专利名称：调控ERα/ERβ-TNFα通路20(S)-人参皂苷Rh2衍生物、制备和抗肿瘤应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及20(S)_人参皂苷Rh2衍生物。
本发明还涉及该衍生物的制备方法；
本发明还涉及其在制备抗肿瘤药物的应用。
背景技术：
药用植物人参Panax ginseng C. A. Meyer根为传统名贵中药材，其主要药用有效成分-人参皂苷(ginsenoside， G)系异戊二烯单元(五碳)构成的四环三萜达玛烷类小分子化合物，由人参二醇和人参三醇皂苷组成。目前人参二醇型皂苷主要有G-Rbl、G-Rb2、G-Rc、 G-Rd、 G-Rg3、 G_Rh2和G_Rh3。人参三醇型皂苷主要包括G-Re、 G-Rf 、 G-Rgl、 G_Rg2、G-Rhl。其中，属于人参二醇组的人参皂苷Rh2、 Rg3、 Compound K、20 (S)-原人参二醇型和20(R)-原人参二醇经体内、外实验证实，均具有十分显著的抗肿瘤活性。与传统的化疗药物相比，抑瘤作用广泛而复杂，呈现多部位、多环节、多靶点的特性可直接作用于癌细胞，通过诱导其凋亡抑制肿瘤的生长或诱导其分化使其逆转；可通过作用于肿瘤侵袭的多个环节抑制肿瘤的转移；影响细胞端粒酶的活性；可逆转肿瘤的耐药性，提高化疗药物的抑瘤活性；也可通过影响代谢和调节免疫功能，增强机体对疾病的抵抗能力，从而抑制肿瘤的生长；还可影响细胞连接通讯或抑制酶的活性拮抗致癌剂的作用起化学防癌的作用。通过对各种人参皂苷抑瘤作用的比较发现，人参皂苷Rh2抑制癌细胞增殖作用的能力最强，人参皂苷Rg3次之。 大量的体内体外实验证实人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2， G-Rh2)具有极强的抗肿瘤药理活性，而20 (S)-人参皂苷Rh2比20 (R)-人参皂苷Rh2抗肿瘤活性更强。
20 (S)人参皂苷Rh2的化学结构 G-Rh2对乳腺癌、、卵巢癌、宫颈癌、白血病、肺癌、肝癌、神经细胞和胶质瘤、前列腺癌、黑色素瘤等多数肿瘤组织细胞，在抑制肿瘤细胞增殖、诱导分化和/或凋亡方面均表现出明显的抗癌活性。表明G-Rh2具有非器官特异性广谱抗肿瘤作用。由于G-Rh2是人参的天然活性成分，毒性小，分子量小，与其它抗肿瘤化疗药物存在协同作用。因而，有望成为临床广谱抗肿瘤的治疗药物。 G-Rh2的抗肿瘤作用最终表现为细胞周期阻滞和凋亡。研究发现，参与细胞周期调节的正性和负性调节因子介入其中。在经G-Rh2处理的大多数肿瘤细胞，显示cyclinDl，cyclinD3， cyclinE， cdk6表达下调，cyclinE/cdk2活性降低，而细胞周期抑制蛋白P27kip、P21WAF1/api、 P16"^表达上调。G-Rh2诱导的凋亡与bcl-2无关，牵涉到调亡的执行分子Caspase3。 Caspase3通过剪切PRPP、P21WAF1/GIP1，并可能在PKC S的参与下介导细胞的凋亡。在G-Rh2诱导肺腺癌A549细胞凋亡时有DR4表达上调。 目前，G-Rh2抗肿瘤作用研究虽取得较大进展，但是有关G-Rh2的抗肿瘤机制研究，大多局限于探讨下游某一已知分子和/或信号转导通路与抗癌效应的关系，主要停留在对现象的观察及个别指标的检测上，却对G-Rh2抗癌调控网络缺乏全面的了解。
雌激素(estrogen)是一种能调控广泛靶组织(如生殖、乳腺、中枢神经与骨骼系统等)生长与分化的关键调节子。包括G-Rh2在内的达玛烷型人参皂苷结构与甾体相似，化学结构上有四个反式环构成的甾体骨架，C-20上连有一个较长的侧链。由于人参皂苷具有与甾体相似的结构，也就表现一些甾体的活性。人参皂苷具有甾体骨架和C-20的侧链的结构共性，不同的人参皂苷各有其不同的结构个性。Kova 1 chuk证实G-Rh2具有弱的植物雌激素活性，能与雌激素受体(estrogen rec印tor)ERa结合，其活性接近雌二醇(17 P-estradiol, E2) IC50的30% (Kovalchuk SN， Kozhemyako VB， Atopkina LN，et al. Estrogenic activity of triterpene glycosides in yeast two—hybrid assay.Journal of SteroidBiochemistry&Molecular Biology,2006 ;101 :226-231)。
雌激素信号通过雌激素受体(ERs)介导。人类雌激素受体系核受体超家族的成员(部分组织质膜上亦存在)，包括ERa和ERP两种亚型，分别由位于6号和14号染色体上两个不同的基因编码595和530个氨基酸组成。ERs包含6个结构域(A F)，并组成4个主要的功能域。ERs的转录活化主要通过AF1和AF2 二个活化功能域介导，包括配体诱导AF2功能域变构(AF1为非配体依赖型)募集辅活化子(coactivators)
与辅抑制子(compressors)，并与其互作，活化的ERs可直接与靶基因的ERE元件结合，亦可通过ERs-Spl和ERs-APl复合物与Spl和AP1DNA结合位点结合，从而激活或抑制靶基因的表达。近年研究表明，在雌激素依赖肿瘤中，ERa与ERP有其独特的相反作用。ERa能促进肿瘤增殖，而ERI3有抑制肿瘤增殖作用。如乳腺癌由于受到ERP基因启动子高度甲基化的影响，ERP表达在大多数乳腺癌中丢失。因而ERP被认为是一禾中可會g的抑瘤基因(Heldring N， Pike A， Andersson S， etal. Estrogen receptors :howdo they signal and what are their targets. Physiol Rev. 2007Jul ;87 (3) :905-31;Safe S， Kim K.. Non-classical genomic estrogen receptor (ER)/specificityproteinand ER/activating protein-l signaling pathways. J Mol Endocrinol. 2008Nov ;41 (5):263-75)。 TNFa是一种在免疫和炎症，以及在控制细胞增殖、分化与凋亡中发挥重要作用的多效细胞因子。高浓度的TNFa为肿瘤抑制和凋亡诱导因子，通过和细胞膜特异性的受体TNFR结合，可以激活Caspase蛋白酶、JNK和转录因子NF_ k B三条信号通路，实现其细胞凋亡、细胞毒性、抗病毒以及免疫调节等生物学功能(Aggarwal BB. Signalling pathwaysof the TNFsuperfamily :a double—edged sword. Nature reviews Immunology, 2003 ;3 :745-75)。 人参皂苷由亲脂性的甾体基团和亲水性的糖基两部分组成。由于糖基数目、种类、与苷元连接方式的不同，可形成化学结构和生物活性有差异的多种人参皂苷。研究发现人参皂苷抑瘤活性受母核和糖基影响，抑瘤活性结构与效应关系规律如下抑瘤活性受糖基影响强弱规律是单糖苷(如G-Rh2) >二糖苷>三糖苷>四糖苷；抑瘤活性受
C-20构型影响的强弱规律是20 (S)-人参皂苷Rh2 (20 (S) _G_Rh2) > 20 (R)-人参皂苷Rh2 (20 (R) -G-Rh2) ， 20 (S)-原人参二醇> 20 (R)-原人参二醇。 原人参二醇是该类化合物具有生物活性的主要药效基团和母核结构。但是G-Rh2和原人参二醇溶解性差，生物利用度低。基于原人参二醇结构，马双刚(CN1704427A、CN1778810A)、惠永正(CN1931177A)、楼金(CN1651451A)等公开了其衍生物的制备和抗肿瘤作用。
发明内容
本发明旨在提供一类20(S)-人参皂苷Rh2衍生物，其结构具有下述通式(I)和通
式(II)的化合物
结构通式(II) 其中 Rl和R2可同时为或单独为氢，1-5个碳烷烃基； NR1R2组合也可为含一个氮原子的杂环，如四氢吡咯，哌啶； NR1R2组合也可为含一个以上杂原子的杂环如哌嗪，吗啉等含氮杂环基； A为CH2，N，芳基； B为-C = 0， -CH2-; A和B组合为-CH2CH2-, —CH2C (0) -， -NC (0) -， ， —PhC (0) ， —PhNC (0)，
结构通式(I)
6
Q为-(CH2) n-， n = 0-3 ; R3为为氢，烷烃基，烷酰基，芳酰基，-BAQNR1R2等； W为亚烷基、芳基、或烯烃基； M为氢原子，金属阳离子，胺正离子，有机碱等 本发明包括结构通式(I)和结构通式(II)的20(S)-G-Rh2及药学上可接受的盐，其中 本发明提供的结构通式(I)的衍生物可以与无机酸或有机酸形成药学上可接受的酸加成盐，所述的盐为盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、醋酸盐、硝酸盐、磺酸盐、亚硫酸盐等无机酸及其他所有能够成盐的有机酸盐。 本发明提供的结构通式(II)的衍生物可以与无机碱或有机碱形成药学上可接受的碱加成盐，所述无机碱如氢氧化钾，氢氧化钾，氨水，有机碱如脂肪族胺(如三乙胺)、醇胺类(如乙醇胺)、氨基酸(如组氨酸)、氨基糖(如葡萄胺)。 本发明所述结构通式(I)中，-BAQNRlR2，优选如下通式，但不限于下列通式，
本发明所述结构通式(II)中所述H 0S(0)2-M-C0，优选下列基团及其磺酸盐，但
不限下列基团及其磺酸盐
本发明结构通式(I)和结构通式(II)中化合物及其中间体的制备方法在本发明
合成路线2
Base, RT or reflux
R3、 合成路线3
的第二方面，提供了一种通式(I)化合物的制备方法，它包括下列合成路线和步骤 合成路线1<formula>formula see original document page 9</formula> 合成路线4
含胺基侧链的20(S)-人参皂苷Rh2羧酸酯可通过卤代酰氯或卤代酸酐与 20 (S)-原人参二醇或其衍生物在适宜的有机溶媒中进行反应而得中间体卤代羧酸酯，然后 在碱性条件下，卤代羧酸酯与胺反应(见合成路线1和合成路线2)。有机溶媒可以是三氯
<formula>formula see original document page 9</formula>甲烷、四氢呋喃、吡啶、二甲基甲酰、苯、甲苯、二甲基亚砜、二氯甲烷、二氧六环等，酯化反应 可以在适当的催化剂存在下进行，如三乙胺、二甲氨基吡啶的存在下进行。反应温度可以是 20-150°C。 含胺基侧链的20(S)-人参皂苷Rh2醚衍生物是相应的二卤代烷在碱催化下与 20 (S)-原人参二醇进行烷基化反应而得12位醇氧烷基化得或3， 12位双醇氧烷基取代的卤 代中间体，后者与胺反应可得胺基侧链的20(S)_人参皂苷Rh2醚衍生物(见合成路线3)。 碱可以是氢化钠、氨基钠、叔丁醇钾、叔丁醇钠、异丙醇钠、乙醇钠、甲醇钠等，反应的溶剂可 以是二甲基甲酰胺、苯、甲苯、二氯甲烷、二甲基亚矾等，反应温度可以是0-150' C，。还可 以用相转移催化反应来制备醚衍生物，可用的相转移催化剂有四丁基溴化胺、三乙基苄基 氯化胺等。 20(S)-人参皂苷Rh2的二元(磺)羧酸衍生物是相应的酸酯与20(S)-原人参二 醇在有机溶剂中反应而制得的(见合成路线4)。反应溶剂可能是无水溶剂，无水二氯甲烷， 无水四氢呋喃，无水二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，三氯甲烷等。反应温度为0-15(TC，最好是 在50-10(TC。反应可以在适当的催化剂存在下进行反应，如二甲氨基吡啶、三乙胺的存在下 反应较顺利地进行。 20 (S)-人参皂苷Rh2的二元羧(磺)酸及无机酸衍生物的盐是用相应离子的氢氧 化物的水溶液调pH，然后用有机溶剂沉淀而得。例如，用氢氧化钠，氨水调pH至中性，然后 用丙酮沉淀，得相应的盐。 本发明结构通式(I)和结构(II)是通过对原人参二醇的母体结构进行修饰，引入 一些新的基团，特别是引入含有水溶性极性基团如胺基取代的侧链，或含有磺酸盐的侧链， 合成20 (S) -G-Rh2衍生物，将提高20 (S) _G_Rh2衍生物的溶解度和生物利用度，并增强该类 化合物的抗肿瘤活性。 本发明发现肿瘤坏死因子TNF a是介导20 (S) _G_Rh2衍生物结构通式(I)和结构 通式(II)发挥广谱抗肿瘤作用的关键分子；发现20(S)-G-Rh2衍生物结构通式(I)和结构 通式(II)是通过靶向选择性作用雌激素受体ERa/ERI3 ，既拮抗ERa表达，又激活ERP表 达，进而活化并上调TNF a诱导肿瘤细胞凋亡的分子调控网络，实现G-Rh2及其衍生物结构 通式(I)和结构通式(II)的广谱抗肿瘤作用。本发明亦涉及基于ERa/ERI3-TNFa通路 小分子探针20(S)-G-Rh2衍生物结构通式(I)和结构通式(II)的合成及其在抗肿瘤领域 的应用。 本发明结构通式(I)和结构通式(II)化合物作为肿瘤形成、生长和凋亡ERa/ ERI3-TNFa通路小分子化合物探针及其结构通式(I)和结构通式(II)化合物的抗肿瘤活 性 本发明涉及运用转录组与蛋白质组高通量筛选等现代生物学方法，发现肿瘤坏死 因子TNF a是介导20 (S)-人参皂苷-Rh2 (20 (S) _G_Rh2)及其衍生物结构通式(I)和结构通 式(II)发挥广谱抗肿瘤作用的关键分子；发现20(S)-G-Rh2及其衍生物结构通式(I)和结 构通式(II)是通过靶向选择性作用雌激素受体ERa/ERI3 ，既拮抗ERa表达，又激活ERP 表达，进而活化并上调TNF a诱导肿瘤细胞凋亡的分子调控网络，实现G-Rh2衍生物结构通 式(I)和结构通式(II)广谱抗肿瘤作用。本发明亦涉及基于ERa/ERI3-TNFa通路小分 子探针20(S)-G-Rh2及其衍生物结构通式(I)和结构(II)的合成及其在抗肿瘤领域的应用。 本发明以20(S)-G-Rh2衍生物结构通式(I)化合物为例，深入阐释了 ERa /ERP 介导20(S)-G-Rh2衍生物结构通式(I)化合物激活TNFa诱导细胞凋亡的抗肿瘤分子机制 (详见实施例4 5)。 在本发明提供了结构通式(I)和结构通式(II)化合物在制备抗肿瘤药物剂中的应用。 本发明提供了含有上述20(S)-G-Rh2衍生物及其盐的药物将上述衍生物及其盐 与常规的药用辅剂混合而制成制剂。所述制剂可为颗粒剂、胶囊剂、片剂、注射剂、输液或栓 剂。本发明的药物可用于治疗肿瘤。 结构通式(I)和结构通式(II)中所述的化合物可用于治疗各种肿瘤的生长和转
移，肿瘤主要包括有肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列
腺癌、睾丸癌、结肠癌、卵巢癌、膀肤癌、子宫颈癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺
癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓状癌、支气管癌、骨细胞
癌、上皮癌、胆管癌、绒毛膜癌、胚癌、精原细胞癌、维尔姆斯癌、胶质细胞癌、星形细胞瘤、成
神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血细胞瘤、声带神经瘤、脑膜瘤、成神经细
胞瘤、成视神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、成纤维细胞瘤、纤维瘤、纤
维腺瘤、纤维软骨瘤、纤维囊瘤、纤维粘液瘤、纤维骨瘤、纤维粘液肉瘤、纤维乳头状瘤、粘液
肉瘤、粘液囊瘤、粘液软骨瘤、粘液软骨肉瘤、粘液软骨纤维肉瘤、粘液腺瘤、成粘液细胞瘤、
脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂细胞瘤、脂肪软骨瘤、脂肪纤维瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、
软骨肉瘤、软骨瘤、软骨肌瘤、脊索瘤、绒毛膜腺瘤、绒毛上皮瘤、成绒毛膜细胞瘤、骨肉瘤、
成骨细胞瘤、骨软骨纤维瘤、骨软骨肉瘤、骨软骨瘤、骨囊瘤、骨牙质瘤、骨纤维瘤、骨纤维肉
瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管软骨瘤、成血管细胞瘤、血管角质瘤、血管神经胶质
瘤、血管内皮瘤、血管纤维瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血
管肌脂瘤、血管肌神经瘤、血管粘液瘤、血管网状内皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管
瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纤维瘤、淋巴细胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴细胞
瘤、内皮瘤、成内皮细胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、间皮瘤、结缔组织瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑
肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纤维瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌粘液瘤、急性淋巴白血
病、急性骨髓性白血病、慢性病细胞、红细胞增多症、淋巴瘤、多发性骨髓瘤。 通式(I)和通式(II)中所述的化合物可用于治疗由ERa/ERP-TNFa通路调控
引起的各种有关疾病，主要有肿瘤，风湿性关节炎、血管神经性老年痴呆等。
本发明的主要优点在于 在天然产物20(S)_原人参二醇的3位或12位引入含有取代胺基侧链的烷氧基， 酯基，氨基甲酸酯基等基团，合成20(S)-G-Rh2衍生物，增强抗肿瘤活性。
在天然产物20(S)-原人参二醇的3位或12位引入含有二元酸及其药学上可接受 的与碱中和形成的盐，合成的20(S)-G-Rh2衍生物提高了水溶性。 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件或按照制造厂商所建议的条件。
图1是20(S)-原人参二醇-12l3-2:N， N-二甲基乙酸酯化合物作用于乳腺癌 MCF-7细胞系的剂量_反应曲线； 图2是20(S)-G-Rh2作用乳腺癌细胞系MCF-7和正常乳腺上皮细胞系MCF-10A1 的剂量-反应曲线； 图3表示20 (S) G-Rh2衍生物化合物2与20 (S) _G_Rh2调控ER a /ER P -TNF a信 号通路。
具体实施方式
实施例1 20(S)_原人参二醇-12 |3 -2:氯乙酸酯的制备。
化合物1 原人参二醇lOOmg(O. 0434mmol)置于25ml干燥的单颈瓶中，加入10ml无水氯 仿，搅拌至全溶。向上述溶液中加入三乙胺70 1 (0. 20mmol)，搅拌均匀后加入氯乙酰氯 25iU(0. 13mmol)，立即产生大量白雾。中间补加三乙胺35X10_3ml和氯乙酰氯15 。反 应生成一小极性点，反应情况和第一次实验相同。室温反应48h后原料基本消失。停止反 应，加入10ml水，搅拌lOmin后加入20ml氯仿萃取3次，合并氯仿层，经无水硫酸钠干燥 后，减压旋去溶剂，经二氯甲烷甲醇=25 : l过柱分离，得到95mg 20(S)-G-Rh2衍生物 20(S)-原人参二醇-12P-2—-氯乙酸酯。S (卯m， CHC13) :5. 15 (t， 1H， H-24) ， 4. 95 (m， 1H， H-12) ， 4. 07 (d， 2H， C1CH2C0_) ， 3. 21 (dd， 1H， H—3) ， 2. 37 (s， 2H) ， 2. 16 (m， 1H) ， 1. 91—2. 10 (m， 4H) ， 1. 71 (s， 3H) ， 1. 60-1. 70 (m， 4H) ， 1. 44-1. 60 (m， 6H) ， 1. 20-1. 44 (m， 5H) ， 1. 14 (s， 3H)， 1. 04-1. 12(m， 1H) ， 1. 01(s，3H) ，0. 98(s，3H) ，0. 95(s，3H) ，0. 84-0. 90(m，4H) ，0. 78(s，3H)， 0. 73(d， 1H， H-5)
实施例2 20(S)_原人参二醇-1213 -2:N， N_ 二甲基乙酸酯的制备
化合物2 实施例1中产物lOmg(O. 0186mmol)置于10ml干燥的单颈瓶中，加入2ml无水乙 腈，搅拌至全溶。向上述溶液中加入无水碳酸钾约7mg(0. 0480mmol)，搅拌5min后加入二 甲胺盐酸盐2mg(0.025mmo1)。室温搅拌10min后移入油浴中，加热至50°C 。反应生成一大 极性点，碘熏后可见。原料无水解现象。反应约2.5d后原料基本消失。停止反应，冷却至 室温，减压旋去溶剂。加入2ml水，溶解所得固体后加入5ml乙酸乙酯萃取3次，吸管吸取 有机层，合并乙酸乙酯层，经无水硫酸钠干燥后，减压旋去溶剂，经乙酸乙酯甲醇=8 : 1 过柱分离，得到27mg 20 (S) -G-Rh2衍生物20 (S)-原人参二醇-12 P -2— -N， N- 二甲基乙酸 酯。1H-NMR : S (卯m， CHC13) :5. 15(t， 1H， H-24) ，4. 78 (m， 1H， H-12) ，4. 24(d，2H， NCH2C0_)， 3. 19 (dd， 1H， H-3) ， 2. 34 (s， 6H， n( ) ， 2. 15-2. 25 (m， 1H) ， 1. 95-2. 15 (m， 4H) ， 1. 81-1. 95 (m， 2H) ， 1. 72 (s， 3H) ， 1. 60-1. 69 (m， 4H) ， 1. 38—1. 60 (m， 6H) ， 1. 16—1. 38 (m， 5H) ， 1. 13 (s， 3H)， 1. 04-1. 10(m， 1H) ， 1. 01(s，3H) ，0. 98(s，3H) ，0. 95(s，3H) ，0. 86—0. 94(m， 1H) ，0. 85(s，3H)， 0. 78(s，3H) ，0. 73(d， 1H， H-5)
实施例3 20 (S) _原人参二醇-12 |3 _邻磺酸苯甲酸酯及其铵盐的制备
<formula>formula see original document page 13</formula>
化合物3 原人参二醇lOOmg(O. 0434mmo1)置于25ml干燥的单颈瓶中，加入10ml无水氯仿， 搅拌至全溶。向上述溶液中加入2-磺苯甲酸酐360mg(0. 20mmo1)，在50度，氮气保护下反 应过夜，然后用冰盐浴冷却至0度，加入甲醇氨水溶液，搅拌2小时，然后蒸出溶剂，柱子层 析分离得6mg 20 (S) -G-Rh2衍生物20 (S)-原人参二醇-12 P -邻磺酸苯甲酸酯。1H-NMR : S (卯m， DMS0-d6) :5. 15 (t， 1H， H-24) ， 4. 85 (m， 1H， H-12) ， 7. 20-7. 8 (m， 4H， H-Ar)
实施例4 通过MTT实验发现，20(S)G-Rh2衍生物20(S)-原人参二醇-12P-2—-N， N-二 甲基乙酸酯和20(S)G-Rh2能够抑制多种肿瘤细胞系增殖，如乳腺癌细胞系(MCF-7和 MDAMB-231)人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60)、慢性粒细胞性白血病细胞系(K562)、肺 癌细胞系(A549)、宫颈癌细胞系(HeLa)，具有广谱抗肿瘤作用，并确定了 IC叨值。
如图1所示，20 (S) _G-Rh2衍生物20 (S)-原人参二醇-12 P _2— _N， N_ 二甲基 乙酸酯作用乳腺癌细胞系MCF-748小时的IC5。 = 17.48iiM明显低于20(S)_G_Rh2 IC5。 =44.61iiM，即20(S)-原人参二醇-12l3-2:N， N_ 二甲基乙酸酯抗肿瘤活性明显强于 20(S)-G-Rh2，是20(S)-G-Rh2活性的2. 5倍(图1和图2)。与此同时，发现20(S)-G-Rh2 衍生物通式(I)化合物具有选择性杀伤肿瘤细胞特点，而对正常细胞如乳腺上皮细胞系 MCF-10A1具有较低的细胞毒作用(图1和图2)。
实施例5 Western blot分析结果显示，18 ii M(IC5。) 20 (S)G_Rh2衍生物20(S)-原人参二 醇-1213 _2—-N， N- 二甲基乙酸酯(图3A)和20(S)G_Rh2(图3B)呈浓度依赖性下调乳腺 癌MCF-7细胞ERa表达，上调ERP的表达，进而上调TNFa的表达。20(S)-原人参二 醇-12 P -2— -N， N- 二甲基乙酸酯与20 (S) -G-Rh2调控ER a /ER P -TNF a信号通路发挥抗肿 瘤作用的机制一致(图3A和图3B)。
权利要求
具有下述结构通式(I)和结构通式(II)的20(S)-人参皂苷Rh2衍生物及其盐或与无机酸或有机酸形成药学上可接受的酸加成盐，或与无机碱或有机碱形成药学上可接受的碱加成盐；结构通式(I)结构通式(II)其中，R1和R2选自氢，1-5个碳烷烃基；或NR1R2组合为含一个氮原子的杂环，或NR1R2组合为含一个以上杂原子的含氮杂环基；A为CH2，N，芳基；B为-C＝O，-CH2-；Q为-(CH2)n-，n＝0-3；R3为为氢，烷烃基，烷酰基，芳酰基，-BAQNR1R2等； W为亚烷基、芳基、或烯烃基；M为氢原子，金属阳离子，胺正离子，有机碱等。FSA00000050485200011.tif,FSA00000050485200012.tif
2.根据权利要求1所述结构通式(I)中，-BAQNR1R2选自如下结构
3.根据权利要求1所述结构通式(II)中所述M0S(0)2-M-C0，选自下列基团及其相应的磺酸盐
4. 权利要求1和2所述化合物的制备方法是(1) 通过卤代酰氯或卤代酸酐与20(S)-原人参二醇在有机溶媒中进行反应而得中间体卤代羧酸酯，然后在碱性条件下，卤代羧酸酯与胺反应获得；有机溶媒选自三氯甲烷、四氢呋喃、吡啶、二甲基甲酰、苯、甲苯、二甲基亚砜、二氯甲烷、二氧六环，酯化反应的催化剂选自三乙胺、二甲氨基吡啶；反应温度是20-15(TC ;(2) 二卤代烷在碱催化下与20(S)-原人参二醇进行烷基化反应而得12位醇氧烷基化得或3，12位双醇氧烷基取代的卤代中间体，后者与胺反应可得胺基侧链的20(S)-人参皂苷Rh2醚衍生物，碱选自氢化钠、氨基钠、叔丁醇钾、叔丁醇钠、异丙醇钠、乙醇钠、甲醇钠，反应的溶剂选自二甲基甲酰胺、苯、甲苯、二氯甲烷、二甲基亚矾等，反应温度可以是0-150' C ; (3)通过二元磺酸羧酸(酐)与20 (S)-原人参二醇在有机溶媒中进行反应而得含磺酸基的20(S)_原人参二醇的羧酸酯，用有机或无机碱中和可得相应的磺酸盐。
5. 权利要求1，2中化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及ERα/ERβ-TNFα通路调控肿瘤细胞的形成、生长和凋亡过程，可作为信号探针和新药的靶点。本发明涉及具有抗肿瘤活性20(S)-人参皂苷Rh2衍生物的制备和应用。本发明提供的含有20(S)-人参皂苷Rh2衍生物及其盐的药物主要用于治疗肿瘤等疾病，本发明的药物比20(S)-人参皂苷-Rh2和20(S)-原人参二醇具有更强的抗肿瘤活性。结构通式(I)结构通式(II)
文档编号A61P35/00GK101781353SQ201010118460
公开日2010年7月21日 申请日期2010年3月5日 优先权日2010年3月5日
发明者刘苏友, 张建亭, 罗志勇, 黄景嘉 申请人:中南大学