过测定抗体是否与其它蛋白质如PROTEINY或RG-I结合来进一步研究抗体对于RG-I的特异性。双特异性分子偶联物的抗体部分可以是双特异性分子。可以将抗RG-I抗体或其片段用其他功能分子衍生化或与其他功能分子连接以产生结合至少两个不同结合位点或靶分子的双特异性分子，所述其他功能分子例如其他肽或蛋白质(如其他抗体或受体的配体)。抗体可实际上被多个功能分子衍生化或与其连接以产生结合两个以上不同结合位点和/或靶分子的多特异分子；该多特异分子也包括在此处使用的术语“双特异性分子”内。为了产生双特异性分子，抗体可以功能性连接(例如通过化学耦合、基因融合、非共价结合或其它方式)至一个或多个结合分子，如另一个抗体、抗体片段、肽或结合模拟物，以产生双特异性分子。双特异性分子包括至少一种对RG-I的第一结合特异性和对第二靶表位如Fc受体(如人FcγRI(⑶64)或人Fcα受体(⑶89))的第二结合特异性。该双特异性分子能够结合表达FcγR或FcαR的效应细胞(如单核细胞、巨噬细胞或多形核白细胞(PMN))，和表达RG-I的细胞。这些双特异性分子使RG-I表达细胞靶向效应细胞并引发Fc受体介导的效应细胞活性，如表达RG-I的细胞的吞噬作用，抗体依赖型细胞介导的细胞毒性(ADCC)、细胞因子的释放或超氧阴离子的产生。双特异性分子实际上可以是多特异性的，也就是说，除了抗Fc结合特异性和抗RG-I结合特异性之外，它还可以包括第三结合特异性。在一个实施方式中，第三结合特异性是抗增强因子(EF)部分，例如，与涉及细胞毒活性的表面蛋白结合由此增强针对靶细胞的免疫应答的分子。“抗增强因子部分”可以是结合给定分子(如抗原或受体)，由此增强Fc受体或靶细胞抗原的结合决定簇的效果的抗体、功能抗体片段或配体。“抗增强因子部分”可以结合Fc受体或靶细胞抗原，或者，作为替代，可结合与第一和第二结合特异性结合的实体不同的实体。例如，抗增强因子部分可结合细胞毒性T细胞(如，经CD2、CD3、CD8、⑶28、⑶4、⑶40、ICAM-I或导致针对靶细胞的免疫应答增强的其它免疫细胞)。在一个实施方式中，本发明的双特异性分子包括至少一种抗体或其抗体片段(包括如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、Fd、dAb或单链Fv)作为结合特异性。抗体还可以为轻链或重链二聚物，或其任何最小片段，如Fv或单链构建体，如Ladner等人的US4，946，778所述，其内容藉由引用并入本文。在一个实施方式中，FcY受体的结合特异性由单克隆抗体提供，其结合不被人免疫球蛋白G(IgG)所阻断。此处使用的术语“IgG受体”系指位于染色体1上的八个γ-链基因中的任一个。这些基因编码总共12种跨膜或可溶的受体同种型，它们被分入三个Fcγ受体类别:FcyRI(CD64),FcyRII(CD32)和FcγRIII(CD16)。在一个优选的实施方式中，Fcγ受体为人高亲和性FcγRI。人FcγRI是一种72kDa的分子，其显示对单体IgG的高亲和性(108-109M-1)。抗Fcγ单克隆抗体的制造和表征在Fanger等人的WO88/00052和US4，954，617中有说明，其内容藉由引用全部并入本文。这些抗体在与受体的Fcy结合位点不同的位点上结合FcyRI.FcyRII或FcyRIII的一个表位，因此，它们的结合基本上不被生理水平的IgG所阻断。可用于本发明的特异性抗FcYRI抗体为mAb22、mAb32、mAb44、mAb62和mAb197。/^^匕32SAmericanTypeCultureCollection(ATCCAccessionNo.HB9469)得到。在其它的实施方式中，抗Fcγ受体抗体是人源化性形式的单克隆抗体22(Η22)οΗ22抗体的制造和表征在Graziano等人(1995)J.Immunol155(10):4996_5002和Tempest等人的WO94/10332中有说明。生成H22抗体的细胞系保藏于AmericanTypeCultureCollection，名称为HA022CL1，保藏号为CRL11177。在其它一些优选的实施方式中，针对Fc受体的结合特异性由结合人IgA受体，如Fc-Q受体(FeαRI(⑶89))的抗体提供，优选的是其结合不被人免疫球蛋白A(IgA)所阻断。术语“IgA受体”包括位于染色体19上的一个α基因(FcaRI)的基因产物。已知该基因编码几个可变剪接的跨膜同种型(55-llOkDa)。FcαRI(⑶89)组成型表达在单核细胞/巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞上，但不表达在非效应细胞群上。FcαRI对IgAl和IgA2均具有中等亲和性(5XIO7M4)，与诸如G-CSF或GM-CSF等细胞因子接触时，该亲和性提高(Morton，H.C.etal.(1996)CriticalReviewsinImmunology边423—440)。四个FcαRI特异性的单克隆抗体(以Α3、Α59、Α62和Α77表示)它们结合IgA配体结合功能域外的FcαRI，已经描述在(Monteiro，R.C.etal.(1992)J.Immunol.1481764)中。FcαRI和FcYRI是用于本发明的双特异性分子中的优选的触发受体，因为它们(1)主要表达在免疫效应细胞上，如单核细胞、ΡΜΝ、巨噬细胞和树突细胞上；(2)表达水平高(如，每个细胞5，000-100，000个该受体)；(3)是细胞毒活性(如，ADCC、吞噬作用)的介导者和(4)介导靶向它们的增强的抗原(包括自身抗原)的抗原呈递(enhancedantigenpresentationofantigens)0尽管优选的是人单克隆抗体，但可在本发明的双特异性分子中采用的其它抗体还有鼠单克隆抗体、嵌合单克隆抗体和人源化单克隆抗体。双特异性分子可以使用本领域中的公知方法，将组成结合特异性(如，抗FcR和抗RG-I特异性)偶联起来而制备。例如，可分别产生双特异性分子的各个结合特异性，然后将它们彼此偶联。当结合特异性是蛋白质或肽时，可使用各种耦联剂或交联剂进行共价偶联。交联剂的实例包括蛋白A、碳二亚胺、N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基-硫代醋酸酯(SATA),5,5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、邻亚苯基二马来酰亚胺(oPDM)、N-琥珀酰亚胺基-3_(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)和磺基琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-I-羧酸酯(硫代-SMCC)(例如，参见Karpovskyetal.(1984)J.Exp.Med.1601686；Liuetal.(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA828648)其它方法包括在Paulus(1985)BehringIns.Mitt.No.78,118-132；Brennanetal.(1985)Science2298**3,andGlennieetal.(1987)J.Immunol.1392367-2375)中说明的方法。优选的偶联试剂是SATA和硫代-SMCC，均由PierceChemicalCo.(Rockford,IL)获得。当结合特异性是抗体时，它们可以经由两个重链的C末端铰链区的巯基键偶联。在一个特别优选的实施方式中，在偶联之前将铰链区修饰成包含奇数个(优选一个)巯基残基。或者，两种结合特异性均可以在同一载体中被编码并在同一宿主细胞中表达和组装。该方法在双特异性分子系mAbXmAb、mAbXFab、FabXF(ab')2或配体XFab融合蛋白时尤其有用。本发明的双特异性分子可以为包含一个单链抗体和结合决定簇的单链分子，或者为包含两个结合决定簇的单链双特异性分子。双特异性分子可包含至少两个单链分子。制备双特异性分子的方法在US5，260，203；5,455，030；4,881，175；5,132，405；5,091,513；5,476,786；5，013，653；5，258，498；和5,482,858中均有说明以示举例，其全部均藉由引用明确并入本文。双特异性分子与其特定靶的结合可以藉由诸如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射性免疫测定(RIA)、FACS分析、生物测定(如生长抑制)或Western印迹法确认。这些方法通常使用对关注的复合物特异性的经标记试剂(如抗体)来检测特别关注的蛋白质-抗体复合物的存在。例如，FcR-抗体复合物可以用诸如能识别并特异性结合该抗体-FcR复合物的酶联抗体或抗体片段来检测。或者，该复合物可以使用各种其它免疫测定法中的任一检测。例如，该抗体可以被放射性标记并用于放射性免疫测定(RIA)(参见，例如Weintraub，B.，PrinciplesofRadioimmuno-assays,SeventhTrainingCourseonRadioligandAssayTechniques,TheEndocrineSociety，March，1986，此处藉由引用并入本文)。放射性同位素可藉由使用Y计数器或闪烁计数器等手段或藉由放射自显影法检测。偶联物本发明的偶联物中，配偶体分子系藉由化学接头(有时简称为“接头”)与抗体偶联。该配偶体分子可以是治疗剂或标志物。该治疗剂例如可以系例如是细胞毒素、非细胞毒性药物(如免疫抑制剂(immunosuppressant))、放射性试剂、其他抗体、或酶。配偶体分子优选是细胞毒素。该标志物可以是任何可产生可检测的信号的标记，如放射性标记、荧光标记或对催化对于底物进行可检测的修饰的酶。抗体担当靶向功能抗体通过与其抗原出现处的靶组织或细胞结合，使偶联物导向(steertheconjugateto)所述靶组织或细胞。在所述靶组织或细胞中，该连接物被切割，释放配偶体分子以执行其所需的生物学功能。连接的配偶体分子与抗体的比率可以随着诸如偶联反应时所用的配偶体分子的量和试验条件等因素而变化。配偶体分子与抗体的比率优选为1-3，更优选为1-1.5。本领域的技术人员将可以认为，抗体Z的各单独分子与整数个配偶体分子偶联，但偶联物制备物可以分析(analyzefor)配偶体分子与抗体的非整数比，其反映统计学平均值。■在一些实施方式中，该连接物是肽基接头，此处被表示为(L4)p-F-(L1)mtl其它接头包括胼和二硫化物接头，此处分别被表示为(L4)p-H-(L1)1^P(L4)p-J-(L1)mtlF、H和J分别为肽基、胼和二硫化物部分，它们可以被切割而使配偶体分子从抗体上释放出来，而L1和L4为连接基团。F、H、J、Li和L4，连同下标ρ和m—起在下文有更充分的定义。这些和其它接头的制备和使用说明于WO2005/112919中，其公开的内容以引用的方式并入本文。US2006/0004081；2006/0024317；2006/0247295；6，989，452；7，087，600；和7，129，261；WO2007/051081；2007/038658；2007/059404；和2007/089100说明了肽基和其它接头在抗体_配偶体分子偶联物中的使用，所有这些文献藉由引用并入本文。US6，214，345；2003/0096743；和2003/0130189；deGroot等人，J.Med.Chem.42，5277(1999)；deGroot等人J.Org.Chem.43，3093(2000)；deGroot等人，J.Med.Chem.66，8815，(2001)；WO02/083180；Carl等人，J.Med.Chem.Lett.24，479，(1981)；Dubowchik等人，Bioorg&Med.Chem.Lett.8，3347(1998)说明了其它接头，所有这些文献公开的内容藉由引用并入本文。除连接抗体和配偶体分子之外，接头还可使配偶体分子具有稳定性，减小其体内毒性，或者对其药物动力学、生物利用度和/或药效学产生有利的影响。通常优选的是一旦偶联物被输送至其作用部位，接头即被切割，释放出配偶体分子。同样优选的是，接头无痕迹(traceless)，使得一旦被切割，不留有接头存在的痕迹。在另一实施方式中，接头的特征在于它们能够在靶细胞内或附近位点(例如在配偶体分子的治疗作用位点或标记活性位点)被切割。该切割可以是酶促性的。这一特点有助于减小配偶体分子的系统性活化、减少毒性和系统性副作用。用于酶促切割的优选的可切割基团包括肽键、酯键、以及二硫键，如前述的F、H和J部分。在其它的实施方式中，接头对PH敏感，藉由改变pH而将其切割。一个重要的方面是控制接头的切割速度的能力。一般希望接头快速切割。然而，在一些实施方式中，可能优选切割较慢的接头。例如，在缓释制剂或同时具有快速释放成分和慢速释放成分的制剂中，提供较慢切割的接头可能是有用的。前述的WO2005/112919公开了胼接头，它们可以被设计而在一定速度范围内(从极快到极慢)切割。接头还可以在当偶联物处在循环过程中到达靶组织或细胞之前稳定配偶体分子，防止其降解。这是重要的有利之处，因为它延长了配偶体分子的循环半衰期。接头还可用于减弱配偶体分子的活性，以使偶联物在循环时相对为良性，而配偶体分子在所需的作用位点活化后具有所需效果，例如具有细胞毒性。对于治疗剂偶联物而言，连接物这一特点可改善该试剂的治疗指数。除了可切割的肽、胼或二硫化物基团(分别为F、H或J)之外，根据情况，一或多个接头L1可任选被导入至配偶体分子和F、H或J之间。这些接头基团L1还可被称为间隔基团(spacergroup)并包含至少两个官能团。依据下标m的值(即，存在的L1基团的个数)和特定基团L1的位置，基团L1的化学官能团可以与配偶体分子的化学官能团结合，与F、H或J(视情况)的化学官能团结合，或者与另一接头L1的化学官能团结合(如果有多于一个L1基团存在)。用于间隔基团L1的适宜的化学官能团的例子包括羟基、巯基、羰基、羧基、氨基、酮、醛和巯基基团。接头L1可以是被取代的或未被取代的烃基、被取代的或未被取代的芳基、被取代的或未被取代的杂芳基或被取代的或未被取代的杂烃基基团。在一个实施方式中，烃基或芳基基团可包含1-20个碳原子。它们还可以包含聚乙二醇部分。示例性基团L1包括例如6-氨基己醇、6-巯基己醇、10-羟基癸酸、甘氨酸和其它氨基酸、1，6_己二醇、β-丙氨酸、2-氨基乙醇、半胱胺(2-氨基乙硫醇)、5_氨基戊酸、6-氨基己酸、3-马来酰亚胺基苯甲酸、苯酞(phthalide)、α-取代的苯酞、羰基、缩醛胺酯、核酸和肽等。基团L1的一个功能是提供F、H或J(视情况而定)与配偶体分子之间的空间分离，以免后者干扰(例如藉由位阻效应或电效应)在F、H或J处的切割化学。基团L1还可用于将额外的分子量和化学官能团引入偶联物。通常，额外的分子量和官能团影响偶联物的血清半衰期和其它性质。因此，通过仔细挑选间隔基团，可以制得血清半衰期不等的偶联物。可任选的是，一或多个连接物L1可以是自消基团(self-immolativegroup)，如后所述。下标m系选自0、1、2、3、4、5和6的整数。在多个L1基团存在时，它们可为相同或不同。L4是接头部分，可提供F、H或J(视情况而定)与抗体之间的空间分离，以免F、H或J干扰抗体与抗原的结合或者抗体干扰F、H或J的切割化学。优选的是，对于使用含有L4部分的接头的偶联物，L4可使该偶联物的溶解性增大或聚集性减小，或者可改变所述偶联物的水解速率。和L1一样，L4任选可以是自消基团。在一个实施方式中，L4系被取代的烃基、未被取代的烃基、被取代的芳基、未被取代的芳基、被取代的杂烃基或未被取代的杂烃基，上述任何基团的都可以为直链、支化或环状。取代基可以例如是低级(C1-C6)烃基、烃氧基、烃硫基、烃基氨基或者二烃基氨基。在一些实施方式中，L4包括非环状部分。在另一个实施方式中，L4包括带正电或负电的氨基酸聚合物，如聚赖氨酸或聚精氨酸。L4可包括诸如聚乙二醇部分等聚合物。另外，L4可同时包括诸如聚合物部分和小分子部分。在一优选的实施方式中，L4包括聚乙二醇(PEG)部分。L4的PEG部分可为1到50个单元长。优选的是，PEG含有1到12个重复单元，更优选3到12个重复单元，更优选2到6个重复单元，或甚至更优选3到5个重复单元，最优选4个重复单元。L4可仅仅由PEG部分组成，或也可包括其它的未取代的或未被取代的烃基或杂烃基。将PEG组合作为L4部分的一部分可以用于提高复合物的水溶性。另外，PEG部分可降低在药物和抗体偶联时可能发生的凝集的程度。下标ρ为0或1；也就是说，L4的存在是可选的。当L4存在时，其至少具有两个功能团，其中一个官能团结合F、H或J(视情况)中的化学官能团，另一个官能团结合抗体。基团L4的适宜的化学官能团的实例包括羟基、巯基、羰基、羧基、氨基、酮、醛和巯基基团。由于抗体通常藉由巯基基团(例如来自未氧化的半胱氨酸残基，利用亚氨基硫烷将含有巯基的延伸序列(extension)添加到赖氨酸残基上，或者二硫桥的还原)、氨基(例如来自赖氨酸残基)、醛基(例如来自糖苷侧链的氧化)或羟基(例如来自丝氨酸残基)偶联，用于连接抗体的优选的化学官能团是与前述基团具有反应性的官能团，其实例有马来酰亚胺、巯基、醛、胼、氨基脲和羧基。抗体上巯基与L4上马来酰亚胺的组合是优选的。在一些实施方式中，L4包括与(AA1)。的N末端直接连接的Or26'R25·R26R25r20。R20系选自H、被取代的或未被取代的烃基、被取代的或未被取代的杂烃基和酰基的基团。铲5、妒5，、126和126，各自独立地选自H、被取代的或未被取代的烃基、被取代的或未被取代的杂烃基、被取代的或未被取代的芳基、被取代的或未被取代的杂芳基和被取代的或未被取代的杂环烃基；s和t独立地为1-6的整数。优选的是，R2°、R25、R25，、R26和R26，是疏水性的。在一些实施方式中，R2tl为H或烃基(优选的是未被取代的低级烃基)。在一些实施方式中，妒5、妒5’、妒6和铲6’独立地为11或烃基(优选的是未被取代的C1-C4烃基)。在一些实施方式中，R25、R25，、R26和R26，均为H。在一些实施方式中，t系1，s为1或2。肽接头(F)如上所述，本发明的肽基接头可由通式(L4)p-F-(L1)m表示，其中F表示含有肽基部分的部分。在一个实施方式中，F部分包括任选的额外的自消接头L2和羰基，对应于式(a)的偶联物OX4-(L4)p-(AA1)c-(L2-C)0-(L1)m-D在该实施方式中，L1、L4、ρ和m如上所述。X4为抗体，D为配偶体分子。下标ο为0或1，L2如果存在，即表示自消连接物。AA1代表一个或多个天然氨基酸，和/或非天然α-氨基酸；c为1到20的整数。在一些实施方式中，c为2-5的整数，或c为2或3。式(a)中，AA1在其氨基末端直接与L4相连，或者如果没有L4，则直接与X4相连。在一些实施方式中，如L4存在，L4不含直接与(AA1)。的N末端相连的羧酰基团。在另一实施方式中，F部分包括氨基基团和任选的间隔基团L3，且L1不存在(即m为零)，对应于式(b)的偶联物X4-(L4)p-(AA1)c-N-(L3)0-D在该实施方式中，X^D.IAAA^c和ρ如上文定义。下标ο为或1。L3如果存在，则为含有伯胺或仲胺或羧基官能团的间隔基团，并且要么L3的胺基与D的侧链羧基官能团形成酰胺键，要么L3的羧基与D的侧链胺基官能团形成酰胺键。自消件接头自消性(self-immolative)接头是一种双官能化学部分，它能将两个间隔的化学部分共价连接成通常稳定的三联分子(tripartatemolecule)，藉由酶切割从该三联分子释放所述间隔的化学部分中的一个；在所述酶切割之后，从分子的其余部分中自发切割而释放所述间隔的化学部分中的另一个。根据本发明，自消性间隔物在其一端以共价键和肽部分相连，而在其另一端以共价键与药物部分的化学反应性位点相连，其中所述药物部分的衍生化可抑制药理活性，从而将肽部分与药物部分间隔开来并共价连接成三联分子，该分子在不存在靶酶的情况下是稳定的且无药理活性，但该分子中共价连接间隔部分(spacermoiety)与肽部分的键可以被这样的靶酶酶促切割，从而使肽部分从该三联分子中释放出来。这样的酶促切割继而又会激活间隔部分的自消性质，引发共价连接间隔部分与药物部分的键的自发断裂，由此释放药理活性形式的药物。例如，参见Carletal.，J.Med·Chem.，24(3),479-480(1981)；Carletal.,WO81/01145(1981)；Tokietal.,J.Org.Chem.67,1866-1872(2002)；Boydetal.WO2005/112919；以及Boydetal.W02007/038658，其内容藉由引用并入本文。一个特别优选的自消性间隔物可以由式(C)表示权利要求一种抗体配偶体分子偶联物，包含与配偶体分子偶联的人单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分可结合人RG1，并且该偶联物显示出以下特性中的至少一种(a)以1×108M或更小的KD与人RG1结合；或(b)抑制体内表达RG1的细胞的生长。2.权利要求1所述的偶联物，其中该抗体或其抗原结合部分包含(a)包含SEQIDNO1的重链可变区CDR1；(b)包含SEQIDNO3的重链可变区CDR2；(c)包含SEQIDNO5的重链可变区⑶R3；(d)包含SEQIDNO7的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQIDNO9的轻链可变区⑶R2；和(f)包含SEQIDNO11的轻链可变区CDR3。3.权利要求1所述的偶联物，其中该抗体或其抗原结合部分包含(a)包含SEQIDNO2的重链可变区CDR1；(b)包含SEQIDNO4的重链可变区⑶R2；(c)包含SEQIDNO6的重链可变区⑶R3；(d)包含SEQIDNO8的轻链可变区⑶R1；(e)包含SEQIDNO10的轻链可变区⑶R2；和(f)包含SEQIDNO12的轻链可变区CDR3。4.权利要求1所述的偶联物，其中该抗体或其抗原结合部分包含(a)包含下述氨基酸序列的重链可变区，该氨基酸序列选自SEQIDN0:13_14或其中任一序列的保守修饰序列；和(b)包含下述氨基酸序列的轻链可变区，该氨基酸序列选自SEQIDN0:15-16或其中任一序列的保守修饰序列。5.权利要求1所述的偶联物，其中该抗体或其抗原结合部分包含(a)包含SEQIDNO:1或SEQIDNO:2或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQIDNO:3或SEQIDNO:4或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQIDNO:5或SEQIDNO:6或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQIDNO:7或SEQIDNO:8或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQIDNO:9或SEQIDNO10或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQIDNO:11或SEQIDNO12或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR3。6.权利要求1所述的偶联物，其中该抗体或其抗原结合部分可结合人RG-1上被下述参考抗体识别的表位，该参考抗体包含(a)包含SEQIDNO13氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDN0:15氨基酸序列的轻链可变区；或(b)包含SEQIDNO:14氨基酸序列的重链可变区和包含SEQIDNO:16氨基酸序列的轻链可变区。7.权利要求1所述的偶联物，其中该配偶体分子是细胞毒素。8.权利要求1所述的偶联物，其中该配偶体分子具有式(I)所表示的结构9.权利要求8所述的偶联物，其中该前药化基团PD是氨基甲酸酯(盐)、磷酸酯(盐)、或者葡萄糖醛酸衍生物。10.权利要求8所述的偶联物，其中该抗体或其抗原结合部分包含(a)包含SEQIDNO:1或SEQIDNO:2或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQIDNO:3或SEQIDNO:4或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQIDNO:5或SEQIDNO:6或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQIDNO:7或SEQIDNO:8或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQIDNO:9或SEQIDNO10或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQIDN0:11或SEQIDNO:12或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR3。11.权利要求1所述的偶联物，其中该配偶体分子具有式(IV)所表示的结构12.权利要求1所述的偶联物，具有式(A)所表示的结构13.—种组合物，包含权利要求1所述的偶联物和药学上可接受的载体。14.一种抑制表达RG-1的肿瘤细胞生长的方法，包括使该表达RG-1的肿瘤细胞与根据权利要求1的偶联物接触，使得该表达RG-1的肿瘤细胞的生长得到抑制。15.权利要求14所述的方法，其中该抗体或其抗原结合部分包含(a)包含SEQIDN0:1或SEQIDNO:2或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQIDNO:3或SEQIDNO:4或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQIDNO:5或SEQIDNO:6或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQIDNO:7或SEQIDNO:8或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQIDNO:9或SEQIDNO10或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQIDNO:11或SEQIDNO12或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR3。16.权利要求14所述的方法，其中该配偶体分子具有式(I)所表示的结构17.权利要求14所述的方法，其中该配偶体分子具有式(IV)所表示的结构18.权利要求14所述的方法，其中该偶联物具有式(A)所表示的结构19.权利要求14所述的方法，其中所述表达RG-1的肿瘤细胞是前列腺癌细胞或膀胱癌细胞。20.治疗受试者体内癌症的方法，包括给予需要此类治疗的受试者有效量的根据权利要求1的偶联物，使该受试者体内的癌症得到治疗。21.权利要求20所述的方法，其中该癌症是前列腺癌或膀胱癌。22.权利要求20所述的方法，其中该癌症是肺癌、胃癌、乳腺癌、肾癌、胰腺癌、结肠癌、黑色素瘤或胰岛素瘤。23.权利要求21所述的方法，其中该配偶体分子是细胞毒素。24.权利要求21所述的方法，其中该配偶体分子具有式(I)所表示的结构25.权利要求24所述的方法，其中该抗体或其抗原结合部分包含(a)包含SEQIDN0:1或SEQIDNO:2或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQIDNO:3或SEQIDNO:4或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQIDNO:5或SEQIDNO:6或其中任一序列的保守修饰序列的重链可变区CDR3；5(d)包含SEQIDN0:7或SEQIDNO:8或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQIDNO:9或SEQIDNO10或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR2；和f)包含SEQIDNO:11或SEQIDNO12或其中任一序列的保守修饰序列的轻链可变区CDR3。26.权利要求21所述的方法，其中该配偶体分子具有式(IV)所表示的结构27.权利要求21所述的方法，其中该偶联物具有式(A)所表示的结构全文摘要对于治疗癌症有用的抗RG-1抗体、抗体片段或抗体模拟物，它们与诸如药物、放射性同位素和细胞毒素等配偶体分子偶联，其中，无论结合有RG-1的偶联物是否在靶细胞内被内化，该配偶体分子均发挥其作用。文档编号A61P35/00GK101951960SQ200880125919公开日2011年1月19日申请日期2008年11月26日优先权日2007年11月30日发明者乔纳森·A·特雷特,切塔纳·拉奥-奈克,戴维·J·金,桑吉夫·甘格沃,潘钦,约瑟芬·M·卡达雷利申请人:百时美施贵宝公司