专利名称：1，2，3-三氮唑化合物及其在制备吲哚胺2，3-双加氧酶抑制剂中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及的1，2，3-三氮唑的优选化合物结构式如下，通过测定对IDO的半数 有效抑制浓度IC5。及部分化合物对IDO的抑制常数Ki发现，苯环邻位含有卤素的4-芳 基-1H-1 ， 2， 3-三唑类化合物4- (2-溴芳基)-1H-1 ， 2， 3-三氮唑和4- (2-氯芳基)_1H_1 ， 2，3-三氮唑具有较强的ID0抑制活性。
本发明公开的4-芳基-1H-1 ， 2， 3-三氮唑类化合物及其衍生物4- (2_溴苯 基)-lH-l，2，3-三氮唑(化合物6)及4-(2-氯苯基)-lH-l，2，3-三氮唑(化合物8)具有 IDO抑制活性，有广阔的应用前景，可以用于具有IDO介导的色氨酸代谢途径的病理学特征 的疾病，包括癌症、艾滋病、阿尔茨海默病、抑郁症和白内障等重大疾病的治疗。
具体实施例方式
下面的实施例是对本发明的进一步说明，而不是限制本发明的范围。 实施例1 :4-苯基-IH-I， 2， 3-三氮唑(化合物1)的制备
C02H
NaN3
Pd2(dba)3， Xantphos DMF 向充入氮气的封管中加入反-2，3-二溴-3-苯基丙酸(lmmol)禾口3mL的DMF，再加 ANaN3(4. Ommol)，室 益搅拌30min。随即加入Xantphos (0. 04mmol) ， Pd2 (dba) 3 (0. Olmmol)， 立即密封，油浴加热至105°C ，温度恒定后继续加热30h，合成4-苯基-IH-I， 2， 3-三氮唑， 收率71%。其中反-2，3-二溴-3-苯基丙酸与NaN3的摩尔比为1 : 4.0;反-2，3-二 溴-3-苯基丙酸与Xantphos的摩尔比为l : 0. 04 ;反-2， 3-二溴-3-苯基丙酸与Pd2 (dba) 3 的摩尔比为l : 0.01 ;反应溶剂DMF总体积与反-2，3-二溴-3-苯基丙酸的物质的量比为 3(mL) : l(mmoL)。产物为白色固体。丄H NMR(500MHz， CDCl3+d6_DMS0) : S 7. 32-7. 44(3H， m) ， 7. 83-7. 84 (2H， m) ， 8. 23 (1H， s， broad) MS (ESI) m/z : 145 (M+)
实施例2 :4-(2-溴苯基)-lH-l，2，3-三氮唑(化合物6)的制备
-N
CO,H
NaN，
Pd2(dba)3, Xantphos— DMF
N
6 向充入氮气的封管中加入反-2， 3- 二溴-3-(2-溴苯基)丙酸(lmmol)和 3mL的DMF，再加入NaN3 (4. Ommol)，室 益搅拌30min。随即加入Xantphos (0. 04mmol)， Pd2 (dba) 3 (0. Olmmol)，立即密封，油浴加热至110°C ，温度恒定后继续加热36h，合成 4-(2-溴苯基)-lH-l，2，3-三氮唑，收率55X。其中反-2， 3-二溴-3-(2-溴苯基)丙酸 与NaNj勺摩尔比为l : 4. 0 ;反-2，3-二溴-3-(2-溴苯基)丙酸与Xantphos的摩尔比为
71 : 0.04 ;反-2，3-二溴-3-(2-溴苯基)丙酸与P4(dba)3的摩尔比为1 : 0. 01 ;反应溶 剂DMF总体积与反-2， 3- 二溴-3- (2-溴苯基)丙酸的物质的量比为3 (mL) : 1 (mmoL)。产 物为白色固体。'H NMR(500MHz，CDCl3+d6-DMS0) : S 7. 26-7. 99 (4H， m) ， 8. 38 (1H， s， broad) MS(ESI)m/z :223 (M+). 实施例3 :4-(2-氯苯基)-lH-l，2，3-三氮唑(化合物8)的制备
向充入氮气的封管中加入反-2，3-二溴-3-(2-氯苯基)丙酸(lmmol)和 3mL的DMF，再加入NaN3 (4. Ommol)，室 益搅拌30min。随即加入Xantphos (0. 04mmo1)， Pd2 (dba) 3 (0. Olmmol)，立即密封，油浴加热至1 l(TC ，温度恒定后继续加热36h，合成 4-(2-氯苯基)-lH-l，2，3-三氮唑，收率56X。其中反_2， 3-二溴-3-(2-氯苯基)丙酸 与NaNj勺摩尔比为l : 4. 0 ;反-2，3-二溴-3-(2-氯苯基)丙酸与Xantphos的摩尔比为 1 : 0.04 ;反-2，3-二溴-3-(2-氯苯基)丙酸与Pd2(dba)3的摩尔比为1 : 0. 01 ;反应溶 剂DMF总体积与反-2， 3- 二溴-3-(2-氯苯基)丙酸的物质的量比为3 (mL) : 1 (mmoL)。产 物为白色固体。力NMR(500MHz，CDCl3+d6-DMS0) : S 7. 31-7. 60 (4H， m) ， 8. 18 (1H， s， broad) MS(ESI)m/z :179(M+)。其它化合物的合成参照上述方法完成。
实施例4 :5-溴代-4-苯基-IH-I， 2， 3_三氮唑(化合物14)的合成
向圆底烧瓶中加入4-苯基-lH-l，2，3-三氮唑145mg(lmmol) 、 N-溴代丁二酰亚 胺178mg(lmmo1) ，2mL DMF作溶剂，室温下剧烈搅拌反应2. 5小时。TLC显示反应完成后， 向反应体系内加入水，用乙酸乙酯萃取，分出有机相，有机相水洗3次，用无水硫酸钠干 燥。真空旋转蒸发除去乙酸乙酯，硅胶柱分离得目标产物178mg黄色固体，收率80X。 ^ NMR(500MHz，CDCl3+DMS0-d6 = 1 : 1) : S 7. 88 (d， J = 7. 2Hz， 2H) ， 7. 49 (t， J = 7. 4Hz， 2H)， 7. 43(t， J = 7. 3Hz， 1H)。 实施例5 :5-氯代-4-苯基-IH-I， 2， 3_三氮唑(化合物15)的合成
向圆底烧瓶中加入4-苯基-1H-1 ， 2， 3-三氮唑145mg (lmmol) 、 N-氯代丁二酰
C02H
Pd2(dba)3, Xantphos
8亚胺134mg(lmmol)，2mL DMF作溶剂，升温至90°C ，反应进行16小时。TLC显示反应完成 后，向反应体系内加入水，用乙酸乙酯萃取，分出有机相，有机相水洗3次，用无水硫酸钠干 燥。真空旋转蒸发除去乙酸乙酯，硅胶柱分离得目标产物，白色固体53mg，收率52X。 ^ NMR(500MHz，CDCl3+DMS0-d6 = 1 : 1) : S 7. 88 (t， J = 7. 5Hz， 2H) ， 7. 47 (t， J = 7. 5Hz， 2H)， 7. 40(t， J = 7. 4Hz， 1H)。 实施例6 :4-苯基-IH-I， 2， 3-三氮唑的硝化产物(化合物17)的合成
向圆底烧瓶中加入4-苯基-1，2，3_三氮唑87mg(0. 6,1)，倾入lg(10. 2,1) 和浓硝酸189mg(3mmo1) ，2mL DMF作溶剂，冰浴下剧烈搅拌反应1小时。TLC显示反应完成 后，向反应体系内加入水，用乙酸乙酯萃取，分出有机相，有机相水洗3次，用无水硫酸钠干 燥。真空旋转蒸发除去乙酸乙酯，硅胶柱分离得化合物17，黄色固体33mg，收率71X。 ^ NMR (500MHz ， CDCl3+DMSO_d6 =1 : 1) : S 8. 33 (d， J = 8. 9Hz ， 2H) ， 8. 16 (d， J = 8. 7Hz ， 2H). 其它化合物的合成参照上述方法完成。 实施例7 :5_ (4-溴苯基)-1H-四氮唑(化合物l9)的合成
向圆底烧瓶中加入4-对溴苯乙腈182mg(lmmol)、叠氮钠1053mg(16mmo1) ， 10mL DMF作溶剂，16(TC下剧烈搅拌回流反应3天。TLC显示反应完成后，过滤，向反应体系内加 入水，10%盐酸调节到ra = 2，用乙酸乙酯萃取，分出有机相，有机相水洗3次，用无水硫酸 钠干燥。真空旋转蒸发除去乙酸乙酯，硅胶柱分离得目标物87mg，收率77X。
实施例8 : IDO抑制活性检测 先将50mM磷酸钾缓冲液(pH 6. 5) ， 40mM维生素C， 400 ii g/ml过氧化氢酶，20 ii M 亚甲基蓝，底物L-色氨酸和待测化合物(1-21)混合，混合液37t:保温5分钟，再向上述 混合液内加入ID0酶，反应在37。C下进行30分钟，加入30X (w/v)三氯乙酸200iil使反 应终止，反应体系在65t:加热15分钟，使之完成从甲酰犬尿氨酸到犬尿氨酸的转化，然后 12000rpm旋转10分钟，取上清与等体积2% (w/v)对_ 二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液混合， 犬尿氨酸与之反应产生的黄颜色可使用酶标仪在490nm观测。
实施例9 :是否为可逆抑制剂的判定 在固定抑制剂浓度的情况下，用一系列不同浓度的酶与抑制剂反应并测定反应速 度。以反应速度对酶浓度(v [E])作图，根据曲线的特征可以判定是否是可逆抑制剂。
反应条件在500iU的反应体系中，先加入50mM磷酸钾缓冲液(pH 6. 5)，40mM维 生素C，400ii g/ml过氧化氢酶，2011] 亚甲基蓝，300慮底物卜色氨酸或同时加入100mM抑制剂(化合物l，化合物6和化合物8)，混合液37t:保温5分钟，再向上述混合液内分别加 入不同体积的IDO酶(对于化合物6和化合物8，加入酶的体积分别为1、5、8、10 1 ;对于 化合物l，加入的酶的体积分别为0. 625、 1. 25、2. 5、5、10iU)，反应在37。C下进行30分钟， 加入30% (w/v)三氯乙酸200ii1使反应终止，反应体系在65t:加热15分钟，使之完成从 甲酰犬尿氨酸到犬尿氨酸的转化，然后12000rpm旋转10分钟，取上清与等体积2% (w/v) 对-二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液混合，用酶标仪检测490nm波长读数。以v [E]做图，加 入化合物1、化合物6以及化合物8后，与不加抑制剂相比，曲线的斜率降低，说明化合物1、 化合物6和化合物8是IDO的可逆抑制剂。 实施例10 :4-苯基-IH-I， 2， 3-三氮唑(化合物1)抑制剂类型判断及Ki值测定
在500iU的反应体系中，先加入50mM磷酸钾缓冲液(pH 6. 5) ，40mM维生素C， 400 ii g/ml过氧化氢酶，20 ii M亚甲基蓝，分别加入100、250、300mM底物L-色氨酸，在一 个底物浓度下，向各管反应体系中分别加入不同浓度的化合物1 (40 ii M，60 ii M， 100 ii M， 140 ii M， 180 ii M)混合液37。C保温5分钟，再向上述混合液内加入10 y 1 IDO(约20nM)，反 应在371:下进行30分钟，加入30% (w/v)三氯乙酸200iil使反应终止，反应体系在65t:水 浴加热15分钟，使之完成从甲酰犬尿氨酸到犬尿氨酸的转化，然后12000rpm离心10分钟， 取上清与等体积2% (w/v)对-二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液混匀反应，用酶标仪检测490nm 波长读数。以Dixon作图法(1/v [I])判定化合物1的抑制剂类型，以S/v [I]作图， 得到抑制剂的Ki值。化合物1为IDO的反竞争性抑制剂，Ki值为22. 5 ii M。
实施例11 :4-(2-溴苯基)-lH-l，2，3-三氮唑(化合物6)抑制剂类型判断及Ki 值测定 在500iU的反应体系中，先加入50mM磷酸钾缓冲液(pH 6. 5) ，40mM维生素C， 400ii g/ml过氧化氢酶，20iiM亚甲基蓝，分别加入100、200、400mM底物L-色氨酸，在一个 底物浓度下，向各管反应体系中分别加入不同浓度的化合物6 (10 ii M， 26 ii M， 50 y M， 75 y M， 100 ii M， 150 ii M)混合液37。C保温5分钟，再向上述混合液内加入10 y 1 IDO(约20nM)，反 应在37。C下进行30分钟，加入30X (w/v)三氯乙酸200ul使反应终止，反应体系在65。C水 浴加热15分钟，使之完成从甲酰犬尿氨酸到犬尿氨酸的转化，然后12000rpm离心IO分钟， 取上清与等体积2% (w/v)对-二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液混匀反应，用酶标仪检测490nm 波长读数。以Dixon作图法(1/v [I])判定化合物6的抑制剂类型，以S/v [I]作图， 得到抑制剂的Ki值。化合物6为IDO的反竞争性抑制剂，Ki值为18 ii M。
实施例12 :4-(2-氯苯基)-lH-l，2，3-三氮唑(化合物8)抑制剂类型判断及Ki 值测定 在500iU的反应体系中，先加入50mM磷酸钾缓冲液(pH 6. 5) ，40mM维生素C， 400 ii g/ml过氧化氢酶，20 ii M亚甲基蓝，分别加入100、200、300mM底物L-色氨酸，在一 个底物浓度下，向各管反应体系中分别加入不同浓度的化合物8(26iiM，50iiM，75iiM， 100 ii M， 150 ii M)混合液37。C保温5分钟，再向上述混合液内加入10 y 1 IDO(约20nM)，反 应在371:下进行30分钟，加入30% (w/v)三氯乙酸200iil使反应终止，反应体系在65t:水 浴加热15分钟，使之完成从甲酰犬尿氨酸到犬尿氨酸的转化，然后12000rpm离心10分钟， 取上清与等体积2% (w/v)对-二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液混匀反应，用酶标仪检测490nm 波长读数。以Dixon作图法(1/v [I])判定化合物8的抑制剂类型，以S/v [I]作图，得到抑制剂的Ki值。化合物8为IDO的反竞争性抑制剂，Ki值为14. 5 M。
实施例13 :半数有效抑制浓度IC50的测定 先将50mM磷酸钾缓冲液(pH 6. 5) ， 40mM维生素C， 400 ii g/ml过氧化氢酶，20 ii M 亚甲基蓝，底物L-色氨酸150mM和抑制剂混合。抑制剂浓度选用100， 200， 400， 600， 800， 1000， 1200 ii M混合液37t:保温5分钟，再向上述混合液内加入IDO酶。反应在37。C下进 行30分钟，加入30% (w/v)三氯乙酸200ii1使反应终止，反应体系在65t:加热15分钟， 使之完成从甲酰犬尿氨酸到犬尿氨酸的转化，然后12000rpm旋转10分钟，取200iU上清 与等体积2% (w/v)对-二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液混合，犬尿氨酸与之反应产生的黄颜色 可使用酶标仪在490nm检测，所得结果利用IC5。计算软件计算。 实施例14 :利用上述方法，对化合物1-22的IDO抑制活性进行测定，其IC5。以及 部分化合物对IDO的抑制常数Ki如下，并用目前体内外实验中通用的IDO抑制剂1-甲基 色氨酸(l-MT，市售)作为对照物。
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权利要求
1，2，3-三氮唑化合物，其特征是具有通式(I)的结构，其中，R1为溴、氯、氟、碘、甲基、甲氧基、羧酸酯或1，2，3-三氮唑基团；R1其取代位置可以为对位，间位或邻位；R2为氯，溴，碘或硝基。FSA00000064935100011.tif
2.按权利要求1所述的1，2，3-三氮唑化合物，其特征是具有下述结构的化合物11，
3.按权利要求l所述的1，2，3-三氮唑化合物，其特征是具有下述结构的化合物6，
4.按权利要求l所述的1，2，3-三氮唑化合物，其特征是具有下述结构的化合物8，
5. 权利要求3所述的1 ， 2， 3-三氮唑化合物在制备治疗或预防具有吲哚胺2， 3-双加氧 酶介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病的药物中的应用。
6. 权利要求4所述的1 ， 2， 3-三氮唑化合物在制备治疗或预防具有吲哚胺2， 3-双加氧 酶介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病的药物中的应用。
7. 按权利要求5或6所述的用途，其中所述的具有吲哚胺2， 3-双加氧酶介导的色氨酸 代谢途径的病理学特征的疾病包括肿瘤性疾病、癌症、阿尔茨海默病、自身免疫性疾病、白 内障、心境障碍、抑郁症和焦虑症。
全文摘要
本发明属于药物化学领域，涉及一种1，2，3-三氮唑化合物，包括4-(2-溴苯基)-1H-1，2，3-三氮唑和4-(2-氯苯基)-1H-1，2，3-三氮唑。经过吲哚胺2，3-双加氧酶抑制活性测定，结果表明，本发明公开的1，2，3-三氮唑化合物作为吲哚胺2，3-双加氧酶抑制剂，有广阔的应用前景，可以用于具有吲哚胺2，3-双加氧酶介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病，包括癌症、艾滋病、阿尔茨海默病、抑郁症和白内障等重大疾病的治疗。
文档编号A61K31/4192GK101786993SQ20101013421
公开日2010年7月28日 申请日期2010年3月26日 优先权日2010年3月26日
发明者于存静, 匡春香, 杨青, 郑茂发 申请人:复旦大学