专利名称：用于治疗和预防获得性免疫缺陷综合症(aids)和其变体的含有节莎草的水溶性抗病毒产品的制作方法
用于治疗和预防获得性免疫缺陷综合症(AIDS)和其变体 的含有节莎草的水溶性抗病毒产品本发明涉及一种基于节莎草(Cyperus Articulatus)植物的叶片的抗病毒产品， 其可溶于水，具有溶解病毒和抑制病毒的能力。其打算用于治疗和预防获得性免疫缺陷综 合症(AIDQ和其变体。AIDS是一种影响了全球、尤其是非洲国家的传染性疾病。人们已 经注意到，AIDS经常伴随有淋巴结病综合症，而在这种疾病的末期，患者的免疫防御陷入崩 溃。1983年，来自巴斯德研究所(Institut Pasteur)的吕克蒙塔尼(Luc Montagnier)教 授分离出了造成这一大范围传染病的病原体。根据本发明人所了解的现有技术，能够确认以下文献OAPI专利第09043号，1991年3月31日授予约瑟夫克鲁兹(Jos印hCruz)，涉及基 于含羞草(Mimosa Pudica Linn)叶片提取物的新颖抗病毒组合物。OAPI专利第11602号， 授予埃瑞克-格布杜索博士(Dr. ErickGbodossou)，涉及含五种植物(胶苦瓜(Momordica Balsamina)、天堂椒(Aframomum Melegueta)、节莎草、埃特榕木(Ficus Iteophylla)和酸 豆(Tamarindus Indica))的提取物的组合物。在博士的治疗过程中，所吸收的产品去除 粪便和尿液中的AIDS病毒。其它文献包括1994年9月授予美国制药康公司(Wiarmakon USA, Inc)的专利 WO 94/18993 ； 1992 年 4 月 16 日授予纽约大学(New York University) 的专利US 5484889 ；2000年6月22日授予帕雅生物技术公司(Paya Biotechnic Inc.)的 专利WO 0035466 ；和1999年3月23日授予克帕尔S.达利沃(Kirpal S. Dhaliwal)的专 利US5886029。当前针对AIDS病毒进行的所有研究在疫苗，或是杀死体内的病毒方面都未 能发展。当前的抗逆转录病毒药物使病原体突变成致病力更强的病毒。在这种大范围传染 病存在的二十多年里，为了找到疫苗，抗病毒剂，研究所、政府和非政府组织、联合国机构， 简单地说，所有的科技、政治、文化和民间社会团体，都经常与世界卫生组织(World Health Organization)或者其它合作者和资金供应者展开合作，投入了这场针对HIV/AIDS的战 斗。使用如叠氮胸苷(AZT)、DDC、3TC、AZT/3C和茚地那韦(indinavir)等抗病毒物质 治疗HIV的常规方法使得血浆病毒载量降低到最低水平，并保持尽可能长的时间。得到的 结果即使为阳性的，也仍很有限。平均起来，有50%的患者在治疗大约12个月后观察到血 浆病毒载量降到50个拷贝/毫升。然而，在当前的研究状态中，通过使用抗逆转录病毒药 物仍未解决的问题持续存在，尤其是不可能完全根除病原体。即使当CD4淋巴细胞含量已经实质上增加，但由于抗逆转录病毒药物的持续毒性 尚未解决，致使免疫修复意义不大。其它问题通过使用抗逆转录病毒药物也未得到解决，例如早期发展抗逆转录病毒 药物抗性的风险，以及关于治疗功效持续时间的不确定性。与使用当前的抗逆转录病毒药 物相关的约束也应引起注意，因为患者每天需要摄取约20种产品，而这对于最广泛地暴露 于HIV/AIDS感染的非洲人群的购买力来说，成本太高。而且，就当前技术进展而言，还没有 具有水溶性的可注射的抗逆转录病毒产品。目前还不知道此类的产品。推荐的一种预防措 施是使用避孕套；我们知道，避孕套的使用不仅限制了生育，而且知道，它并非完全有效。国际社会越来越清楚地意识到需要使医务人员进行HIV的预防和号召使用传统医学。本发明 的产品是基于节莎草植物的叶片，其可溶于水，具有溶解病毒和抑制病毒的能力。塞内加尔 (Senegal)的科研部门(ScientificResearch Department)已经从植物学、药理学和化学 方面对这种植物进行了研究，而且莫尔豪斯医学院(Morehouse School of Medicine)(美 国乔治亚州亚特兰大(Atlanta，GA, USA))基于本发明人开发的参照系统对这种植物的提 取物进行了分析。I-棺物学、药理学和化学研究棺物名称节莎草棺物学方面多年生种子的草本植物，根茎型，具有直立的圆柱形茎干，高度可达1.75米，直径 达8毫米。在茎干上生长的叶片逐渐变小，成为种子。花呈伞形，具有不规则花梗。化学方面化学分析得到倍半萜烯和倍半萜烯醇，具有轻微的气味。检测到呈二硝基_2，4苯 腙形式的香附烯酮(Cyperenone)，命名为4-异广藿香烯(isopatchoulene-4)。它能够通 过促进HIV病毒经尿液和粪便排出，来去除各种受感染组织中的病毒。药理学方面其叶片具有医疗作用。节莎草叶片的芳香特性会使全身产生热扩散感，而且此植 物可在消化不良病症中充当镇静剂。II-节莎草的体外研究将干燥并磨成粉的叶片提供给莫尔豪斯医学院(美国乔治亚州亚特兰大)的病毒 学小组，以便基于本发明人的参照系统验证其对所述病毒和其变体的体外活性。A-目的本研究涉及确定节莎草提取物是否能阻断AIDS病毒的复制，以及干燥的节莎草 粉末是否能溶于水。本研究也旨在研究所述产品对感染获得性免疫缺陷综合症(AIDS)病 毒和其变体的细胞的直接作用。B-实施测试将叶片提取物的可溶部分混入Img所述病毒(NL4-3KFS)的pM等效物中。最初 测试的病毒与提取物为IOmg病毒相对于1微克提取物。必须针对当前的应用测试提取物， 并说明其对病毒的直接作用。所述作用可包括阻断病毒gpl20的包膜蛋白，或溶解病毒包 膜中所含的脂质。或者，活性成分可能整合病毒粒子，并影响病毒壳体或催化蛋白质，如逆转录、蛋 白酶或整合酶。在与提取物一起预先培育15分钟后，需要将提取物/病毒混合物添加到提供支持 的组织培养物中。病毒必须在37°C温度下吸收提取物30分钟。随后，用PBS洗涤培养物 3次，最后保存在冷培养基中。在初始研究中，需要使用具有MAGI指示剂的细胞，这些细胞 是设计成将被HIV-I感染的HeLa细胞。感染后，这些细胞产生半乳糖苷酶，其可在感 染发展时检测呈蓝色。经处理的蓝色细胞与未经处理的细胞的数量的比较，将相对地指示 抑制作用。初始研究中使用的病毒不应具有任何抑制作用，并因此仅限于细胞感染的单一 步骤。此单一细胞感染步骤远不能成为确定与感染相关的作用的最具指示性的方法。在这些测试中，重要的是确立适宜的剂量，即，对细胞无毒，而且仍含有最大浓度的可溶物质。如 果在初始测试中发现了抗逆转录病毒活性，那么必须确定影响的是病毒生命周期的哪一部 分。可以使用特定的病毒分离株和“指示剂”细胞来确定病毒进入的相对性能。如果病毒 进入是完整的，那么有可能使用PCR测试，通过检测前病毒DNA形成的各个步骤，来确定逆 转录受影响的程度。产生完整病毒粒子的能力可使用标准P24ELISA测试直接测定，而病毒 成熟则可由病毒粒子中存在的多数病毒蛋白来测定。也需要至少能够初步确定可溶物质的 性质。蛋白酶提取物处理能够确定该提取物中存在的蛋白质是否是产生所述活性的原因。基于这些目的和指导，进行了实验。III-针对产品特征鉴定的实验A-节莎草提取物的溶解件将1克干燥的节莎草粉末在经100%甲醇灭菌的蒸馏水中浸软，并在室温下静置1 小时。随后，使得到的溶液通过装有0. 45微米过滤器的灭菌设备，以便截留残余的不可溶 物质。可溶部分中不含细菌。开始时存在于干物质中的物质完全被溶解。得到的溶液的 最大浓度为每毫升约IOOmg干粉。B-产品对警感染细胞的作用-为了确定可溶性提取物是否具有任何抗病毒活性，使用典型的MAGI细胞来测试 其对受感染细胞的作用。-利用HeLa细胞对MAGI细胞进行遗传修饰，所述HeLa细胞含有包括病毒LTR的 报告基因盒，其位于大肠杆菌β-gal的编码基因的上游。-所述基因的表达取决于HIV蛋白Tat的活化，而这需要感染HIV。-受感染的细胞变蓝，并且可以在显微镜下进行计数。-用IngHIV KFS病毒接种两块板。-同时，将200μ 1提取物添加到细胞中，并培育2小时。-洗涤细胞2次，并将提取物放回冷培养基中。在产品提取物存在下，感染48小时 的细胞消失了。根据此观察结果，可以确定，该提取物直接对病毒作用，而且主要影响受感染的靶 细胞。为此，进行以下测试。再建立两块含有未受感染的活细胞的板。一块板作为对照。将基于节莎草的抗病 毒产品引入第二块板中。30分钟后，将AIDS病毒注入含有MAGI测试细胞的该第二块板中， 随后恢复至培育温度。这些活细胞没有变蓝，即，它们未受感染。这一实验使我们得出以下结论-该产品具有抗病毒活性。-该产品使病毒灭活。-该产品破坏感染获得性免疫缺陷综合症(AIDQ病毒和其变体的细胞。C-混合产品的SELDI质谱分析研究该产品后发现，活性成分并不复杂，其中分子的大小为小于10，OOODa，并显示 出对蛋白酶处理的抗性。IV-结果
这些不同的实验证实，所述产品-具有抗病毒活性，-对感染AIDS病毒的细胞有毒并具有破坏性作用，-使病毒失活，并且呈现抑制病毒的能力，-可溶于水，-不复杂，分子大小为小于10，OOODa，并显示出对蛋白酶处理的抗性。本发明的用于治疗和预防获得性免疫缺陷综合症(AIDS)和其变体的基于节莎草 的抗病毒产品制备如下。收集节莎草的叶片，然后自然干燥，并磨成细粉；将干粉在经100%甲醇灭菌的水 中浸软；接着，使溶液通过直径为45微米的过滤器，产生可抗病毒、溶解病毒、抑制病毒且 可溶于水的产品。所述产品可用作阴道杀微生物剂，而且也可以任何其它形式使用。体外测试表明，所得溶液阻断获得性免疫缺陷综合症(AIDQ病毒和其变体的发 展，并且间接刺激和增加网状内皮组织系统，由此增强患者的免疫防御能力。
权利要求
1.一种用于治疗用途的基于节莎草(Cyperus Articulatus)的抗病毒产品和其制备 方法，所述治疗用途是用于治疗和预防获得性免疫缺陷综合症(AIDQ和其变体。
2.根据权利要求1所述的产品，其特征在于，所述制备方法含三个步骤a)第一步，收集干燥的节莎草叶片磨成细粉，b)第二步，将所述节莎草叶片的粉末在经100%甲醇灭菌的水中浸软，c)第三步，使所述溶液通过0.45微米的过滤器。
3.根据权利要求2所述的产品，其特征在于，其可溶于水。
4.根据权利要求2所述的产品，其特征在于，其具有抗病毒活性。
5.根据权利要求2所述的产品，其特征在于，其对感染获得性免疫缺陷综合症(AIDS) 和其变体的细胞有毒并具有破坏性作用。
6.根据权利要求2所述的产品，其特征在于，其使所述病毒灭活，并具有抑制病毒的能力。
7.根据权利要求2所述的产品，其特征在于，其不复杂，分子大小为小于10，000Da，并 显示出对蛋白酶处理的抗性。
8.根据权利要求1至7任意一项所述的产品，其特征在于，其刺激网状内皮组织系统。
9.根据权利要求1至8任意一项所述的产品，其特征在于，其可用作阴道杀微生物剂并 且可以任何其它形式使用。
10.根据任意一项前述权利要求所述的产品，其特征在于，所述节莎草叶片提取物的浓 缩和纯化是根据化学和生物化学中所用的常规方法进行。
全文摘要
本发明涉及一种基于节莎草的抗病毒产品，其可溶解病毒、抑制病毒，可溶于水，适用于治疗和预防获得性免疫缺陷综合症(AIDS)和其变体。所述抗病毒产品制备如下收集节莎草的叶片，自然干燥，并磨成细粉；将干粉在经100％甲醇灭菌的水中浸软；接着，使溶液通过直径为0.45微米的过滤器，产生可抗病毒、溶解病毒、抑制病毒且可溶于水的灭菌的产品。不同的实验证实，所述产品具有抗病毒活性，对感染AIDS病毒的细胞有毒并具有破坏性作用，使所述病毒失活，并且呈现具有抑制病毒的能力，可溶于水，不复杂，分子大小为小于10,000Da，并显示出对蛋白酶处理的抗性。
文档编号A61P31/18GK102131512SQ200980133500
公开日2011年7月20日 申请日期2009年3月31日 优先权日2009年3月31日
发明者埃里克·维德金·阿格尼·格博多苏 申请人:埃里克·维德金·阿格尼·格博多苏