专利名称：纳米全氟化碳脂质体颗粒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及的是一种生物医药技术领域的材质及其制备方法，具体是一种纳米全
氟化碳脂质体颗粒及其制备方法。
背景技术：
急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)是由于肺外或肺内的严重疾病引 起的肺毛细血管炎症性损伤，通透性增加，继发高通透性肺水肿和进行性缺氧性呼吸衰竭 (I型)，胸片显示弥漫性肺浸润阴影的一组综合征。是急诊医学领域内的治疗难点和重点， 可继发于休克、创伤、感染等各种疾病的过程中，临床以顽固的低氧血症和进行性呼吸困难 为特征，预后差。治疗时，需要及时纠正缺氧，以保证组织内有足够的氧供。传统机械通气 (conventional mechanicalventilation， CMV)的缺陷在于其改善氧合及总体预后的有限 性，甚至有可能引发的并发症(呼吸机相关肺炎和肺损伤等)。近年来液体通气特别是部分 液体通气(partial liquid ventilation, PLV)似乎显示出了良好的效果。但由于传统的 液体通气费用较高且需要在有创呼吸机辅助下进行等因素的制约，限制了此类疗法在现场 救治中的应用。 全氟化碳(PFC)是碳氢化合物中的氢原子被氟原子取代后形成的一类化合物，其 化学性能稳定，在体内不发生代谢，无毒、无色、无味，不溶于水；具有高密度、低黏度、低表 面张力和良好的气体溶解度等特性，使其成为良好的呼吸气体运载介质，最早被用于血液 代用品(PFC乳剂)。同时，由于其呈现化学和生物惰性，所以具有不需要配型，生物相容性 好的优点，同时，全氟化碳可以通过呼吸完全排除体外。目前，已经有法国、中国、俄罗斯、日 本等国家在20世纪70 80年代对全氟化碳乳液进行全面、详细的研究，部分产品也进入 临床试验。但是，这类产品的生物相容性还不是很好，并且保存方面还存在不少缺点。
脂质体(liposome)作为近年来研究较为广泛的一种药物载体，其主要特点是可 以保护被包封药物，增加药物稳定性，改变药物在体内的分布行为，携载药物被动或主动靶 向到病变部位。脂质体的研究愈来愈受到重视，且发展迅速，其诱人的市场前景和良好的技 术性已经渗透到制药、生物技术、免疫调节、基因药物、化妆品开发等各个领域。由脂质体包 裹的全氟化碳可以插在脂质双层膜之间，能够较好的提高其使用性，并且较大的降低其副 作用。 现在的主要手段都是将全氟化碳化合物制备成纳米级的乳液或是将其制备成水 溶性的全氟化碳液。经过对现有技术的检索发现，中国专利文献号CN101199548A记载了一 种"全氟化碳乳液及其制备方法"，该方法所制备的全氟化碳乳液的粒径一般都比较大，并 且其制备过程中并不能很好的保证所制备的乳液中全氟化碳液的有效载药量。
发明内容
本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种纳米全氟化碳脂质体颗粒及其制 备方法，制备所得纳米级全氟化碳脂质体在粒径和载药量方面都能很好的控制，并且实验重复性好，能够适应其使用过程中存在的局限性，满足临床治疗的需要。同时，该方法制备 的脂质体微球具有保存方便，且生物利用度高，副作用小的优点。
本发明是通过以下技术方案实现的 本发明涉及纳米全氟化碳脂质体颗粒的平均粒径为50 100nm，其组分及含量
为1 20重量份的卵磷脂、1 20重量份的胆固醇和2 1000重量份的全氟化碳液体。 所述的卵磷脂为氢化大豆卵磷脂、大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂中的一种； 所述的胆固醇为蛋白胆固醇、血清胆固醇、蛋黄胆固醇或胆囊胆固醇中的一种； 所述的全氟化碳液体的质量百分比浓度为95% 100%。 本发明涉及上述纳米全氟化碳脂质体颗粒的制备方法，包括以下步骤 第一步、将1 20重量份的卵磷脂、1 20重量份的胆固醇和2 1000重量份的
全氟化碳溶解于盛有有机溶剂的反应瓶中，超声分散后制成脂质体溶液； 所述的卵磷脂为氢化大豆卵磷脂、大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂中的一种； 所述的胆固醇为蛋白胆固醇、血清胆固醇、蛋黄胆固醇或胆囊胆固醇中的一种； 所述的有机溶剂是指氯仿、甲醇、乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸丙脂、三氯乙烯、
甲苯、l，2-二氯乙烷、对二甲苯、乙酸戊脂、四氯乙烯、正戊醇或甲基异丁基甲酮中的一种。 第二步、将反应瓶中的脂质体溶液依次进行减压处理和加温干燥处理，得到脂质
体溶质； 所述的真空减压处理是指将脂质体溶液置于20 60°C以及0 lMPa的环境下 减压挥去有机溶剂，得到脂质体溶质； 所述的加温干燥是指以10 7(TC下进行真空干燥。 第三步、使用缓冲溶液溶解形成在反应瓶的瓶壁上的薄膜，经溶胀水浴处理得到 类脂混悬液； 所述的缓冲溶液的组分及其含量为0. 01 20mg/mL表面活性剂和0. 01 20mg/ mL的柔性剂，该缓冲溶液的pH为6. 0 8. 5 ; 所述的表面活性剂为司盘、吐温、十六烷基三甲基溴化铵、聚乙二醇、聚氧乙烯醚 磺酸盐或多环芳烃磺酸盐縮合物中的一种。 第四步、采用高速剪切法或高压均质法将类脂混悬液均质后加入冻干保护剂，经 干燥处理后得到纳米全氟化碳脂质体颗粒。 所述的高速剪切法是指将类脂混悬液置于高速剪切机中进行机械搅拌。 所述的高压均质法是指采用高压均质机将类脂混悬液置于60 100MPa的压力
下循环均质0. 5 2小时； 所述的干燥处理是指冷冻干燥或真空干燥； 所述的冻干保护剂为甘露醇、海藻糖、果糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、山梨醇或蔗糖 中的一种，其用量为脂质体溶液总质量的0 80%。 本发明纳米全氟化碳(FC-77)脂质体的配方与工艺可使脂质体达到较高的包封 率，且所制备的脂质体粒径均一，稳定性也较好。并且通过冻干工艺使得脂质体的贮存性得 到了保障。
图1为实施例场发射透射电镜图片。
图2为实施例粒径分布图。
具体实施例方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行 实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1 称取60mg全氟化碳(FC-77) 、400mg氢化卵磷脂和150mg蛋白胆固醇共溶于20ml 氯仿中，超声使之完全溶解，转移至圆底烧瓶中，在45°C的水浴下，转速为200r/min，减压 蒸发掉有机溶剂使之在瓶壁上成膜，室温下真空干燥24小时。然后加入60ml浓度为8mg/ ml的吐温-80、9mg/ml去养胆酸钠的磷酸盐缓冲溶液中，充分溶胀，再经水浴超声lOmin，将 此的得到的混悬液加入到高压均质机中在80Mpa的压力下循环均质1小时，此时为带白色 乳光的全氟化碳(FC-77)脂质体溶液。将此溶液加入800mg甘露醇冷冻干燥48小时，既得
到白色脂质体粉末。
实施例2 称取8mg全氟化碳(FC-77) 、200mg大豆卵磷脂和50mg蛋白胆固醇共溶于20ml甲 醇中，超声使之完全溶解，转移至圆底烧瓶中，在25°C的水浴下，转速为300r/min，减压蒸 发掉有机溶剂使之在瓶壁上成膜，室温下真空干燥8小时。然后加入20ml浓度为4mg/ml 的司盘-80、6mg/ml去养胆酸钠的磷酸盐缓冲溶液中，充分溶胀，再经水浴超声30min，将此 的得到的混悬液加入到高压均质机中在60Mpa的压力下循环均质0. 5小时，此时为带白色 乳光的全氟化碳(FC-77)脂质体溶液。将此溶液加入300mg甘露醇冷冻干燥24小时，，既
得到白色脂质体粉末。
实施例3 称取168mg全氟化碳(FC-77) 、400mg蛋黄卵磷脂和250mg血清胆固醇共溶于80ml 乙酸戊脂中，超声使之完全溶解，转移至圆底烧瓶中，在45°C的水浴下，转速为100r/min， 减压蒸发掉有机溶剂使之在瓶壁上成膜，室温下真空干燥12小时。然后加入40ml浓度为 12mg/ml的聚乙二醇、20mg/ml去养胆酸钠的磷酸盐缓冲溶液中，充分溶胀，再经水浴超声 60min，将此的得到的混悬液加入到高压均质机中在100Mpa的压力下循环均质2小时，此时 为带白色乳光的全氟化碳(FC-77)脂质体溶液。将此溶液加入800mg甘露醇冷冻干燥48 小时，既得到白色脂质体粉末。
实施例4 称取80mg全氟化碳(FC-77) 、600mg蛋黄卵磷脂和350mg血清胆固醇共溶于60ml 乙醇中，超声使之完全溶解，转移至圆底烧瓶中，在30°C的水浴下，转速为200r/min，减压 蒸发掉有机溶剂使之在瓶壁上成膜，室温下真空干燥24小时。然后加入80ml浓度为6mg/ ml的聚氧乙烯醚磺酸盐、8mg/ml去养胆酸钠的磷酸盐缓冲溶液中，充分溶胀，再经水浴超 声20min，将此的得到的混悬液加入到高压均质机中在60Mpa的压力下循环均质1. 5小时， 此时为带白色乳光的全氟化碳(FC-77)脂质体溶液。将此溶液加入450mg甘露醇冷冻干燥 24小时，既得到白色脂质体粉末。
权利要求
一种纳米全氟化碳脂质体颗粒，其特征在于其组分及含量为1～20重量份的卵磷脂、1重量份的胆固醇和2～1000重量份的全氟化碳液体；所述的颗粒平均粒径为50～100nm。
2. 根据权利要求1所述的纳米全氟化碳脂质体颗粒，其特征是，所述的卵磷脂为氢化 大豆卵磷脂、大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂中的一种。
3. 根据权利要求1所述的纳米全氟化碳脂质体颗粒，其特征是，所述的胆固醇为蛋白 胆固醇、血清胆固醇、蛋黄胆固醇或胆囊胆固醇中的一种。
4. 一种根据权利要求1所述的纳米全氟化碳脂质体颗粒的制备方法，其特征在于，包 括以下步骤第一步、将1 20重量份的卵磷脂、1重量份的胆固醇和2 1000重量份的全氟化碳 溶解于盛有有机溶剂的反应瓶中，超声分散后制成脂质体溶液；第二步、将反应瓶中的脂质体溶液依次进行真空减压处理和加温干燥处理，得到脂质 体溶质；第三步、使用缓冲溶液溶解形成在反应瓶的瓶壁上的薄膜，经溶胀水浴处理得到类脂 混悬液；第四步、采用高速剪切法或高压均质法将类脂混悬液均质后加入冻干保护剂，经干燥 处理后得到纳米全氟化碳脂质体颗粒。
5. 根据权利要求4所述的纳米全氟化碳脂质体颗粒的制备方法，其特征是，所述的有 机溶剂是指氯仿、甲醇、乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸丙脂、三氯乙烯、甲苯、l，2-二氯乙 烷、对二甲苯、乙酸戊脂、四氯乙烯、正戊醇或甲基异丁基甲酮中的一种。
6. 根据权利要求4所述的纳米全氟化碳脂质体颗粒的制备方法，其特征是，所述的真 空减压处理是指将脂质体溶液置于20 60°C以及小于lMPa的环境下减压挥去有机溶 剂，得到脂质体溶质。
7. 根据权利要求4所述的纳米全氟化碳脂质体颗粒的制备方法，其特征是，所述的缓 冲溶液的组分及其含量为0. 01 20mg/mL表面活性剂和0. 01 20mg/mL的柔性剂，该缓 冲溶液的pH为6. 0 8. 5。
8. 根据权利要求4所述的纳米全氟化碳脂质体颗粒的制备方法，其特征是，所述的高 速剪切法是指将类脂混悬液置于高速剪切机中进行机械搅拌。
9. 根据权利要求4所述的纳米全氟化碳脂质体颗粒的制备方法，其特征是，所述的高 压均质法是指采用高压均质机将类脂混悬液置于60 100MPa的压力下循环均质0. 5 2小时。
10. 根据权利要求4所述的纳米全氟化碳脂质体颗粒的制备方法，其特征是，所述的冻 干保护剂为甘露醇、海藻糖、果糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、山梨醇或蔗糖中的一种。
全文摘要
一种生物医药技术领域的纳米全氟化碳脂质体颗粒及其制备方法，该颗粒的平均粒径为50～100nm，其组分及含量为1～20重量份的卵磷脂、1重量份的胆固醇和2～1000重量份的全氟化碳液体。本发明可使脂质体达到较高的包封率，且所制备的脂质体粒径均一，稳定性也较好，通过冻干工艺使得脂质体的贮存性得到了保障。
文档编号A61K9/14GK101732343SQ200910200608
公开日2010年6月16日 申请日期2009年12月24日 优先权日2009年12月24日
发明者何丹农, 沈新程, 王俊玲, 金彩虹 申请人:上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司