专利名称：：当飞利肝宁制剂的鉴别方法
技术领域：
：本发明涉及一种当飞利肝宁制剂的鉴别方法，属于对药品进行质量控制的
技术领域：
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背景技术：
：当飞利肝宁制剂是采用民间传统治疗肝炎药物当药和七十年代从西德引种植物水飞蓟制备而成的纯天然药物，具有清利湿热、益肝退黄之功效，主要用于治疗湿热郁蒸而致的黄胆、急性黄胆型肝炎、传染性肝炎、慢性肝炎等症(临床发现还可治疗高脂血症和脂肪肝)，其疗效确切可靠，无副作用。其中的"当飞利肝宁胶囊"刊登在中国局颁标准《中药成方制剂》第十七册上，已在临床上应用多年，取得了较满意的治疗效果。目前的质量控制主要依据的是国家卫生部颁《中药成方制剂》第十七册第99页中当飞利肝宁胶囊标准WS3-B—3199"98，但经研究发现，现有当飞利肝宁胶囊存在质量控制标准简单，产品质量不易控制的缺点，在产品生产过程中，用该质量控制方法不能有效控制该制剂的质量，从而将影响其临床疗效。
发明内容本发明的目的，是提供一种当飞利肝宁制剂的鉴别方法。本发明针对原有当飞利肝宁胶囊质量控制标准简单，产品质量不易控制的缺点，对本制剂的质量控制方法进行了研究，拟订了在鉴别当药齐墩果酸基础上增加了对当药中龙胆苦苷的薄层鉴别和水飞蓟中水飞蓟宾的薄层色谱鉴别，提高了当飞利肝宁制剂的质量控制标准，该质量控制方法可有效地控制当飞利肝宁制剂的质量控制标准，从而保证了该制剂的临床疗效。本发明所述的当飞利肝宁制剂是这样构成的处方水飞蓟900g、当药950g制法以上二味，取水飞蓟破碎，去油后，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(中国药典一部附录IO),以80%乙醇为溶剂.缓缓渗漉.收集漉液，减压回收乙醇，浓縮成膏，得水飞蓟总黄酮，粉碎成细粉，备用；当药900g分别以959L75%及50%乙醇进行梯度提取，滤过，合并滤液，浓縮至稠膏状，加入剩余当药细粉50g，干燥.制成干浸膏，粉碎成细粉；取该细粉与水飞蓟总黄酮细粉，加入适量辅料，按照常规制剂方法制成包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂在内的各种剂型。本发明所述的当飞利肝宁制剂还可以是这样构成的处方水飞蓟1200g、当药1267g。制法以上二味，取水飞蓟压榨去油，破碎，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(中国药典一部附录I0),以80%乙醇为溶剂，缓缓渗漉，收集漉液。回收乙醇，减压浓縮成相对密度为1.201.25(60°C)的稠膏，减压干燥得水飞蓟提取物.粉碎成细粉，备用。当药12008加95%乙醇侵泡0.5小时，回流提取2小时，滤过、药渣加75%已醇，回流提取2小时，滤过，再加50%乙醇，回流提取2小时，滤过，合并滤液，浓縮至对密度为1.2~1.3(80"C)稠膏，加入剩余当药细粉67g，干燥得干膏，粉碎成细粉，取细粉与水飞蓟提取物细粉及淀粉，混匀，制粒，加入微粉硅胶适量，压制成1000片，包薄膜衣，即得。本当飞利肝宁制剂的鉴别方法，所述制剂包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂，所述鉴别包括对制剂中当药所含齐敦果酸，还包括对制剂当药中龙胆苦苷、水飞蓟所含水飞蓟宾的薄层色谱鉴别。当药中齐敦果酸的鉴别方法是以齐敦果酸对照品为对照，以氯仿丙酮=515:0.5~1.5为展开剂的薄层色谱法。当药中龙胆苦苷的鉴别方法是以龙胆苦苷对照品为对照，以氯仿甲醇:水=1030:310:0.11.5为展开剂的薄层色谱法。水飞蓟的水飞蓟宾的鉴别方法是以水飞蓟宾对照品为对照，以氯仿丙酮甲酸=615:1.52.5:0.30.8为展开剂的薄层色谱法。所述鉴别方法包括以下项目的部分或全部(l)取本制剂或其内容物，加入乙醇回流提取，滤过，滤液作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加乙醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层扳上，以氯仿丙酮=515:0.51.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以15%磷钼酸乙醇溶液.在105。C烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本制剂或其内容物，加入甲醇超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液；另取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿甲醇水=1030:3~10:0.11.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)取本制剂或其内容物，加醋酸乙酯超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液；另取水飞蓟宾对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，取上述两种溶液，分别点于同一硅胶H薄层板上，以氯仿:丙酮甲酸=615:L52.5:0.30.8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以15%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。更具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)取本制剂或其内容物，研细，取细粉2g，加无水乙醇25ml，回流提取30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层扳上，以氯仿:丙酮-515:0.51.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以15%磷钼酸乙醇溶液.在105。C烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本制剂或其内容物，研细，取细粉2g，加甲醇25mL，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿甲醇水=1030:310:0.11.5为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(3)取本制剂或其内容物，研细，取细粉2g，加醋酸乙酯25ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取水飞蓟宾对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿丙酮甲酸=615:L52.5:0.3~0.8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1~5%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。本制剂中水飞蓟所含水飞蓟宾的含量测定是以水飞蓟宾对照品为对照，以甲醇水:0.5mol/L磷酸二氢钾溶液-810:8~10:0.52.5(用0.2mol/L磷酸调PH值至4.0)为流动相的高效液相色谱法。本制剂中当药所含龙胆苦苷的含量测定是以龙胆苦苷对照品为对照，以甲醇:水=1040:6090为流动相的高效液相色谱法。经研究申请人发现，采用以下质量控制方法将更容易控制这种制剂的质量，更有利于保证制剂的临床疗效性状对于片剂内容物为褐黄色，味苦；对于胶囊剂内容物为黄褐色粉末，味苦；对于软胶囊剂内容物为含有少量悬浮固体浸膏的黄色油状液体；气微，味苦；对于滴丸剂本品为棕色的滴丸；气微，味苦；鉴别(1)取本制剂或其内容物，研细，取细粉2g，加无水乙醇25ml，回流提取30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层扳上，以氯仿丙酮=9:l为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%磷钼酸乙醇溶液，在105。C烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本制剂或其内容物，研细，取细粉2g，加甲醇25mL，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿甲醇水=10:3:0.3为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)取本制剂或其内容物，研细，取细粉2g,加醋酸乙酯25ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取水飞蓟宾对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典薄层色谱法试验，取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿:丙酮甲酸=12:2:0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检査本片剂、胶囊剂、软胶囊剂或滴丸剂应分别符合中国药典片剂、胶囊剂、软胶囊剂或滴丸剂项下有关规定。含量测定(1)水飞蓟宾采用高效液相色谱法测定，色谱柱为C18柱；甲醇水:0.5mol/L磷酸二氢钾溶液=10:10:1(用0.2mol/L磷酸调PH值至4.0)为流动相；检测波长为288nm;理论塔扳数按水飞蓟宾峰计算应不低于3000;精密称取经105t干燥至恒重的水飞蓟宾对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250W频率50KHz)20分钟表，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取胶囊剂装量差异和滴丸剂重量差异项下的内容物或片剂20片，片剂除去薄膜衣，精密称定，研细，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流提取60分钟，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，以水飞蓟宾两峰面积之和计算，即得；本制剂各剂型含水飞蓟以水飞蓟宾(C2sH2A。)计片剂每片不得少于8.9mg;滴丸剂每丸不得少于3.9mg;胶囊剂每粒不得少于3，9mg;软胶囊剂每粒不得少于3.9mg;(2)龙胆苦苷的含量测定采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，甲醇水=20:80为流动相；检测波长为270nm;理论扳数按龙胆苦苷峰计算应不低于5000;精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.1mg的溶液，即得对照品溶液。取水飞蓟宾含量测定项下的细粉1.5g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水50ml，称定重量，超声处理(功率250w、频率50KHz)30分钟，放冷，称定重量，用水补足减失的重量。摇匀，离心，精密吸取上清液25ml，蒸干，残渣用50%甲醇溶液超声使之溶解，转移至25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用0.45ura微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液5ul与供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本制剂各剂型含当药以龙胆苦苷(d6H2A)计片剂每片不得少于l.2mg;滴丸剂每丸不得少于1.2mg;胶囊剂每粒不得少于1.2mg;软胶囊剂每粒不得少于l.2mg。为了确保本发明的质量控制方法科学、合理、可行，本申请人对方法中各药品的鉴别和含量测定方法进行了研究，具体试验资料如下-一、龙胆苦苷的薄层鉴别研究由于当药中含有龙胆苦苷，因此参考《现代实用中药质量控制技术》书收载的龙胆苦苷的薄层鉴别，采用硅胶GF254薄层板，用展开剂(氯仿甲醇水=30:10:1)对当飞利肝宁胶囊中的龙胆苦苷进行鉴别，经实验研究结果采用展开剂(氯仿甲醇水=10:3:0.3)为展开剂，展开，晾干，在紫外光灯(254nm)下观察，检验多批当飞利肝宁胶囊样品，均成阳性，阴性对照试验也未见干扰，证明本方法可行。龙胆苦苷Rf值适中；斑点之间分离好。二、水飞蓟宾的薄层谱鉴别的研究供试品溶液的制备方法一取药物，研细，加甲醇，加热回流30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；同法制备缺水飞蓟阴性对照。供试品溶液的制备方法二取药物，研细，加醋酸乙酯，超声处理10分种，滤过，取滤液作为供试品溶液；同法制备缺水飞蓟阴性对照。展开剂的选择分别以甲苯乙酸乙酯甲酸不同比例的混合溶液；氯仿丙酮甲酸不同比例的混合溶液为展开剂。薄层板的选择将样品分别点于以硅胶G薄层板；以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，展开。结果选用方法二，采用方法二制备供试品溶液，以氯仿丙酮甲酸=615:1.52.5:0.30.8为展开剂，在以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，展开，分离度好，且方法重现性好，斑点显色清晰，Rf值适中，且阴性对照无干扰。最佳展开剂为氯仿丙酮甲酸=12:2:0.5。三、水飞蓟宾含量测定方法研究系方中水飞蓟所含有效成分的含量测定水飞蓟宾的含量测定方法参照国家食品药品监督管理局发布"益肝灵片"试行标准(标准编号WS-11361(ZD-1361)-2002)收载的高效液相色谱法。正文选用的是C18系列色谱柱，以高效液相色谱法对水飞蓟宾进行含量测定。1.色谱条件的选择色谱柱以十八烷基硅垸键合硅胶为填料，GeminiC18柱(4.6X250mm，5um);流动9相甲醇水0.5mol/L磷酸二氢钾溶液-10:10:1)(用O.2mol/L磷酸调pH值至4.0);检测波长288nm;柱温35'C;流速0.8ml/min;理论塔板数按水飞蓟宾峰计算不低于3000。此条件下，水飞蓟宾能与其它组分达到基线分离，与相邻的色谱峰分离度大于2。阴性对照无干扰。2.供试品溶液的制备由于水飞蓟总黄酮中的主要成分为水飞蓟宾，因此，成品质量标准以水飞蓟宾为测定指标，来控制其水飞蓟的含量。由于水飞蓟溶于丙酮、醋酸乙酯及甲醇等有机溶剂，但丙酮易挥发，不易操作，因此我们考察醋酸乙酯和甲醇作为供试液制备的提取溶媒，参考"益肝灵片"供试液制备方法超声提取30分钟，结果采用醋酸乙酯作为提取溶媒比用甲醇提取溶媒，其色谱图分离效果好，杂质峰少，但醋酸乙酯提取效率不如甲醇，因此确定以甲醇作为供试液制备的提取溶媒。经以甲醇作为供试液制备的提取溶媒，考察回流提取30分钟、60分钟，结果测得30分钟和60分钟水飞蓟宾的含量变化不大，但相对60分钟高一些，因此确定回流提取60分钟为易，结果见表l。表l不同超声时间的比较(n=3)超声时间含量(mg/g)30min26.060min26.5优选后的制备方法供试品溶液制备取本品胶囊内容物，研细，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流提取60分钟，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。3.方法学研究3.l线性关系考察精密称取水飞蓟宾对照品适量，加甲醇超声溶解，并采用逐级稀释得到412.8ug/ml，82.56ug/ml，33.024ug/ml的一系列浓度梯度的对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液，各5ul、lOul,按拟定质量控制方法的色谱条件进样测定。以水飞蓟宾两个峰面积积分值和为纵坐标(Y)，水飞蓟宾对照品进样量为横坐标(X)，绘制标准曲线，计算得回归方程Y=3415906X—89919.26，r=999972水飞蓟宾进样量在O.165-4.128ug范围内线性关系良好。3.2.精密度试验精密吸取同一对照品溶液10ul和供试品贮备液10ul，重复进样5次，分别计算的水飞蓟宾与异水飞蓟宾峰面积和的相对标准偏差，结果见表2。表2精密度试验结果次数对照品水飞蓟宾两峰面积和RSD(%)样品水飞蓟宾两峰面积和RSD(%)127041501923642227195531938426327454610,8319351580.564273840619296265276215219527183.3稳定性试验精密吸取同一水飞蓟宾对照品溶液，分别于0、4、6、8、12和16小时，吸取10ul分别注入液相色谱仪中，测定峰面积，其试验结果见表3。表3水飞蓟宾的峰面积稳定性试验结果放置时间(h)04681216水飞蓟宾两峰面积和270415027662992788598278074827993902798987从试验结果可知，供试液放置16小时，水飞蓟宾对照品溶液峰面积基本稳定。3.4重复性试验平行取同批当飞利肝宁胶囊5份，分别按供试品溶液制备方法制得样品供试液。精密吸取各样品供试液10ul进样，计算水飞蓟宾的含量及相对标准差，结果其相对标准差为1.37%，见表4。表4重复性试验结果次数取样量(g)水飞蓟宾含量(mg/g)平均含量(mg/g)RSD(%)10.111426.520.112526.330.110326.926.41.3740.110726.450.113625.93.5回收率试验采用加样回收法，取已知水飞蓟宾含量26.4mg/g的样品，分别添加水飞蓟宾对照品，按上述色谱条件测定，以下式计算回收表，结果表明本法具有良好的回收率，结果见表5。测得水飞蓟量一-样品水飞蓟含量水飞蓟宾回收率(%)=---------------------------------X100%添加对照品量表5回收率试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>四、龙胆苦苷含量测定方法研究1.流动相的选择流动相l:以乙腈水不同比例的混合溶液为流动相；流动相2:以甲醇水不同比例的混合溶液为流动相。流动相3:以甲醇水乙腈不同比例的混合溶液为流动相。结果以甲醇或乙腈水=1090:9010为流动相，阴性样品色谱图在龙胆苦苷峰位置处；干扰，特别是在甲醇水=20:80流动相条件下，龙胆苦苷与其它色谱峰分离最好。2.供试品溶液制备方法研究方法一取药物约1.5g各3份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加水50ml，称定重量，第一份超声处理15分钟、第二份超声处理30分钟、第三份超声处理45分钟(功率250W频率50KHz),放冷，分别称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心，分别精密吸取上清液各25ml，蒸干，残渣用50%甲醇溶液超声使溶解，分别转移至25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45ixm)滤过，即得。方法二取药物约1.5g各3份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入25ml50%甲醇，第一份超声处理15分钟、第二份超声处理30分钟、第三份超声处理45分钟(功率250W频率50KHz)，放冷，分别称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，滤过，分别精密吸取续滤液5ml，用5(m甲醇定容至10ml，作为供试品溶液。分别吸取上述供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，按正文色谱条件，依法测定，结果见表6。表6不同提取方法考察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>依据试验结果，优选提取方法一提取30分钟，作为龙胆苦苷含量测定的供试品溶液制备方法。3、方法学考察3.l精密度试验精密吸取同一对照品溶液(0.1220mg/ml)，重复进样5次，计算得龙胆苦苷峰面积的相对标准偏差，结果见表7:RSD为0.03W。表7实验次数<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>试验结果表明，该方法精密度较好。3.2稳定性试验同一供试品溶液，分别于制备后0、2、4、6、8、12小时，吸取10ul分别注入液相色谱仪中，测定峰面积，试验结果见表8。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>结果表明，供试品溶液在12小时内稳定3.3重复性试验平行取同一批号当飞利肝宁制剂6份，分别按供试品溶液制备方法制得样品供试液，精密吸取各样品供试液10ul进样，计算龙胆苦苷的含量及相对标准差，结果见表9。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>结果表明该方法重复性良好。3.4回收率试验采用加样回收法(按l:l加入)，取己知龙胆苦苷含量4.78mg/g的样品约0.3g，精密称定，分别精密加入龙胆苦苷对照品溶液((14.920—10)各lml,其它按本发明含量测定项下供试品溶液制备方法及色谱条件测定，按以下公式计算回收率，结果见表io。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>试验结果表明，龙胆苦苷的平均加样回收率在95%~105%之间，加样回收良好。具体实施例方式实施例一本当飞利肝宁胶囊的质量控制方法包括处方水飞蓟900g当药950g制法以上二味，取水飞蓟破碎，去油后，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(中国药典一部录IO)，以80%乙醇为溶剂.缓缓渗漉.收集漉液，减压回收乙醇，浓縮成膏，得水飞蓟总黄酮，粉碎成细粉，备用当药900g分别以95X、75%及50%乙醇进行梯度提取，滤过，合并滤液，浓縮至稠膏状，加入剩余当药细粉50g，干燥.制成干浸膏，粉碎成细粉，取细粉与水飞蓟总黄酮细粉及辅料适量，混匀，制粒，装入胶囊，即得。性状本品为胶囊剂，内容物为褐黄药粉末；味苦。鉴别(1)取本品内容物2g，加无水乙醇25ml回流提取30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层包谱法(中国药典一部录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层扳上，以氯仿-丙酮(9:1)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%磷钼酸乙醇溶液.在105。C烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本品内容物2g，加甲醇25ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿甲醇水=10:3:0.3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。检査应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典一部附录1U。含量测定(1)水飞蓟宾的含量测定采用高效液相色谱法(中国药典一部附录VID)测定，色谱柱为C18柱；以甲醇水0.5mol/L磷酸二氢钾溶液-10:10:1(用0.2mol/L磷酸调PH值至4.0)为流动相；检测波长为288nm;理论塔扳数按水飞蓟宾峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取经105OC干燥至恒重的水飞蓟宾对照品10ml，置25ml量瓶中，加甲醇1520ml超声使溶器，并稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取本品装量差异项下内容物，研细，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流提取60分钟，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，以水飞蓟宾两峰面积之和计算，即得。本品每粒含水飞蓟以水飞蓟宾(C2sH2A。)计，不得少于3.9mg。(2)龙胆苦苷的含量测定照高效液相色谱法(中国药典一部附录VID)测定色谱柱为C18柱；甲醇水=20:80为流动相；检测波长为270hm。理论扳数按龙胆苦苷峰计算应下低于5000。对照品溶液的制备精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.1mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取水飞蓟宾含量测定项下的细粉1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水50ml，称定重量，超声处理30(功率250w频率50KHz)分钟，放冷，.称定重量，用水补足减失的重量。摇匀.离心，精密吸取上清液25ml，蒸干，残渣用50%甲醇溶液超声使之溶解，转移至25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度。摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液5ul与供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含当药以龙胆苦苷计，不得少于1.2mg。实施例二本片剂的质量控制方法包括处方水飞蓟1200g当药1267g性状本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显竭黄色；味苦。鉴别(1)取本品，除去薄膜衣，研细，取细粉2g，加无水乙醇25ml，回流提取30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品.加无水乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB)试验.吸取取上述两种溶渡各5ul，分别点于同一硅胶薄层板上，以氯防丙酮=9:l为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，在105'C烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本品，除去薄膜衣，研细，取细粉2g，加甲醇25ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10u1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿甲醇:水=10:3:0.3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(3)取本品，除去薄膜衣，研细，取细粉2g，加醋酸乙酯25ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取水飞蓟宾对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5u1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H寧层板上，以氯仿丙酮甲酸=12:2:0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。检査应符合片剂项下有关的各项规定(中国药典一部附录ID)。含量测定(1)水飞蓟宾的含量测定照高效液相色谱法(中国药典一部附录VID)测定色谱柱为C18柱；以甲醇水:0.5mol/L磷酸二氢钾溶液(10:10:l)(用0.2mol/L磷酸调pH值至4.0)为流动相；检测波长为288nM。理论板数按水飞蓟宾峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备:精密称取经105'C干燥至恒重的水飞蓟宾对照品10mg，置25mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250w频率50KHz)20分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取本品20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约0.1g，精密称定.置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流提取60分钟，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量.摇习，滤过.即得。测定法分别精密吸取对照品溶液洪试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，以水飞蓟宾两峰面积之和计算，即得，本品每片含水飞蓟以水飞蓟宾及异水飞蓟宾计，不得少于8.9mg.(2)龙胆苦苷的含量测定照高效液相色谱法(中国药典一部附录VID)测定色谱柱为C18柱；甲醇:水=20:80为流动相；检测波长为270nm。理论扳数按龙胆苦苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.1mg的溶液,即得。供试品溶液的制备取水飞蓟宾含量测定项下的细粉1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水50ml，称定重量，超声处理30(功率250w频率50KHz)分钟，放冷，称定重量，用水补足减失的重量。摇匀.离心，精密吸取上清液25ml，蒸干，残渣用50%甲醇溶液超声使之溶解，转移至25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度。摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液5ul与供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含当药以龙胆苦苷计，不得少于1.2mg。实施例三本软胶囊的质量控制方法包括性状本品为棕色的软胶囊，内容物为含有少量悬浮固体浸膏的黄色油状液体；气微，味苦。18检查应符合胶囊剂项有关的各项规定(中国药典2005年版附录IL)鉴别应符合其项下规定(同实施例一鉴别项下内容)含量测定应符合其项下规定(同实施例一含量测定项下内容)本软胶囊剂每粒含水飞蓟以水飞蓟宾(C2晶A。)计不得少于3.9mg。含当药以龙胆苦苷(d6H加a)计不得少于l.2mg。实施例四本滴丸的质量控制方法包括性状本品为棕色的滴丸；气微，味苦。鉴别应符合其项下规定(同实施例一鉴别项下内容)检査应符合滴丸剂项下的各项规定(中国药典2005年版附录IK)含量测定应符合其项下规定(同实施例一含量测定项下内容)本滴丸剂每丸含水飞蓟以水飞蓟宾(C2晶A。)计不得少于3.9mg。含当药以龙胆苦苷(C16H2A)计不得少于1.2mg。权利要求1.一种当飞利肝宁制剂的鉴别方法，所述制剂包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂，所述鉴别包括对制剂中当药所含齐敦果酸，其特征在于还包括对制剂当药中龙胆苦苷、水飞蓟所含水飞蓟宾的薄层色谱鉴别；当药中龙胆苦苷的鉴别方法是以龙胆苦苷对照品为对照，以氯仿∶甲醇∶水＝10～30∶3～10∶0.1～1.5为展开剂的薄层色谱法；水飞蓟宾的鉴别方法是以水飞蓟宾对照品为对照，以氯仿∶丙酮∶甲酸＝6～15∶1.5～2.5∶0.3～0.8为展开剂的薄层色谱法。2.根据权利要求l所述当飞利肝宁制剂的的鉴别方法，其特征在于所述鉴别方法包括以下项目的部分或全部(l)取本制剂或其内容物，加入乙醇回流提取，滤过，滤液作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加乙醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层扳上，以氯仿丙酮=515:0.5~1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1~5%磷钼酸乙醇溶液.在105。C烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本制剂或其内容物，加入甲醇超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液；另取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿甲醇水=1030:310:0.11.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)取本制剂或其内容物，加醋酸乙酯超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液；另取水飞蓟宾对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，取上述两种溶液，分别点于同一硅胶H薄层板上，以氯仿丙酮甲酸=615:1.52.5:0.30.8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以15%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。3.根据权利要求2所述当飞利肝宁制剂的鉴别方法，其特征在于更具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)取本制剂或其内容物，研细，取细粉2g，加无水乙醇25ml，回流提取30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层扳上，以氯仿丙酮=515:0.51.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以15%磷钼酸乙醇溶液.在105t烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本制剂或其内容物，研细，取细粉2g，加甲醇25mL，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每l迈l含lmg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿甲醇水=1030:310:0.11.5为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)取本制剂或其内容物，研细，取细粉2g，加醋酸乙酯25ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取水飞蓟宾对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿丙酮甲酸=615:1.52.5:0.3~0.8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以15%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。全文摘要本发明是申请号为200610022692.5的发明专利申请的分案。是涉及一种当飞利肝宁制剂的鉴别方法，所述鉴别包括对制剂中水飞蓟所含水飞蓟宾和当药所含齐敦果酸和龙胆苦苷的薄层色谱鉴别。与现有技术相比，本发明加入了当药中龙胆苦苷、水飞蓟中水飞蓟宾的鉴别控制，所采用的方法专属性强、精密度高，重现性好，回收率高，提高了当飞利肝宁制剂的质量控制标准，从而保证了该制剂的临床疗效。文档编号A61P1/16GK101669987SQ20091020493公开日2010年3月17日申请日期2006年12月29日优先权日2006年12月29日发明者朱林波,彦李,秦方云申请人:四川美大康药业股份有限公司