专利名称：一种纳豆激酶组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种纳豆激酶组合物及其制备方法。
背景技术：
在现代社会生活中，人体内的血栓常引发脉管栓塞、脑血栓、中风、急性心肌梗塞 等严重的心血管疾病，尤其会对中老年人的身体健康造成很大的危害，全世界有血栓患者 1500万，潜在的溶栓剂市场有20亿美元。而纳豆激酶作为一种新型的预防和治疗人血栓性 心血管疾病的安全生物活性物质，自1987年须见洋行博士发现至今，人们已对它进行过广 泛的研究。据大量科学研究、临床试验证实纳豆激酶具有很强的溶解纤维蛋白的作用，能降 低血液粘度、改善血液循环状况，维持血细胞的正常形态和功能等多种生理功能。因此纳豆 激酶制剂主要用于预防和治疗脑血栓、脑中风、老年痴呆症等。开发纳豆激酶的口服制剂产 品，作为预防和治疗血栓性疾病具有广阔的市场前景与深远的社会意义。纳豆激酶在25 45°C范围内酶活保持相对稳定，随着温度升高，酶迅速失活。温 度超过60°C，2小时内酶活力完全丧失。纳豆激酶在自然PH状态下比较稳定PH在4 12 范围内活性相对稳定，PH在7 9范围内活性最为稳定，PH低于4时，迅速变性失活。用传统的制备肠溶片的方法，即素片包肠溶衣，这种方法不适合于纳豆激酶，其原 因是该方法涉及到机械压片，而用压片机压片，物料内部会产生局部高温，从而会使纳豆激 酶活性丧失。而肠溶胶囊由于具有易破裂、渗漏，崩解迟缓等各种缺点，用肠溶胶囊直接装 填纳豆激酶在使用上也受到了限制。利用微囊制剂工艺(如专利公开号CN1766096A所述)，将纳豆激酶与药用辅料混 合，制软材，制丸芯，喷入包衣液包衣，装胶囊。制剂释放度检测试验结果显示这种制备肠溶 微囊制剂的方法有利于减少纳豆激酶体内活性损失。但是这种制剂方法存在一定的缺点 (1)由于包衣时温度较低(30°C)，容易造成微丸的粘连，影响微囊制剂的成型。(2)包衣后 微囊还需一个低温(30°C )烘箱内的膜愈合过程，由于温度较低，所以膜愈合时间较长，需8 小时，在生产上大大地受到了限制。还有技术(如专利公开号CN1714675所述)，纳豆激酶和除核心辅料之外的其他辅料的 混合物通过气流喷雾干燥被微胶囊化固定在核心辅料上。经过气流喷雾干燥技术处理制备的微 胶囊化纳豆激酶药物组合物可直接口服。活性成分纳豆激酶在哺乳动物的胃中不被胃蛋白酶分 解失活，提高了药物的稳定性和有效率。然而使用气流喷雾干燥技术存在的缺点就是干燥器的体 积大，传热系数低，导致热效率低，动力消耗大。目前国内工业规模的喷雾干燥器，热效率一般为 30% 50%，国外带有废热回收的喷雾干燥机，热效率可达到70%，但该设备只有在生产能力大 于100千克(水)/小时才有经济意义。因此使用气流喷雾干燥技术制备纳豆激酶微胶囊药物组 合物不仅在生产工艺上提出了较高的要求，在经济成本上也是一个很大的限制。
发明内容
为了解决其技术问题，本发明提供了一种纳豆激酶组合物及其制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种纳豆激酶组合物，包括纳豆激 酶、成膜材料、成膜剂，所述成膜材料由纤维素酸酯类、丙烯酸树脂类、聚乙烯醇酞酸酯、甲 基丙烯酸共聚物、虫胶、玉米朊中的一种或多种与可溶性溶剂混合而成。其制备方法步骤如下a、按1 (3 19)的重量比例混合成膜材料与溶剂，制备 成膜液；b、按(0.5 2) 1的重量比例将纳豆激酶加入到成膜液中，充分混合均勻；C、在 步骤b的混合物中加入0. 5 2倍量的成膜剂，充分混合均勻，并制备成软材；d、软材经制 粒、40-60 0C干燥和整粒工序制成纳豆激酶组合物颗粒。进一步说明所述成膜剂由水和有机醇类中的一种或两种混合而成。为了纳豆激酶组合物更有益于健康，进一步的所述纳豆激酶组合物还添加有稀 释剂。
进一步的所述稀释剂由淀粉类、糖类、纤维素类、无机盐类、糖醇类中的一种或多 种混合而成。为了根据客户的不同服用习惯，进一步的将所述步骤d制成的纳豆激酶组合物 颗粒进行剂型转化。本发明与现有技术相比具有如下显著特征1、制备工艺简单易行、可实现自动化、 生产效率高、工艺生产设备投资少、与现有技术相比降低了制造成本低。2、利用简单工艺， 有效的改善了制备所得的组合物中纳豆激酶的耐酸稳定性，并且易人体吸收。
具体实施例方式一种纳豆激酶组合物，包括纳豆激酶、成膜材料、成膜剂，所述成膜材料由纤维素 酸酯类、丙烯酸树脂类、聚乙烯醇酞酸酯(PVAP)、甲基丙烯酸共聚物、虫胶、玉米朊中的一种 或多种与可溶性溶剂混合而成，所述成膜剂由水和有机醇类中的一种或两种混合而成，而 为了纳豆激酶组合物更有益于健康，所述纳豆激酶组合物还添加有稀释剂，其稀释剂的成 分由淀粉类、糖类、纤维素类、无机盐类、糖醇类中的一种或多种混合而成。其具体配方及用量如下配方用量(％)_纳豆激酶10 100000单位成膜液8 20成膜剂8 20稀释剂0 60所述纳豆激酶组合物的制备方法步骤如下a、按1 (3 19)的重量比例混合成 膜材料与溶剂，制备成膜液；b、按(0.5 2) 1的重量比例将纳豆激酶加入到成膜液中， 充分混合均勻；C、在步骤b的混合物中加入0. 5 2倍量的成膜剂，充分混合均勻，并制备 成软材；d、软材经制粒、40-6(TC干燥和整粒工序制成纳豆激酶组合物颗粒。为了根据客户的不同服用习惯，进一步的将所述步骤d制成的纳豆激酶组合物 颗粒进行剂型转化，如胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、散剂等。客户通过服用本发明的纳豆激酶组合物可以有效的预防和治疗脑血栓、脑中风、 老年痴呆症等，下面给出对本发明的纳豆激酶组合物的检测数据以及结果
一 .纳豆激酶组合物配方如下表(组合物中纳豆激酶的活性为1，000FU)
~ZMΓ~035~~1525Γ~5二、纳豆激酶组合物检测指标纳豆激酶组合物中纳豆激酶活性耐酸性考察1.配制人工胃液、磷酸缓冲液(1)人工胃液0.9ml浓盐酸加入IOOml容量瓶，加蒸馏水定容至100ml，即得 PHl. 2的人工胃液。(2)ΡΗ7·8磷酸缓冲液甲液磷酸氢二钠71. 8g，溶于IOOOml水乙液磷酸二氢钠2. 76g，溶于IOOml水取甲液997. 35ml,乙液92. 65ml混合即得。2.酸破坏分别称取纳豆激酶组合物样品(上述样品编号1、2、3、4、5，每个编号样品各取2 份)10份，加入25ml容量瓶中，加IOml人工胃液振摇均勻，水浴37°C放置2小时，每隔10 分钟振摇一次。3.中和加IOmlO. 2MPH7. 8磷酸缓冲液，振摇使组合物分散均勻后3000转/分钟离心3分
钟，取上清液待测。4.纤维蛋白平板法测定活性保留率(1)纤维蛋白平板的制备称取纤维蛋白原，用30ml0. 1MPH7. 8PBS液配成浓度为0. 2% -0. 5%;称取凝血酶， 用ImlO. 1MPH7. 8PHS液溶解，配成浓度为0. 2% -0. 5%。称取琼脂粉，加80ml0. 1MPH7. 8PHS 液，配成浓度为1.0% _2.0%，加热煮沸，冷却至50°C左右，将纤维蛋白原液与牛凝血酶液 加至琼脂液中，轻轻摇勻后倒至平皿内，用药匙将气泡去除，室温冷却，用打孔器打孔；
(2)用微量进样器移取各样品酶液少许加至纤维蛋白平板孔中；(3)将上有样品酶液的纤维蛋白平板置37°C烘箱内温育4小时；(4)用游标卡尺测量溶圈直径，计算酶活大小。表一纳豆激酶组合物样品耐酸性考察数据表 结论5批样品耐酸性考察实验结果显示用本方法制备的纳豆激酶组合物在酸性条件 下活性得以改善。用本方法制备的5批纳豆激酶组合物与上市3个产品相比耐酸性(样品 活性保留率)具有明显优势。纳豆激酶组合物(样品编号01)释放度检查方法小杯法，转速100rpm，温度37°C，释放介质0· lmol/LHCl IOOml中2小 时，分别于20min、40min、60min、80min、lOOmin、120min取样，加入PH7. 8硼砂缓冲液中和作 为样品溶液，测定酶活；120min取样结束后，向杯中加入PH7. 8硼砂缓冲液100ml，继续释放 45分钟，取样，测定酶活。释放介质使用前脱气处理。酶活测定方法(1)取试管加入1. 4ml硼砂缓冲液及0. 4ml纤维蛋白原，于37士0. 2°C水浴槽中，静置5分钟。(2)上述试管再加入0. Iml牛凝血酶液，并充分震荡混合，于37士0. 2°C水浴槽中， 静置10分钟。(3)反应组——步骤2完成，在精准第10分钟时，开始加入0. Iml刚刚稀释之样 品溶液，并充分震荡混合5秒，于37士0. 2°C水浴槽中，静置1小时，并与20分钟及40分钟 后，各再进行震荡混合。对照组一步骤 2完成，在精准第10分钟时，开始加入2ml三氯醋酸甲酯，并充分 震荡混合，再加入0. Iml刚刚稀释之样品溶液，并充分震荡混合，于37士0.2°C水浴槽中静 置20分钟。(4)反应组的部分，在步骤3完成，在精准第1小时，开始加入2ml三氯醋酸甲酯， 并充分震荡混合，于37士0. 2°C水浴槽中静置20分钟。(5)将试管中反应物离心，12，OOOrpmlO分钟。(6)反应组及对照组分别取上清液测UV275nm之吸光值，并记录之得反应组吸光值 Ar及对照组吸光值Ac。(7)根据吸光度计算酶活。实验结果如下表二释放实验2小时内纳豆激酶样品溶液酶活测定数据表 由检测结果可知用本方法制备的纳豆激酶组合物中纳豆激酶胃内释放度小于90%，确保组合物中大于10%的纳豆激酶进入到肠中释放，纳豆激酶经肠吸收后发挥生理功效。
权利要求
一种纳豆激酶组合物，其特征是所述纳豆激酶组合物包括纳豆激酶、成膜材料、成膜剂，所述成膜材料由纤维素酸酯类、丙烯酸树脂类、聚乙烯醇酞酸酯、甲基丙烯酸共聚物、虫胶、玉米朊中的一种或多种与可溶性溶剂混合而成。
2.根据权力要求1所述的纳豆激酶组合物，其特征是所述成膜剂由水和有机醇类中 的一种或两种混合而成。
3.根据权力要求1所述的纳豆激酶组合物，其特征是所述纳豆激酶组合物还添加有 稀释剂。
4.根据权力要求3所述的纳豆激酶组合物，其特征是所述稀释剂由淀粉类、糖类、纤 维素类、无机盐类、糖醇类中的一种或多种混合而成。
5.一种根据权利要求1所述的纳豆激酶组合物的制备方法，其特征是所述制备方法 步骤如下a、按1 (3 19)的重量比例混合成膜材料与溶剂，制备成膜液；b、按(0. 5 2) 1的重量比例将纳豆激酶加入到成膜液中，充分混合均勻；c、在步骤b的混合物中加 入0. 5 2倍量的成膜剂，充分混合均勻，并制备成软材；d、软材经制粒、40-60°C干燥和整 粒工序制成纳豆激酶组合物颗粒。
6.根据权利要求5所述的制备纳豆激酶组合物的制备方法，其特征是将所述步骤d 制成的纳豆激酶组合物颗粒进行剂型转化。
全文摘要
本发明涉及一种纳豆激酶组合物及其制备方法。一种纳豆激酶组合物，包括纳豆激酶、成膜材料、成膜剂，其制备方法为a、按1∶(3～19)的重量比例混合成膜材料与溶剂，制备成膜液；b、按(0.5～2)∶1的重量比例将纳豆激酶加入到成膜液中，充分混合均匀；c、在步骤c的混合物中加入0.5～2倍量的成膜剂，充分混合均匀，并制备成软材；d、软材经制粒、40-60℃干燥和整粒工序制成纳豆激酶组合物颗粒。本发明的优点为1、制备工艺简单易行、可实现自动化、生产效率高、工艺生产设备投资少，制造成本低。2、利用简单工艺，改善了稳定性，易人体吸收。
文档编号A61K47/38GK101862447SQ201010125220
公开日2010年10月20日 申请日期2010年3月16日 优先权日2010年3月16日
发明者徐华良, 肖洁瑾, 邹丽萍, 顾瑜 申请人:苏州市玮琪生物科技有限公司