专利名称：环磷酰胺在治疗尖锐湿疣中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及对尖锐湿疣的治疗，具体地说涉及一种环磷酰胺在治疗尖锐湿疣中的应用。
背景技术：
尖锐湿疣主要是由人乳头瘤病毒(HPV)6型和11型感染所致的一类极为常见的性传播性疾病。尽管其临床治疗手段繁多，如C02激光治疗、冷冻治疗、手术切除等，但所有这些治疗方法均不能有效清除残余病毒并控制复发。因而，尖锐湿疣的治疗仍是当前临床上的一个棘手的问题。并且，人乳头瘤病毒对人体而言，属于完全异己的抗原，从本质而言，机体免疫系统对其可产生很强的免疫应答，但由于调节性T细胞所诱导的免疫抑制，使得HPV感染可以逃避机体免疫攻击，从而导致尖锐湿疣的复发。 环磷酰胺是临床常用的抗肿瘤化学药物，在高剂量(200mg)时可诱导免疫抑制，低剂量(50mg)时则可增强免疫。本发明发现服用低剂量环磷酰胺可有效清除尖锐湿疣患者体内的调节性T细胞，并调动机体产生有效抗人乳头瘤病毒感染的免疫应答，不仅对尖锐湿疣有显著的治疗效果，并可防止其复发。
发明内容
本发明的目的是提供一种环磷酰胺在治疗尖锐湿疣中的应用。 本发明采用给尖锐湿疣患者口服低剂量环磷酰胺的方式治疗尖锐湿疣，具体为每天一次，每次50mg，连续7天；或者每天一次，每次50mg，连续7天，间隔7天后，再连续服用7天。 机体免疫系统对外来入侵的病毒，具有本能的免疫攻击能力。调动免疫系统清除入侵的人乳头瘤病毒是潜在的治疗尖锐湿疣的理想手段。 调节性T细胞是免疫系统最为重要的负向调节细胞，对维持免疫自稳起到极为关键的作用。然而，对肿瘤和感染性疾病而言，调节性T细胞帮助肿瘤细胞和入侵的病原体的免疫逃逸。研究发现调节性T细胞在尖锐湿疣组织中大量聚集，从而介导尖锐湿疣的免疫逃逸。因此，消除尖锐湿疣组织中聚集的调节性T细胞，改善局部的免疫微环境，以调动机体免疫细胞，从而可有效杀伤病毒感染的细胞，并清除病毒。发明人发现给尖锐湿疣患者服用低剂量环磷酰胺，不仅可有效清除尖锐湿疣患者体内的调节性T细胞，对尖锐湿疣具有治疗作用，而且对尖锐湿疣患者肝肾功能均不产生影响，无明显的毒副作用，显示环磷酰胺在治疗尖锐湿疣中所具有的独特优势。
图1服用低剂量环磷酰胺降低患者外周血调节性T细胞比例。
图2服用低剂量环磷酰胺降低患者外周血调节性T细胞数量。
图3服用低剂量环磷酰胺不影响患者外周血总T细胞数量。
图4服用低剂l 图5服用低剂l 图6服用低剂l 图7服用低剂l 图8服用低剂l 图9服用低剂l 图10服用低剂
t环磷酰胺不影响患者外周血NK细胞数量。t环磷酰胺增强患者T细胞非特异性增殖。t环磷酰胺增强患者HPV特异性T细胞增殖。t环磷酰胺增强患者T细胞对感染细胞的杀伤。t环磷酰胺增强患者NK细胞对感染细胞的杀伤,t环磷酰胺防止患者尖锐湿疣的复发。匱环磷酰胺不影响尖锐湿疣患者的肝肾功能。
具体实施例方式
为了证实环磷酰胺对尖锐湿疣具有治疗作用，并可防止其复发，且无明显的毒副作用，下面结合附图和实施例进一步说明本发明。 实施例1 :见图1-图4，低剂量环磷酰胺选择性清除尖锐湿疣患者调节性T细胞。尖锐湿疣患者分别服用50mg低剂量环磷酰胺(n = 18) 、200mg高剂量环磷酰胺(n = 8)、安慰剂(n=18)。 7天后，取患者外周血进行流式细胞术分析。与安慰剂组相比，低剂量和高剂量环磷酰胺组均能显著降低患者外周血调节性T细胞的比例和数目(图1和图2，*< 0. 05)，但高剂量组同时显著降低总T细胞和NK细胞的水平，而低剂量组则不产生影响(图3和图4， * < 0. 05)。 实施例2 :见图5-图8，低剂量环磷酰胺增强尖锐湿疣患者的抗病毒免疫应答。尖锐湿疣患者服用50mg低剂量环磷酰胺后，其外周血单个核细胞(PBMCs)被分离出来后，进行T细胞增殖试验、T细胞和NK细胞对HPV感染细胞的杀伤试验。图5对培养的PBMCs中加入抗CD3和CD28的抗体，48小时后，进行氚标记胸腺嘧啶核苷(3H_TdR)标记检测T细胞的增殖。与安慰剂组相比，低剂量环磷酰胺组的T细胞增殖显著增强(* < 0. 05)。图6对培养的PBMCs中加入尖锐湿疣的裂解物，96小时后，进行3H-TdR标记检测T细胞的增殖。与安慰剂组相比，低剂量环磷酰胺组的T细胞增殖显著增强(* < 0. 05)。图7分别采用T细胞和单核细胞分离试剂盒从PBMCs中分离T细胞和单核细胞。单核细胞经尖锐湿疣的裂解物冲击后，与T细胞共培养，诱导HPV特异性T细胞生成，并作为效应细胞，而从尖锐湿疣组织中所分离的疣体细胞作为靶细胞，孵育效应细胞和靶细胞，进行杀伤试验。与安慰剂组相比，低剂量环磷酰胺组具有更强的杀伤作用。图8采用NK细胞分离试剂盒从PBMCs中分离NK细胞。分别进行NK细胞对NK细胞敏感的K526白血病细胞和所分离的疣体细胞的杀伤试验。与安慰剂组相比，低剂量环磷酰胺组具有更强的杀伤作用。 实施例3 :见图9，低剂量环磷酰胺防止尖锐湿疣的复发。对大的多发性尖锐湿疣组织进行二氧化碳激光治疗后，给患者服用一周低剂量环磷酰胺(n = 57)、高剂量环磷酰胺(n二8)、安慰剂(n = 22)。随访28周，低剂量组复发率低于15%，而高剂量组以及安慰剂组复发率均高于75%。 K即lan-Meier统计学分析P < 0. 0001。 实施例4 :见图10，低剂量环磷酰胺不影响尖锐湿疣患者的肝肾功能。尖锐湿疣患者服用一周低剂量环磷酰胺。于服用后第1、7、14、30天，检测患者血中谷丙转氨酶和肌酐含量。与安慰剂组比较，低剂量服用组血中谷丙转氨酶和肌酐含量没有变化。图10显示为第7天所检测结果，其中低剂量组n二 18，安慰剂组n二 18。 上述低剂量环磷酰胺可口服，每天一次，每次50mg，连续7天；或者每天一次，每次
450mg，连续7天，间隔7天后，再连续服用7天。
权利要求
环磷酰胺在治疗尖锐湿疣中的应用。
全文摘要
本发明公开了环磷酰胺在治疗尖锐湿疣中的应用。研究发现服用低剂量环磷酰胺可有效清除尖锐湿疣患者体内的调节性T细胞，并调动机体产生有效抗人乳头瘤病毒感染的免疫应答，不仅对尖锐湿疣有治疗作用，并可防止其复发，而且对尖锐湿疣患者肝肾功能均不产生影响，无明显的毒副作用，显示环磷酰胺在治疗尖锐湿疣中所具有的独特优势。
文档编号A61P17/12GK101693033SQ20091027239
公开日2010年4月14日 申请日期2009年10月13日 优先权日2009年10月13日
发明者黄波 申请人:黄波;湖北盛齐安生物科技有限公司;