专利名称：一种dsRNA与黄芪多糖的药物组合及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种应用于养殖动物病毒性感染防治的药物组合，尤其涉及该组合用
药物的制备及稳定性控制方法。
背景技术：
病毒性感染是引起养殖动物死亡、影响动物养殖经济效益的重要因素，随着国家 兽药质量标准的规范，取消了大批原地方标准的抗病毒药物，可选用的抗病毒药物的短缺 与兽医临床的需求矛盾日益突出。 1967年，美国Merck药厂的Field等人发现了酶促合成的双链核酸(double strained RNA，dsRNA)具有诱生干扰素的能力，其中聚肌胞(Polyinosinic-polycytidylic Acid，PIC)的诱生能力最强，它可以剌激机体产生广谱的内源干扰素，进而激活蛋白激酶和 2'，5'-寡聚腺苷酸合成酶、1^蛋白等抗病毒因子，以降解进入细胞的病毒，达到抑制、治疗 病毒性感染的目的。 PIC由寡聚肌苷酸与寡聚胞苷酸在合适的条件下按碱基配对的原则聚合而成。研
究表明，PIC分子量的大小、双链的紧密程度及其稳定性是决定其诱导干扰素活性高低的重
要影响因素。目前，国内虽然有寡聚肌苷酸及寡聚胞苷酸原料的生产，但尚缺乏对双链配对
的合适条件、稳定性影响因素等的系统研究，也未见到其与其他活性物质配伍方面的报道。 聚肌胞与黄芪多糖的药物配伍比单独聚肌胞与黄芪多糖的作用更显注，聚肌胞能
够诱导机体产生内源性干扰素，从而抑制病毒的增殖，通过非特异性免疫体系建立起抗病
毒状态；黄芪多糖通过提高动物的特异性免疫力而增强动物的抗病毒能力，两种药物通过
组合后，药效相互协同，既能够诱导机体内源性干扰素产生，又能够诱导机体的细胞免疫应
答从而更好的抵抗病毒的侵袭。
发明内容
本发明的目的是提供一种dsRNA与黄芪多糖的药物组合及应用，它能提供合成 PIC的适宜工艺参数；提供PIC与黄芪多糖组合的工艺技术；还公开了 dsNRA(PIC)与黄芪 多糖的药物组合在动物病毒性感染控制的应用。采用将聚肌胞、黄芪多糖添加适当的药用 辅料按一定工艺制成复方制剂，这些组分之间具有一定的促效与增效作用，具有能够诱导 动物机体产生干扰素，增强机体免疫力，具有抗病毒作用的合成核酸类化学药品与中药提 取物的组合用药物，以及本组合药品稳定性控制方法和在家禽，家畜和水产动物上的应用。
为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用以下技术方案它是由黄芪多糖 和dsRNA按一定比例组合而成，黄芪多糖含量范围20-50mg/ml ;dsRNA (聚肌胞甘酸)含量 范围l-5mg/ml，分子量范围200-500bp(琼脂糖凝胶电泳法)。黄芪多糖和dsRNA的主要 成分按水针剂生产工艺，经配液、过滤、灌封、灭菌、检验合格后即得到本药物组合。注射用
水中加一定量的聚肌苷酸在20°C -e(rc条件下溶解，然后加入等摩尔的聚胞苷酸溶解，保
温配对15-50分钟，加入合适量的黄芪多糖，混合均匀，过滤、灌封、灭菌。
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所述的聚肌胞的合成与药物组合是500ml注射用水中依次加入焦亚硫酸钠0. 3g、 氯化钠O. 6g以及适量的磷酸二氢钠与磷酸氢二钠等，加热至20-6(TC，进一步优选为 30-5(TC之间的某一特定温度，加入500mg-2500mg聚胞苷酸搅拌使溶解，保温10分钟，然后 加入500mg-2500mg聚肌苷酸搅拌使溶解，保温配对15-50分钟。上述溶液中加入黄芪多糖 20-50g，充分搅拌混匀，用注射用水定容至lOOOml，O. 45um微孔滤膜法过滤，灌封，IO(TC流 通蒸汽灭菌30分钟，灯检、贴标即得。 所述的聚肌胞为由聚肌苷酸和聚胞苷酸在一定条件下聚合而成的聚合物，为增加 其抗病毒作用和减少其毒性作用要求本聚合产物分子大小为200-500bp，增色效应不得小 于55%。 本发明是通过注射、口服或者药浴等途径，诱导动物机体内源性干扰素水平的升 高以及诱导机体细胞免疫机制，建立起抗病毒状态，从而有效预防和防治病毒性感染的发 生和传播。鉴于药物剂型的多样性，本发明药物组合选用恰当的药用辅料，可将药物制成水 针剂和口服液。 本发明具有以下有益效果适用于提高畜、禽和水产类动物的免疫力，增强对病毒 病的预防与治疗。
图1是本发明dsRNA与黄芪多糖的药物组合对新城疫感染的保护作用示意图；
图2是本发明dsRNA与黄芪多糖的药物组合对猪瘟病毒感染的保护作用示意图；
图3是本发明dsRNA与黄芪多糖的药物组合对虹鳟病毒感染的保护作用示意图。
具体实施例方式
具体实施方式
一 本具体实施方式
采用以下技术方案它是由黄芪多糖和dsRNA 按一定比例组合而成，黄芪多糖含量范围20-50mg/ml ;dsRNA(聚肌胞甘酸)含量范围 l-5mg/ml，分子量范围200-500bp (琼脂糖凝胶电泳法)。黄芪多糖和dsRNA的主要成分按 水针剂生产工艺，经配液、过滤、灌封、灭菌、检验合格后即得到本药物组合。注射用水中加
一定量的聚肌苷酸在20°C -e(rc条件下溶解，然后加入等摩尔的聚胞苷酸溶解，保温配对
20-50分钟，加入合适量的黄芪多糖，混合均匀，过滤、灌封、灭菌。 所述的聚肌胞的合成与药物组合是500ml注射用水中依次加入焦亚硫酸钠0. 3g、 氯化钠O. 6g以及适量的磷酸二氢钠与磷酸氢二钠等，加热至20-6(TC，进一步优选为 30-5(TC之间的某一特定温度，加入500mg聚胞苷酸搅拌使溶解，保温10分钟，然后加入 500mg聚肌苷酸搅拌使溶解，保温配对15-50分钟。上述溶液中加入黄芪多糖20_50g，充分 搅拌混匀，用注射用水定容至lOOOml，O. 45um微孔滤膜法过滤，灌封，IO(TC流通蒸汽灭菌 30分钟，灯检、贴标即得。 所述的聚肌胞为由聚肌苷酸和聚胞苷酸在一定条件下聚合而成的聚合物，为增 加其抗病毒作用和减少其毒性作用要求本聚合产物分子大小为4-16s，增色效应不得小于 55%。 本发明是通过注射、口服或者药浴等途径，诱导动物机体内源性干扰素水平的升 高以及诱导机体细胞免疫机制，建立起抗病毒状态，从而有效预防和防治病毒性感染的发
4生和传播。 本具体实施方式
适用于提高畜、禽和水产类动物的免疫力，增强对病毒病的预防 与治疗。
具体实施方式
二 将该药物组合用注射用水稀释至含聚肌胞50 ii g/ml 。将160只 试验用雏鸡随机分为4个试验组，每组40只。I组空白对照组(生理盐水组)；II组黄 芪多糖药物对照组(黄芪多糖注射液，按每千克体重20mg) ;III组聚肌胞药物对照组(聚
肌胞注射液，按每千克体重0.05mg)IV组药物组合试验组(每千克体重lml);将以上雏鸡
隔离笼养，空白对照组与阳性对照组和用药试验组在不同鸡舍饲养，饲养条件保持一致。饲
养至10d，各组进行新城疫疫苗免疫。免疫后21d，将各组按照分组计划进行药物处理，12h
后将进行攻毒(攻毒100个单位LD5。的ND强毒)，攻毒后24h将各组再按照分组计划注射
与首次注射剂量相同的药物观察，进行观察，持续到新城疫潜伏期结束。 实验结果见图1。表明dsRNA与黄芪多糖对家禽病毒感染用，而两者的的药物组合
相对与两者单独用药对家禽(鸡)病毒病的自然感染发病有明显的保护率和高的治愈率，
能够增强疫苗的保护作用，抑制病毒在家禽体内的增殖。 由图1可见，在疫苗免疫的基础上再给予一定量的该组合药物，对免疫失败或免 疫抑制的鸡群能起到一定的保护作用，保护效果较好。
具体实施方式
三将该药物组合用注射用水稀释至含聚肌胞50ii g/ml。将40头试 验用仔猪随机均分为4个试验组进行试验，每组10头。分组及试验方法如下1组空白对 照组(生理盐水组)；II组黄芪多糖药物对照组(黄芪多糖注射液，按每千克体重20mg); III组聚肌胞药物对照组(聚肌胞注射液，按每千克体重0. 05mg) IV组药物组合试验组 (每千克体重lml);将断奶仔猪按以上实验分组隔离饲养，饲养条件保持一致。饲养1周 后，各组分别进行猪瘟疫苗(免疫剂量为常规免疫剂量)免疫。免疫21天，将各组按照分 组计划进行药物处理，12小时后进行攻毒(攻毒剂量为100LD5。猪瘟强病毒)，攻毒后24小 时给药组再次注射与首次注射剂量相同的药液。试验过程中，每日观察2次，试验观察持续 到猪瘟潜伏期结束。 实验结果见图2。表明dsRNA与黄芪多糖的药物组合比单独的聚肌胞注射液和单 独的黄芪多糖注射液有更好的效果，对猪病毒病的感染发病有明显的保护率和较高的治愈 率，能够抑制病毒在家畜体内的增殖。能够降低家畜的死亡率。 由图2表明，dsRNA与黄芪多糖的药物组合对猪瘟病毒感染具有更好的保护作用， 尤其对免疫失败的猪感染病毒病能起到一定的保护作用。
具体实施方式
四将120条试验用虹鳟稚鱼随机均分为4个试验组进行试验，每组 30条。I组空白对照组(生理盐水组)；II组黄芪多糖药物对照组(黄芪多糖注射液， 按推荐剂量给药)；III组聚肌胞药物对照组(聚肌胞注射液，按每千克体重0.05mg) ;IV 组药物组合试验组(每千克体重lml (以聚肌胞计为0. 05mg/kg))，各组以腹腔注射的方 式给药。 将虹鳟稚鱼按以上实验分组隔离饲养，饲养条件保持一致。饲养一周后，各组按计 划分组给药，12小时后各组注射1000TCID5。的传染性胰脏坏死症病毒，攻毒后24小时后， 按各组方案再次注射与首次注射剂量相同的药液，观察结果。 该实验结果见图3。表明dsRNA与黄芪多糖的 物组合比单独使用聚肌胞注射液和单独使用黄芪多糖注射液在抑制水产鱼类病毒病增殖方面更有效。从而达到对水产鱼类 病毒病感染的治疗与预防作用。 由图3表明dsRNA与黄芪多糖的药物组合对鱼类病毒感染具有较高的保护作用。
权利要求
一种dsRNA与黄芪多糖的药物组合及应用，其特征在于它是由黄芪多糖和dsRNA按一定比例组合而成，黄芪多糖含量范围20-50mg/ml；dsRNA(聚肌胞甘酸)含量范围1-5mg/ml，分子量范围200-500bp(琼脂糖凝胶电泳法)。黄芪多糖和dsRNA的主要成分按水针剂生产工艺，经配液、过滤、灌封、灭菌、检验合格后即得到本药物组合。注射用水中加一定量的聚肌苷酸在20℃-60℃条件下溶解，然后加入等摩尔的聚胞苷酸溶解，保温配对15-50分钟，加入合适量的黄芪多糖，混合均匀，过滤、灌封、灭菌。
2. 根据权利要求1所述的一种dsRNA与黄芪多糖的药物组合及应用，其特征在于所述 的聚肌胞的合成与药物组合是500ml注射用水中依次加入焦亚硫酸钠0. 3g、氯化钠0. 6g以 及适量的磷酸二氢钠与磷酸氢二钠等，加热至20-6(TC，进一步优选为30-5(TC之间的某一 特定温度，加入500mg-2500mg聚胞苷酸搅拌使溶解，保温10分钟，然后加入500mg-2500mg 聚肌苷酸搅拌使溶解，保温配对15-50分钟。上述溶液中加入黄芪多糖20-50g，充分搅拌混 匀，用注射用水定容至lOOOml，O. 45um微孔滤膜法过滤，灌封，10(TC流通蒸汽灭菌30分钟， 灯检、贴标即得。
3. 根据权利要求1所述的一种dsRNA与黄芪多糖的药物组合及应用，其特征在于所述 的聚肌胞为由聚肌苷酸和聚胞苷酸在一定条件下聚合而成的聚合物，为增加其抗病毒作用 和减少其毒性作用要求本聚合产物分子大小为200-500bp，增色效应不得小于55%。
4. 根据权利要求1所述的一种dsRNA与黄芪多糖的药物组合及应用，其特征在于鉴于 药物剂型的多样性，它通过选用恰当的药用辅料，可将药物制成水针剂和口服液。
全文摘要
一种dsRNA与黄芪多糖的药物组合及应用，它涉及一种应用于养殖动物病毒性感染防治的药物组合。它是由黄芪多糖和dsRNA按一定比例组合而成，黄芪多糖含量范围20-50mg/ml；dsRNA(聚肌胞甘酸)含量范围1-5mg/ml，分子量范围200-500bp；黄芪多糖和dsRNA的主要成分按水针剂生产工艺，经配液、过滤、灌封、灭菌、检验合格后即得到本药物组合。注射用水中加一定量的聚肌苷酸在20℃-60℃条件下溶解，然后加入等摩尔的聚胞苷酸溶解，保温配对15-50分钟，加入合适量的黄芪多糖，混合均匀，过滤、灌封、灭菌，适用于提高畜、禽和水产类动物的免疫力，增强对病毒病的预防与治疗。
文档编号A61P31/12GK101703518SQ20091017709
公开日2010年5月12日 申请日期2009年9月21日 优先权日2009年9月21日
发明者刘宗柱, 刘西锋, 尹立杰, 段坤 申请人:青岛汉河动植物药业有限公司