专利名称：：一种中药组合物在制备促进一氧化氮生成药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体地，本发明涉及一种中药组合物在制备促进一氧化氮生成药物中的应用，属中药应用领域。
背景技术：
：急性心肌梗死(AcuteMyocardialInfarction，AMI)发病凶险，病死率高，危害大。因而冠脉再通治疗(溶栓或急诊冠脉介入)尽快使堵塞的冠脉再通，恢复心肌有效再灌注，也已成为最重要的目标和评价指标。然而AMI冠脉再通后仍存在以下问题使心肌完全收益1、无再流或慢血流现象，即冠脉虽已开通(无机械堵塞)，心肌并未恢复有效的再灌注而表现为慢血流或无血流。其结果心肌彻底坏死、梗死范围扩大，心室扩张和重构、心功能低下和心力衰竭、以及恶性心律失常等严重并发症的发生率增高，住院病死率增加5-10倍；2、心肌缺血再灌注损伤，即缺血心肌在恢复血流再灌注后，反而加重其结构破坏，引起细胞死亡，导致梗死范围扩大，造成心功能的进一步损害，并影响AMI患者的预后。NO可以调节血管张力、抑制血小板和白细胞的聚集、粘附、减少氧化应激反应并保护血管结构完整性。已有研究表明急性心肌梗死再灌注后不论是增加外源性还是内源性NO都能够减少缺血再灌注损伤并减少白细胞与内皮细胞的粘附。一些已知可以保护内皮功能如他汀类药物、内皮素受体拮抗剂和脂联素等，都可以减少缺血再灌注损伤而且作用机制都与NO的生成有关。本发明是在第01131203.3号和第200410048292.2号专利的基础上进行的改进发明，在此全文引用该两专利文件记载的内容。上述两项专利未公开该中药组合物在制备促进一氧化氮生成药物中的应用。
发明内容本发明目的是提供一种中药组合物在制备促进一氧化氮生成药物中的应用；优选地，本发明提供了该中药组合物在制备减轻心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用。本发明应用所述中药组合物含全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫、蝉蜕五种虫类药，加上人参、冰片、赤芍等，具有补气、活血、化瘀、驱风、通络等功能，使经络气血得以运行，经脉得以濡养，寒气得以祛除，正气得以恢复，可以有效促进NO生成，减轻心肌缺血再灌注损伤。所述中药组合物由如下重量份的原料药制成人参3-10水蛭3-11土鳖虫5-10乳香(制)1_5赤芍3_9降香1-5檀香1-5全蝎3-9蝉蜕3-12蜈蚣1-3冰片1-7酸枣仁(炒)3-10；优选地，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参6水蛭10土鳖虫7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎7蝉蜕7蜈蚣1冰片5酸枣仁(炒)5；或人参10水蛭8土鳖虫7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎9蝉蜕7蜈蚣1冰片5酸枣仁(炒)5；或人参6水蛭11土鳖虫7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎3蝉蜕7蜈蚣1冰片5酸枣仁(炒)5；上述中药组合物的活性成分由下列成分组成a平均粒径小于100μm的全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫、蝉蜕及制乳香药粉；b冰片药粉；c由降香和檀香提取的挥发油；d人参用乙醇提取后的醇提液经浓缩后的醇提浸膏；e提取成分c后的降香和檀香药渣的水提液、赤芍和炒酸枣仁加水煎煮后的水提液以及提取成分d后的人参药渣的水提液过滤、混勻后浓缩成的水提浸膏。本发明中药组合物中，作为活性组分的原料药的拉丁名及其加工方法来自《中药大辞典》(1977年7月，第一版，上海科学技术出版社)和《中国药典》(2005年版，化学工业出版社)。本发明应用还公开了上述中药组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如填充齐IJ、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括甜味剂及各种香精；防腐剂包括尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括PEG6000，PEG4000，虫蜡等。本发明应用所述中药组合物的胶囊剂优选通过以下制备方法制成将上述配比的水蛭、全蝎、蝉蜕、土鳖虫、蜈蚣等五味药洗净，低温烘干，备用；檀香、降香提取挥发油，药渣及水溶液备用；人参用70%乙醇加热回流提取二次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味；人参药渣与檀香、降香的药渣以水溶液合并，加入赤芍、酸枣仁(炒)，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20-1.25(60°C)的清膏，加入上述人参醇提液，混勻，低温干燥，粉碎成细粉；乳香(制)与水蛭等五味共粉碎成细粉；冰片研细，分别与上述细粉配研，混勻，喷入挥发油，混勻，装入胶囊，即得。或者，本发明应用所述胶囊剂优选通过以下制备方法制成a)原料药的重量比为人参3-10份、水蛭3-11份、土鳖虫5-10份、制乳香1-5份、赤芍3-9份、降香1-5份、檀香1-5份、全蝎3-9份、蝉蜕3_12份、蜈蚣1_3份、冰片1_7份、炒酸枣仁3-10份；b)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上；粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于100μm；待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓缩和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加水煎煮，水提液过滤后，待浓缩成浸膏；人参用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回收乙醇后，浓缩成醇提浸膏，水提液过滤与所有的水提液混勻后浓缩成水提浸膏；d)制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤C)所得提取浸膏喷入制粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，混勻后由胶囊充填机充填，制成胶囊。或者，本发明应用所述胶囊剂优选通过以下制备方法制成a)原料药的重量比为人参3-10份、水蛭3-11份、土鳖虫5-10份、乳香(制)1-5份、赤芍3-9份、降香1-5份、檀香1-5份、全蝎3-9份、蝉蜕3_12份、蜈蚣1_3份、冰片1_7份、炒酸枣仁3-10份；b)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上；粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于100μm；待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓缩和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加水煎煮，水提液过滤后，待浓缩成浸膏；人参用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回收乙醇后，浓缩成醇提浸膏，水提液过滤与所有的水提液混勻后浓缩成水提浸膏，将浸膏直接喷雾干燥成喷雾粉；d)制剂工艺将超微粉碎粉与步骤C)所得喷雾干燥粉一起加到沸腾制粒干燥机中，再喷溶媒制成颗粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，混勻后由胶囊充填机充填，制成胶囊。本发明应用所述中药组合物的用量，折算成原料药材的重量，为每次0.8-3克，每日服用2-4次，优选为每次1.11-2.22克，每日服用三次。图1心肌缺血再灌注模型在不同时间点冠状动脉前降支(LAD)平均血流量中华小型猪分为假手术组(sham，η=7)，安慰剂对照(placebo，η=7)，本发明药物(tongxinluo,n=7)和本发明药物联合N-硝基-左旋-精氨酸(TXL+L_NNA，n=6)处理组。数据以均数士标准误表示。*表示与安慰剂组比较P<0.05，#表示与假手术组比较ρ<0.05。图2心肌缺血、无再流和梗死面积测量结果危险区面积(AAR)定义为缺血区心肌重量占左室重量的百分比；心肌梗死重量占危险区心肌重量的百分比为梗死区面积(IR)；心肌无再流区重量占危险区心肌重量的百分比为无再流区面积(NRR)。中华小型猪分为假手术组(sham,N=7)，安慰剂对照(placebo,N=7)，本发明药物(tongxinluo,N=7))和本发明药物联合N-硝基-左旋-精氨酸(tongxinluoplusL-ΝΝΑ,Ν=6)处理组。数据以均数士标准误表示。*P<0.05为有统计学差异。图3猪心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及β-肌动蛋白(β-actin)蛋白免疫印记检测图分别来自自本发明药物联合N-硝基-左旋-精氨酸(第1-3道)、本发明药物处理组(第4-6道)及安慰剂对照组(第7-9道)的无再流区(第1，4和7道)、再流区(第2，5和8道)及非缺血区(第3、6和9道)的心肌组织。每组3只动物，每只动物重复3次行蛋白免疫印迹检图4猪心肌组织血管内皮钙粘连素(VE-vadherin)及β-肌动蛋白(β-actin)蛋白免疫印记检测图分别来自自本发明药物联合N-硝基-左旋-精氨酸(第1-3道)、本发明药物处理组(第4-6道)及安慰剂对照组(第7-9道)的无再流区(第1、4和7道)、再流区(第2、5和8道)及非缺血区(第3、6和9道)的心肌组织。每组3只动物，每只动物重复3次蛋白免疫印迹检测。图5猪无再流区(NRR)，再流区(RR)及非缺血区(NON)心肌髓过氧化物酶(MPO)活性中华小型猪分为假手术组(sham，n=7)，安慰剂对照(placebos=7)，本发明药物(tongxinluo,η=7))和本发明药物联合N-硝基-左旋-精氨酸(tongxinluoplusL-NNA,η=6)。数据以均数士标准误表示。*表示ρ<0.05。具体实施例方式实施例1a)原料药配方为人参39.6g水蛭72.6g土鳖虫46.2g乳香(制)13.2g赤芍33g降香13.2g檀香13.2g全蝎19.8g蝉蜕46.2g蜈蚣6.6g冰片33g酸枣仁(炒)33g；b)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上；粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于30-40μm；待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓缩和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加适量水煎煮二次，每次3小时，合并水提液，过滤后，待浓缩成浸膏；人参用适量70%的乙醇提取二次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，再用水提取，醇提液浓缩成60°C测定相对密度为0.91.1醇提浸膏，水提液过滤与上述所有水提液混勻后浓缩至60°C测定相对密度为0.91.1的清膏，备用；d)制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤C)所得提取浸膏喷入制粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，混勻后由胶囊充填机充填，制成1000粒胶囊。本发明药物的用量，为每次2-4粒，每日服用三次。实施例2a)原料药配方为人参66g水蛭52.8g土鳖虫46.2g乳香(制)13.2g赤芍33g降香13.2g檀香13.2g全蝎59.4g蝉蜕46.2g蜈蚣6.6g冰片33g酸枣仁(炒)33gb)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上；粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于70-90μm；待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓缩和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加适量水煎煮二次，每次3小时，合并水提液，过滤后，待浓缩成浸膏；人参用适量70%的乙醇提取二次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，再用水提取，醇提液浓缩成相对密度在60°C测定为1.01.05醇提浸膏，水提液过滤与上述所有水提液混勻后浓缩至60°C测定相对密度为1.01.1的清膏，备用；d)制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤C)所得提取浸膏喷入制粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，按常规制剂工艺压制成1000片。本发明药物的用量，为每次2-4片，每日服用三次。实施例3丸剂的制备a)原料药配方为人参39.6g水蛭66g土鳖虫46.2g乳香(制)13.2g赤芍33g降香13.2g檀香13.2g全蝎46.2g蝉蜕46.2g蜈蚣6.6g冰片33g酸枣仁(炒)33gb)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上；粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径10-20μm；待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓缩和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加适量水煎煮二次，每次3小时，合并水提液，过滤后，待浓缩成浸膏；人参用适量70%的乙醇提取二次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，再用水提取，醇提液浓缩成60°C测定相对密度为0.91.0醇提浸膏，水提液过滤与上述所有水提液混勻后浓缩至60°C测定相对密度为1.01.1的清膏，备用；d)制剂工艺按常规制剂工艺，制成1000粒丸剂。本发明药物的用量，为每次2-4粒，每日服用三次。实验例为阐明本发明中药组合物促进一氧化氮生成，减轻心肌缺血再灌注损伤的应用，用按上述实施例1方法制得的胶囊剂(以下称本发明药物)进行了下列试验以证明其疗效，但其不能对本发明的范围构成任何限制。1材料与方法1.1实验分组选用中华小型猪28只(购于北京农业大学)，雌雄不限，体重25士5公斤，随机分成假手术组、安慰剂组、本发明药物组和本发明药物联合一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-左旋精氨酸(L-NNA)处理组，每组7只。1.2试剂及仪器硫磺素S、伊文思蓝购自美国Sigma公司；红四氮唑购自北京马氏化学品有限公司；MPO试剂盒为南京建成生物工程研究所产品；兔抗人N0S3、β-actin多克隆抗体、羊抗人VE-cadherin多克隆抗体均购自美国SantaCruze公司；鼠抗兔、鼠抗羊二抗购自中山金桥生物公司；超声血流量仪及1.5mm探头由TransonicSystems公司生产；西门子900c呼吸机；美国BiopacSystemMP-150多导生理记录仪。1.3药物及用法本发明药物(由石家庄以岭药业股份有限公司生产)。本发明药物0.4g/kg与30ml饮用水混合在冠脉结扎前3小时经胃管注入；10mg/kg的L-NNA溶于200ml生理盐水中，在冠脉结扎前50分钟以7ml/min由股静脉注入。安慰剂组在冠脉结扎前3小时经胃管注入30ml饮用水。1.4实验方法氯胺酮与安定混合制剂(703)730mg肌肉内注射诱导麻醉，然后以2mg/kg/h速度持续静脉点滴。所有动物均经口行气管插管，呼吸机控制通气，沿胸骨正中打开胸腔，纵行切开心包膜，暴露心脏，并将心包膜缝合于胸壁呈吊篮状。在冠状动脉左前降支(LAD)近端1/3处游离并穿线，沿结扎线穿入一长约34cm的硅胶管腔内结扎1.5h，再松解3h建立急性心梗及再灌注模型。假手术组冠脉下只穿线，不结扎，无急性心梗，也无再灌注。术中监测体表心电图、股动脉内血压。在冠脉结扎前、松解即刻、再灌注180分钟测量心室内压。在冠脉结扎前、再灌注5、30、60、120、180分钟时测量LAD平均血流量。所有数据均显示在多导生理记录仪并用3.8.1版Acqknowledge软件分析。1.5无再流面积的判定及取材方法本研究参照既往实验方法，在实验结束时，从左心房、室同时注入lml/kg的4%的荧光染料硫磺素S，它随血流到达的区域在365nm波长荧光灯下显荧光，为再流区；无再流区不显荧光；再于原位重新结扎LAD，从左心房再注入lml/kg的2%伊文思蓝染料，伊文思蓝不能随血流到达缺血区，所以缺血区不着蓝色；非缺血区着蓝色。处死动物后立即取出心脏，剪除左右心耳及右心室，于冰生理盐水中荡洗去除残余血液；从心尖向心底方向，平行于房室沟按顺序将左室切成6-7片，分别称取重量并拍照。留取正常区、再流区和无再流区部分心肌保存于液氮中。将各片心肌放入37°C红四氮唑磷酸盐缓冲液中15分钟并拍照，白色的区域为坏死区心肌。使用LECA-QWIN软件，用面积求积法分别测算缺血危险区占左室重量百分比表示为危险区面积(AAR)，梗死区、无再流区占缺血区重量百分比分别则表示为梗死区面积(IR)和无再流区面积(NRR)。1.6心肌组织髓过氧化物酶(MPO)活性测定从液氮中取出心肌组织约lOOmg，用硬塑料包裹砸碎，余下具体操作按试剂盒说明书进行。蒸馏水调零，在460nm处使用分光光度计测OD值。以每克组织在37°C的反应体系中分解Iumol的H2O2为1个酶活力单位。1.7免疫印迹法测蛋白含量从液氮中取心肌组织约lOOmg，与Iml的冰RIPA裂解液及Immol苯甲基磺酰氟化物(PMSF)混合，在超声粉碎机下粉碎，离心提取上清，用BCA法测定总蛋白浓度。采用十二烷基硫酸钠一变性聚丙烯酰胺凝胶不连续缓冲系统，先后配8%的分离胶和5%的浓缩胶；取蛋白样品，上样25ul(约含蛋白60ug)，先后以80和120V电泳，约IOOmin后，在转移缓冲液中进行电转移至醋酸纤维素膜上’放入5%脱脂奶粉封闭液中室温封闭60min；放入一抗中(1500稀释)4°C过夜；再放入二抗(12000稀释)常温孵育Ih;用ECL超敏发光液显影并在胶片上曝光。1.8统计学分析所有变量以均数士标准误表示，多组间比较用非参Kruskal-Wallis检验，有意义后行Durmett单因素方差分析比较组间差异。用重复检验比较血流动力学指标。以P<0.05有统计学意义。用SPSS13.O软件进行统计学分析。2结果2.1动物死亡情况本发明药物联合L-NNA处理组有一只猪在心肌缺血过程中反复出现室速、室颤，因抢救失败而剔除。2.2血流动力学结果在缺血前、再灌注后不同时间点测定的心率血压乘积(RPP)、心室内压力变化率峰值(+dp/dt)、左室舒张末压(LVDEP)和前降支冠脉平均血流量(CBF)，具体见表1。表1血流动力学指标(均数士标准误)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注RPP，心率血压；CBF，前降支平均血流量；LVEDP，左室舒张末压；+dp/dt，左心室内压力变化率峰值；Sham,假手术组；Placebo，安慰剂对照组；TXL，本发明药物处理组；TXL+L-NNA，本发明药物联合一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-左旋精氨酸处理组在缺血前，反映心肌氧耗量程度的指标RPP在本发明药物联合L-NNA处理组明显高于假手术、安慰剂、和本发明药物组(P<0.05)。但在再灌注期间，各组间RPP无明显差异；以+dp/dt和LVDEP表示的心室功能在再灌注期间明显下降(P<0.05)。但在再灌注期间各时间点，三个缺血再灌注组间比较无统计学差异；在缺血前，冠脉血流量在各组间无差异；再灌注5分钟后缺血再灌注处理组冠脉血流量增加，随后逐渐减少；与假手术和本发明药物处理组比较，再灌注120分钟和180分钟时安慰剂组和本发明药物联合L-NNA处理组冠脉血流量明显减少(P<0.05)，如图1所示。2.3心肌缺血、无再流和梗死面积测量结果安慰剂组、本发明药物组和本发明药物联合L-NNA处理组AAR分别是31士3%，32士4%和28士3%，各组间无明显差异。与安慰剂组(90士3%，70士4%)和本发明药物联合L-NNA处理组(95士2%，63士3%)比较，本发明药物处理组(78士3%，47士5%)明显减少了IR,NRR(P<0.05)，如图2所示。2.4蛋白免疫迹记法测定无再流区、再流区和非缺血区心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和血管内皮钙粘连素(VE-vadherin)含量各组无再流区心肌组织eNOS含量明显少于再流区和非缺血区，但各缺血再灌注组间比较无明显区别，如图3所示；无再流区VE-cadherin含量也较再流区、非缺血区明显减少；与安慰剂组和本发明药物联合L-NNA处理组比较，本发明药物处理明显增加了无再流区VE-cadherin的含量，如图4所示。2.5心肌MPO活性测定结果安慰剂、本发明药物和本发明药物联合L-NNA处理组非缺血区心肌的MPO活性与假手术组比较无差异。而无再流区MPO活性大于再流区(P<0.05)，再流区MPO活性大于非缺血区(P<0.05)。与安慰剂和本发明药物联合L-NNA处理组比较，本发明药物处理明显减少了无再流区和再流区MPO活性(P<0.05)，如图5所示。3结论实验结果显示本发明药物联合L-NNA处理组在缺血前RPP明显升高，提示L-NNA处理有可能在心肌缺血期间增加了心肌的氧耗，但既往研究证实单独应用L-NNA尽管会增加RPP，却不会对梗死面积和心肌局部血流产生影响，基于此认为在此实验中，L-NNA药物处理本身没有增加心肌缺血再灌注损伤，而是取消了本发明药物的心肌保护作用，表明本发明药物的心肌保护作用与NO生成有关。心肌缺血后测定MPO活性可以定量反映中性粒细胞在心肌组织浸润的程度。实验结果显示无再流区MPO活性高于再流区及非缺血区，这与用电镜、免疫组化等方法观察得出的结果相符。与安慰剂组比较，本发明药物处理组明显减少了再流区和无再流区MPO活性，提示本发明药物预处理减少了中性粒细胞在组织浸润的程度。已有研究显示用缺少白细胞的灌流液灌注缺血心肌可以减少无再流面积，缺血再灌注后，NO可以通过调节细胞粘附分子的生成而减少粒细胞的滚动、与内皮细胞的粘附。以上实验显示L-NNA与本发明药物联合处理组再流区和无再流区MPO活性明显增加，表明本发明药物是通过改变NO的生成而减少中性粒细胞在组织中的浸润。VE-cadherin是内皮细胞特异的一种粘附蛋白，对维持血管内皮结构完整性具有重用的作用。粘附连接蛋白功能异常是导致心肌间质水肿及炎性细胞浸润的重要原因。VE-cadherin对蛋白水解酶非常敏感，尤其是心肌缺血再灌注后炎性细胞激活释放的蛋白水解酶，可以直接导致VE-cadherin降解。以上研究显示心肌缺血再灌注后无再流区心肌VE-cadherin明显减少，这与既往的研究结果一致。本发明药物预处理明显增加无再流区VE-cadherin含量，而与L-NNA联用后VE-cadherin含量降低，表明本发明药物增加VE-cadherin含量与NO生成有关。综上所述，本发明药物可以明显减少心肌缺血再灌注损伤，减少中性粒细胞在缺血区的浸润，增加无再流区VE-cadherin含量，而NOS竞争型抑制剂L-NNA则完全取消了本发明药物的这些心肌保护作用。表明本发明药物可以增加血浆一氧化氮的浓度，有效减轻心肌缺血再灌注损伤。权利要求一种中药组合物在制备促进一氧化氮生成药物中的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参3-10水蛭3-11土鳖虫5-10乳香(制)1-5赤芍3-9降香1-5檀香1-5全蝎3-9蝉蜕3-12蜈蚣1-3冰片1-7酸枣仁(炒)3-10。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参6水蛭10土鳖虫7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎7蝉蜕7蜈蚣1冰片5酸枣仁(炒)5。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参10水蛭8土鳖虫7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎9蝉蜕7蜈蚣1冰片5酸枣仁(炒)5。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参6水蛭11土鳖虫7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎3蝉蜕7蜈蚣1冰片5酸枣仁(炒)5。5.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分由下列成分组成a平均粒径小于100um的全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫、蝉蜕及乳香(制)药粉；b冰片药粉；c由降香和檀香提取的挥发油；d人参用乙醇提取后的醇提液经浓缩后的醇提浸膏；e提取成分c后的降香和檀香药渣的水提液、赤芍和酸枣仁(炒)加水煎煮后的水提液以及提取成分d后的人参药渣的水提液过滤、混勻后浓缩成的水提浸膏。6.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，该中药组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述胶囊剂是由以下步骤制成的a)按照重量份比例称取各原料药；b)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上；粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于100um；待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓缩和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加水煎煮，水提液过滤后，待浓缩成浸膏；人参用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回收乙醇后，浓缩成醇提浸膏，水提液过滤与所有的水提液混勻后浓缩成水提浸膏；d)制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤c)所得提取浸膏喷入制粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，混勻后由胶囊充填机充填，制成胶囊。8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述胶囊剂是由以下步骤制成的a)按照重量份比例称取各原料药；b)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上；粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于100um；待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓缩和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加水煎煮，水提液过滤后，待浓缩成浸膏；人参用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回收乙醇后，浓缩成醇提浸膏，水提液过滤与所有的水提液混勻后浓缩成水提浸膏，将浸膏直接喷雾干燥成喷雾粉；d)制剂工艺将超微粉碎粉与步骤c)所得喷雾干燥粉一起加到沸腾制粒干燥机中，再喷溶媒制成颗粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，混勻后由胶囊充填机充填，制成胶囊。9.根据权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物在制备减轻心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种中药组合物在制备促进一氧化氮生成药物中的应用。本发明中药组合物由人参、水蛭、蜈蚣、全蝎、土鳖虫、蝉蜕、赤芍、冰片等组成，具有益气活血、化瘀通络的功效。通过试验证明本发明中药组合物可以增加血浆一氧化氮的浓度，减轻心肌缺血再灌注损伤。文档编号A61P9/10GK101829203SQ20091007390公开日2010年9月15日申请日期2009年3月11日优先权日2009年3月11日发明者杨跃进,程宇彤申请人:河北以岭医药研究院有限公司