氮杂糖类化合物及其制备方法和应用的制作方法

专利名称：：氮杂糖类化合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及氮杂糖类化合物的合成和细胞水平抗癌活性研究领域，具体涉及一系列其中一个羟基由取代三氮唑，酷基，叠氮基等取代的氮杂糖类化合物的合成方法和细胞水平的抗癌活性。氮杂糖类化合物普遍作为各种糖苷酶抑制剂或糖基转移酶抑制剂而广泛应用于新药研究中，比如葡萄糖苷酶抑制剂、半乳糖苷酶抑制剂等，已经广泛用于抗HIV，抗癌，抗流感，以及糖尿病治疗的实际应用中。以四氢吡咯为母核的化合物可以作为半乳糖苷酶抑制剂，希望其可应用于糖类介导的相关疾病，但该类化合物应用于抑制癌细胞的研究尚待进一步发展。
发明内容本发明的目的在于拓展氮杂糖类化合物的衍生结构类型，并寻找具有抑癌活性的新型化合物。为了达到上述目的，本发明采用如下的设计方案本发明所述化合物具有通式I的结构其中<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>&包括，但不限于羟基，酰氧基，叠氮基，卤素，烷基，芳基，氰基，硝基，羧基，氨基，偶氮基，四氮唑，呋喃环，吲哚环，吡咯环，咪唑环，苯并咪唑环，噻吩环，噻唑环，喹啉环，核苷，糖环，氨基酸，肽链或其中R4包括，但不限于苯基，Cl-C4取代苯基，烷基，羟甲基，甲氧甲基；R2包括，但不限于H，对甲苯磺酰基，叔丁氧羰酰基，苄基，无机酸盐和有机酸盐；R3包括，但不限于H，苄基，酰氧基，烷基醚和硅醚。优选的，通式I所述化合物的R2为H或对甲苯磺酰基、R3为H或苄基时，&为羟
背景技术：
：基，酰氧基，叠氮基或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中R4包括，但不限于苯基，ci-c4取代苯基，c「c;烷基，羟甲基，甲氧甲基。所述酰氧基包括但不限于乙酰氧基、苯甲酰氧基。所述C1-C4取代苯基包括但不限于任意位置取代的甲苯基、任意位置取代的乙基苯基、任意位置取代的丁基苯基；优选4-丁基苯基。所述C「Q烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基；优选l-正丁基。更优选的，通式I所述化合物的R2为对甲苯磺酰基或H、R3为H或节基时，&为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>所述R4为苯基，4-丁基苯基，1-正丁基，叔丁基，羟甲基或甲氧甲基c在本发明的较佳实施例中，所述化合物R2为对甲苯磺酰基或H、R3为苄基时，1^为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>所述&为1-正丁基，叔丁基或羟甲基。本发明还提供制备氮杂糖类化合物的方法，包括如下步骤A.式豆化合物在三乙胺的作用下，与甲磺酰氯反应，得到式旦化合物；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>B.式§化合物在18-冠-6的作用下，与叠氮化纳反应，得到式Z化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>D.式Z化合物在DIPEA和碘化亚铜的作用下，与端基炔反应，得到通式旦化合物，其中R4的定义同前；N—N//Tos〃々,NOBn丫BnOOBnR4￡E.通式S化合物在钠萘无水四氢呋喃溶液的作用下反应，得到通式互化合物cH,N、N—N//OBnBnOOBnFJ45或将式2化合物在吡啶作用下，与苯甲酰氯反应，得到式4化合物'Tos/^"'。,\"、、、、、\HO,<、"、BnTosBzO','、、、、、\OBnBnOOBn4BnOOBn旦一ReagentandConditions:1.pyridine,BzCl当通式I化合物的R2为对甲苯磺酰基、R3为苄基时，在无水三氯化铝作用下反应，得到式2化合物:TosTos,、、、、*\'OBnBn(f、Bn,、、、、\\■OHH(5OH旦ReagentandConditions:1.A1C13其中，所述式9化合物，是以D-葡萄糖烯(式^化合物)为起始原料，根据VipinKumar，NamakkalG.Ramesh，Tetrahedron,2006，62，1877-1885的报道，通过下列步骤制备得到的7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>ReagentandConditions:1.NaH，BnBr;2.p-toluenesulfonamide，NIS;3.Et3N;4.LiAlH4;5.pyridine,DMAP，Ac20;6.PDC;7.CeCl37H20，NaBH4;8.ph3p，DEAD;9.MeONa.本发明所述化合物的抑制耙细胞包括，但不限于A549，MCF_7，HCT_116，HT-29和HeLa细胞，以及其他哺乳动物增生类细胞。在本发明的化合物中，通过MTT比色法进行癌细胞生长抑制实验证明，其中通式I的化合物具有抑癌活性，尤其化合物^，&，M对特定癌细胞具有中高度抑癌活性。Tos〃、乂OBn'OBnOBn本发明有益效果在于本发明的一系列氮杂糖化合物及其中间体具有新颖的结构，并提供了其制备方法。上述化合物通过MTT比色法证明对特定癌细胞具有中高度抑癌活性，证明该类化合物结构具有潜在的药物开发前景。图1为中间体式^化合物的反应路线；图2为本发明较佳实施例的式互化合物的反应路线。縮略语表Tos、Ts对甲苯磺酰基Bn节基Bz苯甲酰基Ac乙酰基BnBr溴化苄NISn-碘代琥珀酰亚胺DMAP4-二甲基氨基吡啶Ac20酸酐PDC重铬酸吡啶鎗盐DEAD偶氮二甲酸二乙酯DIPEA二异丙基乙基胺DMFN，N-二甲基甲酰胺MTT甲基噻唑基四唑具体实施方案实施例1将380毫克(0.65mmol)式2化合物用10毫升无水二氯甲烷中溶解，加入0.1毫升(1.30mmol)Et3N，再慢慢滴入0.36毫升(2.60mmol)MsCl，冰浴下，搅拌4小时。TLC板监测反应结束后处理用15毫升1N稀盐酸溶液停止反应，用二氯甲烷5毫升/次萃取5次，合并有机层，无水化2504干燥。常压柱层析(环己烷乙酸乙酯=5:1，3:i)梯度洗脱，得式S化合物无色油状物396毫克，产率91.6%。力NMR(400MHz，CDC13):S(ppm)7.72(2H，d，J=8.OHz，S02Ar)，7.32-7.17(15H，m，S02Ar，Ph)，6.97—6.94(2H，m，S02Ar)，4.78—4.75(1H，m)，4.54—4.43(3H，m)，4.40(2H，s)，4.14(2H，s)，4.00(1H，m)，3.89—3.87(1H，m)，3.83—3.81(4H，m)，2.93(3H，s，S02Me)，2.31(3H，s，S02C6H4Me)实施例2将396毫克(0.60mmol)式§化合物用10毫升DMF溶解，力Q入催化量(0.06mmol)18-冠-6，以及1.55克(23.82mmol)NaN3，ll(TC下加热搅拌，反应20小时。TLC板监测反应结束后处理旋干溶剂，冷却后加水15毫升，用二氯甲烷5毫升/次萃取5次，合并有机层，无水化2504干燥。常压柱层析(环己烷乙酸乙酯=5:i，3:i)梯度洗脱，得式Z化合物无色油状物341毫克，产率93.5%。力NMR(400MHz,CDC13):S(ppm)7.68(2H，d，J=8.OHz，S02Ar)，7.33-6.96(17H，m，S02Ar，Ph)，4.53—4.40(4H，m，2XCH2Ph)，4.16(2H，s)，4.05(1H，s)，3.93—3.65(7H，m)，2.31(3H，s，S02C6H4Me).实施例3将315毫克(0.52mmol)式Z化合物用0.6毫升甲苯和1.8毫升异丙醇溶解，加入催化量(5毫克)CuI，及分别加入过量的DIPEA和丙炔醇各1毫升，5(TC加热搅拌过夜(10-12小时)。TLC板监测反应结束后处理旋干溶剂后，直接上柱分离。常压柱层析(环己烷乙酸乙酯=5:i-i:i.5)梯度洗脱，得式^化合物无色油状物291毫克，产率84.6%。力NMR(400MHz，CDC13):S(卯m)7.68-7.66(2H，m，S02Ar)，7.42-7.13(16H，m，Ph，9H-Azi)，6.99-6.97(2H，m，S02Ar)，4.97—4.78(1H，m)，4.75—4.70(3H，m)，4.52—4.47(3H，m)，4.36-4.07(5H，m)，3.94-3.77(3H，m)，3.57(1H，s)，2.40-2.31(3H，m，S02C6H4Me)，2.01-2.26(1H，m，OH).实施例4将291毫克(0.43mmol)式■化合物用8毫升无水四氢呋喃溶解，加入26毫克(0.64mmol)NaH，-3(TC下反应40分钟后，慢慢滴加0.04毫升(0.64mmol)CH3I，滴加完毕后升至室温，反应过夜(10-12小时)。TLC板监测反应结束后处理在冰浴下，滴入10毫升水结束反应，分出有机层保留，用乙酸乙酯萃取水层5次，5毫升/次，合并有机层，无水Na2S04干燥。常压柱层析(环己烷乙酸乙酯=io:1-3:i)梯度洗脱，得式处化合物黄色固体235毫克，产率80.1%。力画R(400MHz，CDC13):S(ppm)7.67(2H，d，J=8.OHz，S02Ar)，7.40(IH，s，H-Azi)，7.32-7.13(15H，m，Ph)，6.97-6.95(2H，m，S02Ar)，4.96-4.91(1H，m)，4.77-4.71(1H，m)，4.55—4.46(4H，m)，4.28(2H，dd，J=33.6，11.2Hz)，4.18—4.05(4H，m)，3.83-3.77(3H，m)，3.60-3.58(1H，m)，3.39-3.38(3H，m，OMe)，2.30(3H，s，S02C6H4Me).实施例5将230毫克(0.38mmol)式Z化合物用0.6毫升甲苯和1.8毫升异丙醇溶解，加入催化量(约5毫克)Cul，及分别加入大过量的DIPEA和叔丁基乙炔各1毫升，5(TC加热搅拌过夜(10-12小时)。TLC板监测反应结束后处理旋干溶剂后，直接上柱分离。常压柱层析(环己烷乙酸乙酯=ioo:2-5:i)梯度洗脱，得式^化合物无色油状物221毫克，产率84.0%。力NMR(400MHz，CDC13):S(ppm)7.69(2H，d，J=8.4Hz，S02Ar)，7.31-7.12(16H，m，Ph，H-Azi)，6.95—6.93(2H，m，S02Ar)，4.97—4.92(1H，m)，4.75—4.69(1H，m)，4.51(2H，dd，J=32.8，11.6Hz)，4.29(2H，dd，J=32.8，11.6Hz)，4.15—4.08(3H，m)，4.02(1H，s)，3.87-3.84(1H，m)，3.80-3.77(2H，m)，3.66-3.65(1H，m)，2.29(3H，s，S02C6H4Me)，1.32(9H，s，H-2-tBu).实施例6将192毫克(0.31mmol)式Z化合物用0.6毫升甲苯和1.8毫升异丙醇溶解，加入催化量(约5毫克)CuI，及分别加入大过量的DIPEA和1-己炔各1毫升，5(TC加热搅拌过夜(10-12小时)。TLC板监测反应结束后处理旋干溶剂后，直接上柱分离。常压柱层析(环己烷乙酸乙酯=ioo:2-5:i)梯度洗脱，得式M化合物无色油状物iso毫克，产率82.9%。力NMR(400MHz，CDC13):S(卯m)7.69(2H，d，J=8.OHz，S02Ar)，7.34-7.13(16H，m，Ph，H-Azi)，6.96-6.94(2H，m，S02Ar)，4.56-4.53(1H，m)，4.48-4.45(1H，m)，4.27(2H，dd，J=39.2，11.2Hz)，4.16-4.09(3H，m)，4.03(1H，s)，3.84—3.77(3H，m)，3.62—3.61(1H，m)，2.67(2H，brs，H—l—nBu)，2.30(3H，s，S02C6H4Me)，1.62(2H，s，H—2—nBu)，1.40—1.35(2H，m，H-3-nBu)，0.95-0.92(3H，m，H-4-nBu)实施例7将186毫克(0.30mmol)式Z化合物用0.6毫升甲苯和1.8毫升异丙醇溶解，加入催化量(约5毫克)Cul，及分别加入大过量的DIPEA和苯乙炔各1毫升，5(TC加热搅拌过夜(10-12小时)。TLC板监测反应结束后处理旋干溶剂后，直接上柱分离。常压柱层析(环己烷乙酸乙酯=100:2-5:i)梯度洗脱，得式^化合物微黄色油状物179毫克，产率82.6%。4NMR(400MHz，CDC13):S(ppm)7.74-7.68(4H，m)，7.56(1H，s，H_Azi)，7.44-7.40(2H，m)，7.35—6.96(18H，m，S02Ar，Ph)，5.02—4.98(1H，m)，4.79—4.74(1H，m)，4.53(2H，dd，J=35.2，11.6Hz)，4.37(1H，d，J=11.2Hz)，4.23—4.12(4H，m)，4.07(1H，s)，3.91-3.79(3H，m)，3.68—3.67(1H，m)，2.27(3H，s，S02C6H4Me).实施例8将209毫克(0.34mmol)式Z化合物用0.6毫升甲苯和1.8毫升异丙醇溶解，加入催化量(约5毫克)Cul，及分别加入大过量的DIPEA和4-丁基苯乙炔各1毫升，5(TC加热搅拌过夜(10-12小时)。TLC板监测反应结束后处理旋干溶剂后，直接上柱分离。常压柱层析(环己烷乙酸乙酯=ioo:2-5:i)梯度洗脱，得式虹化合物微黄色油状物219毫克，产率83.4%。4NMR(400MHz，CDC13):S(ppm)7.70-7.63(4H，m)，7.53(1H，s，H_Azi)，7.32-7.12(17H，m，Ph)，6.97-6.95(2H，m，S02Ar)，4.993(1H，m)，4.79-4.77(1H，m)，4.52(2H，dd，J=34.4，11.6Hz)，4.36(1H，d，J=11.2Hz)，4.24—4.14(4H，m)，4.06(lH，s)，3.89-3.85(1H，m)3.81—3.79(2H，m)，3.69—3.67(1H，m)，2.64(2H，t，J=6.4Hz，H—l—nBu)，2.26(3H，s，S02C6H4Me)，1.63—1.61(2H，m，H—2—nBu)，1.39—1.37(2H，m，H—3—nBu)，0.94(3H，t，J=7.2Hz，H-4-nBu).实施例9将161毫克(0.23mmol)式^化合物用2毫升乙二醇二甲醚溶解，-78t:下缓慢滴入钠萘四氢呋喃溶液5毫升，至溶液变为墨绿色，且反应30分钟不褪色，则反应完成。处理加入5毫升水及5毫升饱和NaHC(^溶液，待升至室温后，用乙酸乙酯5毫升/次萃取5次，合并有机层，无水化2504干燥。常压柱层析(纯二氯甲烷-二氯甲烷甲醇=200:1-50:i)梯度洗脱。得式&化合物微黄色油状物32毫克，产率25.6%。力NMR(400MHz，CDCl3):S(ppm)7.34—7.21(16H，m，Ph，H—Azi)，4.59—4.48(6H，m)，4.37-4.33(2H，m)，3.91—3.88(2H，m)，3.82—3.79(1H，m)，3.59—3.50(2H，m)，3.39—3.35(1H，m)，1.78-1.76(1H，m，NH)，1.32(9H，s，H—2—tBu).实施例10将238毫克(0.34mmo1)式M化合物用2毫升乙二醇二甲醚溶解，-78t:下缓慢滴入钠萘四氢呋喃溶液5毫升，至溶液变为墨绿色，且反应30分钟不褪色，则反应完成。处理加入5毫升水及5毫升饱和NaHC(^溶液，待升至室温后，用乙酸乙酯5毫升/次萃取5次，合并有机层，无水化2504干燥。常压柱层析(纯二氯甲烷-二氯甲烷甲醇=200:1-50:i)梯度洗脱。得式肘化合物微黄色油状物81毫克，产率43.8%。NMR(400MHz，CDCl3):S(ppm)7.34—7.19(16H，m，Ph，H—Azi)，4.56—4.51(6H，m)，4.39-4.34(2H，m)，3.91—3.90(2H，m)，3.88—3.87(1H，m)，3.57—3.52(2H，m)，3.37—3.36(1H，m)，2.67(2H，t，J=7.6Hz，H+nBu)，2.04—2.00(1H，m，NH)，1.65—1.57(2H，m，H-2-nBu)，1.41-1.26(2H，m，H-3-nBu)，0.98-0.91(3H，m，H-4-nBu).实施例11将233毫克(0.33mmol)式^化合物用2毫升乙二醇二甲醚溶解，-78t:下缓慢滴入钠萘四氢呋喃溶液5毫升，至溶液变为墨绿色，且反应30分钟不褪色，则反应完成。处理加入5毫升水及5毫升饱和NaHC(^溶液，待升至室温后，用乙酸乙酯5毫升/次萃取5次，合并有机层，无水化2504干燥。常压柱层析(纯二氯甲烷-二氯甲烷甲醇=200:1-50:i)梯度洗脱。得式^化合物无色油状物150毫克，产率82.1%。力画R(400MHz，CDC13):S(ppm)7.77-7.75(2H，m，Ph)，7.70(1H，s，H-Azi)，7.43-7.26(18H，m，Ph)，4.68-4.63(1H，m)，4.58-4.43(6H，m)，4.38-4.35(1H，m)，3.95-3.92(2H，m)，3.88-3.85(1H，m)，3.61-3.55(2H，m)，3.41-3.39(1H，m).实施例12将245毫克(0.32mmo1)式虹化合物用2毫升乙二醇二甲醚溶解，-78t:下缓慢滴入钠萘四氢呋喃溶液5毫升，至溶液变为墨绿色，且反应30分钟不褪色，则反应完成。处理加入5毫升水及5毫升饱和NaHC(^溶液，待升至室温后，用乙酸乙酯5毫升/次萃取5次，合并有机层，无水化2504干燥。常压柱层析(纯二氯甲烷-二氯甲烷甲醇=200:1-50:i)梯度洗脱。得式M化合物无色油状物89毫克，产率45.4%。力NMR(400MHz，CDCl3):S(卯m)7.68—7.21(20H，m，Ph，H—Azi)，4.67—4.62(1H，m)，4.58-4.42(6H，m)，4.38—4.29(1H，m)，3.94—3.91(2H，m)，3.87—3.84(1H，m)，3.58—3.51(2H，m)，3.39-3.38(1H，m)，2.65—2.61(2H，m，H+nBu)，1.95(1H，brs，NH)，1.45—1.26(4H，m，H-2-nBu，H-3-nBu)，0.98-0.92(3H，m，H-4-nBu)实施例13将148毫克(0.25mmo1)式豆化合物用8毫升二氯甲烷溶解，加入8毫克(0.06mmol)DMAP，0.08毫升妣啶，以及0.1毫升(1.26,1)BzCl，反应1小时后，TLC板监测反应结束后处理用1NHC1溶液10毫升结束反应，分出有机层，水层用二氯甲烷萃取5次，5毫升/次，合并有机层，无水Na^04干燥。常压柱层析(环己烷乙酸乙酯=10:1，5:1)梯度洗脱，得式4化合物白色固体162毫克，产率93.2%。力画R(500MHz，CDC13):S(ppm)7.99-7.97(2H，m，COCH2Ph)，7.76(2H，d，J=8.5Hz，S02Ar)，7.57—7.54(1H，m，COCH2Ph)，7.43—7.40(2H，m，COCH2Ph)，7.33—7.18(13H，m，Ph)，7.14-7.11(2H，m，Ph)，7.00-6.98(2H，m，S02Ar)，4.90-4.86(1H，m)，4.64-4.60(1H，m)，4.55(1H，d，J=12.OHz)，4.46(1H，d，J=12.OHz)，4.37(2H，dd，J=23.0，12.OHz)，4.24-4.19(2H，m)，4.10—4.09(1H，m)，4.01—3.97(1H，m)，3.87—3.84(1H，m)，3.82—3.79(IH，m)，3.77-3.73(2H，m)，2.33(3H，s，S02C6H4Me).实施例14将1.51克(11.33mmol)无水A1C13放入单颈瓶中，翻口塞密封瓶口，冰浴下加入1毫升无水二氯甲烷，搅拌5分钟后，用2毫升无水二氯甲烷和4毫升间二甲苯溶解1.19克(1.89mmol)式边化合物后，将该溶液缓慢滴入反应液，反应液变为橙黄色澄清液体，加毕后反应50分钟，处理将反应液迅速倒入适量冰中，振摇使反应液由橙黄色液体变为无色，用二氯甲烷萃取反应液2次，10毫升/次，合并有机层，分出水层保留，再用水回萃有机层2次，5毫升/次，合并水层，旋干，用丙酮柱层析分离目标产物和无机盐，得黄色油状物粗品，再用常压柱层析(二氯甲烷甲醇=200:1-50:i)梯度洗脱，得式u化合物白色油状物645毫克，产率95.1%。12力NMR(500MHz，CDC13):S(ppm)7.74(2H，d，J=8.OHz，S02Ar)，7.39-7.34(2H，m，S02Ar)，4.64-4.61(1H，m)，4.38-4.29(1H，m)，4.18-4.13(1H，m)，4.11-4.04(1H，m)，3.95-3.80(3H，m)，3.65-3.64(1H，m)，3.43(1H，m)，2.65(1H，m)，2.46-2.44(3H，m，S02C6H4Me)，2.11(3H，s，C0Me).实施例15将286毫克(2.14mmol)无水A1C13放入单颈瓶中，翻口塞密封瓶口，冰浴下加入1毫升无水二氯甲烷，搅拌5分钟后，用2毫升无水二氯甲烷和4毫升间二甲苯溶解247毫克(0.36mmol)式4化合物后，将该溶液缓慢滴入反应液，反应液变为橙黄色澄清液体，加毕后反应50分钟，处理将反应液迅速倒入适量冰中，振摇使反应液由橙黄色液体变为无色，用二氯甲烷萃取反应液2次，10毫升/次，合并有机层保留，再用乙酸乙酯萃取3次，5毫升/次，合并有机层，无水化2504干燥。常压柱层析(纯二氯甲烷-二氯甲烷甲醇=200:1-50:1)梯度洗脱，得式i^化合物白色固体152毫克，产率100%。力画R(400MHz，MeOD):S(卯m)8.07—8.06(2H，m，C0CH2Ph)，7.79—7.77(2H，m，S02Ar)，7.59(1H，t，J=7.6Hz，C0CH2Ph)，7.49-7.45(2H，m，C0CH2Ph)，7.38-7.37(2H，m，S02Ar)，4.77-4.73(1H，m)，4.56—4.52(2H，m)，4.II(IH，t，J=4.4Hz)，3.97—3.92(2H，m)，3.81-3.78(lH，m)，3.68(1H，t，J=5.6Hz)，3.47—3.44(lH，m)，2.46—2.41(3H，m，S02C6H4Me)实施例16将320毫克(2.40mmol)无水A1C13放入单颈瓶中，翻口塞密封瓶口，冰浴下加入1毫升无水二氯甲烷，搅拌5分钟后，用2毫升无水二氯甲烷和4毫升间二甲苯溶解240毫克(0.40mmol)式Z化合物后，将该溶液缓慢滴入反应液，反应液变为橙黄色澄清液体，加毕后反应50分钟，处理将反应液迅速倒入适量冰中，振摇使反应液由橙黄色液体变为无色，用二氯甲烷萃取反应液2次，10毫升/次，合并有机层保留，再用乙酸乙酯萃取3次，5毫升/次，合并有机层，无水化2504干燥。常压柱层析(纯二氯甲烷-二氯甲烷甲醇=200:1-50:1)梯度洗脱，得式i^化合物白色固体136毫克，产率100%。力画R(400MHz，MeOD):S(ppm)7.74(2H，d，J=8.OHz，S02Ar)，7.40(2H，d，J=8.OHz，S02Ar)，4.03(1H，t，J=7.2Hz)，3.90-3.86(1H，m)，3.80-3.70(2H，m)，3.66-3.60(3H，m)，3.45-3.42(1H，m)，2.43(3H，s，S02C6H4Me).[O104]试验例1MTT比色法实验选用指数生长期的贴壁肿瘤细胞，经胰蛋白酶消化后，用含10%小牛血清的RPMI1640培养液配成500010000个/mL的细胞悬液，接种在96孔培养板所设的实验孔中，每孔加入90iiL。同时设置本底孔(即只加入90iiL培养基)。于37°〇，5%(A环境下培养1824h。配置药液时，样品组为用无血清无抗生素培养基配置的不同浓度的药液，对照组为10yg/mL匿SO的培养基液。于样品孔中加入10iiL药液，对照孔中加入10iiL匿SO的培养基液，本底孔中加入10iiL无血清无抗生素培养基，每孔设置3个复孔，于37。C，5XC02下培养72h。向各实验孔及本底孔中加入20yLMTT(试剂盒)，37。C继续培养2h。在酶联免疫监测仪OD492nm处测量各孔的光密度(OD)值。按如下公式计算细胞生长抑制率(InhibitionRate,IR%)，结果见表1。抑制率的计算OD实验=样品组实测OD-本底组OD0D对照=空白组实测OD-本底组OD肿瘤细胞生长抑制率=l-(OD实验/OD对照)X100%表l17个样品初步MTT活性测试结果化合物编号化合物结构式分子量抑制率(％)MCF-7A-549HCT-116HT29HeLaTos/V,/N\、、、、、、\HO,'(〉'、0BnBn(5OBn587.233224131912辺TosI八,"',.,\.,'、、、\\AcO()'、BnBnCOBn629.242521714<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>5e51说明书12/14页668.2760694514682.28303014560.2829321521616.323328131017540.3140702241422AN—N'//TosI〃々'YN、.'、、、、、、\OBnYBnOO已nTosI,N、,,、、、、、、\N_N//OBnN、》/\YBnOOBny''.,N、,-、、、、、\N-NOBn丫BnOOBn16<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>注样品浓度10iig/mL，8-氯腺苷(8-Cl-XG)和5-氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照。然后用SPSS数理统计软件求出化合物M，&，M的半数抑制浓度(ICs。值)，如表2所示。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>权利要求具有通式I结构的氮杂糖类化合物其中R1选自羟基，酰氧基，叠氮基，卤素，烷基，芳基，氰基，硝基，羧基，氨基，偶氮基，四氮唑，呋喃环，吲哚环，吡咯环，咪唑环，苯并咪唑环，噻吩环，噻唑环，喹啉环，核苷，糖环，氨基酸，肽链或其中R4选自苯基，C1-C4取代苯基，C1-C4烷基，羟甲基或甲氧甲基；R2选自H，对甲苯磺酰基，叔丁氧羰酰基，苄基，无机酸盐或有机酸盐；R3选自H，苄基，酰氧基，烷基醚或硅醚。F2009102370303C0000011.tif,F2009102370303C0000012.tif2.根据权利要求1所述的氮杂糖类化合物，其中当R2为H或对甲苯磺酰基、R3为H或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>节基时，Ri为羟基，酰氧基，叠氮基或所述R4选自苯基，Cl-C4取代苯基，Q-Q烷基，羟甲基或甲氧甲基。3.根据权利要求1或2所述的氮杂糖类化合物，其中所述酰氧基为乙酰氧基或苯甲酰4.根据权利要求1所述的氮杂糖类化合物，其中当R2为对甲苯磺酰基或H、R3为H或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>节基时，&为Y一所述R4选自苯基，4-丁基苯基，l-正丁基，叔丁基，羟甲基或甲氧R45.根据权利要求1所述的氮杂糖类化合物，其中当R2为对甲苯磺酰基或H、R3为苄基N、z<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>所述R4为1-正丁基，叔丁基或羟甲基c<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>6.—种制备氮杂糖类化合物的方法，包括如下步骤A.式9化合物在三乙胺的作用下，与甲磺酰氯反应，得到式8化合物；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>b.式8化合物在18-冠-6的作用下，与叠氮化纳反应，得到式7化合物；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>d.式7化合物在dipea和碘化亚铜的作用下，与端基炔反应，得到通式6化合物，其中r4的定义同前；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>e.通式6化合物在钠萘无水四氢呋喃溶液的作用下反应，得到通式5化合物c<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>7.—种制备氮杂糖类化合物的方法，包括如下步骤将式9化合物在吡啶作用下，与苯甲酰氯反应，得到式4化合物。TosTos<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>ReagentandConditions:1.pyridine,BzCI8.—种制备通式i的氮杂糖类化合物的方法，当通式i化合物的r2为对甲苯磺酰基、r3为苄基时，在无水三氯化铝作用下反应，得到式3化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>ReagentandConditions:1.AICI39.根据权利要求6或7的制备方法，其中，所述式9化合物，是以d-葡萄糖烯为起始原料，通过图1所示步骤制备得到的。10.权利要求1所述的氮杂糖类化合物在制备抑制癌细胞药物中的应用。全文摘要本发明公开了一系列新型氮杂糖化合物及其中间体结构和制备方法，本发明所提供的氮杂糖化合物具有通式I的结构，其中式中R1，R2和R3同说明书中定义。上述化合物中通过MTT比色法进行癌细胞生长抑制实验证明对特定癌细胞具有中高度抑癌活性。本发明所提供的化合物是一类新型具有中高度抑癌活性的化合物，具有潜在的药物开发前景。文档编号A61P35/00GK101704812SQ200910237030公开日2010年5月12日申请日期2009年11月9日优先权日2009年11月9日发明者张亮仁,张礼和,方圆,杨振军,马宇衡申请人:北京大学