改进的胆固醇流出的肽介质的制作方法

专利名称：改进的胆固醇流出的肽介质的制作方法
改进的胆固醇流出的肽介质相关申请的交叉参考本申请要求2008年6月18日提交的美国临时专利申请No. 61/073，708的优先权， 该申请以引用的方式并入本文中。本申请的主题还涉及2007年12月13日提交的PCT申请No. PCT/US07/87477，该 申请的公开出于所有目的以引用的方式全文并入本文中。在联邦政府资助的研究和开发下作出本发明的权利声明。本发明按照由美国能源部(U. S. Department of Energy)授予的合同 No. DE-AC02-05CH11231 和由国家老年研究所(National Institutes of Aging)授予的许 可(合同)No.R03-AG023153在政府支持下完成。政府享有本发明的某些权利。导致本发明的研究还受到Artery Therapeutics, Inc.发起的研究协议(LBNL Work for Other Agreement No. LB05-001119)和加利福尼亚州烟草相关的疾病研究 (Tobacco Related Disease Research Program of the State of California)授予的准 许 No. 13IT-0025 的资助。
背景技术：
心血管疾病(CVD)是美国和全世界发病率和死亡率的首要原因。胆固醇在 动脉壁内的巨噬细胞中的积累促进泡沫细胞的形成，并且动脉粥样硬化构成了 CVD 白勺 ± 胃帛 @ (Schmitz, G. and Kaminski, W. Ε. , "ATPcassette (ABC) transporter in atherosclerosis, " Curr Atheroscler Rep,4(3) :243-51 (2002))。巨噬细胞中的胆固 醇积累在很大程度上取决于由含载脂蛋白B的脂蛋白粒子(例如VLDL、IDL和LDL)的 产生沉积和由ApoA-I和ApoE粒子产生的胆固醇清除之间的平衡。通过他汀类和其他 降胆固醇药物降低血浆LDL浓度预防大约1/3的CVD事件，而仍有2/3的事件(例如参 见“Randomized trial of cholesterol lowering in 4444 patients with coronary heart disease :the Scandinavian Simvastatin Survival Study(4S)Lancet, 344(8934) :1383-1389(1994)；禾口 "Influence of pravastatin and plasma lipid on clinical events in the West of Scotland Coronary Preventionion Study(W0SC0PS) Circulation, 197 (15) :1440-5(1998))。后者构成了巨大的未满足的医疗需要。血浆HDL胆固醇水平升高与减少动脉粥样硬化的风险有关(Gordon et al，“High Density Lipopropein As A Protective Factor Against Coronary Heart Disease，”Am· J. Med. ,62 :707-14(1977))。近年来流行病学研究已将HDL的保护性作用归于其主要载脂 蛋白 Apo A-I (ffalldius, G, et al. , High Apolipoprotein B, Low Apolipoprotein A-I, And Improvement In The Prediction of Fatal Myocardial Infarction(AM0RIS study) A Prospective Study, “ Lancet,358 (9298) :2026-33(2001)；禾口 Yusuf et al, "Effect of Potentially Modifiable Risk Factors Associated With Myocardial Infarction in 52 Countries (the INTERHEART study) Case-control Study, " Lancet,364 (9438) 937-52 (2004) )0 HDL的有益作用部分是与介导抗动脉粥样硬化的胆固醇逆向转运(RCT)途径中的活性有关。RCT参与胆固醇从外周巨噬细胞转运到肝中以在粪便中排泄固醇 (Lewis et al, "New Insights Into The Regulation of HDL Metabolism and Reverse Cholesterol Transport, ” Circ. Res. ,96 :1221-32 (2005)) RCT 的限速步骤包括通过 天然载脂蛋白(例如Apo A-I和Apo E)介导，刺激胆固醇从巨噬细胞中流出。该胆固醇 流出过程产生新生HDL并需要ATP-结合盒转运蛋白Al (ABCAl)，否则动脉粥样硬化发展 (Calpe-Berdiel et al，〃 Direct Evidence In Vivo of Impaired Macrophage-Specific Reverse Cholesterol Transport in ATP—Cassette Transporter Al—Deficient Mice，“ Biochim. Biophys. Acta. , 1738 (1-3) :6-9(2005) 0 ABCAl 是丹吉尔(Tangiers) 病的缺陷分子，该病的特征在于血浆HDL严重缺乏和早发动脉粥样硬化(Attie et al, "Pivotal Role of ABCAl in Reverse Cholesterol Transport Influencing HDL Levels and Susceptibility to Atherosclerosis,"J Lipid Res. ,42(11) :1717-26 (2001))。载 脂蛋白A和E还通过阻止降解来稳定细胞ABCAl蛋白，这确保了高水平的细胞胆固醇输出 和HDL装配。在策略的开发中已经对HDL的临床重要性产生关注，以出于治疗目的调控RCT。概 念研究的探索性证据表明注射在磷脂复合体中的全长Apo A-I变体，例如proApoA-I、Apo A-I Milano JPApo A-I 2 野生型，增加了 RCT(Eriksson et al. ,"Stimulation of Fecal Steroid Excretion After Infusion of Recombinant Proapolipoprotein A-I. Potential Reverse Cholesterol Transport in Humans, "Circulation, 100 (6) :594-8 (1999))、并使 冠状动脉粥样硬化退化(Nissen et al, “ Effect of Recombinant ApoA-I Milano on Coronary Atherosclerosis in Patients with Acute Coronary Syndromes :A Randomized Controlled Trial, “ JAMA,290 (17) :2292-300(2003) ；and Tardif et al, "Effect of rHDL on Atherosclerosis-Safety and Efficacy (ERASE) Investigators, " JAMA, 297 1675-82. Epub March 26(2007)).尽管若将有前途的全长ApoA-I蛋白开发成商业产品，则 它们作为治疗剂还具有一些缺点。例如，Apo A-I为长度243个氨基酸的蛋白，生产出商业 产品所需要的量远不是小事。另外，Apo A-I变体例如Milano和Paris变体，可由于它们 的外源性质而激发免疫应答。因此，本领域需要使用有效的RCT途径以介导胆固醇流出、从而稳定和消退动脉 粥样硬化斑块即治疗心血管疾病的另外的组合物和方法。出人意料地，本发明通过提供这 样的组合物和方法而满足了这种要求和其他要求。

发明内容
本发明涉及对脂质代谢具有效果的肽。脂质是重要的细胞结构成分，并且为基本 的细胞信号传导提供源材料，包括前列腺素、活性氧化物质等。通过信号传导途径，脂质还 有助于细胞因子对例如炎性刺激反应的安排。这种脂质作用牵涉在一些疾病状态中，包括 但不限于动脉粥样硬化以及神经、炎症和感染疾病表现。所述肽直接或通过介质发挥它们 的作用。介质包括但不限于HDL、ABC转运蛋白以及用于氧化和炎症的介质。在一方面，本发明因此提供一族多肽，所述多肽在重量基础上具有与全长载脂蛋 白(例如Apo AI和Apo E)类似、优选超越的胆固醇流出活性；并具有与全长载脂蛋白类似 的对于ABACI的高选择性。更特别地，本发明提供一族非天然存在的多肽，所述多肽起到对ABCAl高亲和性功能配体的作用，并且在每分子基础上以与天然载脂蛋白近似的能力和效 力刺激细胞胆固醇流出。本发明的多肽体内刺激胆固醇从巨噬细胞源性泡沫细胞流出，促 进粪便固醇排泄的持续增长，并且在高胆固醇血症小鼠中降低动脉粥样硬化的严重性。同样地，本发明的多肽，即对ABCAl具有有效的和选择性活性的多肽，可治疗性地 用于提高ABCAl稳定性和ABCAl脂质流出活性，并且其可单独使用，或可选择地，与其他已 知试剂联合使用，以治疗心血管疾病，从而减少动脉粥样硬化。另外，本发明的多肽可单独 使用，或可选择地，与其他已知试剂联合使用，以治疗急性冠脉综合征，从而减少斑块脂质 含量并稳定易损性斑块。另外，本发明的多肽可单独使用，或可选择地，与其他已知试剂联 合使用，以治疗血脂异常、高胆固醇血症和炎症，从而提高血浆HDL浓度和/或促进胆固醇 逆向转运。本发明的肽包含了某些特征，它们共同限定了所述肽的药代动力学和药效学性 能。这些特征包括α螺旋结构和氨基酸沿着α螺旋结构的两性亲取向。所述肽沿着亲水 性轴包含两个分离的酸性残基集中点。α螺旋结构还通过在脂质-水内相中形成天然氨基 酸盐桥而进一步增强。此外所述肽缺乏明显的立体特异性作用，例如包含L和D氨基酸以 及反向形式氨基酸的肽同等良好地发挥作用。所述肽包含20个氨基酸残基的核心序列，所 述氨基酸残基选择性地与血浆中的HDL结合并且以细胞中的ABCAl转运蛋白为靶。疏水性促进药效学，例如，沿着α螺旋的轴的疏水性楔角使所述肽定位于ABCAl 转运蛋白附近的细胞膜中，从而允许功能性相互作用。因此，所述肽以生理学方式与细胞膜 相互作用，因为它们在非特异性细胞膜影响最小的条件下赋予ABCAl特异性脂质流出。在另一方面，本发明部分基于在长度为20个氨基酸的小肽中，利用在单螺旋中适 当位置例如10、12位等的疏水性残基例如L、F、I、W，能够扩展该螺旋的非极性表面区域 (即，增加疏水性足迹)，以提供具有20个氨基酸核心序列并具有天然的ABCAl流出刺激活 性的小的单螺旋肽，也就是达到可与天然蛋白质、例如具有许多由脯氨酸连接的两亲性α 螺旋的ApoAI相匹敌的ABCAl流出活性。此外，在一些实施方案中，本发明提供具有扩大的 疏水性足迹的20个氨基酸长度的肽，其中所述肽能够与HDL以免除需要配制磷脂的水平结 合起来。在一个方面，本发明提供分离的多肽，其包含下面的氨基酸序列(并且在某些实 施方案中，由所述氨基酸序列构成，或者基本由所述氨基酸序列构成) ^ ^ X11X12X13X14X15X16X17X18X19X20 其中=X1^ X7> X11 和 X15 是独立选自 E 和 D 的氨基酸；X4 和 X18 是独 立选自E、D和A的氨基酸；知、Χ10,Χ13>Χ16和\说是独立选自F、L和W的氨基酸；X17是氨基 酸L、A、F或W;X3、X5和X19是独立选自R和K的氨基酸；X14是氨基酸R、A或E ；和X2J6、X8 和)(12是独立选自L、V和A的氨基酸；其中每个字母代表传统的单字母氨基酸密码。本发明还提供包含下面的氨基酸序列(并且在某些实施方案中，由所述氨基酸序 列构成，或者基本由所述氨基酸序列构成)的多肽A^yy^xjf^XiAXicAAJuXMXuXiJuXi 8X19X20(SEQ ID NO 1)其中Xi、X7和X15是独立选自E和D的氨基酸;X4、XU和X18是独立选 自E、D、A和G的氨基酸W、\’ X10,X12>X13>X16>X17和\收是独立选自F、L、W、I、V和A的 氨基酸；x3、X5和X19是独立选R、K和C的氨基酸；X14是氨基酸R、A、E或C ；和&是A、G或 V0在本发明这类肽的一些实施方案中，Χ2、Χ6、Χ9、Χ1(1、)(12、)(13、)(16、Χ17*)(2(1独立选自F、L、 I和W。在一些实施方案中，&、X11和独立选自A、D和E。在一些实施方案中，&和X11
8位是Α。在一些实施方案中，)(4和X11位独立选自D和Ε。在一些实施方案中，X9是！^、F或 W0在一些实施方案中，&、)(6、&2和)(1位中的至少三个是1^。在一些实施方案中，X14是尺； 和)(17是1^或F。在一些实施方案中，)(8是々。在一些实施方案中，)(2是1^或V。在一些实施 方案中，\、X10> X12> X13> X16> Xi7和独立地选自F、L、I和W。在一些实施方案中，X6> Χ10> X12> X13> X16> X17 和)(2。独立地选自 F 禾口 L。在一些实施方案中，本发明的肽包含下面的氨基酸序列(并且在某些实施方案 中，由所述氨基酸序列构成，或者基本由所述氨基酸序列构成)=X1X2X3X4X5X6X7AX9XioXiiXI2XI3 X14X15X16X17X18X19X20 (SEQID NO :27)，其中=X1、X7, X15 和 X18 独立选自 D 和 E J2 是 L、I 或 V ；X4 和X11独立选自D、E和A ；X3、X5和X19独立选自K和R ;Χ9是W、F或L ；X14是R、E或A ；并且 X6> X10> x12> x13> x16> X17 和 \收独立选自 F、L、I 和 W。在一些实施方案中，X10> X12> X13> X16> X17 和独立选自F禾口 L。在一些实施方案中，本发明提供了包含下面的氨基酸序列(并且在某些实施方案 中，由所述氨基酸序列构成，或者基本由所述氨基酸序列构成)的肽ALRAXiX^XA/XiA 3RX15X16X17X18RX20(SEQ ID NO :28)，X”X7、X15 和 X18 独立选自 D 和 E ;)(5 是 K 或 R ;X9 是 W、L 或 F ；并且&。、X12> X13> X16> X17和\收独立选自F禾口 L。在一些实施方案中，本发明提供了包含下面的氨基酸序列(并且在某些实施方案 中，由所述氨基酸序列构成，或者基本由所述氨基酸序列构成)的肽=X1LRXALX7AX9XiciX11X12 X13RX15X16X17X18RX20 (SEQ ID NO』9)，其中 X” X4, X7, X11, X15 和 X18 独立选自 E 和 D J5 是 K 或 R ;X9 是 F、L 或 W ；并且)(1(1、X12, X13> X16> X17 和 独立选自 F 禾口 L。在一些实施方案中，本发明的肽包含下面的氨基酸序列(并且在某些实施方案 中，由所述氨基酸序列构成，或者基本由所述氨基酸序列构成)ELR(D/E) (K/R)LEA(ff/F/ L) (F/L) (D/E) L (F/L) RE (F/L) LER (F/L) (SEQ ID NO :30)。在一些实施方案中，本文描述的本发明的肽还包含X21，其中X21选自C、K、Y或L。 在一些实施方案中，本发明的多肽还包含X21和X22，其中X21选自C、K、Y和L,和知是S或 C。在一些实施方案中，)(21是1(。在一些实施方案中，是S。在一些实施方案中，、或)(22 是C。本发明的多肽具有胆固醇流出活性和ABCAl-稳定化活性。在一些实施方案中，半胱氨酸在两亲性α螺旋的脂-用水界面处被引入本发明的 肽，例如，选自SEQ ID NO :2-33的肽，置换带正电荷的氨基酸例如精氨酸或赖氨酸。典型 地，包含半胱氨酸置换的本发明的肽在每个肽和/或螺旋段上具有一个半胱氨酸。因此在 一些实施方案中，半胱氨酸存在于SEQ ID NO :1的3、5、14或19位，或在SEQ ID NO :27的 3、5、14或19位置换。例如，在一些实施方案中，本发明的肽例如SEQ ID NO :2，包含以下置 换之一 R3 — C，K5 — C，R14 — C 和 R19 — C。在一些实施方案中，SEQ ID NO :27、28、四或 30的肽也可在3、5、14或19位包含半胱氨酸置换。在一些实施方案中，本发明的肽可以在 SEQ ID NO :1中包含半胱氨酸或在SEQ ID NO :27、沘、39或30的3、5、14或19位处置换的 半胱氨酸，和21或22位处的第二个半胱氨酸残基。在一些实施方案中，本发明的肽包含选自下列的氨基酸序列(并且在某些实施方 案中，由所述氨基酸序列构成，或者基本由所述氨基酸序列构成)ELREKLEAffFELFREFLERF(SEQ ID NO 2),ELRERLEAffFELFREFLERF(SEQ ID NO 3),
ELRDKLEAffFDLFREFLERF(SEQ ID NO 4),DLRDKLDAffFDLFRDFLDRF(SEQ ID NO 5),ELRDRLEAffFDLFREFLERF(SEQ ID NO 6),DLRDRLDAffFDLFRDFLDRF(SEQ ID NO 7),ELREKLEAffLELLRELLERL(SEQ ID NO 8),ELRERLEAffLELLRELLERL(SEQ ID NO 9),ELRDKLEAffLDLLRELLERL(SEQ ID NO: 10)，DLRDKLDAffLDLLRDLLDRL(SEQ ID NO :11)，ELRDRLEAffLDLLRELLERL(SEQ ID NO :12)，DLRDRLDAffLDLLRDLLDRL(SEQ ID NO :13)，EVREKLEAffFEAFREFAERFKS(SEQ ID NO :14)，EVREKLEAffFELFREFAERFKS(SEQ ID NO :15)，EVREKLEAffFELFREFAERFLS(SEQ ID NO :16)，EVREKLEAffFELFREFLERFKS(SEQ ID NO :17)，EVREKLEAffFELFREFLERFLS(SEQ ID NO :18)，EVREKLEAffFELFREFLERFL(SEQ ID NO :19)，EVREKLEAffFELFREFLERF(SEQ ID NO :20)，EIREKIEAffIEIIREIIERI(SEQ ID NO :21)，ELREKLEAffFELFEEFFARFKS(SEQ ID NO :22)，ELREKLEAffFELFAEFFARFKS(SEQ ID NO :23)，ELREKLEAffFELFAEFFARFK(SEQ ID NO :24)，ELREKLEAffFELFAEFFARF(SEQ ID NO :25)，ELRAKLEAffFEAFAEFFARF(SEQ ID NO :26)，ELREKLEAffFELFREFLERFKS(SEQ ID NO :31)ELREKLEALFELFREFLERF(SEQ ID NO. 32)，禾口ELREKLEAFFELFREFLERF(SEQ ID NO :33)。在另一个方面，本发明提供具有氨基酸序列SEQ ID NOs :2力6、31、32或33的多肽 的多肽变体。在一个实施方案中，所述多肽与选自SEQ ID NOs :2力6、31、32和33的氨基酸 序列具有至少75%同一性。在优选的实施方案中，所述多肽与选自SEQ ID NOs :2-26、31、32 和33的多肽具有至少75%的同一性，优选80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%, 96%,97%,98%,99%^； 100% 的同一性。本发明还提供具有胆固醇流出活性的多肽，其中所述多肽是具有实施例2中表A、 表B或表C显示的序列的多肽。在一些实施方案中，本发明的肽例如通过脯氨酸残基与另一种具有胆固醇流出活 性的两亲性的α螺旋肽连接。在一些实施方案中，本发明的肽与本发明的第二种肽连接。 本发明的第二种肽可以是相同的肽，或不同的肽。因此，本发明还提供包含本发明的一种或 多种肽的、具有胆固醇流出活性的多肽。在一些实施方案中，本发明的多肽还包含保护基团。例如，所述多肽可被修饰，使 得组成氨基酸和/或末端氨基酸上的R基团被保护基团封闭，即保护。现已发现封闭、特别是氨基和/或羧基末端的封闭明显改善口服递送并显著延长血清半衰期。因此，在一个实 施方案中，本发明的多肽还包含与氨基或羧基末端连接的保护基团。在一个实施方案中，多 肽还包含与氨基末端连接的第一保护基团和与羧基末端连接的第二保护基团。合适的保护基团包括但不限于乙酰基(Ac)、酰胺、3至20个碳的烷基、Fmoc、叔 丁氧羰基(Tboc)、9_芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧羰基、咕吨基 (Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基_2， 3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧二苯甲基(Mbh)、 甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc) ,4-甲基苄基(MeBzl)、4-甲 氧基苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰基(Bz)、3_硝基-2-吡啶次磺酰基 (Npys)U-G，4-二甲基-2，6-二氧亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、 2-氯苄氧羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧羰基(2-BrD、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔 丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)和三氟乙酰基(TFA)。在优选的实施方案中，多肽包含与氨基末端连接的第一保护基团，所述第一保护 基团包括但不限于乙酰基、丙酰基和3至20个碳的烷基。在优选的实施方案中，第一保护 基团为乙酰基。在另一个优选的实施方案中，多肽包含与羧基末端连接的第二保护基团，所 述第二保护基团为酰胺。本发明的多肽可以全部包含“L”氨基酸、全部包含“D”氨基酸或“L”和“D”氨基 酸的混合物。意外地发现全部包含D氨基酸的多肽像L氨基酸多肽一样具有刺激胆固醇流 出的高的能力和高的亲和性。本发明的多肽具有胆固醇流出活性。在一些实施方案中，本发明的多肽具有ABCAl 稳定活性。在一个实施方案中，本发明的多肽保护磷脂避免被氧化剂氧化(即所述多肽具 有抗氧化活性)。在一个实施方案中，本发明的多肽具有抗炎活性。在优选的实施方案中， 本发明的多肽具有一种或这些多种活性。在甚至更优选的实施方案中，本发明的多肽具有 各种这些活性。本发明的肽典型地通过与人血浆中的主要HDL粒子一不同的α -HDL粒子结合/ 相互作用，并且还将α-HDL粒子改型，以移除apoA-I，从而产生前β-HDL粒子，导致人血浆 前β-IHDL形成。此外，本发明的肽是有力的，并且以2 1的肽apoA-I(血浆中)的摩尔比率、 更典型以1 1的摩尔比率、更加经常以1 5或1 10或更低的比率，导致前β-l和 ABCAl-介导的胆固醇流出。本发明的又一个实施方案提供药物组合物，所述药物组合物包含本文中描述的至 少一种多肽和药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含另 外的治疗剂(例如他汀类，例如阿伐他汀，洛伐他汀，普伐他汀，辛伐他汀，氟伐他汀或罗伐 他汀；胆酸结合剂，例如消胆胺或考来替泊；Nieman-Pick Cl样1 (Nieman-Pick Cl-Like 1)固醇转运蛋白通道抑制剂，例如依泽替米贝；血小板聚集抑制剂，例如阿司匹林、噻氯匹 定或氯吡格雷；烟酸/烟酰胺；PPAR激活剂；维生素E ；或其组合)以治疗与胆固醇流出(有 关的疾病或病症例如心血管疾病)。本发明的另一个方面提供本文中公开的多肽的肽模拟物。在一个实施方案中，本 发明提供的肽模拟物具有基本上如同具有氨基酸序列SEQ ID NO=USEQ ID NO 27、SEQ IDNO :28,SEQ ID NO : 或SEQ ID NO :30的多肽那样的三维构象。在另一个实施方案中，本发 明提供的肽模拟物具有基本上如同具有选自SEQ ID N0s:246、31、32和33的氨基酸序列 的多肽那样的三维构象。在一个实施方案中，肽模拟物为反-转型类似物(retro-inverso analog) 0在另一个实施方案中，肽模拟物为反-对映类似物(retro-enantio analog) 0在 又一个实施方案，肽模拟物为反式烯烃(trans-olefin)类似物。如本文中所述，本发明的 肽模拟物能包含其他主链修饰。至于本发明的多肽，本发明的肽模拟物还可包含保护基团， 并且保护基团优选在氨基和羧基末端处。在另一个方面，本发明提供两亲性α -螺旋肽，其作为包含一个α -螺旋区段并具 有胆固醇流出活性的肽，例如选自SEQ ID NO :1-33的肽，结合到相同的ABCAl结合位点。本 发明还提供一种结合HDL的两亲性α-螺旋肽。另外，本发明还提供分离的刺激ABCAl-特 异性胆固醇流出的两亲性α螺旋肽，例如，其具有单一的20个氨基酸α-螺旋肽元件，并 且在一些实施方案中具有21个氨基酸或22个氨基酸的α -螺旋肽元件。在又一个方面，本发明提供一种组合物，所述组合物包含与脂质复合的本发明的 多肽例如具有选自由SEQ ID NO :1-33的氨基酸序列的多肽或其肽模拟物。在一个实施方 案中，脂质为磷脂。在另一个实施方案，磷脂为1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆 碱(“P0PC”)。在又一个实施方案中，组合物还包含药学上可接受的载体。本发明的又一个方面提供通过将本文中描述的至少一种多肽或肽模拟物施用至 对象来介导哺乳动物对象(例如灵长类动物如人或黑猩猩、或啮齿动物如大鼠或小鼠)中 的胆固醇流出的方法。本领域技术人员将理解编码这种多肽(或肽模拟物)的核酸可被施 用到对象以代替施用所述多肽(或肽模拟物)。本发明提供这样的核酸。基于它们的胆固 醇流出活性，本发明的多肽和肽模拟物可有利地用于治疗、改善或预防与血脂异常、高胆固 醇血症和炎症有关的疾病或状况。在另一个方面，本发明提供合成的脂质粒子，例如合成的LDL或HDL粒子，用于递 送包含本文描述的多肽、例如具有选自SEQ ID NO :1-33的序列的多肽的治疗或诊断剂。这 样的粒子能够用于例如递送用于治疗癌症或治疗感染的治疗剂。本发明的又一个方面提供了通过将本文中描述的至少一种多肽或肽模拟物施用 至对象来治疗或预防哺乳动物中的动脉粥样硬化症状的方法。此外，本领域技术人员将理 解编码这种多肽(或肽模拟物)的核酸可被施用到对象以代替施用所述多肽(或肽模拟 物)。本发明提供这样的核酸。在该方法的一个实施方案中，哺乳动物是被诊断为具有动 脉粥样硬化的一种或多种症状的哺乳动物。在另一个实施方案中，哺乳动物被诊断为存在 动脉粥样硬化风险。优选地，哺乳动物是人，但也可以是非人动物。在一个示例性实施方案 中，多肽具有 SEQ ID N0:1、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29 或 SEQ ID NO 30 的氨基酸序列，或选自SEQ ID NOs :2-26、31、32和33的氨基酸序列。在另一个相关的实施方案中，该方法还包括施用到少一种附加的治疗剂。这种治 疗剂的例子包括但不限于抗体、酶抑制剂、抗菌剂、抗病毒剂、类固醇、非类固醇抗炎剂、抗 代谢物、细胞因子、或可溶性细胞因子受体。酶抑制剂可以是蛋白酶抑制剂或环氧合酶抑制 剂。附加剂可作为药物组合物的一部分加入，或者可伴随施用或在附加剂的生理作用与本 发明的多肽或肽模拟物的生理作用重叠的时间期限内施用。更具体地，附加剂可伴随施用 或在施用多肽或肽模拟物之前一个星期、几天、M小时、8小时或即刻施用。可选择地，附加剂可在施用多肽或肽模拟物之后一个星期、几天、对小时、8小时或即刻施用。本发明的又一个方面提供稳定易损性斑块的方法，该方法包括将本文中描述的至 少一种多肽或肽模拟物施用至哺乳动物。此外，本领域技术人员将理解编码这种多肽的核 酸可被施用到对象以代替施用多肽。这样的核酸由本发明提供。在该方法的一个实施方案 中，哺乳动物是被诊断患有一种或多种易损性斑块的哺乳动物。在另一个实施方案中，哺乳 动物被诊断为存在患有易损性斑块的风险。哺乳动物优选是人，但也可以是非人动物。在 一些实施方案中，多肽具有氨基酸序列SEQ ID NO. USEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO.四或SEQ ID N0:30。在一些实施方案中，多肽具有选自SEQ ID NOs :2_洸、31、32和33 的氨基酸序列。本发明还提供治疗或预防与血脂异常、高胆固醇血症或炎症有关的疾病或状况的 试剂盒。在优选的实施方案中，本发明提供治疗或预防动脉粥样硬化的症状的试剂盒，所述 试剂盒包含含有本发明的多肽或肽模拟物的容器。所述试剂盒还可包含药学上可接受的载 体。另外，所述试剂盒还能包含教导使用多肽或肽模拟物治疗或预防与血脂异常、高胆固醇 血症或炎症有关的疾病或状况例如动脉粥样硬化的说明材料。本发明的试剂盒中提供的多 肽和肽模拟物可全部包含L氨基酸、全部包含D氨基酸、或L和D氨基酸的混合物。与上述试剂盒有关的是，说明材料可包括使用药物组合物的文件或记录介质，包 括书面的或可听的说明。说明材料包括例如)瓶上的标签、盒中插入的纸、印刷在盒或箱 上、在任何这些位置中给出的网址提供的说明书等等。在另一个方面，本发明提供制备具有胆固醇流出活性和/或ABCA稳定活性的多肽 变体的方法，该方法包括(a)提供具有SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO 29或SEQ ID NO 30的氨基酸序列或具有选自SEQ ID NOs :2-26,31,32和33的氨 基酸序列的多肽；(b)修饰所述多肽的至少一个氨基酸位置以产生多肽变体；(c)筛选所述 多肽变异体的胆固醇流出活性和/或ABCA稳定活性；(d)选择胆固醇流出活性为亲本多肽 的至少80%的多肽变体和/或选择ABCA稳定活性为为亲本多肽的的至少80%的多肽变 体；以及(e)合成所述选择的多肽变体。在一些实施方案中，多肽通过例如置换、缺失或插 入一个、两个、三个或更多氨基酸而修饰。例如，在一些实施方案中，22-聚体可被修饰以产 生具有胆固醇流出活性的20-聚体。在一个实施方案中，一个或多个氨基酸被保守氨基酸 置换。多肽可包含一种或多种D氨基酸。在该方法的一些实施方案中，修饰或变异的多肽 全部包含D氨基酸。另外，为了修饰多肽的一个或多个氨基酸，多肽的主链还可被修饰以制 备如本文中所述的肽模拟物。在又一个方面，本发明提供本发明的至少一种多肽或肽模拟物在制备介导哺乳动 物中的胆固醇流出的药物中的应用。在示例性实施方案中，多肽具有选自SEQ ID NO 1-33 或者其肽模拟物的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述肽模拟物具有的三维构象基本上 与具有选自SEQ ID NO 1-33的氨基酸序列的多肽相同。在又一个方面，本发明提供本发明的至少一种多肽或肽模拟物在制备治疗哺乳动 物中动脉粥样硬化症状的药物中的应用。在示例性实施方案中，多肽具有选自SEQ ID NO 1-33或者其肽模拟物的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述肽模拟物具有的三维构象基 本上与具有选自SEQ ID NO 1-33的氨基酸序列的多肽相同。在又一个方面，本发明提供本发明的至少一种多肽或肽模拟物在制备稳定哺乳动
13物的易损性斑块的药物中的应用。在示例性实施方案中，多肽具有选自SEQ ID NOS 1-33 或者其肽模拟物的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述肽模拟物具有的三维构象基本上 与具有选自SEQ ID NO :1-33的氨基酸序列的多肽相同。本发明的另一个方面提供编码本发明多肽的分离的核酸、包含所述核酸的表达载 体和包含所述表达载体的宿主细胞。本发明的多肽和肽模拟物还可用作研究工具和/或诊断工具。例如，这种肽可用 于鉴别具有反向胆固醇缺乏血浆的对象和对反向胆固醇治疗起反应的那些对象。此外，本 发明的多肽可用于评价其他化合物(例如包括肽模拟物)的抗动脉粥样硬化潜能。另外，本发明的多肽或肽模拟物可用于研究动物和动物模型中的脂蛋白-受体相 互作用，特别是在本发明的多肽或肽模拟物被标记(例如，放射性标记、荧光标记等)时更 是如此。本发明的多肽或肽模拟物还可用于鉴别阐明脂质代谢途径的合适的动物模型。例 如，多肽或肽模拟物可用于鉴别对于胆固醇逆向转运有作用的动物模型以及基因和/或药 物相互作用。通过阅读下面的详细描述、实施例、权利要求和附图，本发明和其优选的实施方案 的其他特征、目的和优点将是明显的。


图1显示肽N257-11的螺旋轮状图。图2显示本发明的肽SEQ ID NO :2的螺旋轮状图和螺旋网状图(helical net diagram)。其中图A显示了展示所述肽的两亲性质的旋轮图。图B显示了展示所述肽沿极 性表面的长轴下切并展平的螺旋网状图。带阴影的圆圈指示酸性氨基酸，部分带阴影的圆 圈指示阳离子残基。两个图中的编号是指一级氨基酸序列。图3提供了显示SEQ ID NO 2对比全长apoA-I的胆固醇流出活性的数据。其中 图A显示胆固醇流出对浓度的依赖性(无脂质的SEQ ID NO 2肽(正方形)；无脂质的 载脂蛋白(apo)A-I (圆圈))。图B显示利用cAMP处理和不处理细胞确定的胆固醇流出对 ABCAl表达的依赖性。图4提供了数据显示，SEQ ID NO 2的将残基KS加到C端的22-聚体类似物刺激 ABCAl胆固醇流出。图5提供了数据证明，亮氨酸(L)或苯丙氨酸(F)能够置换SEQ ID NO 2中的色 氨酸(W)而不会不利影响ABCAl胆固醇流出活性的数据。其中图A显示响应所指出的肽的 处理，在培养基中出现的细胞[3H]胆固醇的百分比。图B显示胆固醇流出对肽浓度的依赖 性。图6提供了数据显示缬氨酸能够置换胆固醇流出肽的非极性表面上的缬氨酸，而 不会不利地影响活性。其中图A显示响应所指出的肽的处理，在培养基中出现的细胞『H] 胆固醇的百分比(8h)。图B显示胆固醇流出对肽浓度的依赖性。图7提供了数据显示，刺激ABCAl胆固醇流出受到肽中疏水性亮氨酸残基数量的 影响。其中图A显示响应所指出的肽的处理，在培养基中出现的细胞[3H]胆固醇的百分比。 图B显示胆固醇流出对肽浓度的依赖性。
图8提供数据显示，本发明的肽能够在非极性表面上用亮氨酸残基或亮氨酸和异 亮氨酸残基的组合进行改造，而不会不利影响ABCAl胆固醇流出活性。其中图A和B显示 响应所指出的肽的处理，在培养基中出现的细胞[3H]胆固醇的百分比。图C显示胆固醇流 出对肽浓度的依赖性。图9提供数据显示，本发明的肽能够在非极性表面上用数量渐增的苯丙氨酸进行 改造，而不会不利影响刺激ABCAl胆固醇流出的能力。其中图A显示响应所指出的肽的处 理，在培养基中出现的细胞[3H]胆固醇的百分比。图B显示胆固醇流出对肽浓度的依赖性。图10提供的数据显示，本发明的肽的亮氨酸和苯丙氨酸残基能够代替异亮氨酸 而不会不利地影响刺激ABCAl胆固醇流出的能力。其中图A显示响应所指出的肽的处理， 在培养基中出现的细胞[3H]胆固醇的百分比。图B显示胆固醇流出对肽浓度的依赖性。图11提供的数据显示，带正电荷的精氨酸能够置换肽中带正电荷的赖氨酸而不 会不利地影响刺激ABCAl胆固醇流出的能力。其中图A显示响应所指出的肽的处理，在培 养基中出现的细胞[3H]胆固醇的百分比。图B显示胆固醇流出对肽浓度的依赖性。图12提供的数据显示，带负电荷的天冬氨酸能够置换带负电荷的谷氨酸而不会 不利地影响刺激ABCAl胆固醇流出的能力。其中图A显示响应所指出的肽的处理，在培养 基中出现的细胞[3H]胆固醇的百分比。图B显示胆固醇流出对肽浓度的依赖性。图13提供的数据显示，天冬氨酸和谷氨酸残基在本文描述的肽中是可互换的，而 且任一种均可被用于与其它氨基酸置换进行组合。结果表示为利用SEQ ID NO :2肽获得的 对照活性的百分数(8h)。图14提供的数据显示，色氨酸(W)或苯丙氨酸(F)能够置换12位处的亮氨酸(L) 而不会不利地影响肽刺激ABCAl胆固醇流出的能力。其中图A和B显示响应所指出的肽的 处理，在培养基中出现的细胞[3H]胆固醇的百分比。图15提供数据显示，本本发明的肽肽肽能够以全部D-氨基酸或反向序列使用而 不会不利地影响刺激ABCAl胆固醇流出的能力。图15显示响应所指出的肽的处理，在培养 基中出现的细胞[3H]胆固醇的百分比。图16提供的数据显示，极性表面上的丙氨酸置换有利地增加了本发明的肽刺激 ABCAl胆固醇流出的能力。其中图A和B显示响应所指出的肽的处理，在培养基中出现的细 胞[3H]胆固醇的百分比。图C显示胆固醇流出对肽浓度的依赖性。图17提供的数据显示，丙氨酸能够置换精氨酸14 (R14)和谷氨酸18(E18)而不会 不利地影响刺激ABCAl胆固醇流出的能力其中图A显示响应所指出的肽的处理，在培养基 中出现的细胞[3H]胆固醇的百分比。图B显示胆固醇流出对肽浓度的依赖性。图18提供的数据显示，本发明的肽能够用磷脂配制，以产生通过ABCAl-依赖性 和-不依赖性机制支持高水平的细胞胆固醇流出的复合物。其中图A显示表明肽POPC 复合物的粒度的凝胶照片。图B显示肽POPC复合物的胆固醇流出活性。图19提供的数据显示本发明的肽在用高脂西式膳食喂养的载脂蛋白E-缺乏的小 鼠中减少已形成的动脉粥样硬化。其中图A显示对照和肽处理小鼠中动脉粥样硬化的程 度，表示为覆盖有病变的主动脉的百分比。图B显示主动脉窦斑块的脂质含量，通过油红0 染色确定。图20提供数据显示，使用氨基酸置换来赋予针对髓过氧物酶(MPO)来源的氧化产物的抗性。其中图A显示用和不用丙烯醛温育的SEQ IDNO :2肽的胆固醇流出活性。图B 显示SEQ ID NO 12肽的胆固醇流出活性。图21提供的数据显示，本发明的肽在人血浆中通过涉及不同HDL亚群的高度特异 性的机制，引起前β-IHDL形成。本发明示例性序列的简要说明SEQ IDNO :1 是
权利要求
1.分离的多肽，其包含下面的氨基酸序列^1^3^4^5^6^7^8^9^10^11^12^13^14^15^16^17^18^19^20 (SEQ ID NO l) 其中X1J7和X15是独立选自E和D的氨基酸； X4> X11和X18是独立选自E、D、A和G的氨基酸；X2> X6> X9> X10> X12> X13> X16> X17 和)(2。是独立选自 F、L、W、I、V 和 A 的氨基酸； X3、X5和X19是独立选R、K和C的氨基酸； X14是氨基酸R、A、E或C;并且 父8是々、6或V。
2.权利要求1的分离的多肽，其中)(1(1、)(12、&6和&7独立选自F、L、I和W。
3.权利要求2的分离的多肽，其中)(1(1、)(12、&6和&7独立选自F和L。
4.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中X9是L、F或W。
5.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中Wlvi和X17位的至少三个是L。
6.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中和X11位的一个或多个是A。
7.权利要求6的分离的多肽，其中)(8是八。
8.权利要求1的分离的多肽，其中X4、XU和X18独立选自D和E。
9.权利要求1的分离的多肽，其中C存在于选自X3、X5、X14*X19的一个位置。
10.权利要求1的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含 X1X2X3X4X5X6X7AX9X10X11X12X13X14X15X16X17X18X19X20(SEQ ID NO 27) 其中X1^X7>X15和Xw独立选自D和E ；&是L、I或V ；X4和X1Jil立选自D、E和A ；X3>X5和独立选自KiPR;X9 是 W、F 或 L ；X14是R、E或A;并且X6> X10> X12> X13> X16> X17 和 X^1 独立选自 F、L、I 和 W。
11.权利要求10的分离的多肽，其中)(1(1、)(12、)(13、)(16、乂17和)(2(1独立选自L和Fc
12.权利要求10的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含 X1LRAX5LX7AX9X10AX12X13RX15X16X17X18RX2O (SEQ ID NO 28), 其中X1^X7^X15和Xw独立选自D和E ；X5是K或R ；X9是F、L或W;并且x10> X12> x13> x16> X17 和 \收独立选自 F 禾口 L。
13.权利要求10的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含 X1LRX4X5LX7AX9X10X11X12X13RX15X16X17X18RX20 (SEQ ID NO 29)， 其中Xi> X4 > X7> X11^X15 和 Xw 独立选自 D 禾口 E ；X5是K或R ；X9是F、L或W;并且x10> X12> x13> x16> X17 和 \收独立选自 F 禾口 L。
14.权利要求13的分离的多肽，其中所述多肽包含ELR(D/E)(K/R)LEA(ff/F/L)(F/L)(D/E)L(F/L)RE(F/L)LER(F/L)(SEQ ID NO 30)。
15.前述权利要求任一项的分离的多肽，其还包含)(21，其中X21选自(、1(、￥或1^。
16.前述权利要求任一项的分离的多肽，其还包含)(22，其中^是S或C。
17.权利要求15的分离的多肽，其中X21是K。
18.权利要求17的分离的多肽，其中X22是S。
19.权利要求16的分离的多肽，其中X21或是C。
20.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中所述多肽还包含保护基团。
21.权利要求20的分离的多肽，其中保护基团是选自下列的保护基团乙酰基(Ac)、酰 胺、3至20个碳的烷基、Fmoc、叔丁氧羰基(Tboc)、9_芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴 酮-1-羧基、苄氧羰基、咕吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4_甲基三苯甲基(Mtt)、4_甲氧基三 苯甲基(Mmt)、4_甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲苯-2-磺酰基(Mts) ,4, 4-二甲氧二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Rnc)、 4-甲基苄基(MeBzl)、4_甲氧基苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰基(Bz)、 3-硝基-2-吡啶次磺酰基(Npys)、1_ (4，4-二甲基-2，6-二氧亚环己基)乙基(Dde), 2, 6-二氯苄基0，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧羰基(2-C1-Z)、2_溴苄氧羰基Q-Br-Z)、苄氧基甲 基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)和三氟乙 酰基(TFA)。
22.权利要求20或21的分离的多肽，其中保护基团与氨基或羧基末端连接。
23.权利要求20、21或22的分离的多肽，其中所述多肽包含与氨基末端连接的第一保 护基团和与羧基末端连接的第二保护基团。
24.权利要求23的分离的多肽，其中所述第一保护基团是选自乙酰基、丙酰基和3至 20个碳烷基的保护基团。
25.权利要求对的分离的多肽，其中所述第一保护基团是乙酰基。
26.权利要求23、24或25的分离的多肽，其中所述第二保护基团是酰胺。
27.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中全部对映体氨基酸是“D”氨基酸。
28.权利要求1至沈任一项的分离的多肽，其中对映体氨基酸是“L”氨基酸和“D”氨 基酸的混合物。
29.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中所述肽与具有权利要求1所显示的序列的第二肽连接。
30.权利要求四的分离的多肽，其中第二肽具有与第一肽相同的序列。
31.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中所述多肽具有胆固醇流出活性。
32.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中所述多肽诱导人血浆中的前形成。
33.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中所述多肽具有ABCAl稳定活性。
34.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中所述多肽保护磷脂免遭氧化剂的氧化。
35.前述权利要求任一项的分离的多肽，其中所述多肽与药学上可接受的载体混合。
36.与权利要求1至34任一项的多肽具有基本上相似的三维构造的肽模拟物。
37.权利要求36的肽模拟物，其中所述肽模拟物是反-转型类似物。
38.权利要求36的肽模拟物，其中所述肽模拟物是反-对映型类似物。
39.组合物，其包含权利要求1至34任一项的多肽或权利要求36至38任一项的肽模 拟物以及药学上可接受的载体。
40.权利要求39的组合物，其还包含治疗心血管疾病的治疗剂。
41.权利要求40的组合物，其中所述治疗剂选自他汀类、胆酸结合剂、血小板聚集抑制 剂、烟酰胺、PPAR激活剂、维生素E和其组合。
42.组合物，其包含与脂质复合的权利要求1至34任一项的多肽或权利要求36至38 任一项的肽模拟物。
43.权利要求42的组合物，其中所述脂质是磷脂。
44.权利要求42的组合物，其中所述脂质是1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-磷脂酰胆 碱(〃 POPC“)。
45.权利要求42至44任一项的组合物，其还包含药学上可接受的载体。
46.在哺乳动物中介导胆固醇流出的方法，所述方法包含给所述哺乳动物施用权利要 求1至34任一项的多肽，从而介导胆固醇流出。
47.权利要求46的方法，其中所述多肽稳定ABCA。
48.权利要求47的方法，其中所述ABCA是ABCAl。
49.权利要求46的方法，其中所述多肽具有抗氧化剂活性。
50.权利要求46的方法，其中所述多肽具有抗炎活性。
51.权利要求46的方法，其中所述哺乳动物是人类。
52.权利要求46的方法，其中所述哺乳动物是非人类哺乳动物。
53.治疗哺乳动物的动脉粥样硬化症状的方法，所述方法包含给哺乳动物施用治疗有 效量的权利要求1至；34任一项的多肽。
54.权利要求53的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为患有一种或多种动脉粥样硬化 症状的哺乳动物。
55.权利要求53的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为具有动脉粥样硬化风险的哺乳 动物。
56.权利要求53的方法，其中所述哺乳动物是人类。
57.权利要求53的方法，其中所述哺乳动物是非人类哺乳动物。
58.稳定哺乳动物管腔壁中易损性斑块的方法，所述方法包含给所述哺乳动物施用权 利要求1至34任一项的多肽。
59.权利要求58的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为具有一个或多个易损性斑块的 哺乳动物。
60.权利要求58的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为处于具有一个或多个易损性斑 块风险下的哺乳动物。
61.制备包含两亲性α-螺旋的多肽变体的方法，其中所述变体具有胆固醇流出活性 和/或ABCA稳定活性，所述方法包括(a)提供具有SEQ ID NO 2的氨基酸序列的多肽；(b)取代所述多肽的至少一个氨基酸位置以产生多肽变体；(d)筛选所述多肽变异体的胆固醇流出活性和/或ABCA稳定活性；(e)选择胆固醇流出活性为具有SEQID NO :2氨基酸序列的多肽的至少80%的所述多 肽变体和/或选择ABCA稳定活性为具有SEQ ID NO :2氨基酸序列的多肽的至少80%的所 述多肽变体；以及(f)合成所选择的多肽变体。
62.权利要求61的方法，其中所述多肽变体包含至少一个D氨基酸。
63.权利要求61的方法，其中所述多肽变体的羧基末端包含D氨基酸和所述多肽变体 的氨基末端包含D氨基酸。
64.权利要求61的方法，其中所述多肽变体全部包含D氨基酸。
65.治疗动脉粥样硬化症状的药剂盒，所述药剂盒包含容器，所述容器包含权利要求1 至34任一项的多肽或权利要求36至38任一项的肽模拟物。
66.权利要求65的药剂盒，其还包含药学上可接受的载体。
67.权利要求65的药剂盒，其中所述多肽在单位剂量制剂中与药学上可接受的载体组
68.权利要求1至34任一项的分离的多肽或权利要求36至38任一项的肽模拟物，其 用作药剂。
69.权利要求1至34任一项的分离的多肽或权利要求36至38任一项的肽模拟物，其 用于治疗与血脂异常有关的疾患。
70.权利要求1至34任一项的分离的多肽或权利要求36至38任一项的肽模拟物，其 用于治疗胆固醇流出疾患。
71.权利要求1至34任一项的分离的多肽或权利要求36至38任一项的肽模拟物，其 用于治疗高胆固醇血症。
72.权利要求1至34任一项的分离的多肽或权利要求36至38任一项的肽模拟物，其 用于治疗炎症。
73.权利要求1至34任一项的分离的多肽或权利要求36至38任一项的肽模拟物，其 用于治疗动脉粥样硬化或用于预防动脉粥样硬化症状的治疗。
74.权利要求1至34任一项的分离的多肽或权利要求36至38任一项的肽模拟物，其 用于稳定斑块的治疗。
75.权利要求1至34任一项的分离的多肽或权利要求36至38任一项的肽模拟物在体 外结合ABCA中的应用。
76.包含权利要求1至34任一项的分离的多肽或权利要求36至38任一项的肽模拟物 的可检测的亲和配体，其直接或间接与可检测的部分连接。
77.权利要求76的可检测的亲和配体，其中所述标记选自荧光染料、金属、发色染料、 化学发光化合物、生物发光蛋白、酶、放射性同位素、磁铁氧化物粒子、含气囊泡和量子点。
全文摘要
本发明提供了一族非天然存在的多肽，其具有与全长载脂蛋白(例如，Apo AI和Apo E)相似的胆固醇流出活性，并具有与全长载脂蛋白相似的对ABAC1的高选择性。本发明还提供了包含这样的多肽的组合物，鉴别、筛选和合成这样的多肽的方法，以及治疗、预防或诊断与血脂异常、高胆固醇血症和炎症有关的疾病和疾患的方法。
文档编号A61K38/00GK102123722SQ200980132418
公开日2011年7月13日 申请日期2009年6月17日 优先权日2008年6月18日
发明者简·约翰松, 约翰·K·别利茨基 申请人:加利福尼亚大学董事会