专利名称：反义组合物及其制备和使用方法
反义组合物及其制备和使用方法相关申请本申请要求2008年11月12日提交的申请EP08425727. 8和2009年2月1日提交的U. S. S. N 61/152, 297的优先权，将其完整引入本文作为参考。背景溃疡性结肠炎和克罗恩病是人体慢性炎性肠病(IBD)的主要形式。肠病是发生在遗传易感性个体中的作为环境因素、微生物因素和肠免疫系统中复杂相互作用结果的不适当的免疫应答。已经证实不适当受到正常反向调节机制控制的对粘膜抗原的过度免疫应答导致慢性肠炎。克罗恩病是胃肠道的慢性复发性炎症疾病，其特征在于节段透壁炎症和肉芽肿改变。典型表现包括不连续牵连胃肠道的不同部分和发生并发症，包括狭窄、脓肿或瘘。因为不了解其原因，所以对克罗恩病的医学处置主要凭借经验并且为减轻炎症而设计。医学疗法包括皮质类固醇、抗生素、免疫抑制药和抗-TNF α药。由于目前疗法的治疗失败和严重的副作用，所以需要可替代选择的疗法。IBD发病机制中的重要作用由TGF-β 1发挥，其为能调节免疫和非免疫细胞生长、 分化和功能的多功能细胞因子。认为固定对炎症刺激的有效反向调节TGF-β 1应答的能力下降与疾病如IBD的发病机制相关。TGF-β 1起粘膜炎症有效负调节剂的作用并且抑制其活性导致结肠炎发生，这显示与克罗恩病或溃疡性结肠炎的免疫形态学相似性。在具有IBD的患者的发炎的肠中，存在显著的Smad7(作为TGF-β 1受体底物的蛋白质)超表达和Smad 3磷酸化减少，即TGF-β 1介导的信号传导中的决定性步骤。因此， 在IBD中，高水平的Smad7可以导致有缺陷的TGF-β 1信号传导，从而导致促炎分子基因超表达且TGF-β 1不能发挥其抗炎作用。反义寡脱氧核苷酸药物是短链DNA核苷酸，其通过特异性结合负责驱动导致疾病的蛋白质产生的信使RNA(mRNA)的小压段抑制蛋白质翻译。将反义药物的序列设计成与其 mRNA靶互补，使得在杂交时，得到的双链压段被细胞识别为异常的并且被破坏，由此防止信息被翻译成蛋白质产物。然而，典型地通过胃肠外给予反义治疗剂，这可能因全身效应而产生不良反应。这种给药还可能不能集中在需要治疗的部位上。因此，对使用基于片剂的制剂治疗IBD和相关疾病的反义治疗的局部样施用存在需求。概述本说明书至少部分涉及用于针对SMAD7的反义寡核苷酸如反义寡核苷酸的口服给药的药物制剂。在一个实施方案中，提供了用于反义寡核苷酸口服给药的药物片剂，其包含颗粒内相，其中颗粒内相包括反义寡核苷酸，如SEQ ID NOl表示的反义寡核苷酸或其药学可接受的盐(如钠盐)和药学可接受的填充剂，且还可以包括颗粒外相，其可以包括药学可接受的赋形剂，如崩解剂。关注的寡核苷酸包括SEQ ID NO 1表示的那些，其中至少一种或在某些实施方案中全部核苷酸间键合是0，0-连接的硫代磷酸类。
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本说明书提供了包括公开的反义寡核苷酸和包含肠溶衣的片剂。这种片剂可以包括，例如填充剂、崩解剂和/或润滑剂。例如，本文提供了口服剂型，如片剂，其包含约 35mg-约500mg的反义寡核苷酸，例如40mg的SEQ ID NO 1表示的寡核苷酸或其药学可接受的盐。在一个实施方案中，本文提供了用于口服应用的片剂，包含约0.5% -约10%重量的SEQ ID NO 1表示的反义寡核苷酸或其药学可接受的盐；约30%-约50%重量的甘露糖醇；和约10% -约30%重量的微晶纤维素。例如，本说明书提供了用于口服应用的药学可接受的片剂，包含颗粒内相和颗粒外相，其中，例如，颗粒内相包含约5% -约10%重量的(例如约8%重量)的SEQ ID NO 1表示的反义寡核苷酸或其药学可接受的盐、约40%重量的甘露糖醇、约8%重量的微晶纤维素、约5%重量的羟丙基甲基纤维素和约2%重量的羟基乙酸淀粉钠；和例如，颗粒外相， 其包含约17%重量的微晶纤维素、约2%重量的羟基乙酸淀粉钠和约0. 4%重量的硬脂酸镁，其中该片剂还可以包含肠溶衣。本文还提供了克罗恩病、溃疡性结肠炎和慢性炎性肠病的治疗方法，包括对有此需要的患者给予本文公开的片剂、口服剂型或药物制剂。例如，在口服对患者给予所述药物制剂、片剂或口服剂型时，该药物制剂、片剂或口服剂型基本上被递送至患者终末回肠和/ 或右结肠。附图简述
图1描述了本文公开为ASl的反义化合物分子结构。图2是ASl制备方法的流程图。图3是描述3. 5mg ASl剂量强度的粒度分布的棒形图。图4是描述35mg ASl剂量强度的粒度分布的棒形图。图5是描述250mg ASl剂量强度的粒度分布的棒形图。图6是呈现三种不同剂量强度的ASl在三种不同介质(pH 1. 0、ρΗ 6. 6和pH 7.2) 中的溶出特性(作为片剂溶解百分比)的线性示意图。图7描述了本文所述的批量的溶出特性。详细描述本说明书总地涉及药物组合物，其包括反义寡核苷酸，如图1中所示的。关注的组合物包括针对Smad7起作用且可以口服给药的寡核苷酸。公开的组合物在口服给药时可以将有效量的反义寡核苷酸递送至患者肠系统，例如将有效量的反义寡核苷酸递送至患者终末回肠和/或右结肠。关注的反义寡核苷酸包括包含SEQ ID NO IGTC * GCC CCTTCT CCC C * GC AGC的那些，其中C*表示5-甲基-2'-脱氧胞苷。在一些实施方案中，关注的反义寡核苷酸的至少一种核苷酸间键合是0，0_连接的硫代磷酸类，例如，SEQ ID NO :1的20个核苷酸间键合各自可以是0，0_连接的硫代磷酸。在一些实施方案中，本文公开的关注的组合物可以包括 SEQ ID NO :1的反义寡核苷酸的药学可接受的盐，例如钠盐，其可以任选地包括1-20个0， 0-连接的硫代磷酸核苷酸间键合。关注的寡核苷酸盐包括完全中和的那些盐，例如，每个硫代磷酸键与离子如Na+结合。寡核苷酸可以包括天然存在的核碱基、糖类和共价核苷酸间 (骨架)键合以及非天然存在的部分。本文称作ASl的典型的反义寡核苷酸如图1所示。
在一些实施方案中，本文关注适合于反义寡核苷酸口服递送的组合物，例如片剂， 其包括肠溶衣，例如，胃耐受性包衣层，使得该组合物可以将反义化合物递送至例如患者终末回肠和右结肠。例如，这种给药可以产生局部效应，基本上局部将反义化合物直接施用于患者肠的受侵害部分。在一些实施方案中，这种给药基本上可以避免反义化合物不需要的全身吸收。例如，提供用于口服给药的片剂，其包含颗粒(例如，至少部分由颗粒形成的)，其包括公开的反义化合物，例如，AS1，和药学可接受的赋形剂。这种片剂可以被肠溶衣包衣。 关注的片剂可以包括药学可接受的赋形剂，如填充剂、粘合剂、崩解剂和/或润滑剂以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂如冬青油、橙、木糖醇、山梨醇、果糖和麦芽糖糊精和芳香剂、防腐剂和/或抗氧化剂。在一些实施方案中，关注的药物制剂包括颗粒内相，其包括关注的反义化合物，例如，SEQ ID NO. 1中所示的，或药学可接受的盐，例如，AS1，和药学可接受的填充剂.例如， 可以将ASl和填充剂任选地与其他赋形剂一起掺合并且形成颗粒。在一些实施方案中，可以使用湿法制粒形成颗粒内相，例如将液体(例如，水)加入到掺合的反义化合物和填充剂中，然后干燥、研磨和/或过筛组合，产生颗粒。本领域技术人员可以理解其他方法可以用于形成颗粒内相。在一些实施方案中，关注的制剂包括颗粒外相，其可以包括一种或多种药学可接受的赋形剂并且可以与颗粒内相掺合以形成公开的制剂。公开的制剂可以包括颗粒内相，其包括填充剂。典型的填充剂包括、但不限于纤维素、明胶。磷酸钙、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨醇、微晶纤维素、果胶、聚丙烯酸酯类、右旋糖、醋酸纤维素、羟丙基甲基纤维素、部分预胶化淀粉、碳酸钙等，包括其组合。在一些实施方案中，公开的制剂可以包括颗粒内相和/或包括粘合剂的颗粒外相，其一般可以起使药物制剂的成分结合的作用。本发明包括的典型的粘合剂可以是、但不限于如下淀粉、糖类、纤维素或改性纤维素如羟丙基纤维素、乳糖、预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、低取代的羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、 甲基纤维素、乙基纤维素、糖醇类等，包括其组合。例如，包括颗粒内相和/或颗粒外相的关注的制剂可以包括崩解剂，诸如，但不限于淀粉、纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、羟基乙酸淀粉钠、羧甲基纤维素钠、藻酸盐、玉米淀粉、交联羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素、低取代的羟丙基纤维素、阿拉伯树胶等，包括其组合。例如，颗粒内相和/或颗粒外相可以包括崩解剂。在一些实施方案中，关注的制剂包括颗粒内相，其包含公开的反义化合物和选自如下的赋形剂甘露糖醇、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟基乙酸淀粉钠或其组合；和颗粒外相，其包含一种或多种微晶纤维素、羟基乙酸淀粉钠和硬脂酸镁或其混合物。在一些实施方案中，关注的制剂可以包括润滑剂，例如颗粒外相可以包含润滑齐U。 润滑剂包括、但不限于滑石粉、二氧化硅、脂肪、硬脂精、硬脂酸镁、磷酸钙、二氧化硅、硅酸钙、磷酸钙、胶态二氧化碳、金属硬脂酸盐、氢化蓖麻油、玉米淀粉、苯甲酸钠、聚乙二醇、乙酸钠、硬脂酸钙、十二烷基硫酸钠、氯化钠、月桂基硫酸镁、滑石和硬脂酸。在一些实施方案中，药物制剂包含肠溶衣。一般而言，肠溶衣建立用于口服给药的屏障，其控制药物沿消化道吸收的位置。肠溶衣可以包括根据PH以不同速率崩解的聚合
6物。肠溶衣可以包括，例如，醋酸邻苯二甲酸纤维素、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、醋酸琥珀酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物C型、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯和醋酸邻苯二甲酸纤维素。典型肠溶衣包括Opadry AMB、Acryl-EZE 、Eudragit 级。在一些实施方案中，肠溶衣可以占关注的片剂重量的约5% -约10%、约5% -约20%、8-约15%、约 8% -约18%、约10% -约12%或约12-约16%。例如，肠溶衣可以包括丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸共聚物。例如，提供片剂，其包含约0.5% -约70%例如约0.5% -约10%或约-约 20%重量的反义寡核苷酸或其药学可接受的盐(例如ASl)或主要由其组成。这种片剂可以包括，例如，约0.5% -约60%重量的甘露糖醇，例如约30% -约50%重量的甘露糖醇，例如，约40%重量的甘露糖醇和/或约20% -约40%重量的微晶纤维素或约10% -约30% 重量的微晶纤维素。例如，公开的片剂可以包含颗粒内相，其包括约30% -约60%例如约 45% -约65%重量或约5-约10%重量的ASU^J 30% -约50%或约5% -约15%重量的甘露糖醇、约5% -约15%的微晶纤维素、约0% -约4%或约-约7%的羟丙基甲基纤维素和约0% -约4%例如约2% -约4%的羟基乙酸淀粉钠(重量)。典型制剂包括剂型，其包括约35mg_约500mg的ASl或主要由其组成，例如，包括约 35mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、150mg、200mg 或 250mg 的 ASl 的片剂是本文关注的。在典型的实施方案中，提供了用于口服给药的药学可接受的片剂，其包括颗粒内相，其可以包含约50%重量的ASl (或其盐)、约11. 5%重量的甘露糖醇、约10%重量的微晶纤维素、约3%重量的羟丙基甲基纤维素和约2. 5%重量的羟基乙酸淀粉钠；和颗粒外相，其可以包含约20%重量的微晶纤维素、约2. 5%重量的羟基乙酸淀粉钠和约0. 5%重量的硬脂酸镁。该片剂还可以包括肠溶衣。在另一个典型的实施方案中，提供了用于口服给药的药学可接受的片剂，其包括颗粒内相或主要由其组成，所述颗粒内相可以包含约5% -约10%例如约8%重量的 ASl (例如，其中核苷酸间键合各自是0，0-连接的硫代磷酸类和/或其盐，例如钠盐)、约 40%重量的甘露糖醇、约8%重量的微晶纤维素、约5%重量的羟丙基甲基纤维素和约2. % 重量的羟基乙酸淀粉钠或主要由其组成；和颗粒外相，其可以包含约17%重量的微晶纤维素、约2%重量的羟基乙酸淀粉钠和约0. 4%重量的硬脂酸镁。公开的片剂还可以包括肠溶衣，例如，公开的片剂可以包括约13%、约15%、 16%,17%重量的肠溶衣，例如AcyrlEZE 。包衣层溶解且活性成分释放时的速率是其溶出速率。在一个实施方案中，例如，当用USP/EP 2型仪器(桨式)以IOOrpm和37°C在pH 7. 2的磷酸盐缓冲液中测试时，关注的片剂可以具有约120分钟-约240分钟后，例如180分钟后约50% -约100%寡核苷酸释放的溶出特性。在另一个实施方案中，例如，当用USP/EP 2型仪器(桨式)以IOOrpm和 37°C在pH 1.0的稀HCl中测试时，关注的片剂可以具有120分钟后基本上无寡核苷酸释放的溶出特性。例如，当用USP/EP 2型仪器(桨式)以IOOrpm和37°C在pH 6. 6的磷酸盐缓冲液中测试时，关注的片剂可以具有30分钟后约10% -约30%或不超过约50%寡核苷酸释放的溶出特性。在一些实施方案中，当对患者口服给药时，公开的制剂，例如片剂，可以在患者体内产生最低寡核苷酸血浆浓度。在另一个实施方案中，当对患者口服给药时，公开的制剂典型地递送至患者终末回肠和/或右结肠，例如递送至患者受侵害或患病的肠部位。本文还提供了治疗需要的患者中罗恩病、溃疡性结肠炎和/或慢性炎性肠病的方法，包括给予公开的制剂。
实施例如下实施例不以任何方式限制本发明的范围，而提供它们是为了说明本发明的方法。本发明的许多其他实施方案对本领域技术人员而言显而易见。实施例I-片剂通过桨每一颗粒内成分分配于适合的容器制备湿颗粒。使全部颗粒内物质通过 710 μ m筛过筛，在食物加工机钵中掺合约5分钟。使用注射器缓慢加入水制粒流体。使湿团通过2. OOmm手动筛，在40°C在烘箱内干燥至多90分钟。干燥后，使颗粒通过1. OOmm手动筛。使用乳钵和研杵减小粗颗粒大小。使用Turbula掺合机以42rpm将颗粒与除硬脂酸镁外的颗粒外赋形剂掺合10分钟。将硬脂酸镁加入到掺合物中，再以42rpm混合2分钟。 用Manesty F3单冲压制机压制制剂。可以在图2中观察到ASl片剂的总体制备过程流程图。以50g批量大小制备的基于甘露糖醇的250mg剂量强度制剂具有5. 21%的干燥混合物含水量和6. 42%的干燥颗粒的含水量。基于甘露糖醇的250mg剂量强度制剂具有 5. Og加入的水、4分钟的制粒时间和60分钟的干燥时间。以IOOg批量大小制备的基于甘露糖醇的35mg剂量强度制剂具有2. 35%的干燥颗粒的含水量、28g加入的水、6分钟的制粒时间和65分钟的干燥时间。基于甘露糖醇的250mg剂量强度制剂的压制IPC结果如下平均重量453. Omg,硬度18. OKp，厚度3. 82mm，脆碎度0. 23%和崩解时限17分钟。表IA包括三种剂量强度3. 5mg、35mg和250mg的片剂组合物。所有制剂的片重都是500mg。表 IA
材料3. 5mg(% w/w)35mg(% w/w)250mg (% w/w)颗粒内ASl活性成分0. 77. 050. 0甘露糖醇57. 851. 511. 5微晶纤维素10. 010. 010. 0
权利要求
1.用于反义寡核苷酸口服给药的药物片剂，包含颗粒内相，其包含SEQID NO 1表示的反义寡核苷酸或其药学可接受的盐和药学可接受的填充剂；和颗粒外相，其包含崩解剂。
2.权利要求1的药物片剂，其中SEQBD NO 1的寡核苷酸间键合是0，0-连接的硫代磷酸酯类。
3.权利要求1或2的药物制剂，其中反义寡核苷酸是SEQID NOl的钠盐。
4.权利要求1-4任一项的药物片剂，其中颗粒内相还包含崩解剂。
5.权利要求1-4任一项的药物片剂，其中颗粒外相还包含润滑剂。
6.权利要求1-5任一项的药物片剂，其中填充剂是甘露糖醇。
7.权利要求1-6任一项的药物片剂，其中崩解剂是羟基乙酸淀粉钠。
8.权利要求1-7任一项的药物片剂，其中润滑剂是羟基乙酸淀粉钠。
9.权利要求1-8任一项的药物片剂，其中颗粒内相还包含选自微晶纤维素、羟基乙酸淀粉钠、羟丙基甲基纤维素及其混合物的成分。
10.权利要求1-9任一项的药物片剂，其中颗粒外相还包含选自微晶纤维素和硬脂酸镁及其混合物的成分。
11.权利要求1-10任一项的药物片剂，还包含肠溶衣。
12.权利要求11的片剂，其中所述肠溶衣占片剂的约12%-约16%重量。
13.权利要求11或12的片剂，其中所述肠溶衣包含丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸共聚物。
14.权利要求1-13任一项的药物片剂，其中当对患者口服给药时，在患者体内产生基本上最低的寡核苷酸血浆浓度。
15.权利要求1-14任一项的片剂，其中当对患者口服给药时，导致反义寡核苷酸基本上递送至终末回肠和/或右结肠。
16.用于口服应用的药学可接受的片剂，包含约0.5%-约10%重量的SEQID NO 1 表示的反义寡核苷酸或其药学可接受的盐；约30% -约50%重量的甘露糖醇；约10% -约 30%重量的微晶纤维素。
17.口服剂型，包含约35mg-约500mg的SEQ ID NO 1表示的反义寡核苷酸或其药学可接受的盐。
18.用于口服应用的药学可接受的片剂，包含颗粒内相，其包含约5-约10%重量的 SEQ ID NO 1表示的反义寡核苷酸或其药学可接受的盐；约40%重量的甘露糖醇、约8%重量的微晶纤维素、约5%重量的羟丙基甲基纤维素和约2%重量的羟基乙酸淀粉钠；颗粒外相，其包含约17%重量的微晶纤维素、约2%重量的羟基乙酸淀粉钠、约0.4%重量的硬脂酸镁；和片剂上的肠溶衣，其包含约13%重量的AcyrlEZE 。
19.权利要求18的片剂，具有约40mg的反义寡核苷酸。
20.治疗克罗恩病的方法，包括对有此需要的患者口服给予权利要求1-19任一项的药物制剂、片剂或口服剂型。
21.治疗溃疡性结肠炎的方法，包括对有此需要的患者口服给予权利要求1-19任一项的药物制剂、片剂或口服剂型。
22.治疗慢性炎性肠病的方法，包括对有此需要的患者口服给予权利要求1-19任一项的药物制剂、片剂或口服剂型。
23.权利要求20-22任一项的方法，其中在口服给予所述药物制剂、片剂或口服剂型时，所述药物制剂、片剂或口服剂型基本上被递送至患者的终末回肠和/或右结肠。
全文摘要
本发明提供了用于反义寡核苷酸如针对SMAD7的反义寡核苷酸的口服给药的药物制剂。该药物制剂可以用于治疗克罗恩病、溃疡性结肠炎和慢性炎性肠病。
文档编号A61K31/7088GK102216458SQ200980145188
公开日2011年10月12日 申请日期2009年11月13日 优先权日2008年11月13日
发明者F·维蒂, S·巴洛尼, S·贝林维亚 申请人:朱利亚尼国际有限公司