专利名称：一种larotaxel磷脂复合物的脂质微球注射液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，确切地说它是一种Larotaxel磷脂复合物及含有该磷脂复合物的脂质微球注射液的制备。
背景技术：
癌症严重威胁着人类的生命与健康，随着工业化程度的提高、环境污染的加重与人类寿命的普遍延长，癌症的发病率还将上升。全世界每年约有1000万人新患癌症，有600 万人死亡.中国每年约有170万人新患癌症，有120万人丧生。癌症已成为城市和农村第一和第三位的死亡原因。无疑，占世界人口 1/4的中国正面临着尽快摆脱癌症威胁，征服肿瘤的艰巨任务。紫杉醇是20世纪天然药物化学发展中抗癌活性研究与开发最富成果、最令人激动的重大发现。1991年，美国肿瘤信息服务部门宣布紫杉醇治疗卵巢癌、乳腺癌效果良好，治疗前列腺癌、上胃肠道癌、小细胞和非小细胞癌前景良好。1992年底被美国FDA批准作为抗癌新药上市。NCI会长Brode将紫杉醇誉为20世纪发现的最重要的抗癌新药。并且大胆预测在今后10 15年内，紫杉醇将成为主要的抗癌药物之一。目前，紫杉醇在临床上已广泛用于卵巢癌、乳腺癌、小细胞和非小细胞癌、食道癌、头颈癌、抗化疗白血病等多种癌症的化疗。独特的作用机理、确切的疗效、巨大的市场、毒性限制剂量限制疗效、耐药性，以及染色体紊乱理论的确认等多种因素，掀起了前所未有的多学科、多层次的紫杉烷类研究热潮，内容涉及紫杉醇新资源的寻找、开发、结构优化，到以其为先导物追求更简单、更有效的抗癌新药研究。目前，紫杉烷产业呈现两种明显的发展趋势1、强化产业链形成，以提高产量、降低成本和增加供给；2、提高药效降低毒性以增强核心竞争力。近20年来，紫杉烷的构效关系和结构优化研究取得了显著的进展。研究表明 13位侧链的结构与药效、毒性和基于微管蛋白变异的耐药性相关，2，4，7，10位的侧链结构与药效，毒性和基于Pgp的耐药性相关。在此基础上研发的新一代紫杉烷第二代紫杉烷，药效和毒性与第一代紫杉烷(紫杉醇和多西紫杉醇)相当，但具有抗药性；第三代紫杉烷不仅具有显著的抗耐药性，而且药效比第一代紫杉烷高1 2个数量级，毒性也显著降低。至2006年止，进入或经过临床评价的新一代紫杉烷有DJ927、XRP-6258、 XRP-9881、IDN5109、BMS184467、BMS188797、BMS275183、MAC-321。遗憾的是第三代紫杉烧并没有在人体上再现其在小鼠上表现的巨大潜力，目前最有希望成药的仅有第二代紫杉烷 XRP9881 (Iarotaxel)，其具有抗PgP耐药性，可口服给药，毒性与紫杉醇相当，对耐药患者的有效率为19%，对非耐药患者的有效率为42%，可用于紫杉醇治疗后复发或/和转移的
研究发现，Iarotaxel的水溶性和脂溶性都较差，水中溶解度比Iarotaxel还小。 同为紫杉烷类药物，其在结构上和紫杉醇及多西他赛极为相似，但紫杉醇及多西他赛市售注射液主药是通过加入助溶剂Cremophor EL和聚山梨酯80。临床研究表明=CremophorEL不仅具有诱导超敏反应和神经毒性，而且给紫杉醇带来极为不利的药代动力学改变，又由于严重的外周神经毒，使用剂量上受到限制。而用聚山梨酯80作为潜溶剂增溶多西他赛，发现其和多种毒性反应有关，其中文献报道较多的包括有严重的过敏反应及周围神经病变。因此，在临床使用时，剂量也受到极大的限制，患者需提前口服皮质激素和抗组织胺类药物加以预防，且需谨慎监测整个用药过程，对已发生过敏反应的患者给予注射肾上腺素对症治疗。加之紫杉醇是耐药蛋白PgP的底物；对于紫杉醇和多西他赛，PgP作为药物流出泵而发挥作用。其中，PgP是由多药抗药基因编码的，经紫杉醇治疗后多数肿瘤均产生耐药性，并且紫杉醇的耐药性还涉及微管蛋白变异。但在Iarotaxel的临床前的研究中发现=Iarotaxel仅很小程度的被PgP识别，所以预期larotaxe能对一下肿瘤发挥作用自身含有大量抗药基因和PgP的肿瘤，例如结肠癌，肾癌，胰腺癌等，以及抗多西他赛的肿瘤。另外，这个化合物能穿过血脑屏障，这可能是由于Iarotaxel被PgP减少识别造成的。目前，关于Iarotaxel的研究国外很多，但在国内还没见到相关的报道，国外对其在临床上的推荐给药计量和给药方式，常见的毒性反应以及解决办法都进行的深入系统的研究，如临床推荐给药计量为60mg/m2，最大耐受计量为 75mg/m2，给药方式为1小时静脉输注给药，三个星期为以疗程，临床用药常见毒性为血液学方面的，如嗜中性白血球减少症，血小板减少症，高胆红素血症等，而非血液学方面的毒性一般是较轻微的，有时会出现疲劳、恶心，呕吐，非特异性发烧等。磷脂特殊的理化特性和低毒性决定了其可以作为脂溶性药物，特别是抗癌药物的良好载体，而近些年对磷脂复合物的相关研究也日益广泛和深入，磷脂复合物是药物和磷脂分子通过电荷迁移作用而形成的较为稳定的化合物或络合物。由于磷脂分子的两亲性， 其不仅是非常有效的乳化剂，更是细胞膜的重要组成部分。药物通过与磷脂的极性基团相互作用而被固定，而磷脂的2个长脂肪酸链不参与复合反应，可自由移动，包裹了磷脂的极性部位，形成一个亲脂性的表面。因此，磷脂复合物能够增强母体药物的水溶性和脂溶性， 增加生物膜亲和性和透过性，从而显著提高生物利用度。水溶解性能的改变与复合物的无定形特征及磷脂在水中形成胶束有关；而脂溶性的改变，不仅与复合物的无定形有关，还与复合物中药物的极性端与磷脂相互作用而受到一定的掩蔽有关。通过磷脂复合物来改善母体药物的某些理化性质而达到预期目的的实例很多，如在灯盏花素的结构中，羧基上的氧以及酚羟基上的氧均具有负电性，均可与卵磷脂中带正电性的季胺氮产生偶极一偶极作用力形成复合物；葛根素和卵磷脂通过极性部位间的范德华力而结合形成磷脂复合物。药物与磷脂形成复合物后，理化性质、生物学活性等都会发生很大程度的改变。理化性质的改变如脂溶性明显增强，熔点、吸收系数、光谱特征等也会发生明显变化等。生物学活性的改变如磷脂复合物的活性一般比母体药物更强、生物利用度更高、毒副作用更小。在本研究中，磷脂作为主要的乳化剂，能将药物包裹于脂肪乳剂的脂质核心部分， 由于该结构亦类似于微球，因此脂质微球(Lipid Microsphere,LM)的名称也应运而生。一般认为脂质微球是通过将药物溶于脂肪油中，并经磷脂乳化分散于水相后制成，是一种以脂肪油为软基质而被磷脂膜包封的微粒分散体系，平均粒径在200nm左右。LM中药物部分包裹于油相或界面膜中，避免了与体液的直至接触，因而降低了药物自身可能产生的局部及血管刺激性。另外，药物在体内是由油相中缓慢释放，可避免药物在注射用时由于初期浓度过高而引起的不良反应。粒径在200nm左右的小微粒能被机体的网状组织系统的吞噬细
5胞所吞噬而滞留在网状组织系统(如肝脏、肺等)中，具有靶向性，这种特点对于抗肿瘤药物提高药效、降低毒副作用尤为重要。
发明内容
为了解决紫杉醇和多西他赛所面临的问题以进一步提高疗效降低毒性，全球的科学家进行了广泛深入的研究，内容涉及紫杉醇新资源的寻找、开发、结构优化、制剂改革等。 其中1、新一代紫杉烷Iarotaxel具有抗Pgp耐药性，药效和毒性与紫杉醇相当，可用于紫杉醇和多西他赛治疗后复发或/和转移的患者；2、亚微乳剂是紫杉烷类抗癌药目前交加的给药形式，由于亚微乳剂和脂质体均按淋巴系统转运，可有效的提高主要脏器的血药浓度， 减少患者刺激性增加耐受性。本发明的目的在于提供一种含有larotaxel磷脂复合物的脂质微球注射液，其理化性质符合静脉用药要求，不仅能进行高温灭菌而且长期储存物理化学稳定性良好，并且血管刺激性小，提高患者顺应性，且提供一种Iarotaxel磷脂复合物以及其制造方法，该方法简单可行。其中，该注射液由Iarotaxel磷脂复合物、注射用油、乳化剂、稳定剂、抗氧剂、 金属螯合剂、等渗调节剂及注射用水组成，所述Iarotaxel磷脂复合物由larotaxel和注射用磷脂组成。本发明还提供了一种Iarotaxel磷脂复合物的制备方法，即将Iarotaxel和注射用磷脂加入到反应溶剂中，加热回流反应，至溶液澄清透明，然后蒸发除去反应溶剂，得到 Iarotaxel磷脂复合物。将Iarotaxel与适当比例的磷脂制成磷脂复合物后，通过Iarotaxel和磷脂极性部位的结合，磷脂的碳链自由转动并包裹着Iarotaxel及磷脂的极性部分，这种结构大大提高了 larotaxel脂质微球注射液的稳定性。经高速搅拌和高压均质乳化制成脂质微球注射液，药物被包裹于油相或界面膜中，可以避免与血管内壁直接接触，从而降低药物在注射部位所产生的刺激性及由此而引发的全身毒性，并且有类似脂质体的靶向性和体内分布特征，既降低血液及其他组织中的药物浓度，又提高了疗效，还可以降低其全身副作用。本发明通过将Iarotaxel脂质微球注射液的pH控制在4_6，在此范围内药物稳定性良好，利于制剂的长期放置。本发明通过将larotaxel和磷脂制备成磷脂复合物，使得Iarotaxel的脂溶性得以提高，载药量增加的同时毒性降低，而且提高了制剂的稳定性，所制备的Iarotaxel脂质微球注射液在121°C高压蒸汽灭菌IOmin后，物理、化学稳定性均良好，三批样品经6士2°C 留样6个月后，所考察项均符合要求。本发明提供了一种含有Iarotaxel磷脂复合物的脂质微球注射液及其制备工艺， 工艺简单可行，同时也提高了制剂的稳定性，利于临床上的应用及工业化生产。本发明提供了一种含有Iarotaxel磷脂复合物的脂质微球注射液，其中，该注射液由larotaxel磷脂复合物、注射用油、乳化剂、稳定剂、抗氧剂、等渗调节剂及注射用水组成，所述Iarotaxel磷脂复合物由Iarotaxel和注射用磷脂组成；该注射液组成的重量百分比为=Iarotaxel 0. 001% _1%、注射用磷脂1_7%、注射用油5-25%、乳化剂0. 2-0. 8%、 稳定剂0. 02-0. 2%、抗氧剂0. 01-0. 5 %、等渗调节剂1. 5-3. 5 %，其余为注射用水；优选为IarotaxelO. 05-0. 5%、注射用磷脂2-4. 5%、注射用油10-20%、乳化剂0. 2-0. 5%、稳定剂 0. 05-0. 1%、抗氧剂0. 02-0. 1%、等渗调节剂2-3%，其余为注射用水。根据所述的脂质微球注射液，所述注射用磷脂为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂和合成磷脂中的一种或几种的混合物。根据所述的脂质微球注射液，所述注射用油为长链甘油三酯和中链甘油三酯中的一种或几种的混合物，优选自大豆油、红花油、沙棘油、月见草油、玉米油、鸦胆子油、椰子油、紫苏油、葡萄籽油、橄榄油、蓖麻油、茶油、棉籽油和棕榈油中的一种或几种。根据所述的脂质微球注射液，所述乳化剂为磷脂，吐温(Tween)或普朗尼克 (poloxamer)，其中磷脂优选为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、合成磷脂；吐温优选为吐温20，吐温 40，吐温60，吐温80，吐温85或者是以上不同规格的任意比例混合物；普朗尼克优选为普朗尼克F68根据所述的脂质微球注射液，所述稳定剂为油酸。根据所述的脂质微球注射液，所述等渗调节剂为注射用甘油。根据所述的脂质微球注射液，所述抗氧剂为L-半胱氨酸、抗坏血酸、dl-α-生育酚、亚硫酸钠和无水亚硫酸氢钠中的一种或几种的混合物。本发明还提供了一种Iarotaxel磷脂复合物的制备方法，其中，将Iarotaxel和注射用磷脂加入到反应溶剂中，加热回流反应，至溶液澄清透明，然后旋转蒸发或冷冻干燥除去反应溶剂，得到Iarotaxel磷脂复合物。根据所述的制备方法，所述的larotaxel磷脂复合物中，Iarotaxel与注射用磷脂的质量比为1 1-1 50，优选为1 20-1 40，在此范围内能够确保形成稳定的磷脂复合物；所述反应溶剂优选为无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿和乙酸乙酯中的一种或几种， 进一步优选为无水乙醇；反应温度优选为20-60°C ；更优选为20-40°C ；反应时间优选为 0. 5-2. Ohr，更优选为0. 5-1. ^ir,通过旋转蒸发法或真空干燥法来除去有机溶剂。本发明还提供了一种含有larotaxel磷脂复合物的脂质微球注射液的制备方法， 该方法包括下述工艺步骤①将水溶性乳化剂、等渗调节剂加入到适量注射用水中，加热至60-80°C，搅拌分散均勻得水相；②将处方量的Larotaxel的磷脂复合物、注射用油、油溶性乳化剂、稳定剂和抗氧剂在60-80°C温度下加热搅拌分散均勻得澄清的含药油相；③在组织捣碎机搅拌下，将载药油相缓慢加入水相中或将水相加入到油相中，待完全加入后，以8000 20,000转/分搅拌3 5分钟，即得初乳。④将初乳冷却至室温，用注射用水定容至全量，用氢氧化钠或盐酸溶液来调节PH 值至4-6，转移至高压均质机中，在600 1200bar，30°C 60°C条件下均质5 10次。⑤装瓶，充氮气，轧盖密封，121°C高压蒸汽灭菌10分钟，然后在冷水浴中迅速冷却。优选的制备工艺包括如下步骤①将水溶性乳化剂、等渗调节剂加入到适量注射用水中，加热至75°C，搅拌分散均勻得水相；②将处方量的Larotaxel的磷脂复合物、注射用油、油溶性乳化剂、稳定剂和抗氧剂在75°C温度下加热搅拌分散均勻得澄清的含药油相；③在组织捣碎机搅拌下，将载药油相缓慢加入水相中或将水相加入到油相中，待完全加入后，以15000转/分搅拌3 5分钟，即得初乳。④将初乳冷却至室温，用氢氧化钠或盐酸溶液来调节pH值至5. 0左右，用注射用水定容至全量，转移至高压均质机中，在700 800bar，30°C 45°C条件下均质5 10次。⑤装瓶，充氮气，轧盖密封，121°C高压蒸汽灭菌10分钟，然后在冷水浴中迅速冷却。本发明的特点是所述制剂是使Larotaxel与磷脂复合形成磷脂复合物，以提高 Larotaxel的脂溶性和水溶性，将其载入磷脂层中，实现界面膜载药，然后通过做成脂质微球来达到药物的传递，和市售传统注射液相比，不但载药量增加，毒性显著降低，而且制剂稳定性显著提高，利于临床应用。脂质微球(Lipidmicrosphere，LM)是通过将药物溶解于脂肪油中，经磷脂乳化分散于水相后制成的脂质乳剂，是一种以脂肪油为软基质而被磷脂膜包封的水包油型微粒体分散系，其平均粒径在200nm左右。具有许多物理化学以及生物学上的优点1、是脂溶性药物的良好载体。临床很多药物水溶性差，必须依靠有机溶剂或者潜溶剂才能发挥作用，而有机溶剂和潜溶剂不仅本身具有一定得毒性，还可能干扰药物作用， 影响药物疗效。2、能够有效增加药物的稳定性。含药脂质微球中有相当一部分药物分布在油相或油水界面膜中，避免了直接与水接触。对于易于水解或对PH变化敏感的药物，这种隔离起到了增加稳定性的作用。3、LM中药物部分包裹于油相或界面膜中，避免了与体液的直接接触，因而降低了药物自身可能产生的局部及血管刺激性，增加了临床用药的安全性。另外，药物在体内是从油相中缓慢释放，可避免药物在注射用时由于初期浓度过高而引起的不良反应，达到缓释的效果。4、粒径在200nm左右的小微粒能够被机体的网状组织系统的吞噬细胞所吞噬而滞留在网状组织系统(如肝脏、肺等)中，具有靶向性，这种特点对于抗肿瘤药物提高药效， 降低毒副作用尤为重要。本发明是利用上述原理，先将Iarotaxel与适当比例的磷脂制成磷脂复合物，通过larotaxel和磷脂极性部位的结合，磷脂的碳链自由转动并包裹着Iarotaxel及磷脂的极性部分而使其稳定，然后制备成脂质微球注射液，达到了预期的效果。Ularotaxel与磷脂形成复合物后，提高了 Iarotaxel的溶解性和分散性，提高其亲脂性，最终脂质微球注射液的包封率和稳定性都得到显著提高。2、磷脂复合物的制备显著提高了 Iarotaxel的载药量由于Iarotaxel与磷脂之间的相互作用，在一定程度上改变了其原有的性质，界面膜载药，溶解度的增加，所以载药量和同类的市售注射液相比，有很大的提高，这不仅便于临床使用，更重要的是显著降低毒性。3、磷脂复合物的制备也显著提高了制剂的物理和化学稳定性。本发明所制备的 Iarotaxel脂质微球注射液在121 °C高压蒸汽灭菌IOmin后，物理、化学稳定性均良好，样品经6个月6士2°C留样试验，各项指标物理、化学稳定性均未发生显著改变。
4、处方及制备工艺的优化，使制得的制剂平均粒径在170nm左右，容易被机体的网状组织系统的吞噬细胞所吞噬而滞留在网状组织系统(如肝脏、肺等)中，具有靶向性， 这种特点对于抗肿瘤药物提高药效，降低毒副作用尤为重要。而且，药物在体内是从油相中缓慢释放，可避免药物在注射用时由于初期浓度过高而引起的不良反应，达到缓释的效果。
具体实施例方式实施例1磷脂复合物的制备制备Ilarotaxel-蛋黄卵磷脂复合物取larotaxel lg,蛋黄卵磷脂20g，缓慢加入氯仿20ml，使磷脂和药物浸没在氯仿中，在40°C条件下加热回流反应2小时，得到澄清反应溶液，减压干燥除去氯仿，即得载药磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。制备21arotaxel-大豆卵磷脂复合物取larotaxel lg，大豆磷脂50g，加入乙酸乙酯25ml，使磷脂和药物浸没在乙酸乙酯中，40°C条件下加热回流反应0.5小时后，旋转蒸发除去乙酸乙酯，即得载药大豆磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。制备31arotaxel-大豆卵磷脂复合物取larotaxel lg，大豆磷脂40g，加入无水乙醇30ml，使磷脂和药物浸没在无水乙醇中，60°C条件下加热回流反应1小时后，旋转蒸发除去无水乙醇，即得载药大豆磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。制备41arotaxel-合成磷脂复合物取larotaxel lg，合成磷脂lg，加入乙醚30ml，使磷脂和药物浸没在乙醚中，20°C 复合1小时后，旋转蒸发除去乙醚，即得载药合成磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。实施例2 =Iarotaxel脂质微球注射液(规格0. 01mg/ml)Larotaxel磷脂复合物(以 Larotaxel if )大豆油蛋黄卵磷脂(供注射用)甘油油酸F68注射用水制备方法Larotaxel磷脂复合物的制备将Larotaxel Ig与大豆卵磷脂30g置于圆底烧瓶中，缓慢加入乙醚，使磷脂和药物浸没在乙醚中，在60°C条件下加热回流反应2小时，得到澄清反应溶液，蒸发挥干溶剂， 即得Larotaxel磷脂复合物。Larotaxel脂质微球注射液制备工艺步骤如下(1)将注射用甘油、F68分散于适量注射用水中，至磁力搅拌器中加热至75°C搅拌
0. 001% 5% 1. 0% 1. 5% 0. 02% 0. 2% 加至100%
9至全部溶解；(2)将处方量的油相及油酸加入到Iarotaxel磷脂复合物中，在75°C下搅拌至完全溶解，得到澄清的载药油相。(3)将油相加入至水相中，置于高速组织捣碎机中，以15000转/分搅拌3-5分钟。(4)以0. Imol · L—1盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值至5. 0，注射用水定容至全量， 转移至高压均质机中，40°C下，以800bar压力均质6 10次。(5)装瓶，封罐氮气，121°C灭菌lOmin，冰水浴迅速降温即得。实施例3 Iarotaxel脂质微球注射液(规格10mg/ml)Larotaxel 磷脂复合物(以 Larotaxel 计)油相(大豆油MCT= 7. 5 2. 5)25%
蛋黄卵磷脂(供注射用) 7 %油酸0.2%F680. 8%甘油3.5%注射用水加至100%制备方法Larotaxel磷脂复合物的制备取larotaxel lg,蛋黄卵磷脂35g，缓慢加入氯仿20ml，使磷脂和药物浸没在氯仿中，在60°C条件下加热回流反应2小时，得到澄清反应溶液，减压除去氯仿，即得载药磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。(1)将注射用甘油、F68分散于适量注射用水中，至磁力搅拌器中加热至75°C搅拌至全部溶解；(2)将处方量的油相及油酸加入到larotaxel磷脂复合物中，在75°C下搅拌至完全溶解，得到澄清的载药油相。(3)将油相加入至水相中，置于高速组织捣碎机中，以10000转/分搅拌3-5分钟。(4)以0. Imol · L—1盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值至5. 0，注射用水定容至全量， 转移至高压均质机中，40°C下，以800bar压力均质6 10次。(5)装瓶，封罐氮气，121°C灭菌lOmin，冰水浴迅速降温即得。
实施例4 =Iarotaxel制剂的处方制备工艺(规格:2mg/ml)
Larotaxel磷脂复合物(以 Larotaxel 计)0· 2%
油相(大豆油MCT = 5 5)10%
豆磷脂4. 0%
甘油2. 5%
油酸0. 05%
F680. 4%
注射用水加至100%
制备方法
Larotaxel磷脂复合物的制备
取larotaxel lg，大豆磷脂35g，加入无水乙醇30ml，使磷脂和药物浸没在无水乙醇中，40°C复合1小时后，旋转蒸发除去无水乙醇，即得载药大豆磷脂复合物。(1)将注射用甘油、F68分散于适量注射用水中，至磁力搅拌器中加热至75°C搅拌至全部溶解；(2)将处方量的油相及油酸加入到Iarotaxel磷脂复合物中，在75°C下搅拌至完全溶解，得到澄清的载药油相。(3)将油相加入至水相中，置于高速组织捣碎机中，以12000转/分搅拌3-5分钟。(4)以0. Imol -L"1盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值至5. 0，注射用水注射用水定容至全量，转移至高压均质机中，40°C下，以800bar压力均质6 10次。(5)装瓶，封罐氮气，121°C灭菌lOmin，冰水浴迅速降温即得。实施例5 =Iarotaxel脂质微球注射液(规格lmg/ml)
0111]Larotaxel 磷脂复合物(以0.
0112]Larotaxel if )
0113]油相(大豆油MCT= 2. 57.5) 10%
0114]卵磷脂3.5%
0115]甘油2.5%
0116]油酸0.05%
0117]F680. 4%
0118]注射用水加至100%
0119]制备方法
0120]Larotaxel磷脂复合物的制备取larotaxel lg，合成磷脂35g，加入乙酸乙酯30ml，使磷脂和药物浸没在乙酸乙酯中，60°C复合1小时后，旋转蒸发除去乙酸乙酯，即得载药合成磷脂复合物(1)将注射用甘油、F68分散于适量注射用水中，至磁力搅拌器中加热至75°C搅拌至全部溶解；(2)将处方量的油相及油酸加入到larotaxel磷脂复合物中，在75°C下搅拌至完全溶解，得到澄清的载药油相。(3)将油相加入至水相中，置于高速组织捣碎机中，以15000转/分搅拌3-5分钟。(4)以0. Imol · L—1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至5. 0，注射用水定容至全量， 转移至高压均质机中，40°C下，以800bar压力均质6 10次。
0126](5)装瓶，封罐氮气，121°C灭菌lOmin，冰水浴迅速降温即得。0127]实施例6 =Iarotaxel脂质微球注射液(规格:2mg/ml)0128]larotaxel 1磷脂复合物(以0. 2%0129]Larotaxel if )0130]油相(大豆油MCT = 2. 5 7. 5)10%0131]豆磷脂3. 0%0132]甘油2. 5%0133]油酸0. 06%0134]F680. 4%0135]注射用水加至100%
制备方法Larotaxel磷脂复合物的制备将Larotaxel Ig与合成磷脂30g置于圆底烧瓶中，缓慢加入40ml乙醚，使磷脂和药物浸没在乙醚中，在20°C条件下加热回流反应2. Ohr，得到澄清反应溶液，真空干燥除去乙醚，即得Larotaxel磷脂复合物.(1)将注射用甘油、F68分散于适量注射用水中，至磁力搅拌器中加热至75°C搅拌至全部溶解；(2)将处方量的油相及油酸加入到Iarotaxel磷脂复合物中，在75°C下搅拌至完全溶解，得到澄清的载药油相。(3)将油相加入至水相中，置于高速组织捣碎机中，以18000转/分搅拌3-5分钟。(4)以0. Imol · L—1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至5. 0，注射用水定容至全量， 转移至高压均质机中，40°C下，以800bar压力均质6 10次。(5)装瓶，封罐氮气，121°C灭菌lOmin，冰水浴迅速降温即得。实施例7 =Iarotaxel脂质微球注射液(规格2mg/ml)Larotaxel 1 磷脂复合物(以0.2%Larotaxel 计)油相(大豆油红花油=5 5)10%豆磷脂3.5%甘油2.5%油酸0.06%F680. 4%注射用水加至100%制备方法Larotaxel磷脂复合物的制备取larotaxellg，大豆磷脂18g，加入无水乙醇20ml，使磷脂和药物浸没在无水乙醇中，60°C复合1小时后，旋转蒸发除去无水乙醇，即得载药大豆磷脂复合物。(1)将注射用甘油、F68分散于适量注射用水中，至磁力搅拌器中加热至75°C搅拌至全部溶解；(2)将处方量的油相及油酸加入到larotaxel磷脂复合物中，在75°C下搅拌至完全溶解，得到澄清的载药油相。(3)将油相加入至水相中，置于高速组织捣碎机中，以20000转/分搅拌3-5分钟；(4)以0. Imol · L—1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至5. 0，注射用水定容至全量， 转移至高压均质机中，40°C下，以800bar压力均质6 10次；(5)装瓶，封罐氮气，121°C灭菌lOmin，冰水浴迅速降温即得。实施例8 =Iarotaxel脂质微球注射液(规格％ig/ml)larotaxel 1 磷脂复合物(以0.4%Larotaxel if )油相(大豆油MCT= 2. 5 7.5)10%卵磷脂3.5%
甘油 2. 5%油酸0. 06%F68 0. 2% 注射用水
加至100%制备方法Iarotaxel磷脂复合物的制备将larotaxel Ig与合成磷脂35g置于圆底烧瓶中，缓慢加入丙酮，使磷脂和药物浸没在丙酮中，在40°C条件下加热回流反应ljhr，得到澄清反应溶液，旋转蒸发挥干丙酮，即得larotaxel磷脂复合物。含有larotaxel磷脂复合物的脂质微球注射液的制备(1)将注射用甘油、F68分散于适量注射用水中，至磁力搅拌器中加热至75°C搅拌至全部溶解；(2)将处方量的油相及油酸加入到larotaxel磷脂复合物中，在75°C下搅拌至完全溶解，得到澄清的载药油相。(3)将油相加入至水相中，置于高速组织捣碎机中，以15000转/分搅拌3-5分钟；(4)以0. Imol · L—1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至7. 0，注射用水定容至全量， 转移至高压均质机中，40°C下，以800bar压力均质6 10次；(5)装瓶，封罐氮气，121°C灭菌lOmin，冰水浴迅速降温即得。实施例9 =Iarotaxel脂质微球注射液(规格％ig/ml)larotaxel 1 磷脂复合物(以0.4%Larotaxel 计)油相(大豆油MCT= 2. 5 7.5)10%卵磷脂3.5%甘油2.5%油酸0.06%F680. 4%注射用水加至100%制备方法larotaxel磷脂复合物的制备将larotaxel Ig与卵磷脂35g置于圆底烧瓶中，缓慢加入无水乙醇，使磷脂和药物浸没在无水乙醇中，在60°C条件下加热回流反应》ir，得到澄清反应溶液，旋转蒸发挥干无水乙醇，即得多西他赛磷脂复合物。含有larotaxel磷脂复合物的脂质微球注射液的制备(1)将注射用甘油、F68分散于适量注射用水中，至磁力搅拌器中加热至75°C搅拌至全部溶解；(2)将处方量的油相及油酸加入到larotaxel磷脂复合物中，在75°C下搅拌至完全溶解，得到澄清的载药油相。(3)将油相加入至水相中，置于高速组织捣碎机中，以18000转/分搅拌3-5分钟；(4)以0. Imol · L—1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至7. 5，注射用水定容至全量，转移至高压均质机中，40°C下，以800bar压力均质6 10次；(5)装瓶，封罐氮气，121°C灭菌lOmin，冰水浴迅速降温即得。实施例10 =Iarotaxel脂质微球注射液的稳定性试验采用长期放置的方法来考察Iarotaxel脂质微球注射液(采用实施例4，6和8) 的稳定性，将制得的Iarotaxel脂质微球注射液放置于温度6 士 2°C的药物稳定试验箱中， 在试验期间分别于第O个月、1个月、2个月、3个月、6个月取样一次，按药典中的质量标准检查供试品的外观、粒径、含量、PH值、包封率及有关物质情况。结果见表1，2，3.表1 实施例4制得的Iarotaxel脂质微球注射液加速稳定性实验结果
权利要求
1.一种含有Larotaxel磷脂复合物的脂质微球注射液，其特征在于该注射液由 Larotaxel磷脂复合物、注射用油、乳化剂、稳定剂、抗氧剂、等渗调节剂及注射用水组成， 所述Larotaxel磷脂复合物由Iarotaxel和注射用磷脂组成；该注射液组成的重量百分比为Larotaxel 磷脂复合物(以 Larotaxel 计)0· 001% _1%、注射用磷脂1_7%、注射用油5-25%、乳化剂0. 2-0. 8%,稳定剂 0. 02-0. 2%,抗氧剂 0. 01-0. 5%,等渗调节剂1. 5-3. 5%其余为注射用水。
2.根据权利要求1所述的脂质微球注射液，特征在于所述注射用磷脂为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂和合成磷脂中的一种或几种的混合物。
3.根据权利要求1所述的脂质微球注射液，特征在于所述注射用油为长链甘油三酯和中链甘油三酯中的一种或几种的混合物；所述乳化剂为磷脂，吐温(Tween)或普朗尼克 (poloxamer)；所述的稳定剂为油酸；所述的等渗调节剂为注射用甘油；所述的抗氧剂为 L-半胱氨酸、抗坏血酸、dl-α-生育酚、亚硫酸钠和无水亚硫酸氢钠中的一种或几种的混合物。
4.根据权利要求3所述的脂质微球注射液，特征在于所述注射用油为选自由大豆油、 红花油、沙棘油、月见草油、玉米油、鸦胆子油、椰子油、紫苏油、葡萄籽油、橄榄油、蓖麻油、 茶油、棉籽油和棕榈油中的一种或几种；所述磷脂选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、合成磷脂； 吐温选自吐温20，吐温40，吐温60，吐温80，吐温85，或者是以上不同规格的任意比例混合物；所述的普朗尼克为普朗尼克F68。
5.一种Larotaxel磷脂复合物的制备方法，特征在于按照处方量称取Larotaxel和磷脂，将其加到有机溶剂中，20 60°C加热回流0. 5 2小时，至溶液澄清透明。取出溶液进行旋转蒸发或真空干燥以除去有机溶剂，即得Larotaxel磷脂复合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法，特征在于所述的Larotaxel磷脂复合物中， Larotaxel与注射用磷脂的质量比为1 1_1 50。反应溶剂为无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿和乙酸乙酯中的一种或几种；反应温度为20-60°C ；反应时间0. 5-2. O小时。
7.根据权利要求6所述的制备方法，特征在于所述的Larotaxel磷脂复合物中， Larotaxel与注射用磷脂的质量比优选为1 20_1 40。反应溶剂优选为无水乙醇；反应温度优选为20-40°C ；反应时间优选为0. 5-1. 5小时。
8.—种权利要求1所述的含有Iarotaxel磷脂复合物的脂质微球注射液的制备方法， 其特征在于，该方法包括下述工艺步骤①将水溶性乳化剂、等渗调节剂加入到适量注射用水中，加热至60-80°C，搅拌分散均勻得水相；②将处方量的Larotaxel的磷脂复合物、注射用油、油溶性乳化剂、稳定剂和抗氧剂在 60-80°C温度下加热搅拌分散均勻得澄清的含药油相；③在组织捣碎机搅拌下，将载药油相缓慢加入水相中或将水相加入到油相中，待完全加入后，以8000 20，000转/分搅拌3 5分钟，即得初乳。④将初乳冷却至室温，用注射用水定容至全量，用氢氧化钠或盐酸溶液来调节PH值至 4-6，转移至高压均质机中，在600 1200bar，30°C 60°C条件下均质5 10次。⑤装瓶，充氮气，轧盖密封，121°C高压蒸汽灭菌10分钟，然后在冷水浴中迅速冷却。
全文摘要
本发明涉及一种含有Larotaxel磷脂复合物的脂质微球注射液及其制备方法。本发明注射液由Larotaxel磷脂复合物、注射用油、乳化剂、稳定剂、抗氧剂、等渗调节剂及注射用水组成，所述Larotaxel磷脂复合物由larotaxel和注射用磷脂组成；该注射液组成的重量百分比为larotaxel 0.001％-1％、注射用磷脂1-7％、注射用油5-25％、乳化剂0.2-0.8％、稳定剂0.02-0.2％、抗氧剂0.01-0.5％、等渗调节剂1.5-3.5％，其余为注射用水。本发明所述的Larotaxel脂质微球注射液采用磷脂复合物为载药形式，明显提高了载药量，且药物90％以上被包裹在脂质微球的油相及油水接面膜中，同时也提高了药物在制剂中的溶解性能和稳定性，还降低了药物的静脉刺激性和毒性，并增强了其抗肿瘤疗效。本制剂作为一种抗肿瘤的制剂，静脉输注给药，具有低刺激性、低毒性、高效性、靶向性。
文档编号A61K47/48GK102210652SQ201010143679
公开日2011年10月12日 申请日期2010年4月6日 优先权日2010年4月6日
发明者刘军锋, 刘珂, 唐星, 李国飞 申请人:山东靶点药物研究有限公司