专利名称：黑芥子甙提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及植物中活性成分的制备方法，具体涉及黑芥子甙提取物的制备方法。
背景技术：
早在19世纪80年代，国际委员会建议多吃十字花科蔬菜，因为十字花科蔬菜可以 预防癌症。我国十字花科植物品种主要有花椰菜、西兰花、甘蓝、萝卜、芥菜。在十字花科 植物中芸苔属是主要的食用蔬菜，芸苔属植物包括西兰花、花椰菜、芜箐、焦青甘蓝、羽衣甘 蓝、芥菜等。流行病学数据已表明，富含十字花科蔬菜的饮食，如西兰花、花椰菜、甘蓝等能 减小许多癌症的发病率。目前一致认为，十字花科植物的重要抗癌活性成分前体是硫代葡 萄糖苷(Glucosinolates)。在天然植物中已发现120多种不同的硫代葡萄糖苷，它们存在 于11个不同种属的双子叶被子植物中，最重要的是十字花科，所有的十字花科植物都能够 合成硫代葡萄糖苷。硫代葡萄糖苷存在于这些植物的根、茎、叶和种子中，但主要存在于种 子中。硫代葡萄糖苷在一些十字花科植物中的含量大约占干重的1%，在一些植物种子中 的含量达到10%。但是，硫代葡萄糖苷在植物中的含量变化很大，不同品种、不同生长环境 以及同一植株的不同生长阶段、同一植株的不同部位含量都存在差别，如Glucorapha-nine 在西兰花嫩芽中的含量是成熟植株或花的10 100倍。所有硫代葡萄糖苷都由一个含糖基团、硫酸盐基团和可变的非糖侧链(R)组成。 基于R基团的不同，硫代葡萄糖苷可以分为3类脂肪族硫代葡萄糖苷、芳香族硫代葡萄糖 苷和吲哚硫代葡萄糖苷。黑芥子甙(Sinigrin)是其中脂肪族硫代葡萄糖苷中研究得较多 的一种，黑芥子甙的R基团是烯丙基，因此黑芥子甙也叫烯丙基硫代葡萄糖苷。现有很多 报道都是从十字花科植物中提取硫代葡萄糖苷的方法，如涂宗财等发表的《芥菜中硫代葡 萄糖苷提取工艺条件的优化》(食品与生物技术学报，2007年11月，第沈卷第6期，9 12页)一文中，通过单因素和正交试验得到最佳的从芥菜中提取硫代葡萄糖苷的工艺条件 为体积浓度80%的乙醇提取2次，每次提取20分钟，提取温度80°C，原料料液比为(g/ mL)l 7，粒度大小为20目，芥菜中硫代葡萄糖苷的提取量为22. 146 μ mol/g。目前还未见 有从十字花科植物中提取制备黑芥子甙提取物的相关报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种工艺简单、易操作，提取率高的黑芥子甙提 取物的制备方法。本发明所述的黑芥子甙提取物的制备方法，包括以下步骤1)取原料，粉碎，乙醇煮沸保温提取，提取液离心，收集上清液；其中，所述原料为 十字花科芸苔属植物芥菜、甘蓝或西兰花；优选选用芥菜种子、甘蓝种子或西兰花花蕾或嫩 芽；2)向上清液中加入乙醇，调节其中乙醇浓度为80 85% (质量)，放置1 1.5 小时，离心，收集二次离心液；3
3) 二次离心液浓缩至无醇味，所得浓缩离心液过0. 5 μ m的陶瓷膜，透过液浓缩至 原料重量的2 3倍，得浓缩透过液；4)浓缩透过液进大孔树脂柱，收集流出液，用2 3倍树脂重量的水洗脱，收集洗 脱液，合并流出液和洗脱液，浓缩，冷冻干燥，即得黑芥子甙提取物。上述提取方法的步骤1)中，提取用乙醇的体积浓度为60 80%，提取次数为1 2次，每次1 2小时；当原料为新鲜原料时，提取时的料液比为1 2 3(W/V，即1克的 原料用2 3毫升的提取液提取)，当原料为干燥原料时，提取时的料液比为1 7 10 (W/ V,即1克的原料用7 10毫升的提取液提取)。步骤2、中，可将上清液浓缩至原料重量的0. 5 3倍后再调节其中的乙醇浓度。步骤4)中，大孔树脂的型号为D101、DM130、DM132、DM312或DM2。与现有技术相比，本发明提供了一种从十字花科芸苔属植物芥菜、甘蓝或西兰花 中提取制备黑芥子甙提取物的方法，该方法通过对原料进行高醇提取、对提取液离心分离 后的上清液进行醇沉以及陶瓷膜过滤，有效去除其中中的大分子蛋白质及多糖，再经大孔 树脂柱分离得到黑芥子甙提取物。该方法工艺简单、易操作，得到的产品中黑芥子甙含量可 达20 40%，避免了黑芥子甙的氧化，黑芥子甙的提取率为80%以上。
具体实施例方式实施例1黑芥子甙提取物的制备方法，包括以下步骤1)取干燥的芥菜种子，粉碎，用相当于原料重量8倍、60% (ν/ν)的乙醇水溶液煮 沸保温提取2小时，过滤，残渣再用相当于原料重量10倍、60% (ν/ν)的乙醇水溶液提取1 小时，过滤，合并提取液，离心，收集上清液；2)向上清液中加入无水乙醇，直至该混合液中乙醇浓度为80% (质量)，放置1小 时，离心，收集二次离心液；3) 二次离心液浓缩至无醇味，所得浓缩离心液过0. 5 μ m的陶瓷膜，透过液浓缩至 原料重量的2倍，得浓缩透过液；4)浓缩透过液进DlOl型大孔树脂柱，收集流出液，用相当于2倍树脂重量的蒸馏 水洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，并浓缩至60白利糖度，用常规冷冻干燥工艺进 行干燥，即得黑芥子甙提取物。用HPLC测定，上述提取物中黑芥子甙的含量为40%，提取率为91%。实施例2黑芥子甙提取物的制备方法，包括以下步骤1)取干燥的甘蓝种子，粉碎，用相当于原料重量10倍、80% (ν/ν)的乙醇水溶液煮 沸保温提取2小时，过滤，提取液浓缩至原料重量的4倍，离心，收集上清液；2)将上清液浓缩至原料重量的0. 5倍，向其中加入95% (ν/ν)的乙醇水溶液，直 至该混合液中乙醇浓度为85% (质量)，放置1小时，离心，收集二次离心液；3) 二次离心液浓缩至无醇味，所得浓缩离心液过0. 5 μ m的陶瓷膜，透过液浓缩至 原料重量的3倍，得浓缩透过液；4)浓缩透过液进DM130型大孔树脂柱，收集流出液，用相当于2倍树脂重量的蒸馏 水洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，并浓缩至60白利糖度，用常规冷冻干燥工艺进 行干燥，即得黑芥子甙提取物。
用HPLC测定，上述提取物中黑芥子甙的含量为35%，提取率为85%。实施例3黑芥子甙提取物的制备方法，包括以下步骤1)取新鲜的芥菜的茎叶，粉碎至20 30目，用相当于原料重量3倍、70% (ν/ν) 的乙醇水溶液煮沸保温提取2小时，过滤，残渣再用相当于原料重量2倍、80% (ν/ν)的乙 醇水溶液提取2小时，过滤，合并提取液，提取液浓缩至原料重量的4倍，取出放冷后离心， 收集上清液；2)将上清液浓缩至原料重量的1.5倍，再向其中加90% (ν/ν)的乙醇水溶液，直 至该混合液中乙醇浓度为82% (质量)，放置1. 5小时，离心，收集二次离心液；3) 二次离心液浓缩至无醇味，所得浓缩离心液过0. 5 μ m的陶瓷膜，透过液浓缩至 原料重量的3倍，得浓缩透过液；4)浓缩透过液进DM312型大孔树脂柱，收集流出液，用相当于2倍树脂重量的蒸馏 水洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，并浓缩至60白利糖度，用常规冷冻干燥工艺进 行干燥，即得黑芥子甙提取物。用HPLC测定，上述提取物中黑芥子甙的含量为30%，提取率为88%。实施例4黑芥子甙提取物的制备方法，包括以下步骤1)取新鲜的西兰花嫩芽，粉碎至20 30目，用相当于原料重量2倍、75% (ν/ν) 的乙醇水溶液煮沸保温提取1小时，过滤，残渣再用相当于原料重量2倍、60% (ν/ν)的乙 醇水溶液提取1. 5小时，过滤，合并提取液，提取液浓缩至原料重量的5倍，取出放冷后离 心，收集上清液；2)将上清液浓缩至原料重量的2. 5倍，再向其中加95% (ν/ν)的乙醇水溶液，直 至该混合液中乙醇浓度为80% (质量)，放置1. 3小时，离心，收集二次离心液；3) 二次离心液浓缩至无醇味，所得浓缩离心液过0. 5 μ m的陶瓷膜，透过液浓缩至 原料重量的2倍，得浓缩透过液；4)浓缩透过液进DM2型大孔树脂柱，收集流出液，用相当于3倍树脂重量的蒸馏水 洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，并浓缩至60白利糖度，用常规冷冻干燥工艺进行 干燥，即得黑芥子甙提取物。用HPLC测定，上述提取物中黑芥子甙的含量为35%，提取率为82%。
权利要求
1.黑芥子甙提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)取原料，粉碎，乙醇煮沸保温提取，提取液离心，收集上清液；其中，所述原料为十字 花科芸苔属植物芥菜、甘蓝或西兰花；2)向上清液中加入乙醇，调节其中乙醇浓度为80 85%(质量)，放置1 1.5小时， 离心，收集二次离心液；3)二次离心液浓缩至无醇味，所得浓缩离心液过0. 5 μ m的陶瓷膜，透过液浓缩至原料 重量的2 3倍，得浓缩透过液；4)浓缩透过液进大孔树脂柱，收集流出液，用2 3倍树脂重量的水洗脱，收集洗脱液， 合并流出液和洗脱液，浓缩，冷冻干燥，即得黑芥子甙提取物。
2.根据权利要求1所述的黑芥子甙提取物的制备方法，其特征在于步骤1)中，提取 用乙醇的体积浓度为60 80%，提取次数为1 2次，每次1 2小时；当原料为新鲜原料 时，提取时的料液比为1 2 3(W/V)，当原料为干燥原料时，提取时的料液比为1 7 10(W/V)。
3.根据权利要求1或2所述的黑芥子甙提取物的制备方法，其特征在于步骤4)中， 大孔树脂的型号为D101、DM130、DM132、DM312或DM2。
全文摘要
本发明公开了一种黑芥子甙提取物的制备方法，它包括以下步骤1)以十字花科芸苔属植物芥菜、甘蓝或西兰花为原料用乙酸提取，提取液离心，得上清液；2)向上清液中加入乙醇，调节其中乙醇浓度为80～85％，放置1～1.5小时，离心，收集二次离心液；3)二次离心液浓缩至无醇味，所得浓缩离心液过0.5μm的陶瓷膜，透过液浓缩至原料重量的2～3倍，得浓缩透过液；4)浓缩透过液进大孔树脂柱，收集流出液，用2～3倍树脂重量的水洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，浓缩，冷冻干燥，即得黑芥子甙提取物。该方法工艺简单、易操作，得到的产品中黑芥子甙含量可达20～40％，黑芥子甙的提取率达80％以上。
文档编号A61P35/00GK102048791SQ20091011451
公开日2011年5月11日 申请日期2009年11月1日 优先权日2009年11月1日
发明者孙步祥, 宋云飞, 梁远盛, 汤凌志, 赵军 申请人:桂林莱茵生物科技股份有限公司