专利名称：磁性脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种脂质体，特别是磁性脂质体。还涉及磁性脂质体的制备方法。
背景技术：
文献l"公开号为CN100998563"的中国发明专利公开了一种载药磁性脂质体的制备方法， 首先将多柔比星药物溶解于制备好的磁液里形成多柔比星磁液，将L-a-磷脂酰乙醇胺、胆固 醇、L-a-磷脂酰胆碱按7:2:1的重量比制得脂质体薄膜，再将多柔比星磁液加入形成脂质 体薄膜的茄形瓶里，在室温下进行旋涡振荡30min直至薄膜脱落完全，将初液倒入试管内进 行超声粉碎间断脉冲20min，静置12小时形成磁性多柔比星脂质体。
文献2"公开号为CN1559439"的中国发明专利公开了一种载药磁性脂质体的制备方法， 首先采用薄膜旋转蒸发器在茄形瓶内壁形成一均匀的脂质体薄膜，制备砒霜与锰锌铁氧体磁 性纳米粒子的混悬液，将此混悬液加到上述含薄膜的茄形瓶中，40±5°(3恒温震荡至薄膜脱落， 反复冻融及超声处理3次制得纳米砒霜磁性脂质体。
文献3"M. M. Elmi, M. N. Sarbolouki. A simple method for preparation of immunomagnetic liposomes. Int. J. Pharm. 2001, 215(1~2): 45-50"公开一种逆向蒸发法制备磁性脂质体的方法， 其工艺流程为将脂质混合物溶于有机溶剂中，加入含有磁性粒子和药物的缓冲液，超声处 理使其形成稳定乳剂，于42。C时减压旋转蒸发，达到胶态后，再滴加缓冲液，继续旋转蒸发， 得到水性溶液，除去未包封的磁性粒子和药物，得到磁性脂质体。
以上文献所公开的磁性脂质体结构如图2所示，脂质体3将磁性微粒2和药物1一同包 裹在其内部，这种结构存在一些局限性。第一，磁含量不高、磁响应性低。由于脂质体，特 别是小单室脂质体(SUV)的磷脂双层的内部空间有限，导致仅有较少量的磁性微粒可以包 在脂质体内部；并且磁性微粒密度较大、易沉降，在脂质体水合形成囊泡的同时，难以均匀 包覆其中。第二，药物的包载量低。由于脂质体内部空间有限，当磁性微粒占据其中时，导 致药物的包载量下降。
发明内容
为了克服现有技术方法制备的脂质体磁含量低、药物的包载量低的不足，本发明提供一 种磁性脂质体，脂质体内包载药物，磁性微粒沉积在脂质体表面，可以在提高药物的包载量 的同时，提高磁含量。本发明还提供这种磁性脂质体的制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案 一种磁性脂质体，包括药物、脂质体和磁 性微粒，其特点是所述脂质体内部是药物，脂质体表面是磁性微粒。一种上述磁性脂质体的制备方法，其特点是包括下述步骤
(a) 分别将蛋黄卵磷脂、胆固醇溶解于体积比甲醇氯仿=1:2混合溶剂中，分别得到 0.1g/mL的蛋黄卵磷脂溶液和O.lg/mL的胆固醇溶液，将蛋黄卵磷脂溶液和胆固醇溶液在茄形 瓶中以2:1 2.5:1的摩尔比进行混合，旋转蒸发形成脂质体薄膜；
(b) 将pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液加入到已形成脂质体薄膜的茄形瓶中，蛋黄卵磷脂 溶液和胆固醇溶液的总体积与磷酸盐缓冲溶液的体积比为1:4 1:10，使用旋涡混合器旋混 20 40min，使用高速分散均质机分散5-10min，充分水合以后离心水洗2 3次，得到表面带 有负电的脂质体；
(c) 将步骤(b)得到的表面带有负电性的脂质体分散在浓度为0.8~1.2mg/(ml 0.5MNaCl) 的聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液中，脂质体与聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液的质量比为 1:60" : 100，静置吸附20~40min后离心水洗；
(d) 将步骤(c)得到的脂质体分散在浓度为0.3 0.6mg/(ml0.5MNaCl)的聚苯乙烯磺酸 钠水溶液中，脂质体与聚苯乙烯磺酸钠水溶液的质量比为1:60一100，静置吸附20~40min 后离心水洗；
(e) 将歩骤(d)得到的脂质体分散在浓度为0.8~1.2mg/(ml 0.5M NaCl)的聚二烯丙基 二甲基氯化铵水溶液中，脂质体与聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液的质量比为1:60 1:100， 静置吸附20~40min后离心水洗；
(f) 将质量百分浓度2%、带有负电的Fe3CU纳米微粒磁流体稀液慢慢加入步骤(e)得 到的脂质体中，脂质体与磁流体稀液的质量比为1:0.8 1:2.5，静置吸附2(K40min后进行分 离，得到磁性脂质体。
本发明的有益效果是由于脂质体内包载药物，磁性微粒沉积在脂质体表面，脂质体内 部空间的有限空间全部包载药物，提高了药物的包载量，同时提高了磁含量。
下面结合附图和实施例对本发明作详细说明。
图1是本发明磁性脂质体的结构示意图。 图2是现有技术磁性脂质体的结构示意图。 图3是本发明磁性脂质体的TEM照片。
具体实施例方式
参照图l、图3，本发明的磁性脂质体的结构是，脂质体3内部是药物1，脂质体3表面是 磁性微粒2。从磁性脂质体的TEM照片可以清楚地看到脂质体内部的药物以及表面的磁性微粒。 实施例1:分别将蛋黄卵磷脂、胆固醇溶解于甲醇-氯仿混合有机溶剂(1:2， v/v)中，得到O.lg/mL的蛋黄卵磷脂溶液和O.lg/mL的胆固醇溶液，将lOmL蛋黄卵磷脂溶液和2.5mL 胆固醇溶液在茄形瓶中进行混合，旋转蒸发形成脂质体薄膜。将50mL磷酸盐缓冲溶液(pH， 7.4)加入形成脂质体薄膜的茄形瓶中，使用旋涡混合器旋混20min，使用高速分散均质机分 散5min，充分水合以后离心水洗2次，得到表面带有负电的脂质体。将上述表面带有负电的 脂质体lg分散在60mL浓度为0.8mg/(ml 0.5MNaCl)的聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液中， 静置吸附20min后离心水洗；再分散在60mL浓度为0.5mg/(ml 0.5M NaCl)的聚苯乙烯磺酸钠 水溶液中，静置吸附20min后离心水洗；再分散在60mL浓度为0.8mg/(ml 0.5MNaCl)的聚 二烯丙基二甲基氯化铵水溶液中，静置吸附20min后离心水洗。将lg浓度为2。/。的磁流体稀 液慢慢加入上述脂质体中，静置吸附20min后进行分离，得到磁性脂质体。
实施例2:分别将蛋黄卵磷脂、胆固醇溶解于甲醇-氯仿混合有机溶剂(1:2， v/v)中， 得到O.lg/mL的蛋黄卵磷脂溶液和O.lg/mL的胆固醇溶液，将10mL蛋黄卵磷脂溶液和2mL 胆固醇溶液在茄形瓶中进行混合，旋转蒸发形成脂质体薄膜。将60mL磷酸盐缓冲溶液(pH， 7.4)加入形成脂质体薄膜的茄形瓶中，使用旋涡混合器旋混30min，使用高速分散均质机分 散6min，充分水合以后离心水洗3次，得到表面带有负电的脂质体。将上述表面带有负电的 脂质体lg分散在70mL浓度为lmg/(ml 0.5M NaCl)的聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液中， 静置吸附20min后离心水洗；再分散在70mL浓度为0.4mg/(ml 0.5MNaCl)的聚苯乙烯磺酸钠 水溶液中，静置吸附20min后离心水洗；再分散在70mL浓度为lmg/(ml0.5MNaCl)的聚二 烯丙基二甲基氯化铵水溶液中，静置吸附20min后离心水洗。将1.5g浓度为2%的磁流体稀 液慢慢加入上述脂质体中，静置吸附20min后逬行分离，得到磁性脂质体。
实施例3:分别将蛋黄卵磷脂、胆固醇溶解于甲醇-氯仿混合有机溶剂(1:2， v/v)中， 得到O.lg/mL的蛋黄卵磷脂溶液和O.lg/mL的胆固醇溶液，将10mL蛋黄卵磷脂溶液和2mL 胆固醇溶液在茄形瓶中进行混合，旋转蒸发形成脂质体薄膜。将70mL磷酸盐缓冲溶液(pH， 7.4)加入形成脂质体薄膜的茄形瓶中，使用旋涡混合器旋混30min，使用高速分散均质机分 散8min，充分水合以后离心水洗2次，得到表面带有负电的脂质体。将上述表面带有负电的 脂质体lg分散在70mL浓度为1.2mg/(ml 0.5MNaCl)的聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液中， 静置吸附30min后离心水洗；再分散在70mL浓度为0.5mg/(ml 0.5M NaCl)的聚苯乙烯磺酸钠 水溶液中，静置吸附30min后离心水洗；再分散在70mL浓度为1.2mg/(ml 0.5MNaCl)的聚 二烯丙基二甲基氯化铵水溶液中，静置吸附30min后离心水洗。将1.8g浓度为2°/。的磁流体 稀液慢慢加入上述脂质体中，静置吸附30min后进行分离，得到磁性脂质体。
实施例4:分别将蛋黄卵磷脂、胆固醇溶解于甲醇-氯仿混合有机溶剂(1:2， v/v)中， 得到O.lg/mL的蛋黄卵磷脂溶液和O.lg/mL的胆固醇溶液，将lOmL蛋黄卵磷脂溶液和2.5mL胆固醇溶液在茄形瓶中进行混合，旋转蒸发形成脂质体薄膜。将60mL磷酸盐缓冲溶液(pH， 7.4)加入形成脂质体薄膜的茄形瓶中，使用旋涡混合器旋混40min，使用高速分散均质机分 散10min，充分水合以后离心水洗3次，得到表面带有负电的脂质体。将上述表面带有负电 的脂质体lg分散在80mL浓度为1.2mg/(ml 0.5M NaCl)的聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液 中，静置吸附40min后离心水洗；再分散在80mL浓度为0.6mg/(ml 0.5M NaCl)的聚苯乙烯磺 酸钠水溶液中，静置吸附40min后离心水洗；再分散在80mL浓度为1.2mg/(ml 0.5MNaCl)的 聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液中，静置吸附40min后离心水洗。将2.5g浓度为2%的磁流 体稀液慢慢加入上述脂质体中，静置吸附40min后进行分离，得到磁性脂质体。
在制备磁性脂质体的过程中，对上述方法所涉及的各种比例范围、浓度范围、时间范围 进行了多次试制，均取得了良好的效果。
权利要求
1、一种磁性脂质体，包括药物、脂质体和磁性微粒，其特征在于所述脂质体内部是药物，脂质体表面是磁性微粒。
2、 一种权利要求l所述磁性脂质体的制备方法，其特征在于包括下述步骤(a) 分别将蛋黄卵磷脂、胆固醇溶解于体积比甲醇氯仿=1:2混合溶剂中，分别得到 0.1g/mL的蛋黄卵磷脂溶液和O.lg/mL的胆固醇溶液，将蛋黄卵磷脂溶液和胆固醇溶液在茄形 瓶中以2:1 2.5:1的摩尔比进行混合，旋转蒸发形成脂质体薄膜；(b) 将pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液加入到已形成脂质体薄膜的茄形瓶中，蛋黄卵磷脂 溶液和胆固醇溶液的总体积与磷酸盐缓冲溶液的体积比为1:4 1:10，使用旋涡混合器旋混 20 40min，使用高速分散均质机分散5 10min，充分水合以后离心水洗2~3次，得到表面带 有负电的脂质体；(c) 将步骤(b)得到的表面带有负电性的脂质体分散在浓度为0.8 1.2mg/(ml0.5MNaCl) 的聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液中，脂质体与聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液的质量比为 1:60~1:100，静置吸附20 40min后离心水洗；(d) 将步骤(c)得到的脂质体分散在浓度为0.3 0.6mg/(ml0.5MNaCl)的聚苯乙烯磺酸 钠水溶液中，脂质体与聚苯乙烯磺酸钠水溶液的质量比为1:60 1:100，静置吸附20 40min 后离心水洗；(e) 将步骤(d)得到的脂质体分散在浓度为0.8~1.2mg/(ml 0.5M NaCl)的聚二烯丙基 二甲基氯化铵水溶液中，脂质体与聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液的质量比为1:60 1:100， 静置吸附20~40min后离心水洗；(f) 将质量百分浓度2%、带有负电的Fe304纳米微粒磁流体稀液慢慢加入步骤(e)得 到的脂质体中，脂质体与磁流体稀液的质量比为1:0.8 1:2.5，静置吸附20 40min后进行分 离，得到磁性脂质体。
全文摘要
本发明公开了一种磁性脂质体及其制备方法，该磁性脂质体将药物包裹在脂质体内部，磁性微粒包覆在脂质体外面。制备方法是将蛋黄卵磷脂溶液和胆固醇溶液在茄形瓶中以2∶1～2.5∶1的摩尔比进行混合，旋转蒸发形成脂质体薄膜；再使用磷酸盐缓冲溶液对脂质体薄膜进行充分水合得到表面带有负电的脂质体；然后交替吸附阳离子聚电解质——聚二烯丙基二甲基氯化铵、阴离子聚电解质——聚苯乙烯磺酸钠、阳离子聚电解质——聚二烯丙基二甲基氯化铵，最后通过电荷作用、自组装法将表面带负电的Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>磁性粒子沉积到脂质体表面，得到磁性脂质体。由于脂质体内包载药物，磁性微粒沉积在脂质体表面，脂质体内部空间的有限空间全部包载药物，提高了药物的包载量，同时提高了磁含量。
文档编号A61K9/127GK101564380SQ20091002271
公开日2009年10月28日 申请日期2009年5月26日 优先权日2009年5月26日
发明者洋 于, 卢婷利, 宏 张, 雯 赵, 涛 陈 申请人:西北工业大学