一种药物组合物及其制备方法

专利名称：：一种药物组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明提供了一种药物组合物及其制备方法及在心脑血管疾病的应用，属于生物医药
技术领域：
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背景技术：
：复方血栓通是以三七、黄芪、丹参、玄参四味药材为原料药，经过提取制得浸膏，然后与药用辅料混合制成的药物，用来治疗活血化瘀，益气养阴。用于治疗血瘀兼气阴两虚证的视网膜静脉阻塞，症见视力下降或视觉异常，眼底瘀血征象，神疲乏力、咽干、口干等症。三七的活性成分主要为三七总皂苷，功能主要为活血去瘀，通脉活络，扩张血管，改善血液，抑制血小板聚集，增加脑血流量，用于中风偏瘫，脑梗塞，脑血管病后遗症，内眼病，视网膜中央静脉阻塞，眼前房出血等。黄芪的活性成分主要为黄芪皂苷、黄酮及多糖，皂苷主要为黄芪甲苷为主，其主要用于气虚乏力、中气下陷、气虚水肿等症状。玄参的主要成分为玄参苷与环烯醚萜类化合物，其功效主要有凉血滋阴、泻火解毒的作用。丹参的主要成分分为脂溶性成分及水溶性成分；大量的药理和临床研究结果证明水溶性成分的活性高于脂溶性成分。丹参总多酚酸是中药材丹参中的水溶性成分，主要成分为丹酚酸、原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素、咖啡酸、迷迭香酸等。丹参多酚酸具有显著的抗心肌缺血作用，可降低心脏耗氧量，并能对抗诱导的血小板聚集和抑制血栓的形成。临床试验研究表明，丹参多酚酸对于冠心病、心绞痛，疗效显著、确切，病人使用安全。以该四种药材作为主要活性成分的复方血栓通胶囊收载于新药转正标准27册(WS3-211(z-030)-2000(z))中。中国专利申请号02103920.8公开了复方血栓通滴丸的制备方法，申请号02121219.8公开了复方血栓通软胶囊的制备方法，这两个专利的方法都是将三七采用乙醇浸滞提取，其余三味药材乙醇加热回流提取，然后将两种提取物进行混合均匀后，制成相应的制剂。该方法采用乙醇来浸滞提取，需要大量的溶剂，提取效率较低，周期也较长。中国专利申请号02149700.1中公开了复方血栓通的口服制剂及其制备方法，该方法是将三七采用乙醇超声提取得到提取物，其余三味药材采用乙醇加热回流得到提取物，然后将两种提取物混合均匀后，与适量的药用辅料制得合适的口服剂型；以上方法在提取丹参时均未采用氮气保护，很容易导致丹参酚酸氧化，导致有效成分降低。丹参的水溶性成分以丹参酚酸为主，其中丹参酚酸B(salvianolicacidB，SAB)的含量最高(约占总丹参酚酸的70%)、活性最强，随着加热时间的延长，丹酚酸B等大分子物质水解为丹参素，造成提取时间越长，丹酚酸B的含量越少。而且这些方法均是将提取物直接与辅料制成制剂，而没有得到药材的有效部位，降低了疗效，增加了药物的副作用。为了克服以上现有技术的缺陷，本发明人经过多次试验，得到以药材的有效部位为主要成分，并与文献报道的提取物进行了药理学试验比较，证明本发明的药物组成，能够更有效的降低心肌缺血犬心率、升高收縮压、舒张压。通过研究更明确了有效成分并减少了不必要的无效成分，因此更容易控制药品质量，而且作用机理明确，制剂稳定性和均一性好，产品质量可控。
发明内容本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种以复方血栓通有效部位为主要成分，加以适量的药用辅料制成合适的制剂。本发明人经过多次正交提取试验和动物的药理学试验等艰苦努力，终于获得了以药材的有效部位为主要成分，并在此基础上通过进一步研究，获得了一种药效好，见效快，生物利用度高，毒副作用小的药物。本发明的解决方案是提供一种药物组合物，该组合物是以三七25份，黄芪8份，玄参8份，丹参5份为原料药制备的，所述药物组合物，其中含有从上述四种中药中提取的总黄酮类提取物，总皂苷类提取物和总多酚酸类提取物，三种提取物的重量比例为1-5:1-5:1，其中总黄酮提取物中含总黄酮80%以上；总皂苷类提取物中含总皂苷70%以上；总多酚酸类提取物中含总多酚酸85%以上，三者含总黄酮、总皂苷与总多酚之合在80%以上，三种提取物是用本发明的方法制备的。所述百分比例均为重量百分比。优选的，本发明的组合物含有总黄酮类提取物，总皂苷类提取物和总多酚酸类提取物，三者比例为l-i.5:3-5:i。更优选的三者比例为i.2:4.4:i。本发明的药物组合物，其中所述的总黄酮类提取物，总皂苷类提取物和总多酚酸类提取物，可以按照以下步骤提取(1)三七，黄芪，玄参药材乙醇加热回流提取；提取液回收乙醇至无醇味，加水沉淀，静置过夜，过滤，滤液浓縮；(2)将浓縮滤液过大孔树脂，先以水洗脱，再以20%乙醇洗脱，20%乙醇洗脱液浓縮，干燥得到总黄酮类提取物；然后再以70%乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥得到总皂苷类提取物；(3)将丹参水提，提取液浓縮，加乙醇醇沉，静置过夜，过滤，回收乙醇至无醇味，浓縮；(4)将丹参浓縮液过大孔树脂，先以水洗脱，再以乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓縮干燥得总多酚酸类提取物；优选的步骤(1)中乙醇的浓度为70-95%，步骤(4)中乙醇的浓度为50-95%。步骤(1)中提取次数为1-3次，步骤(3)中提取次数为1-3次。将上述三种提取物混合即得本发明的药物组合物的活性成分，将该活性成分和药物可接受的载体混合，按制剂学常规技术可制成药物制剂组合物。本发明的药物组合物，其特征在于，具有活血化瘀、益气养阴之功效，用于治疗血瘀兼气阴两虚证的视网膜静脉阻塞，症见视力下降或视觉异常，眼底瘀血征象，神疲乏力，咽干，口干等症；用于治疗血瘀兼气阴两虚的稳定性劳累型心绞痛，症见胸闷痛、心悸、心慌、气短乏力、心烦口干者。本发明的药物组合物，是任何可药用剂型。这些剂型包括滴丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，更优选是滴丸剂型。本发明优选的滴丸剂型。是将药物活性成分加入聚乙二醇，加热至809(TC，滴入到温度为l(TC以下的液体石蜡中，制成滴丸。本发明的药物组合物优选按照以下步骤制备(1)将四味药材粉碎，过12目筛，三七，黄芪，玄参药材混合后分别以8倍量、6倍量的75%乙醇加热回流提取两次，合并滤液；回收乙醇至无醇味，加水沉淀，静置过夜，过滤，滤液浓縮至含生药量lg/ml;(2)将该提取液过大孔树脂，先以水洗脱，水洗至无molish反应，停止洗脱，洗脱液弃去，再以20%乙醇洗脱，洗脱液得到主要含有黄酮类提取液，浓縮，喷雾干燥得到总黄酮类提取物；然后以70%乙醇洗脱，收集洗脱液，得到主要含有总皂苷类提取液，喷雾干燥得到总皂苷类提取物；(3)将丹参分别以8倍量、6倍量的水在氮气保护下6(TC提取两次，过滤，合并滤液，浓縮至密度1.11.2，加乙醇醇沉至醇度达50%，静置过夜，过滤，回收乙醇至无醇味，浓縮至浓度含生药量lg/ml;(4)将丹参提取液过大孔树脂，先以水洗脱，至无molish反应，停止洗脱，弃去洗脱液，再以60%乙醇洗脱，至三氯化铁铁氰化钾试剂不变蓝，停止收集，收集洗脱液，浓縮喷雾干燥得总多酚酸类提取物；(5)将上述三种提取物按照1-2:1-5:l混合均匀，作为药物活性成分，根据需要，加入药物可接受的载体，制备成药物组合物。Molish反应对本领域的技术人员是个很熟知的常识，它是鉴别糖的一个反应。采用a-萘酚与糖醛及衍生物反应生成紫色化合物这一现象来鉴别糖的存在。本发明在过大孔树脂时先采用水洗去多糖，Molish反应呈阴性证明洗脱液里不再含有多糖。总黄酮、总皂苷、总多酚的分析测定对本领域的技术人员来讲是个非常熟悉的方法，一般采用紫外分光光度法，以对照品的浓度为x轴，以对照品的吸收度或者峰面积为y轴，制定出相应的标准曲线。根据标准曲线，算出相应总黄酮、总皂苷、总多酚的量。本发明测定总黄酮采用以芦丁为对照，在500nm处测定总黄酮的量；测定总皂苷采用黄芪甲苷为对照，在580nm处测定总皂苷的量；测定总多酚采用原儿茶醛为对照，在750nm处测定总多酚的含量。在具体实施例1中本发明人按照本说明书提供的方法进行提取得到复方血栓通提取物也就是本说明书中所说的复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚提取物，经分析测定含有有效部位包括总皂苷、总黄酮与总多酚的含量在83.8%。按照中国专利申请号02103920.8的方法进行了制备得到复方血栓通浸膏，并经分析测定，该浸膏粉里含总黄酮8.42%，总皂苷18.7%，总多酚6.2%，有效成分33.3%。在具体实施例2中，本发明人以复方血栓通总黄酮提取物、复方血栓通总皂苷+总黄酮提取物、复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚提取物，以及按照中国专利申请号02103920.8的方法进行了制备得到复方血栓通浸膏分别进行了一系列药理学试验，试验证明实验结果表明各剂量组对大鼠体外血栓形成的湿重有明显的减轻作用(P<0.05，P<0.01)，试药组可明显抑制大鼠血栓形成，减轻血栓湿重，具有明显的溶血栓作用。给药前后可明显降低家兔血小板聚集率(PAgVmaX%)和聚集时间(PAgTmaX%)(P<0.05，P<0.01)，说明有明显的降低家血小板聚集性的作用。对大鼠急性心肌缺血具有一定的抑制作用。给药组动物的CPK、AST、LDH-L有所降低，心肌梗死范围明显縮小、心率减慢、ST段及T波高与模型组比较统计学检查有显著差异(P6<0.01)。提示对大鼠急性心肌缺血具有改善心肌酶谱、保护心肌降低损伤的作用。观察了经十二指肠给药后对心肌缺血犬血流动力学的影响，并与阳性药复方丹参滴丸进行比较。结果显示能够使心肌缺血犬心率降低，升高收縮压、舒张压(复方血栓通总皂苷+总黄酮组不升高)和平均压，以及升高左室内压和左室内压变化最大速率dP/dtmax。复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚组作用强度更强及时程更长，而复方血栓通浸膏粉和复方血栓通总黄酮组对上述指标未显现影响。本发明的药物组合物将药材的有效部位皂甙类与酚酸类组合在一起，该方法与现有技术相比，具有以下特点1)工艺的优化，采用了氮气保护提取丹参水溶性丹参总多酚，使有效成分含量升高；突破了以往的直接采用乙醇提取得到提取物的方法，由于采用药材的有效部位作为药物的主成分，能最大限度的发挥药物的作用，降低药物的副作用，提高了药物的生物利用度。2)由于明确了药材的有效部位，提高了药品的质量，提高了疗效。3)采用滴丸作为本发明的剂型，设备简单、操作方便、工艺条件易于控制，质量稳定，剂量准确，受热时间短，易氧化的药物溶于基质后，可增加其稳定。为了便于理解，以下将通过具体实施例对本发明进行描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来讲都是显而易见的了。具体实施例方式实施例1本发明复方血栓通有效部位的提取及组合物的制备将三七2000g、黄芪640g、玄参640g、丹参400g四味药材粉碎，过12目筛，前三味药材混合后分别以25L、20L的75%乙醇加热回流提取两次，第一次2小时，第二次1小时，合并滤液；回收乙醇至无醇味，加水沉淀，静置过夜，过滤，滤液浓縮至含生药量lg/ml。将该提取液过大孔树脂层析柱(010*100)，先以20L的水洗脱，至无molish反应，停止洗脱，洗脱液弃去，再以15L的20%乙醇洗脱，洗脱液得到主要含有黄酮类提取液，浓縮，喷雾干燥得到总黄酮类提取物32g;然后以20L的70%乙醇洗脱，收集洗脱液，得到主要含有总皂苷类提取液，喷雾干燥粉碎得到总皂苷类提取物118g;将400g丹参分别以3200ml、2400ml的水在氮气6(TC提取两次，第一次2小时，第一次1小时。过滤，合并滤液，浓縮至密度1.11.2，加乙醇醇沉至醇度达50%，静置过夜，过滤，回收乙醇至无醇浓縮至浓度含生药量lg/ml。将丹参提取液过大孔树脂层析柱(010*80)，先以20L的水洗脱，至无molish反应，停止洗脱，弃去洗脱液，再以约25L的60%乙醇洗脱，至三氯化铁铁氰化钾试剂不变蓝，停止收集，收集洗脱液，浓縮喷雾干燥得总多酚酸类提取物26.8g。经分析测定总黄酮提取物中含有总黄酮87.5%，总皂苷提取物中含总皂苷82.3%，总多酚提取物中含总多酚86.4%。将上述三种提取物按照1.2:4.4:l重量比例混合均匀，作为药物活性成分，根据需要，加入药物可接受的载体，制备成滴丸。实施例2本发明复方血栓通有效部位的提取及组合物的制备(1)将三七2000g、黄芪640g、玄参640g、丹参400g四味药材粉碎，过12目筛，三七，黄芪，玄参药材混合后分别以8倍量、6倍量的70%乙醇加热回流提取两次，合并滤液；回收乙醇至无醇味，加水沉淀，静置过夜，过滤，滤液浓縮至含生药量lg/ml;(2)将该提取液过大孔树脂，先以水洗脱，水洗至无molish反应，停止洗脱，洗脱液弃去，再以20%乙醇洗脱，洗脱液得到主要含有黄酮类提取液，浓縮，喷雾干燥得到总黄酮类提取物；然后以70%乙醇洗脱，收集洗脱液，得到主要含有总皂苷类提取液，喷雾干燥得到总皂苷类提取物；(3)将丹参分别以8倍量、6倍量的水在氮气保护下6(TC提取两次，过滤，合并滤液，浓縮至密度1.11.2，加乙醇醇沉至醇度达50%，静置过夜，过滤，回收乙醇至无醇味，浓縮至浓度含生药量lg/ml;(4)将丹参提取液过大孔树脂，先以水洗脱，至无molish反应，停止洗脱，弃去洗脱液，再以50%乙醇洗脱，至三氯化铁铁氰化钾试剂不变蓝，停止收集，收集洗脱液，浓縮喷雾干燥得总多酚酸类提取物；(5)将上述三种提取物按照1:1:1的重量比例混合均匀，作为药物活性成分，根据需要，加入药物可接受的载体，制备成片剂。实施例3本发明复方血栓通有效部位的提取及组合物的制备(1)将三七2000g、黄芪640g、玄参640g、丹参400g四味药材粉碎，过12目筛，三七，黄芪，玄参药材混合后分别以8倍量、6倍量的95%乙醇加热回流提取两次，合并滤液；回收乙醇至无醇味，加水沉淀，静置过夜，过滤，滤液浓縮至含生药量lg/ml;(2)将该提取液过大孔树脂，先以水洗脱，水洗至无molish反应，停止洗脱，洗脱液弃去，再以20%乙醇洗脱，洗脱液得到主要含有黄酮类提取液，浓縮，喷雾干燥得到总黄酮类提取物；然后以70%乙醇洗脱，收集洗脱液，得到主要含有总皂苷类提取液，喷雾干燥得到总皂苷类提取物；(3)将丹参分别以8倍量、6倍量的水在氮气保护下6(TC提取两次，过滤，合并滤液，浓縮至密度1.11.2，加乙醇醇沉至醇度达50%，静置过夜，过滤，回收乙醇至无醇味，浓縮至浓度含生药量lg/ml;(4)将丹参提取液过大孔树脂，先以水洗脱，至无molish反应，停止洗脱，弃去洗脱液，再以95%乙醇洗脱，至三氯化铁铁氰化钾试剂不变蓝，停止收集，收集洗脱液，浓縮喷雾干燥得总多酚酸类提取物；(5)将上述三种提取物以2:5:l重量比例混合均匀，作为药物活性成分，根据需要，加入药物可接受的载体，制备成胶囊。实施例4组合物的制备将总黄酮类提取物，总皂苷类提取物和总多酚酸类提取物三种提取物以1.5:3:i重量比例混合均匀，作为药物活性成分，根据需要，加入药物可接受的载体，制备成丸剂。实施例5组合物的制备将总黄酮类提取物，总皂苷类提取物和总多酚酸类提取物三种提取物以i:5:i重量比例混合均匀，作为药物活性成分，根据需要，加入药物可接受的载体，制备成口服液。实施例6组合物的制备将总黄酮类提取物，总皂苷类提取物和总多酚酸类提取物三种提取物以1.5:3:i重量比例混合均匀，作为药物活性成分，根据需要，加入药物可接受的载体，制备成注射剂。实施例7药效学试验取总黄酮提取物8g+总皂苷提取物29.5g混合均匀作为复方血栓通总黄酮+总皂苷组(有效成分83.4%);取总黄酮提取物16g+总皂苷提取物59g+总多酚提取物13.4g作为复方血栓通总黄酮+总皂苷+总多酚组(有效成分83.8%);总黄酮提取物作为复方血栓通总黄酮组(有效成分87.5%)。对照品按照中国专利申请号02103920.8中的制备方法提取的对照品将三七2000g、黄芪640g、玄参640g、丹参400g四味药材中的三七粉碎，过12目筛，以10L的50%乙醇浸滞两次，第一次5天，第二天10天，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓縮成稠膏，烘干，得到180.4g，粉碎成细粉；其余黄芪等三味以10L、8L的50%乙醇加热回流提取两次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，喷雾干燥得到234.6g，将这两种提取物混合均匀，作为复方血栓通浸膏粉。经分析测定该浸膏含有总黄酮8.42%，总皂苷18.7%，总多酚6.2%，总有效成分33.3%。1.试验材料受试药物复方血栓通总皂苷+总黄酮组，复方血栓通浸膏粉，本发明实施例1方法制备的复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚组复方血栓通总黄酮组阳性药复方丹参片0.3g/片广州白云山中药厂，地奥心血康胶囊0.3g/粒多贝斯胶囊0.5g/粒复方丹参滴丸27m/g丸1.2动物种属、品系、来源、合格证SD品系大白鼠早$各半，体重190成都地奥制药集团有限公司西安利君制药股份有限公司天津天士力制药股份有限公司240g;质量合格证陕医动证字08-005号<新西兰品系大白兔体重1.82.2kg，早d兼用；质量合格证陕医动证字08-018健康家犬体重1215kg，早$各半。均由西安交通大学医学院实验动物中心提供。实验室温度1826°C，相对温度4555%。[(Km](—)、对大鼠动静脉血栓的影响取健康的SD大鼠36只，早$兼用，体重180220g，，适应实验室环境7天后称重，编号，随机均衡分为6组，每组6只。①.对照组(正常动物组)；②.多贝斯胶囊组(250mg/kg);③.复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚组(200mg/kg);.复方血栓通总皂苷、+总黄酮组(200mg/kg);⑤.复方血栓通浸膏粉组(200mg/kg);⑥复方血栓通总黄酮组；以上动物灌胃给药，每天一次，连续3天，末次给药30分钟后，用3%戊巴比妥钠lml/kg腹腔注射麻醉后仰卧固定在大鼠手术台上，分离右颈总动脉及左颈外静脉，用事先备好的聚乙稀插管(聚烯管内径lmm，长5cm，内径2mm，长8cm，在三段管中放入一根5cm长的4号手术线，用50ii/ml肝素生理盐水溶液充满聚乙烯管后夹住管壁)，当管的一端插入左颈外静脉后，将管的另一端插入右颈总动脉，手术后5min开放血流，开放血流15min后中断血流迅速取出丝线称血栓湿重(全重_线重=血栓湿重)。9<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>各给药组与生理盐水组比较，组间T检验处理。结果见表1表1.对大鼠动静脉血栓形成的影响G±S，n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*表示各给药组与对照组比较*P<0.05**P<0.01试验结果表明各剂量组对大鼠体外血栓形成的湿重有明显的减轻作用，结果与多贝斯胶囊组相似(P<0.05，P<0.01)，上述试药组可明显抑制大鼠血栓形成，减轻血栓湿重，具有明显的溶血栓作用。(二)、对家兔血小板聚集性的影响取健康的新西兰品系家兔36只，体重1.82.2kg，早$兼用随机分为6组，每组6只，①对照组(正常模型组)；②多贝斯胶囊组(190mg/kg);③复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚组(140mg/kg);复方血栓通总皂苷组+总黄酮组(140mg/kg);⑤复方血栓通浸膏粉组(140mg/kg);⑥复方血栓通总黄酮组。以上动物试验前12h禁食不禁水，在无菌条件下心脏取血5ml，加入含3.8%枸橼酸钠抗凝剂试管中(比例l:9)轻轻混匀，在600转离心10min吸取上清液备用，此为PRP，再以3000转离心10min，此为PPP，用PPP调零，再于PRP中按l:IO加入ADP试剂(终浓度为2iimol/L)。测定给药前血小板聚集性正常值后连续灌胃给药3天，容量2ml/kg，于末次给药40min后按以上方法测给药后各组血小板聚集性。给药前后自身比较，T检验处理。结果见表2表2.对家兔血小板聚集性的作用(；士S，n=6)组别剂量(mg/kg)PAgTmax%PAgVmax%给药前给药后给药前给药后对照组多贝斯胶囊组复方l(IL栓通总皂苷+总黄酮+总多酚组复方血栓通总皂苷+总黄酮组复方血栓通浸膏粉组190140140140140复方血栓通总黄酮组各组给药前后自身比较140.00±28.36139.13±11.9526.10±3.3925.33±4.66145.00±12.40132.75±14.16**29.44±2.8722.98±2.66**142.88士20.51138.13±16.47**28.58±6.2721.74±2.73**142.13±20.07140.25±20.5527.33±5.1822.06±3.22*145.88±18.57137.63±11.7726.95±2.7224.39±2.45*138.38±16.45133,13±11.2328.55±4.5825.36±2.15P<0.05P<0.01试验结果表明复方血栓通总皂苷+总黄酮+多酚类组给药前后可明显降低家兔血小板聚集率(PAgVmaX%)和聚集时间(PAgTmaX%)，试验结果同多贝斯胶囊组相似(P<0.05，P<0.01)，说明有明显的降低家血小板聚集性的作用。(三)、对心肌缺血大鼠的作用1.对冠脉阻断致心肌缺血大鼠酶谱、梗死范围及ECG的影响领取健康SD品系大鼠42只，早$各半，体重190240g，称重、编号，随机分为7组，每组6只，①假手术组；②模型组；③地奥心血康组(100mg/kg);模型+复方血栓通总皂苷+多酚类组(200mg/kg);⑤模型+复方血栓通总皂苷+总黄酮组(200mg/kg);⑥模型+复方血栓通浸膏粉组(200mg/kg);⑦模型+复方血栓通总黄酮组。试验时，将大鼠用乙醚麻醉，仰位固定，记录正常心电图(n导联，标准电压，纸速50mm/s)后，在无菌条件下切开左胸部皮肤，于第四肋间隙钝性分离肌肉，轻压右胸，挤出心脏，于肺动脉园锥与左心耳之间，距前降枝根部l2mm处结扎冠脉前降枝。回复心脏，挤净残气，封闭胸腔。缝合伤口，用76万u青霉素预防感染。假手术组动物的手术全过程相同，穿线不结扎冠脉。手术后次日开始灌胃给药，每日l次，连续l周。假手术组和模型对照组灌胃给予等容量生理盐水1.0ml/100g，未次给药后4h，用乙醚麻醉动物，腹主动脉采血，用日立7170型全自动生化分析仪以动态法测定血清CK、LDH-L和AST水平。然后开胸，取出心脏，挤净残血，剪去周围大血管及心房，称湿重，自心尖部切成均匀厚度5片，置0.25XNBT(甲硝基四氮唑蓝)溶液中，37t:水浴10min染色。切下未染区称湿重，计算心脏梗死区占全心室重量的百分比。试验结果如表35。表3.对结扎冠脉大鼠心肌酶谱的影响G士S，n=6)组另U剂量(mg/kg)AST(u/L)CPK(u/L)LDH丄(u/L)假手术组147.1±7.5595,0±33.4412.5±57,2模型组244.7±44.1AA1241.8±259.4AA888.5±26.6AA地奥心血康组100180.2士18.7"859.9±72.41**783.5±127.8*复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多200168.2±14.2**785.8士217.9峙573.2士90.8"酚组复方血栓通总皂苷+总黄酮组200197.2±41.2817.7±220.2**769.4±69.4**复方血栓通浸膏粉组200228.9±37.81052.4±189.1805.7士84.3"复方血栓通总黄酮组200233.6±87.31189.8±187.6832肚43.2"*表示各给药组与模型组比较*P<0.05**P<0.01A表示模型组与假手术组比较Ap〈0.05AAP<0.01表4.对结扎冠脉大鼠心肌梗死范围的影响G±S，n=6)组另IJ剂量(mg/kg)全心室重(g)梗死区重(g)梗死.(%)假手术组1.12±0.090—模型组1.15±0.190.34±0.0728,3±4.1地奥心血康组1001.03±0.100.13±0.0512.5±2,1**复方血栓通总皂苷+总黄酮+总2001.33±0.160.12±0.049.10±1.6**多酚组复方血栓通总皂苷+总黄酮组2001.02±0.150.17±0,0816.4±2.2**复方血栓通浸膏粉组2001.02±0.080.20±0.0619.7±2.5**复方血栓通总黄酮组2001.05±0.060.23±0.0822.2±3.2***表示各给药组与模型组比较*P<0.05**P<0.01表5.对结扎冠脉大鼠急性心肌缺血心率变化的影响(；士S，n=6)组别剂量(mg/kg)结扎后心率次/minT波ST段(mV)假手术组210±170.20±0.030.19±0.02模型组245土20厶厶0.38±0.02AA0.38±0.02厶厶地奥心血康组100195±21**0.19±0.03**0.16±0.03**复方血栓通总皂苷+总黄酮-^200200±15**0.18士0.02峙0.18±0.02**总多酚组复方血栓通总皂苷+总黄酮组200210±18**0.21±0.03**0.20±0.06**复方血栓通浸膏粉组200215±15**0.25±0.03**0.21士0.03峙复方血栓通总黄酮组200217±16**0.24±0.02**0.25土0.03峙*表示各给药组与模型组比较*P<0.05**P<0.01试验结果显示，上述试药对大鼠急性心肌缺血具有一定的抑制作用，与地奥心血康作用相似，但没有复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚组作用显著。给药组动物的CPK、AST、LDH-L有所降低，心肌梗死范围明显縮小、心率减慢、ST段及T波高与模型组比较统计学检查有显著差异(P<0.01)。提示对大鼠急性心肌缺血具有改善心肌酶谱、保护心肌降低损伤的作用。(四)、对犬血流动力学的影响1)、对心肌缺血犬血流动力学的影响方法将42只健康杂种犬，雌雄各半，随机分成6组，每组各6只①正常对照组；②模型组；③心肌缺血模型+复方丹参滴丸组；④心肌缺血模型+复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚组；⑤心肌缺血模型+复方血栓通总皂苷+总黄酮组；⑥心肌缺血模型+复方血栓通浸膏粉组；⑦心机缺血模型+复方血栓通总黄酮组。各给药组分别经十二指肠给予110mg/kg;阳性药对照组给予复方丹参滴丸68.Omg/kg;正常对照组经十二指肠给予生理盐水，给药容积均为0.5ml/kg。实验时将动物用3%的戊巴比妥钠(iv)麻醉(30mg/kg)，仰卧位固定，暴露气管，插入气管导管，与呼吸机连接，进行正压人工呼吸；分离颈总动脉，插入充满肝素生理盐水的心导管至左心室，另一端与AP-601G载波放大器连接，测量左心室内压。将AP-601G载波放大器的信号输入EQ-601G微分放大器，测量左心室内压变化的最大速率dP/dtmax。分离股动脉和股静脉，插入充满3%。肝素生理盐水的动脉导管，另一端与AP-601G载波放大器连接，测量动脉血压；股静脉内插入静脉导管，备做静脉点滴生理盐水用。连接标准II导联心电图。打开胸腔，暴露心脏，剥离主动脉动脉根部周围的脂肪和结缔组织，放置电磁血流量计探头，测量心输出量。在左心耳根部分离状动脉左旋支，放置电磁血流量计探头，测量冠脉血流量。所有测量信号导入RM-6000型多导生理记录仪，并同步记录。打开腹部，暴露十二指肠，插入导管并结扎固定以备给药。打开右心耳，插入冠状静脉窦插管，以备作采集冠状静脉窦血液。手术完毕，静脉滴注生理盐水，稳定30min后，记录各项指标正常值后，在冠状动脉前降支下1/3处结扎冠状动脉，随即经十二指肠给药，记录给药后15、30、90、150、270min时的各项指标。以给药后各时间段与正常值的变化百分率为数据，做组间t检验。结果①对心率(HR)的影响(表6)结扎动脉后，结扎冠脉后，模型组的HR明显高于正常对照组(P<0.01)。给药后各组与模型对照组比较，HR减慢，其中，复方丹参滴丸组差异有统计学意义(15和90min，P<0.05;30min，P<0.01);复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚类组差异有统计学意义(1590min，P<0.05);复方血栓通总皂苷+总黄酮组差异有统计学意义(15min，P<0.05);复方血栓通浸膏粉组和复方血栓通总黄酮组差异无统计学意义(15270min，P>0.05)。②对收縮压(SAP)的影响(表7)结扎动脉后，模型组SAP较正常对照组下降明显(P<0.01)。给药后各组与模型对照组比较，SAP均有所上升，其中，复方丹参滴丸组差异有统计学意义(15150min，P<0.05);复方血栓通总皂苷+多酚类组和复方血栓通总黄酮组差异有统计学意义(1530min，P<0.05);复方血栓通总皂苷组差异有统计学意义(15min，P<0.05);复方血栓通浸膏粉组差异无统计学意义(15270min，P>0.05)。③.对动脉舒张压(DAP)的影响(表8)结扎动脉后，模型对照组较正常对照组的DAP明显下降(P<0.01)。给药后各组与模型对照组比较，DAP有所上升，其中，复方丹参滴丸组和复方血栓通总皂苷+多酚类组差异有统计学意义(1530min，P<0.01;90min，P<0.05);复方血栓通浸膏粉组、复方血栓通总黄酮组和复方血栓通总皂苷+总黄酮组差异无统计学意义(15270min，P>0.05)。.对平均动脉压(MAP)的影响(表9)结扎动脉后，模型对照组较正常对照组的MAP明显下降(P<0.01)。给药后各组与模型对照组比较，MAP有不同水平上升，其中，复方丹参滴丸组差异有统计学意义(1590min，P<0.01;150min，P<0.05);复方血栓通总皂苷+总黄酮+多酚类组差异有统计学意义(1530min，P<0.01;90min，P<0.05);复方血栓通总皂苷+总黄酮组，15min时差异有统计学意义(P<0.05);复方血栓通浸膏粉组和复方血栓通总黄酮组差异无统计学意义(15270min，P>0.05)。[O117]⑤对左室内压峰值(LVSP)的影响(表10)结扎动脉后，模型对照组的LVSP较正常对照组明显降低(P>0.01)。给药后各组与模型对照组比较，LVSP有所升高，其中，复方丹参滴丸组差异有统计学意义(15、30、150min，P<0.05;90minP<0.01);复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚组差异有统计学意义(30、90min，P<0.01;150、270minP<0.05);复方血栓通总皂苷+总黄酮组差异有统计学意义(30、90min，P<0.05);复方血栓通浸膏粉组、复方血栓通总黄酮组差异无统计学意义(15270min，P>0.05)。.对左室内压变化最大速率(LVP+dP/dtmax)的影响(表11)结扎动脉后，模型对照组1^++(^/(^!￡明显下降，与正常对照组比较有明显统计差异(P<0.01)。给药后各组与模型对照组比较，LVP+dP/dt^均有不同程度明显上升，其中，复方丹参滴丸组差异有统计学意义(15、30min，P<0.01;90min，P<0.05);复方血栓通总皂苷+多酚类组差异有统计学意义(15、150min，P<0.05;30、90min，P<0.01);复方血栓通总皂苷组差异有统计学意义(30、90min，P<0.05);复方血栓通浸膏粉组和复方血栓通总黄酮组差异无统计学意义(15270min，P>0.05)。14<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表8不同组分复方血栓通对心肌缺血犬动脉舒张压(DAP,kPa)变化百分率(。/。)的组间比较(X±S，n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>二o.ovds-s.ovd*"您qs藍友翻魅SJ.I嫁Kg二o.ovd:-so.ovd<"您lq崩蓝贫解3Iirl超fe翻il:一270min-27.40±5.88"-0.18±0.92-20.22±5.67-21.98±5.13-22.48±5.97-18.67±5.59*陽23.16士5,79表U不同组分复方血栓通对心肌缺血犬LV收縮期压力最大变化速率(LVP+^PA/tmM，kPa/s)变化百分率("/o)的组间比较(X土S，n-6)270min-23.57±4,81"-0.30±0.95-20.09±5.30-23.74±3.40-20.73±4.98-18.62±2.86-21.70±3.05150min-29.04±6.33"0.02±1.55-21.14±5.20*-22.80士5.85-24.19±4.40-19.71±5.35*-22.63±3.69150min-24.35土4.01"-0.66±0.92-21.94±4.81-24.37±3.44-22.13±4.66-18.43±3.14*-21.50±3.8690min-31.75土3.55"-0.32±0.62-21.47±5.70**-25.99±5.72-27.49土3.99-19.72±3.96"-24.35±4.52*,**P<0.01。90min習24.70±4.09"-0.98±0.98-19.03±4.54*-23.50±2.66-20.67±4.04-16.89±3.44**-19.30±3.28*30min-32.01±4,87"-0.36±1.14-23.68±6.64*-29.37±3.20-31.50±3.61-22.00±5.39**-25.16±4.54*▲PO.05,"P〈0.01;②用药组与模型对照组比较*P<0.05,30min-25.65±4.53"-1.56±1.65-12.09士3.37"-23.99±3.57-21.53士5.53-16.97±3.10**-19,03±3.89*15min-32.49士4..82"0.44±1.60-26.86±2.91*-31.47±4.8S-32.85±5.61-27.35±4.64-31.86±5.0815min-23.48±4.84"-0.14±1.89-11.63±2.86**-24.08±3.55-22.56±4.54-18.09±2.48*-22.28±3.45用药前19.38±0.8518.44±1.2119.18±0.8819.18±0.7819.38±1.3518.67±1.1819.20±0.76用药前300.06士21.85290.73士15.38292.20±25.71294.66±15.53290.35±17.86294.33±18.65294.28±10.87尿崩模型对照组正常对照组复方丹参滴丸组复方血栓通浸膏粉组复方血栓通总黄酮组复方血栓通总皂苷十十总黄酮+总多酚组复方血栓通总皂苷+总黄酮组①模型对照组与正常对照组比较:尿崩模型对照组正常对照组复方丹参滴丸组复方血栓通浸膏粉组复方血栓通总黄酮组复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚组复方血栓通总皂苷+总黄酮组苷皂总栓压禾方复类多+高苷皂总苷翁皂血总方龍复方张貧舒一il显満身结中高升表，6、」表力(9"u-s屮20翁fml崩s(。/。)掩^扭^欲(。s-JSAd5ry糊。、wy萄堪1/EKI、贫瞎站萄，^w^崩叵lk01^进血上缺人几、」使眵匕匕厶目17以及升高左室内压和左室内压变化最大速率dP/dtmax。复方血栓通总皂苷+总黄酮+总多酚组作用强度更强及时程更长，而复方血栓通浸膏粉和复方血栓通总黄酮对上述指标未显现影响。权利要求一种药物组合物，以三七25份，黄芪8份，玄参8份，丹参5份为原料药制备的，其特征在于所述的组合物，其中含有总黄酮类提取物，总皂苷类提取物和总多酚酸类提取物，三者比例为1-5∶1-5∶1，其中总黄酮提取物中含总黄酮80％以上；总皂苷类提取物中含总皂苷70％以上；总多酚酸类提取物中含总多酚酸85％以上，三者含总黄酮、总皂苷与总多酚之合在80％以上。2.权利要求1的药物组合物，其特征在于，所述的含有总黄酮类提取物，总皂苷类提取物和总多酚酸类提取物，三者比例为1-1.5:3-5:1。3.权利要求1的药物组合物，其特征在于，所述的含有总黄酮类提取物，总皂苷类提取物和总多酚酸类提取物，三者比例为1.2:4.4:i。4.权利要求1的药物组合物，其特征在于，按照以下步骤制备(1)三七，黄芪，玄参药材乙醇加热回流提取；提取液回收乙醇至无醇味，加水沉淀，静置过夜，过滤，滤液浓縮；(2)将浓縮滤液过大孔树脂，先以水洗脱，再以20%乙醇洗脱，20%乙醇洗脱液浓縮，干燥得到总黄酮类提取物；然后再以70%乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥得到总皂苷类提取物；(3)将丹参水提，提取液浓縮，加乙醇醇沉，静置过夜，过滤，回收乙醇至无醇味，浓縮；(4)将丹参浓縮液过大孔树脂，先以水洗脱，再以乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓縮干燥得总多酚酸类提取物；(5)将上述三种提取物混合，作为药物活性成分，根据需要，加入药物可接受的载体，制备成药物组合物。5.权利要求4的药物组合物，其特征在于，步骤(1)中乙醇的浓度为70-95%，步骤(4)中乙醇的浓度为50-95%。6.权利要求4的药物组合物，其特征在于，步骤(1)中提取次数为l-3次，步骤(3)中提取次数为1-3次。7.权利要求4药物组合物，其特征在于，按照以下步骤制备(1)将四味药材粉碎，过筛，三七，黄芪，玄参药材混合后分别以8倍量、6倍量的75%乙醇加热回流提取两次，合并滤液；回收乙醇至无醇味，加水沉淀，静置过夜，过滤，滤液浓縮至含生药量lg/ml;(2)将该提取液过大孔树脂，先以水洗脱，水洗至无molish反应，停止洗脱，洗脱液弃去，再以20%乙醇洗脱，洗脱液得到主要含有黄酮类提取液，浓縮，喷雾干燥得到总黄酮类提取物；然后以70%乙醇洗脱，收集洗脱液，得到主要含有总皂苷类提取液，喷雾干燥得到总皂苷类提取物；(3)将丹参分别以8倍量、6倍量的水在氮气保护下6(TC提取两次，过滤，合并滤液，浓縮至密度1.11.2，加乙醇醇沉至醇度达50%，静置过夜，过滤，回收乙醇至无醇味，浓縮至浓度含生药量lg/ml;(4)将丹参提取液过大孔树脂，先以水洗脱，至无molish反应，停止洗脱，弃去洗脱液，再以60%乙醇洗脱，至三氯化铁铁氰化钾试剂不变蓝，停止收集，收集洗脱液，浓縮喷雾干燥得总多酚酸类提取物；(5)将上述三种提取物混合，作为药物活性成分，根据需要，加入药物可接受的载体，制备成药物组合物。8.权利要求l的药物组合物，其特征在于，具有活血化瘀、益气养阴之功效，用于治疗血瘀兼气阴两虚证的视网膜静脉阻塞，症见视力下降或视觉异常，眼底瘀血征象，神疲乏力，咽干，口干等症；用于治疗血瘀兼气阴两虚的稳定性劳累型心绞痛，症见胸闷痛、心悸、心慌、气短乏力、心烦口干者，或糖尿病所致视网膜病变。9.权利要求1的药物组合物，其特征在于，是任何可药用剂型。10.权利要求9的药物组合物，其特征在于，是滴丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。全文摘要本发明提供了一种药物组合物及其制备方法及在心脑血管疾病的应用，发明的解决方案是提供一种药物组合物，该组合物是以三七25份，黄芪8份，玄参8份，丹参5份为原料药制备的，所述药物组合物，其中含有从上述四种中药中提取的总黄酮类提取物，总皂苷类提取物和总多酚酸类提取物，三种提取物的重量比例为1-5∶1-5∶1，其中总黄酮提取物中含总黄酮80％以上；总皂苷类提取物中含总皂苷70％以上；总多酚酸类提取物中含总多酚酸85％以上，三者含总黄酮、总皂苷与总多酚之合在80％以上。文档编号A61P27/00GK101744938SQ20101010614公开日2010年6月23日申请日期2010年2月5日优先权日2010年2月5日发明者刘军,杨春玮申请人:刘军;杨春玮