专利名称：：灭活疫苗的一步乳化方法
技术领域：
：本发明涉及疫苗乳化剂，尤其涉及灭活疫苗的一步乳化方法。
背景技术：
：目前灭活疫苗生产工艺一般需要三步第一步是将注射白油与油溶性乳化剂混合均匀，第二步是抗原液与水溶性乳化剂混合均匀，第三步是将上述两步均匀溶液放入一起进行乳化，制备出均匀稳定的油包水灭活疫苗。该方法工艺繁琐，流程较长，能耗高，生产效率低。其主要原因是油溶性乳化剂不溶于水，水溶性乳化剂不溶于油，因此乳化工艺必须分三步完成。目前我国生产灭活疫苗的油溶性乳化剂一般为司本-80(又称span-80或司盘-80)，水溶性乳化剂一般为吐温-80(Tween-80)。
发明内容本发明的目的在于提供一种生产工艺步骤简洁、生产成本低且其乳化剂具有增强免疫活性作用的一种灭活疫苗一步乳化方法，它由下述技术方案予以实现包括下述步骤1)合成乳化剂取一定量甘露醇在氮气保护下，于190-20(TC的条件下脱水0.40.6小时，然后分别缓慢加入1.52.5倍和1/2201/180倍于所述甘露醇重量的油酸和氢氧化钠，恒温脂化2.53.5小时，所得产品为甘露醇油酸脂，其结构式为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>2)灭活疫苗配置按66:770:7的体积份取注射白油和上述乳化剂，用乳化泵以900011000转/分对上述比例的注射白油和乳化剂混合物进行搅拌，边搅拌边加入一定体积份的灭活抗原液，灭活抗原液完全加入后继续以900011000转/分的转速搅拌5070秒，然后停机2535秒，再以1400016000转/分搅拌110130秒，配成乳化的灭活疫苗。所述灭活疫苗在动物接种方面的应用。本发明的有益效果是工艺简洁，流程较断，能耗低，生产效率高，其配制的灭活疫苗性能稳定，免疫活性强，同时其中的乳化剂具有增强免疫活性的作用。图1是本发明方法和三步法制取的疫苗其免疫效果比较图。具体实施例方式下述实施例采用108.17EID50/0.1ml;HA=210的尿囊液作为灭活抗原液。实施例1第一步合成乳化剂取40g甘露醇在氮气保护下，于195'C的条件下脱水0.50小时，然后分别缓慢加入相当于40g甘露醇重量的2.0倍和1/200倍的80g油酸和0.20g氢氧化钠NaOH，恒温脂化3小时，得到甘露醇油酸脂的乳化剂，该甘露醇油酸脂的结构式为.-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>第二步配置灭活疫苗按68:7的体积份数取注射白油和上述乳化剂，用乳化泵以10000转/分对上述比例的注射白油和乳化剂进行搅拌混合，边搅拌边加入上述灭活抗原液25体积份，灭活抗原液完全加入后继续以1000转/分的转速搅拌60秒，然后停机30秒，再以15000转搅拌120秒，配置成乳化的禽流感(Re-5株)灭活疫苗。实施例2第一步合成乳化剂同样取40g甘露醇在氮气保护下，于19(TC的条件下脱水0.40小时，然后分别缓慢加入相当于40g甘露醇重量的1.5倍和l/220倍的60g油酸和0.18g氢氧化钠NaOH，恒温脂化2.5小时，得到甘露醇油酸脂的乳化剂，该甘露醇油酸脂的结构式同上述实施例。第二步配置灭活疫苗本实施例还是采用108.17EID50/0.1ml;HA=210的尿囊液作为灭活抗原液。按70:7的体积份数取注射白油和上述乳化剂，用乳化泵以9000转/分对上述比例的注射白油和乳化剂进行搅拌混合，边搅拌边加入灭活抗原液24体积份，灭活抗原液完全加入后继续以9000转/分的转速搅拌50秒，然后停机25秒，再以14000转搅拌110秒，配置成乳化的禽流感(Re-5株)灭活疫苗。实施例3第一步合成乳化剂还是取40g甘露醇在氮气保护下，于200'C的条件下脱水0.60小时，然后分别缓慢加入相当于40g甘露醇重量的2.5倍和1/180倍的100g油酸和0.22g氢氧化钠NaOH，恒温脂化3.5小时，得到甘露醇油酸脂的乳化剂，该甘露醇油酸脂的结构式与实施例l相同。第二步配置灭活疫苗本实施例采用A(该抗原菌种是否有名称，如有请给名称)牛白蛋白抗原液按66:7的体积份数取注射白油和上述乳化剂，用乳化泵以11000转/分对上述比例的注射白油和乳化剂进行搅拌混合，边搅拌边加入灭活抗原液26体积份，灭活抗原液完全加入后继续以11000转/分的转速搅拌70秒，然后停机35秒，再以16000转搅拌130秒，配置成乳化的禽流感(Re-5株)灭活疫苗。本发明人还采用油溶性乳化剂司本-80、水溶性乳化剂吐温-80和相同的灭活抗原液，根据现有三步法来生产禽流感灭活疫苗，并对两种不同方法生产的疫苗进行稳定性实验，其结果见表l表1两种方法配置的疫苗稳定性比较<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>从表中可看出，两种方法配置的疫苗稳定性基本相同。发明人还用本发明方法和现有三步法制备的禽流感灭活疫苗进行灭活疫苗效力比较实验，选用三组SPF鸡。其疫苗的效力的检验结果如图1。从附图1中可看出，本发明方法与三步法所制得的疫苗，其疫苗稳定和免疫效果相当。但本发明的流程要比三步法简单得多，从而使灭活疫苗配置效率大大提高，成本大大降低。权利要求1.灭活疫苗一步乳化方法，其特征在于包括下述步骤1)合成乳化剂取一定量甘露醇在氮气保护下，于190-200℃的条件下脱水0.4～0.6小时，然后分别缓慢加入1.5～2.5倍和1/220～1/180倍于所述甘露醇重量的油酸和氢氧化钠，恒温脂化2.5～3.5小时，所得产品为甘露醇油酸脂，其结构式为2)灭活疫苗配置按66∶7～70∶7的体积份取注射白油和上述乳化剂，用乳化泵以9000～11000转/分对上述比例的注射白油和乳化剂混合物进行搅拌，边搅拌边加入一定体积份的灭活抗原液，灭活抗原液完全加入后继续以9000～11000转/分的转速搅拌50～70秒，然后停机25～35秒，再以14000～16000转/分搅拌110～130秒，配成乳化的灭活疫苗。全文摘要本发明涉及灭活疫苗的一步乳化方法。包括下述步骤1)合成乳化剂，取一定量甘露醇在氮气保护下，于190-200℃的条件下脱水0.4～0.6小时，然后分别缓慢加入1.5～2.5倍和1/220～1/180倍于所述甘露醇重量的油酸和氢氧化钠，恒温脂化2.5～3.5小时，所得产品为甘露醇油酸脂；2)灭活疫苗配置，按66∶7～70∶7的体积份取注射白油和上述乳化剂，用乳化泵以9000～11000转/分对上述比例的注射白油和乳化剂混合物进行搅拌，边搅拌边加入一定体积份的灭活抗原液，灭活抗原液完全加入后继续以9000～11000转/分的转速搅拌50～70秒，然后停机25～35秒，再以14000～16000转/分搅拌110～130秒，配成乳化的灭活疫苗。其有益效果是工艺简洁，流程较断，能耗低，生产效率高，其配制的灭活疫苗性能稳定，免疫活性强，同时其中的乳化剂具有增强免疫活性的作用。文档编号A61K9/107GK101474149SQ200910028380公开日2009年7月8日申请日期2009年1月23日优先权日2009年1月23日发明者刘卫星,薛家兵,陈锡武申请人:南京联海化工有限公司