专利名称：蒲公英甾醇的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，具体为蒲公英留醇在制药方面的应用，尤其是在制备 a-葡萄糖苷酶抑制剂、a -淀粉酶抑制剂和制备治疗糖尿病药物方面的应用。糖尿病是一种以高血糖为特征，代谢紊乱，与胰岛素分泌密切相关的全身性疾病。 全球糖尿病患者超过1. 5亿，我国约有2000万，其中80%为非胰岛素依赖性糖尿病(2型)。 糖尿病已成为心血管病、癌症之后的第三位“健康杀手”。对于2型糖尿病人，餐后高血糖对机体的危害远远超过空腹高血糖，不仅极易诱 发各种并发症，还会极大地增加糖尿病的死亡率。所以降低餐后血糖是预防糖尿病、减少并 发症和降低死亡率的重要措施。目前a-葡萄糖苷酶抑制剂已被推荐为降低餐后血糖的一 线药物。食物中主要成分是碳水化合物_淀粉，正常人进食后淀粉等被胰淀粉酶和糖苷酶 水解成单糖被机体吸收。糖尿病患者因代谢障碍而导致血糖、胰岛素和脂蛋白的浓度发生 异常改变。控制的方法是限制多糖在消化道内的分解和吸收。为此要降低a-葡萄糖苷酶 和a "淀粉酶的活性，阻滞双糖水解成单糖，延缓糖的吸收，使血糖平稳。Hussain Z以及Cho S. Y.等报道，蒲公英乙醇提取物有促进胰岛素分泌和降低糖 尿病小鼠的血清葡萄糖浓度的效果。在我们筛选中药常见成分体外对a-葡萄糖苷酶和 a -淀粉酶抑制活性时，发现了蒲公英甾醇有很强的抑制活性，IC50 < 8 u g/ml，是阿卡波糖 活性的5 60倍，这为开发防治糖尿病及其并发症的新药展现了令人鼓舞的前景。
发明内容
本发明的目的在于将蒲公英甾醇应用于制备a -葡萄糖苷酶抑制剂。本发明另一个目的在于将蒲公英甾醇应用于制备a-淀粉酶抑制剂。本发明还将蒲公英甾醇应用于制备治疗糖尿病的药物。蒲公英留醇(taraxasterol)，其结构如式(I)所示，是蒲公英提取物中的一个组 分，经过体外试验证实，蒲公英留醇(taraxasterol)，对于a -葡萄糖苷酶和a -淀粉酶有 抑制作用。以阿卡波糖为对照，其抑制效果是阿卡波糖的5 60倍。<formula>formula see original document page 3</formula>式(I)将蒲公英甾醇应用于制备治疗糖尿病的药物，可以单独使用，也可以与其他成分 组合成复方，用于制备降低餐后血糖、防治糖尿病的各种制剂。
背景技术：
所述的药物还包括药学上可接受的载体，剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊、软胶囊、滴 丸、口服液、注射剂等。所述的药物中，蒲公英甾醇的含量为5% 100%。经体外实验证明蒲公英留醇对a _葡萄糖苷酶和a -淀粉酶活性有很强的抑制作 用，为开发成降低餐后血糖，防治糖尿病及其病发症提供科学依据。而且蒲公英留醇在植物 中存在范围广，如蒲公英和旋覆花等中药中含量较高，来源广泛，易得，性质比较稳定。既安 全又经济，极具推广应用价值，有望开发成防治糖尿病及其并发症的新药。
具体实施例方式试剂阿卡波糖对照品购自上海史瑞可生物有限公司；蒲公英留醇对照品由上海 药物研究所提供；蒲公英留醇样品参照文献(上海药物研究所.中草药有效成分提取与分 离，上海科技出版社，1983，382)方法提取制备所得。a -葡萄糖苷酶(a-Glueosidase，Type I From Bakers Yeast)、a-淀粉酶 (a -Amylase, Type VI-B :From Porcine pancreas，PPA)、4_ 硝基苯酚-a _D_ 口比喃葡萄糖苷 (4-Nitropheny- a -D-glucopyranoside, PNPG)禾口淀粉天青(Starch Azure :Potato starch covalently linked with RemazolBriliant Blue R)均购自 Sigma ；其余试剂均为分析纯。仪器HWS26型电热恒温水浴锅；PHS-25酸度计；Anke TGL 一 16C离心机，上海申 生科技；上海棱光S54PC紫外可见分光光度计实施例1 a -葡萄糖苷酶抑制剂活性测定参照文献(中药材，2005，28(1) 38)的方法，以4_硝基苯酚-a _D_吡喃葡萄糖 苷(PNPG)为底物。反应体系为:2mL 0. lmol L-1的磷酸盐缓冲液(pH 6. 8)中加入待测样品葛根 素溶液100 UL(DMS0溶解，剂量见表1)，还原谷胱甘肽50 uL(lmg mL—1)，a -葡萄糖苷 酶100 ii L (0. 57U mL—1)，摇勻后37 °C温浴10分钟；然后加入37 V温浴好的底物PNPG 0. 2mL(20mmol -L—1) 37°C水浴反应 15min 后，加入 0. lmol I71Na2C03 溶液 10mL 终止反应，在 波长400nm处测定吸光度。阳性对照物为阿卡波糖，结果见表1。a -葡萄糖苷酶抑制剂活性计算公式如下
A空白-(A样品-A背景)
a-葡萄糖苷酶活性抑制率(％) =----------------------------xioo
A空白式中Aee 不加样品反应后的吸收值A#p 加入样品反应后的吸收值A背景只加样品的吸收值实施例2 a -淀粉酶抑制剂活性测定参照文献(Biosci.Biotechnol. Biochem. 2000,64(5) 1041)方法，反应体系为 淀粉天青 5mg 用 0. 5mL 的 0. 05mol L_1pH 6. 9Tris-HCl 缓冲液(含 CaCl20. Olmol L—1)配 制成悬液，于90-95°C水浴加热5min，再于37°C水浴置5min后，加0. 5mL待测样品蒲公英甾
4醇液(用DMS0溶解，剂量见表1)，加0. 25mL的PPA ( a -淀粉酶)溶液(2. 3U .mL—1)，37°C水 浴反应lOmin，加入1. 25mL50%冰醋酸终止反应，混勻，4°C条件下6000r mirT1离心5min， 595nm处测定吸光度。阳性对照物为阿卡波糖(0. 2mg mL—1)，结果见表1。a _淀粉酶抑制剂活性计算
公式如下
<formula>formula see original document page 5</formula>a-淀粉酶活性抑制率(％) = ------------------------ x100
Ac+- Ac.式中Ac+ :100%酶活性的吸收值(仅溶剂中加酶)Ac_ 酶活性的吸收值(仅溶剂未加酶)As 待测样品的吸收值(待测样品加酶)Ab 空白的吸收值(待测样品未加酶)上述实施例1和2的酶抑制活性测定实验中，每个样品重复三次实验，取其平均 值，以平均值计算酶活性抑制率，结果如表1。表1蒲公英留醇对a -葡萄糖苷酶和a _淀粉酶活性的抑制作用
样品名a-葡萄糖苷酶抑制活性a—淀粉酶抑制活性剂量(pg/ml)抑制活性(％)剂量(|jg/ml)抑制活性(％)阿卡波糖12038.24074.0Acarbose2050.220100874.9蒲公英甾醇1098.3452.6Taraxasterol4 283.6 35.5实施例3取蒲公英甾醇1kg，加入1kg淀粉，0. 1kg微晶纤维素，硬脂酸镁0.01kg，滑石粉 0. 02kg,置混合机中混合均勻，分装胶囊。实施例4取琼脂55g溶于适量的蒸馏水中，加热使溶，加入200g甘油在搅拌下混勻，最后 滴加尼泊金乙酯乙醇溶液100ml (SOg.L—1)；另称取过80目筛的蒲公英甾醇粉10g，置研钵 中，分次加入上述琼脂溶液，随加研磨，适当时间后，置搅拌机中高速搅拌至颗粒均勻细腻 为止，加蒸馏水至10L，121°C灭菌20分钟，即得口服液。实施例5取蒲公英留醇1kg，加入1kg淀粉、微晶纤维素0. 2kg、羧甲基淀粉钠0. 05kg，置混 合机中混合均勻，用70 %乙醇水溶液湿法制粒，70°C干燥，整粒，加硬脂酸镁0. 01kg，滑石 粉0. 02kg，混勻，压片。
权利要求
蒲公英甾醇在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂方面的应用。
2.蒲公英留醇在制备α-淀粉酶抑制剂方面的应用。
3.蒲公英留醇在制备治疗糖尿病药物方面的应用。
4.一种治疗糖尿病的药物，其特征在于，包括重量含量为5% 100%的蒲公英甾醇。
5.权利要求4所述治疗糖尿病的药物，其特征在于，还包括药学上可接受的载体。
6.权利要求4所述治疗糖尿病的药物，其特征在于，剂型为片剂、颗粒剂、胶囊、软胶 囊、滴丸、口服液或注射剂。
全文摘要
本发明涉及医药领域，公开了蒲公英甾醇的医药用途。蒲公英甾醇对于α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶有抑制作用，其抑制效果是阿卡波糖的5～60倍。因此可用于制备α-葡萄糖苷酶抑制剂、α-淀粉酶抑制剂和制备治疗糖尿病药物。蒲公英甾醇在植物中存在范围广，易得，性质比较稳定；既安全又经济，极具推广应用价值。
文档编号A61K31/56GK101810625SQ20101014357
公开日2010年8月25日 申请日期2010年4月9日 优先权日2010年4月9日
发明者叶晓平, 宋纯清, 茅仁刚 申请人:上海新康制药厂;上海师范大学