专利名称：2-巯基环戊烷甲酸化合物、其制备方法和含有它们的药用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的2-巯基环戊烷甲酸化合物、其制备方法和含有它们的药用组合 物。
背景技术：
本发明化合物为TAFIa抑制剂(活化的凝血酶可激活的纤溶抑制剂)。TAFI (也称为血浆羧肽酶原B、羧肽酶原R或羧肽酶原U)为60kDa的血浆糖蛋 白，由肝脏产生，它以酶原的形式循环。在血液凝结和纤溶过程中，凝血酶和纤溶酶能够裂 解Arg92-Ala93键的TAFI的前片段，将其转化为活性酶(TAPIa)，该酶于37°C的半衰期为 8-15分钟。血栓调节蛋白可以促进凝血酶导致的前片段的裂解，该蛋白为存在于血浆中 和血管内皮细胞表面上的辅助因子(Bouma BN和Meijers JC，凝血酶可激活的纤溶抑制 齐[J (Thrombin-activatab1e fibrinolysis inhibitor),2003,Journal ofThrombosis and Haemostasis,l : 1566-1574)。TAFIa通过裂解纤维蛋白纤维的C-末端赖氨酸残基而负向调 节纤溶，所述纤维蛋白纤维由于痕量血浆导致的纤维蛋白部分降解而出现。在所述部分降 解的纤维蛋白上的这些C-末端赖氨酸残基作为循环中的血浆纤溶酶原的配体和组织纤溶 酶原激活剂(tPA)的配体，该激活剂是在血栓性缺血的情况下由内皮细胞产生的。因此，它 们使得通过tPA将纤溶酶原转化为血浆酶局部化成为可能，同时不会干扰循环血浆酶抑制 剂a2-抗血浆酶或干扰循环组织纤溶酶原激活剂抑制剂(PAl-I)。因此TAFIa导致的C-末 端赖氨酸位点的裂解降低了血浆酶产生的速度。然后又抑制了内源性纤溶并减少动脉纤维 蛋白的溶解和静脉血栓形成，同时在血栓形成后急性缺血期的患者中进行溶栓治疗。因此， TAFIa抑制剂能够有效地提高内源性和治疗性纤溶可能性，作为抗血栓形成和纤溶酶原药 物而又不具有重大的出血风险，因为它们既不会干扰血小板激活，也不会在止血过程中造 成凝结。因此，抑制TAFIa的特性使得本发明化合物能够治疗和预防风险患者中的血栓形 成事件。它们在治疗、预防和二级预防血管并发症中有重要价值，更特别是用于心血管、肺 和脑血管并发症，上述并发症与下列疾病有关动脉血栓形成疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、 高脂血症、高血压、慢性静脉疾病、与肥胖有关的代谢综合征和癌症。本发明化合物尤其可 以用于治疗、预防和二级预防心肌梗塞、心绞痛、脑血管意外、主动脉瘤、下肢动脉炎、静脉 血栓形成和肺动脉栓塞。血管风险因素和血管疾病(例如高血压、肥胖、糖尿病、心脏病、脑血管疾病和高 脂血症以及动脉粥样硬化)是导致痴呆(如阿尔茨海默病和血管性痴呆)的部分原因(Qiu C.，De Ronchi D.和 Fratiglioni L.，痴呆的流行病学最新进展(The epidemiology of the dementias :an update), 2007, Current Opinion in Psychiatry，20 :380_385)。因此， 本发明化合物也可以用于治疗和/或预防痴呆，例如阿尔茨海默病和血管性痴呆。TAFIa能够降低内源性纤维蛋白成分的效能。因此，本发明化合物作为TAFIa抑制剂可以用作注射用纤维蛋白溶解药物的急性治疗的辅助成分，所述药物例如重组tPA(例 如，阿替普酶、替奈普酶、瑞替普酶)、重组uPA或链激酶，它们均可以用于紧急状态(例如， 心肌梗塞、脑血管意外)。本发明化合物能够增强那些注射用纤维蛋白溶解药物的效能，因此，可以使用它 们而同时仅具有少量出血和神经毒性的风险(可以降低它们的剂量，因此，可以减少其副 作用)。
发明内容
更具体地讲，本发明涉及式(I)化合物、其光学异构体以及其与可药用酸形成的 加成盐其中R1代表氢原子或式COR4基团，其中R4代表线性或支链C「C6烷基或芳基，或R1代表式㈧基团 R2代表式NR5R6基团，其中R5和R6为相同或不同的，每一个均代表氢原子或直链或 支链C1-C6烷基，或者R2代表含氮杂环基团、芳基或杂芳基，R3代表氢原子或直链或支链C1-C6烷基，m代表1-6的整数，包含1和6，η 代表 0、1 或 2。 芳基可以理解为任选被一或多个相同或不同的选自下列的基团取代的苯基卤 素、直链或支链(C1-C6)烷基，直链或支链(C1-C6)烷氧基，氨基(任选被1或2个直链或支链 (C1-C6)烷基取代)和氨基烷基，所述氨基任选被1或2个直链或支链(C1-C6)烷基取代。杂芳基可以理解为含有1、2或3个选自氧、氮和硫的杂原子的5-12元单环或双 环芳族基团，可以理解，杂芳基可以任选被一或多个相同或不同的选自下列的基团取代商 素、直链或支链(C1-C6)烷基，直链或支链(C1-C6)烷氧基、氨基(任选被1或2个直链或支链 (C1-C6)烷基取代)和氨基烷基，所述氨基任选被1或2个直链或支链(C1-C6)烷基取代。在杂芳基中，可以提及的(不加任何限定)基团包括下列基团噻吩基、吡啶基、呋 喃基、吡咯基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基。含氮杂环基团可以理解为4-7元饱和的或不饱和的单环基团，该环含有一或多个 氮原子并任选含有一或多个选自氧和硫的杂原子。
在含氮杂环基团中，可以提及的(不加任何限定)基团包括下列氮杂环丁基、吡 咯烷基、哌啶基和哌嗪基。光学异构体可以理解为非对映异构体和对映异构体。式(I)化合物含有至少两个不对称中心(在该环的1和2位)，因此，可以存在单 一对映异构体形式、单一非对映异构体形式或非对映异构体混合物形式。在可药用酸中，可以提及的(不加任何限定)包括下列酸盐酸、氢溴酸、硫酸、 磷酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、马来酸、柠檬 酸、抗坏血酸、草酸、甲磺酸、苯磺酸、樟脑酸。
另-另-另-另-另-另-
-方面，本发明涉及式(I)化合物，其中R1代表氢原子。 -方面，本发明涉及式(I)化合物，其中R2代表氨基。 -方面，本发明涉及式(I)化合物，其中R2代表吡啶基。 -方面，本发明涉及式(I)化合物，其中R3代表氢原子。 -方面，本发明涉及式(I)化合物。其中m代表3。 -方面，本发明涉及式(I)化合物，其中η代表1。 -方面，本发明涉及式(Ia)化合物，它是式(I)化合物的-
-种特别形式
NR5R6
CO2R3
(Ia)其中R1^R3, R5和R6如式(I)所定义。另一方面，本发明涉及下列式⑴化合物(1R，2S)-1-(3-氨基丙基)_2_巯基环戊烷甲酸以及其光学异构体和其与可药用 酸的加成盐，(1R，2S)_2-乙酰基硫代-1-(3-氨基丙基)_环戊烷甲酸以及其光学异构体和其与 可药用酸的加成盐。本发明还涉及式(I)化合物的制备方法，采用式(II)化合物作为原料
(II)
其中η代表0、1或2，G代表羧基官能团的保护基团， 将其与式(III)化合物反应
X-(CH2)-R'
(III)
其中χ代表卤素原子或三氟甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基或甲磺酸酯基，
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m代表1-6的整数，包括1和6，R' 2代表式NR' 5R' 6基团，其中R' 5和1 ' 6可以是相同或不同的，每一个均 代表氨基官能团的保护基团或直链或支链C1-C6烷基，或R' 2代表任选被氨基官能团的保 护基团取代的含氮杂环基团，或R' 2代表芳基或杂芳基，获得式(IV)化合物 其中R' 2、G、m和η如上文所定义，将其采用用于氧代官能团的还原剂处理，获得式(V)化合物 其中R' 2、G、m和η如上文所定义，将其与甲磺酰氯、甲苯磺酰氯、三氟甲磺酸酐或卤化试剂反应，获得式(VI)化合物 其中R' 2、G、m和η如上文所定义，X代表甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基或三氟甲磺 酸酯基或卤素原子，当需要时，将其非对映异构体分离获得单一非对映异构体形式的式(I)化合物，然后，将其与式(VII)化合物反应MS-(CO)-R' ！ (VII),其中M代表钾、钠或锂，R' ！代表烷基或芳基，获得式(VIII)化合物 其中R' ”R' 2、G、m和η如上文所定义，当需要时，其对映异构体可以通过手性色谱分离，从而获得单一对映异构体形式的式⑴化合物，如果适当的话，可以将其硫醇、氨基和羧基官能团脱保护，获得式(I)化合物，当需要时，将其与相应的酸反应，获得式(I)化合物与可药用酸的加成盐。本发明还涉及式(Ia)化合物的制备方法，它是式(I)化合物的特殊形式，其中m 代表3并且R2代表NR5R6，采用式(II)化合物为原料 其中η代表0、1或2，G代表羧基官能团的保护基团，在不对称催化剂(根据需要，例如催化剂Q或QD)存在下，将其与丙烯醛反应，可 以获得构型为(IR)或(IS)的化合物 获得构型为(IR)或(IS)的式(IX)化合物 其中η和G如上文所定义，将其醛官能团还原，获得式(χ)化合物
其中n、G和X如上文所定义， 将其与式(XIII)化合物反应 NHR" 5R" 6 (XIII),
其中R" 5和『6各自代表氨基官能团的保护基团或线性或支链C1-C6烷基， 获得式(XIV)化合物
物
其中η和G如上文所定义，
将其与甲磺酰氯、甲苯磺酰氯、氟甲磺酸酐或卤化试剂反应，获得式(XI)化合 其中η和G如上文所定义，X代表卤素原子或三氟甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基或甲 磺酸酯基，
将其酮官能团在还原剂的作用下还原，获得式(XII)化合物
其中n、G、R〃 5和1 〃 6如上文所定义，
将其与甲磺酰氯、甲苯磺酰氯、三氟甲磺酸酐或卤化试剂反应，获得式(XV)化合 其中n、G、R〃 5和1 〃 6如上文所定义，X代表甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基或三氟甲 磺酸酯基或卤素原子，
然后将其与式(VII)化合物反应
MS-(CO)-R' ！ (VII),
其中M代表钾、钠或锂，R'工代表烷基或芳基，
获得式(XVI)化合物
其中n、R' i、G、R〃 5和1 〃 6如上文所定义，
如果适当的话，可以将其硫醇、氨基和羧基官能团脱保护，获得式(Ia)化合物，
13 其中n、H RjPR6如上文所定义，当需要时，将其与相应的酸反应，获得式(Ia)化合物与可药用酸的加成盐。采用手性还原剂，通过式(XI)酮的不对称还原，可以获得光学纯的式(Ia)化合 物，或者在后期阶段将它们自非对映异构体混合物分离也可以获得光学纯的式(Ia)化合 物。本发明化合物为TAFIa抑制剂。因此，它们可以用于预防或治疗风险患者的血栓形成事件。它们在治疗和预防血 管并发症中有重要价值，更特别是用于心血管、肺和脑血管并发症，上述并发症与下列疾病 有关动脉血栓形成疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、高脂血症、高血压、慢性静脉疾病、与肥胖 有关的代谢综合征或癌症。发明化合物尤其可以用于治疗、预防和二级预防心肌梗塞、心绞痛、任何起因的脑 血管意外(特别是动脉血栓性、心源性或房颤导致的意外)、主动脉瘤或下肢动脉炎、静脉 血栓形成(特别是在接受插管的癌症患者中)和肺动脉栓塞。血管风险因素和血管疾病(例如高血压、肥胖、糖尿病、心脏病、脑血管疾病和高 脂血症以及动脉粥样硬化)是导致痴呆(如阿尔茨海默病和血管性痴呆)的部分原因(Qiu C.，De Ronchi D.和 Fratiglioni L.，痴呆的流行病学最新进展(The epidemiology of the dementias :an update), 2007, Current Opinion in Psychiatry，20 :380_385)。因此， 本发明化合物也可以用于治疗和/或预防痴呆，例如阿尔茨海默病和血管性痴呆。TAFIa能够降低内源性纤维蛋白成分的效能。因此，本发明化合物作为TAFIa抑制 剂可以用作注射用纤维蛋白溶解药物的急性治疗的辅助成分，所述药物例如重组tPA(例 如，阿替普酶、替奈普酶、瑞替普酶)、重组uPA或链激酶，它们均可以用于紧急状态(例如， 心肌梗塞、脑血管意外)。本发明化合物能够增强那些注射用纤维蛋白溶解药物的效能，因此，可以使用它 们而同时仅具有少量出血和神经毒性的风险(可以降低它们的剂量，因此，可以减少其副 作用)。本发明还涉及药用组合物，该组合物含有式(I)化合物以及一或多种惰性、无毒、 可药用的赋形剂或载体。在本发明的药用组合物中，更特别可以述及的是那些适合于下列途径给药的组合 物口服、肠胃外(静脉内、肌肉或皮下)、经皮或透皮、鼻、直肠、舌下或呼吸道，特别是片剂 或糖衣剂、舌下片剂、胶囊、硬明胶胶囊、栓剂、霜剂、软膏、皮肤用凝胶剂、注射用或饮用制 剂、气雾剂、滴眼剂和滴鼻剂。除了式(I)化合物外，本发明药用组合物还可以含有一或多种赋形剂或载体，例如稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、吸附剂、着色剂、甜味剂。对于赋形剂或载体的实例而言，可以述及的包括稀释剂乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素、甘油，润滑剂二氧化硅、滑石粉、硬脂酸及其镁盐和钙盐、聚乙二醇，粘合剂娃酸铝、硅酸镁、淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙 烯吡咯烷酮，崩解剂琼脂、藻酸及其钠盐、泡腾混合物。式(I)活性成分在药用组合物中的重量百分比优选为5% -50%。使用的剂量取决于患者的年龄和体重、给药途径、疾病的性质和严重程度以及所 采用的任何相关治疗，剂量范围为每天0. 5mg至lOOOmg，分为一或多次给药。根据本发明的一个方面，本发明药用组合物除式(I)化合物外不合有任何其他活 性成分。根据本发明的另一方面，除了式(I)化合物外，本发明药用组合物还含有纤维蛋 白溶解药物，更特别的是注射用纤维蛋白溶解药物，例如重组tPA(例如阿替普酶)、重组 uPA或链激酶。在此情况下，组合物为可注射用形式。所述tPA剂量可以在0至IOOmg的范围内变动。根据本发明的另一方面，除了式(I)化合物外，本发明药用组合物还含有抗凝血 药物，例如华法令、达比加群酯(dabigatran etexilate)、利伐沙班(rivaroxaban)。华法令的剂量可以在1至IOOmg的范围内变动。根据本发明的另一方面，除了式(I)化合物外，本发明药用组合物含有抗血小板 药物，例如阿司匹林、氯吡格雷、普拉格雷....阿司匹林的剂量可以在10至IOOOmg的范围内变动。氯吡格雷的剂量可以在10至IOOOmg的范围内变动。
具体实施例方式下列实施例对本发明进行了说明。实施例中所述化合物的结构根据常规色谱技术 (红外、核磁共振、质谱)测定。缩写(+)-DIPCl (+)_ 二异松菔基基(diisopinocampheyl)氯硼烷((+)_ 二异松菔基 硼氯化物)DMAP 二甲基氨基吡啶DMF: 二甲基甲酰胺DMSO 二甲基亚砜eq.摩尔当量HMPA 六甲基磷酰胺HPLC 高效液相色谱NMR:核磁共振TAFIa 活化的凝血酶可激活的纤溶抑制剂THF:四氢呋喃
tPA 组织纤溶酶原激活剂upa 尿激酶或尿激酶类纤溶酶原激活剂实施例1 :(1R，2S)-1_(3-氨基丙基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐步骤A 2-氧代_环戊烷甲酸苄基酯在配备Dean-Stark设备和冷凝器的4_升烧瓶中，将2_氧代环戊烷甲酸甲酯 (380mL ;3mol)、苄基醇(342mL ；3. 3mol ； 1. Ieq.)和 DMAP(18. 3g ;0· 15mol ；0. 05eq.)溶于 ISOOmL环己烷溶液中。将反应混合物于回流下搅拌48小时(混合物的温度90°C )，蒸馏 除去形成的甲醇。冷却后，将反应混合物浓缩并溶于1500mL 二氯甲烷中。有机相采用IN 盐酸洗涤，用水洗涤，然后采用饱和的氯化钠溶液洗涤。然后将其干燥，过滤并蒸发。将如此获得的油状物经减压分馏(128-130°C /4X 10_2mbar)得到目标产物。步骤B 1- (4-叔-丁氧基-4-氧代丁基)-2-氧代-环戊烷甲酸苄基酯于室温下，在剧烈搅拌下，将上面步骤中获得的2-氧代-环戊烷甲酸苄基酯(Ig ； 5. 43mmol)的5mL无水丙酮溶液倒入无水碳酸钾(3g ；21. 7mmol ；4eq.)的IOmL无水丙酮悬 浮液中。将反应混合物剧烈搅拌1小时，然后快速倒入溶于2ml丙酮中的4-溴丁酸叔-丁 基酯(2. 04g ;9. 16mmol ;2eq.)。反应混合物于回流下加热过夜。冷却后，将反应混合物过 滤并溶于20mL 二氯甲烷。将有机相洗涤，干燥，过滤，然后蒸发。粗品产物经硅胶快速色谱 纯化，采用庚烷/乙酸乙酯(95/5)作为洗脱液。步骤C:4-{1-[(苄基氧基)羰基}-2_氧代环戊基} 丁酸于室温下，20分钟内将140mL三氟乙酸倒入上面步骤中获得的叔-丁基酯(200g ； 0. 545mol)的700mL无水二氯甲烷溶液中。将反应混合物于室温下搅拌过夜。注意搅拌 过夜后，如果有原料剩余，则加入更多10%三氟乙酸，继续搅拌3小时。将反应混合物蒸发并溶于甲苯(3X500ml)从而除去最大量的三氟乙酸。真空泵 干燥后，将获得的粗品油状物溶于碳酸氢钠溶液(84g/lL ;2eq.)。然后碱性水相采用乙醚 洗涤(3X300mL)，再用4N盐酸溶液酸化。酸性水相用乙酸乙酯萃取(3X300mL)，将合并的 有机相洗涤、干燥并蒸发。产物无需纯化可以直接用于下一步骤。步骤D:l-(3_{[苄基氧基)羰基]氨基}丙基-2-氧代-环戊烷甲酸苄基酯于室温下，5分钟内向上面步骤获得的酸(123. 7g ；0. 406mol)的IL无水甲苯溶液 中滴加三乙胺(84. 5mL ；0. 610mol ；1. 5eq.)、节基醇(75. 6mL ； 0. 731mol ；1. 8eq.)，然后滴 加二苯基磷酰基叠氮化物(96. 3mL ；0. 447mol ；1. Ieq.)。将反应混合物于回流下搅拌过夜。 冷却后，将反应混合物蒸发并溶于IL乙酸乙酯中。乙酸乙酯相用IN盐酸溶液(3X200mL)、 水、饱和的碳酸氢钠溶液洗涤，然后采用饱和的氯化钠溶液洗涤。将有机相干燥，过滤，然后 蒸发。将粗品产物于50-70°C、4X10_2mbar蒸馏除去杂质(主要是苯基醇)纯化。步骤E (3-{[苄基氧基)羰基氨基}丙基)-2_羟基-环戊烷甲酸苄基酯于-10°C，向上面步骤获得的酮酯(98g ；0. 239mol)的600mL无水甲醇溶液中分10 份加入硼氢化钠(11. 4g ；0. 30Imol ；1. 25eq.)。将反应混合物保持在_10°C—小时，然后将 其在2小时内于搅拌下温热至室温。蒸发除去甲醇后，反应混合物溶于IL乙酸乙酯。有机 相采用10%氯化铵溶液、水、饱和的氯化钠溶液洗涤。将有机相干燥，过滤，然后蒸发。步骤F 1- (3- {[(苄基氧基)羰基]氨基}丙基)-2-[(甲基磺酰基)氧基]环戊 烷甲酸盐苄基酯(外消旋反式非对映异构体)
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于室温下，将三乙胺(49. 53mL;0. 357mol ;1.5eq.)加至上面步骤中获得的醇 (98g ；0. 238mol)的950mL无水四氢呋喃溶液中。将反应混合物冷却至_30°C，然后滴加溶 于120mL无水四氢呋喃中的甲磺酰氯(27. 6ImL ；0. 357mol ；1. 5eq.)。然后将混合物在2小 时内于搅拌下温热至室温。蒸发除去四氢呋喃后，将反应混合物溶于IL乙酸乙酯。将有机 相洗涤，干燥，过滤，然后蒸发。粗品产物经硅胶(5kg)快速色谱纯化，采用梯度庚烷/乙酸 乙酯(7/3-6/4)作为洗脱液。反式非对映异构体为洗脱过程中的第一组分。步骤G:2_(乙酰基硫代)-1-(3_{[(苄基氧基)羰基]氨基}丙基)环戊烷甲酸 苄基酯(外消旋顺式非对映异构体)硫代乙酸钾的制备非常吸湿_不用干燥_制备并立即使用将40g硫代乙酸钾的350mL无水乙腈悬浮液于回流下加热30分钟，过滤，然后将
该操作重复一次。向获自上面步骤的(外消旋反式)甲磺酸酯(25g;0.051mol)的SOOmL无水乙腈 溶液中加入先前洗涤的硫代乙酸钾(45g没有抽滤-理论值29. 2g ； 0. 255mol ；5eq.)和 18C6冠醚(13. 5g ；0. 051mol ；leq.)，然后将反应混合物于回流下加热20小时。冷却后，将 反应混合物过滤，然后蒸发除去溶剂。粗品产物经硅胶(2kg)快速色谱纯化，采用梯度庚烷/乙酸乙酯(8/2-5/5)作为 洗脱液。注意该第一次上柱为预纯化并回收未反应的原料。含有目标产物的组分(6. 5g) 经凝胶(200g)快速色谱纯化，采用梯度二氯甲烷/乙酸乙酯(99/1-95/5)作为洗脱液。步骤!1:(11 ，25)-2-(乙酰基硫代)(3_ {[(苄基氧基)羰基]氨基}丙基)环 戊烷甲酸苄基酯将上面步骤中获得的外消旋顺式化合物的对映异构体通过制备性手性色谱在 CHIRALPAK AD-H 5μπι柱上分离，采用C02/Et0H(80/20k)混合物作为流动相。检测波长为230nm。(1R，2S)对映异构体=对映异构体2为洗脱过程中的第二组分。步骤I :(lR，2S)-l-(3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}丙基)_2_巯基环戊烷甲酸苄
基酯于10°C，向上面步骤中获得的化合物(8. 16g ；0. 0174mol)的150mL无水和脱气二 氧六环溶液中滴加IN氢氧化钠溶液(35mL ；0. 0348mol ；2eq.)。将混合物于60°C加热30分 钟。冷却后，反应混合物通过加入35mL IN盐酸中和，然后冷冻干燥。步骤J (1R，2S)-1-(3-氨基丙基)_2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐将600mL氨在2升反应器中浓缩，于-78 °C，分10份加入钠(IOg ；0. 435mol ； 25eq.)。将反应混合物于_78°C保持45分钟。然后在30分钟内滴加上面步骤中获得的化 合物的预先脱气的四氢呋喃/甲醇(140mL/12mL)混合物溶液。于_78°C继续搅拌1小时， 在搅拌下将混合物温热至室温。除去氨后，在30分钟内将氯化铵溶液(23. 3g的IlOmL水 溶液)加至反应混合物中，蒸发除去四氢呋喃，然后采用6M盐酸溶液(15mL)酸化。过滤， 然后进行冷冻干燥。粗品产物通过制备性HPLC在Kromasil柱上脱盐，采用梯度水/乙腈/三氟乙酸 作为流动相(100/0/0. 1洗脱10分钟，然后自100/0/0. 1-70/30/0. 1洗脱20分钟，随后以70/30/0. 1等度洗脱)。将含有目标产物和相应的二聚物(二硫化桥)的组分冷冻干燥。向上述冷冻干燥物(4. 3g)的IOOmL乙酸溶液中加入4. 5g锌(IOeq.)，然后，在剧 烈搅拌下，将反应混合物于60°C加热直到二聚物消失(约6小时)。冷却后，将反应混合物 过滤，滤液用400mL稀释，然后冷冻干燥。粗品产物通过制备性HPLC 在 Kromasil 柱(lkg_600mmX 60mm-70ml/min)上纯化， 采用水/乙腈/三氟乙酸(85/15/0. 1)作为流动相。将含有目标产物的组分冷冻干燥。旋光度溶剂甲醇，C=l，T = 21°C，L = 589nm，[a]D = +32.46°。[M+H] + 的 CAD/MS/MS 谱=204. 1，与预期结构符合。实施例2 :(1R，2S)_2-乙酰基硫代-l-(3-氨基丙基)_环戊烷甲酸盐酸盐于室温下，向实施例1步骤H化合物(2. 40g ；4. 72mmoles)的20mL无水二氯甲烷 溶液中滴加4M HCl/ 二氧六环溶液(35. 5mL ；141. 6mmoles ；30eq.)。将反应混合物于室温 下搅拌放置直到两个官能团脱保护(通过LC/MS检测-大约时间过夜)，然后蒸发除去溶 剂。将获得的产物在BIOGEL P2柱上纯化，采用水/乙腈/IN盐酸(1000/1000/2)混合物 作为流动相。将含有目标产物的组分冷冻干燥。 实施例3 :(1R，2S)-1_(3-氨基丙基)-2_巯基环戊烷甲酸盐酸盐将实施例2化合物(4. 51g ； 16mmoles)的148mL 4M HCl溶液于45°C加热过夜。冷 却后，将反应混合物采用50mL水稀释，然后冷冻干燥。粗品产物通过制备性HPLC在Kromasil柱(lkg_600mmX 60mm-70ml/min)上纯化， 采用水/乙腈(95/5)混合物作为流动相。将含有目标产物的组分冷冻干燥。 [M+H] + 的 CAD/MS/MS 谱=204. 1，与预期结构符合。实施例3a (1R，2S) (3_氨基丙基)_2_巯基环戊烷甲酸步骤A 己二酸二 -叔-丁基酯于室温下，将己二酰氯(629. 8g ；3. 44moles)倒入叔-丁醇(3. 27L ； 34. 4moles-10eq.)和吡啶(800mL ； 10. 32moles-3eq.)的3L无水甲苯溶液中。将反应混合 物于70°C加热搅拌过夜。冷却后，将吡啶氯化物的沉淀物过滤，采用甲苯冲洗。甲苯相采用IN盐酸溶液 (4X500mL)、10%碳酸钠溶液(lX500mL)、水(lX500mL)洗涤，然后采用饱和的氯化钠溶 液洗涤(lX500mL)。有机相经硫酸钠干燥，过滤，然后蒸发。获得的粗品油状物经减压分馏纯化(100°C /2X 10_2mmHg)。
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步骤B 2-氧代-环戊烷甲酸叔丁基酯将叔-丁醇(5.66mL ；0. 06mole-0. 05 eq.)和 14g 己二酸二 _ 叔 _ 丁基酯于室温 下倒入NaH(108. 54g的60%悬浮物；2. 71moles 2. 15eq.)的1. IL无水甲苯悬浮液中。将 反应混合物于回流下加热。于此温度下，滴加溶于500mL无水甲苯中的己二酸二叔-丁基 酯溶液(324. 6g ；1. 26moles)，同时控制气体的溢出。加入时间约为3小时。注意在己二酸二叔丁基酯的加入过程中，观察到大量反应混合物凝聚，但逐渐形 成悬浮液。一旦加入完成，将反应混合物于回流下保持5小时。冷却后，将反应混合物于0°C 采用10%乙酸溶液(IL)水解。分离有机相，水相采用甲苯(300ml)萃取。合并的甲苯相用 水洗涤(2X300ml)，然后采用饱和的氯化钠溶液(300ml)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过 滤，然后蒸发。橙色油状物经减压分馏纯化(65_70°C /1 X 1 O^mmHg)。步骤C:(lS)-2-氧代-1_(3-氧代丙基)环戊烷甲酸叔-丁基酯在氩气环境中、于-25 °C，30分钟内将丙烯醛(4. 19g ；74. 83mmoles-2. 5eq.) 的IOmL无水二氯甲烷溶液在缓慢搅拌下倒入2-氧代-环戊烷甲酸叔丁基酯(5. 51g ； 29. 93mmoles)和催化剂 Q (1. 46g ；2. 99mmoles-0. Ieq.)的 60mL 无水二氯甲烷溶液中。
催化剂 Q -才艮据 Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 105-108中所述合成 在加入结束时，将反应混合物于此温度下搅拌4小时，然后于_5°C搅拌过夜。将滤液蒸发，获得无色油状物。步骤D :(lS)-l-(3-羟基丙基)-2_氧代环戊烷甲酸叔丁基酯向获自上面步骤中的酮酯醛(6. 5g ；26. 9mmoles)的80mL无水四氢呋喃溶液中加 入三乙酰氧基硼氢化钠(6. 84g ；32. 3mmoles 1. 2eq.)。将反应混合物于回流下加热搅拌5 小时30分钟。回归室温后，将反应混合物蒸发。将残留物溶于IOOmL 二氯甲烷中，采用饱 和的碳酸氢钠溶液洗涤(2X20mL)。碱性水相采用二氯甲烷萃取。合并的有机相采用饱和 的氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，然后蒸发。粗品产物经硅胶快速色谱纯化，采用CH2Cl2/ 异丙醇(95/5)混合物作为洗脱液。步骤E :(lS)-l-(3-溴丙基)-2_氧代环戊烷甲酸叔丁基酯向获自上面步骤中的醇(5. 4g ；22. 12mmoles)和三苯膦(6. 7g ； 25. 44mmoles-l. 15eq.)的35mL无水二氯甲烷溶液中分次加入N-溴代琥珀酰亚胺 (4. 53g ；25. 44mmoles-l. 15eq.)，同时将温度保持在5°C。于室温下搅拌1小时后，将反应混合物蒸发。残留物溶于IOOmL异丙基醚并研磨，获得三苯膦衍生物的结晶。过滤固体并 冲洗。滤液浓缩，溶于戊烷，然后再过滤。将含有戊烷的滤液蒸发。粗品产物经硅胶快速色 谱纯化，采用庚烷/乙酸乙酯(8/2)混合物作为洗脱液。步骤F (1S，2R) (3_溴丙基)_2_羟基环戊烷甲酸叔-丁基盐酯于室温、搅拌下，将得自商业的1. 8M(+) DIPCl的己烷溶液(320mL ； 0. 577mole-l. 5eq.)倒入获自上面步骤中的酮酯(117. 5g ；0. 385mole)中。将反应混合物 于55 °C、于室温下搅拌过夜.向反应混合物加入950mL乙醚，然后在搅拌下、于0 °C，加入乙醛(35. 9mL ； 0. 635mole-9. 65eq.)。将反应混合物于室温下搅拌4小时。将反应混合物冷却至10°C后，加 入6N氢氧化钠溶液(480mL ；2. 88moles-7. 5eq.)。将反应混合物于室温下搅拌1小时。分 离有机相，用水(3X300ml)、10%柠檬酸溶液(2X300mL)和饱和的氯化钠溶液(3X150mL) 洗涤。有机相经硫酸钠干燥，然后蒸发。粗品产物经硅胶快速色谱纯化，采用梯度庚烷/乙 酸乙酯(95/5-85/15)作为洗脱液。步骤G:(lS，2R)-l-{3-[二(叔-丁氧基羰基)氨基]丙基}_羟基环戊烷甲酸 叔_ 丁基酯于室温下，向获自上面步骤中的溴化醇(11.8g;36. 06mmoles)的IlOmL无水DMF 溶液中加入亚氨基二甲酸二 _叔_ 丁基酯(7. 83g ；36. 06mmoles ；leq.)，然后加入碳酸铯 (11. 75g ；36. 06mmoles ；leq.)。反应混合物于室温下搅拌3小时。过滤反应混合物。滤液浓缩后，将油状残留物溶于300mL乙酸乙酯。乙酸乙酯相 用水洗涤(3X IOOmL)，然后采用饱和的氯化钠溶液(IOOmL)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过 滤并蒸发。粗品产物经硅胶快速色谱纯化，采用梯度庚烷/乙酸乙酯(9/1-85/15)作为洗脱 液。步骤H:(lS，2R)-l-{3-[二(叔-丁氧基羰基)氨基]丙基}_2_[(甲基磺酰基) 氧基]环戊烷甲酸叔-丁基酯于室温下，将三乙胺(4. llmL;29. 55mmoles ;1.5eq.)加至获自上面步骤中的醇 (8. 70g ；19. 7mmoles)的130mL无水四氢呋喃溶液中。将反应混合物冷却至_30°C，然后滴 加溶于IOmL无水四氢呋喃中的甲磺酰氯(2. 29mL ；29. 55mmoles ；1. 5eq.)。将混合物在搅 拌下2小时内回归至室温。蒸发除去四氢呋喃，将反应混合物溶于200mL乙酸乙酯。乙酸 乙酯相用水(2X20mL)和饱和的氯化钠溶液(lX20mL)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤， 然后蒸发。粗品产物经硅胶快速色谱纯化，采用梯度庚烷/乙酸乙酯(85/15-8/2)作为洗脱 液。步骤I :(lR，2S)-2-(乙酰基硫代)_{3_[二(叔-丁氧基羰基)氨基]丙基)环 戊烷甲酸叔-丁基酯采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤G的方法，获得目标产 物。步骤J. (1R，2S)-1_(3-氨基丙基)-2_巯基环戊烷甲酸盐酸盐酸和胺官能团的去保护
于室温下，向上面步骤中获得的化合物(8. 80g ；17. 6mmoles)的IOOmL无水二氯甲 烷溶液中滴加4M HCl/二氧六环溶液(132mL ；0. 53moles ；30eq.)。将反应混合物于室温下 搅拌放置使2个官能团脱保护(通过LC/MS检测-大约时间过夜)，然后蒸发除去溶剂。 获得的产物无需纯化可以直接用于下一步骤。硫醇的去保护将蒸发的产物溶于预先采用氩气脱气的200mL的4M HCl水溶液中，然后于45°C加 热过夜。冷却后，将反应混合物采用IOOmL脱气水稀释，然后冷冻干燥。步骤K (1R，2S) (3_氨基丙基)_2_巯基环戊烷甲酸将获自上面步骤的化合物(10g，41. 5mmol)溶于80mL水中并搅拌。溶液为澄清的 浅黄色(PH约为1.2)。在搅拌下，加入约IlmL饱和的碳酸氢钠溶液。在pH = 4，观察到 第一次沉淀，将其滤出。然后将滤液调至更为碱性，高至pH = 5. 5，当沉淀形成时，滤出沉 淀。滤液减压蒸发(T浴=55°C)。当剩余约IOmL溶液时，再次过滤。收集相等量的沉淀物，真空干燥，获得目标产物。匪R谱(1H 匪R，D20,600MHz) δ = 3. 08ppm(lH, dd) ；2.91(2H，t) ；2. 18(lH，m) ；2. 11 (1H, m) ；1.79(lH，m) ； 1. 69-1. 56 (4H，m) ；1.52(lH，m) ；1.45(lH，m) ;1.37(lH，m)。实施例3b :(1R，2S)-1_(3-氨基丙基)-2_巯基环戊烷甲酸磷酸盐将实施例3a化合物与磷酸的85%水溶液反应，然后冷冻干燥。匪R谱(1H 匪R，D20,600MHz) δ = 3. 09ppm(lH, t) ；2. 93 (2H, t) ；2. 18 (2H, m) ；1. 82 (1H, m) ； 1. 79 (1H, dt) ； 1. 72-1. 50 (5H, m) ；1. 41 (1H, dt)。实施例3c (1R，2S) (3_氨基丙基)~2~巯基环戊烷甲酸苯磺酸盐将实施例3a化合物与苯磺酸水的水溶液反应，然后冷冻干燥。匪R谱(1H NMR, DMS0—D6，600ΜΗζ) δ = 12. 38ppm(lH, si) ；7. 64 (3H, si) ；7. 59 (2H, m) ；7. 32 (2H, m) ；7. 29 (1H, m) ；3. 02 (1H, tl) ；2. 76 (2H, m) ；2. 33 (1H, si) ；2. 13 (2H, m)； 1. 84-1. 65 (3H, m) ；1.61(lH，m) ；1.52(3H，m) ;1.32(lH，m)。实施例4 (1S，2R) (3_氨基丙基)~2~巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐根据实施例1步骤I和J中所述方法，采用施例1步骤H中获得的另一个对映异构 体作为原料，即采用(1S，2R)-2-(乙酰基硫代P1-C3-I;[(苄基氧基)羰基]氨基}丙基) 环戊烷甲酸苄基酯作为原料，获得目标产物。[M+H]+的CAD/MS/MS谱=204. 1，与预期结构 相符。实施例5 :(lS，2R)-2-乙酰基硫代-l-(3-氨基丙基)_环戊烷甲酸盐酸盐采用实施例2步骤H中获得的另一个对映异构体作为原料，即(lS，2R)-2_(乙酰 基硫代)-1_(3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}丙基)环戊烷甲酸苄基酯为原料，根据实施例 2中所述方法，获得目标产物。
实施例6 1-(3-氨基丙基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式非对映 异构体)采用实施例1步骤G中获得的化合物为原料，根据实施例1步骤I和J中所述方 法，获得目标产物。[M+H]+ 的 CAD/MS/MS 谱=204. 1，与预期结构相符。实施例7 :1-(4_氨基丁基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋反式非对映 异构体)步骤A 1- (4-溴丁基)-2-氧代-环戊烷甲酸盐苄基酯在惰性氮气环境中，在配备磁力搅拌和冷凝器的500mL三颈烧瓶中，将氢化钠 95% (2. 2g ；87. Immol ；1. 25eq.)悬浮于无水 THF(115mL) ^P HMPA(14. 6mL)的混合物中。滴 加2-氧代环戊烷甲酸苄基酯(15. 3g ；70. 3mmol)的45mL无水THF溶液，从而将温度保持 在45°C以下。将反应混合物于室温下搅拌1小时。向该澄清的黄色溶液中加入1，4_ 二溴 丁烷(12. 6mL ；105. 4mmol ；1. 5eq.)。将反应混合物于回流下再搅拌14小时。冷却至室温 后，加入80mL饱和的氯化铵水溶液。将混合物倒入500mL乙醚中，有机相用IOOmL水洗涤 5次，然后采用IOOmL饱和的氯化钠水溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。产物经硅胶色谱纯化，采用环己烷/乙酸乙酯混合物(95/5-80/20的梯度)作为 洗脱液，得到目标产物，为黄色油状物形式。步骤B 1- (4-溴丁基)-2-羟基-环戊烷甲酸苄基酯采用获自上面步骤中的化合物作为原料，根据实施例1步骤E中所述方法，获得目 标产物。 步骤C 1- (4-叠氮丁基)-2-羟基-环戊烷甲酸苄基酯在惰性氮气环境中，在烧瓶中，将上面步骤中获得的化合物(4.41g;16.6mmol)、 叠氮化钠(5. 5g ；84. 6mmol ；5eq.)和碘化钠(0. 2g)悬浮于60mL乙醇中。将反应混合物于 回流下搅拌24小时，然后浓缩至干。将油性残留物溶于150mL乙醚和SOmL水。有机相采 用SOmL水和40mL饱和的氯化钠水溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。形成的 (Rac)-反式和(Rac)-顺式叠氮化物混合物直接用于下一步骤。步骤D 1- (4-氨基丁基)-2-羟基-环戊烷甲酸苄基酯在烧瓶中，将(Rac)-反式和(Rac)-顺式叠氮化物混合物(20. 64g ；62. 3mmol)和 三苯膦(24. 4g ；93mmol ；1. 5eq.)溶于500mL的THF中。将溶液于50°C搅拌1小时。加入水 (IOmL ；556mmol ；9eq.)。将反应混合物于50°C搅拌4小时，然后浓缩至干。将油性残留物 溶于250mL乙醚中，有机相采用120mL的IN盐酸水溶液萃取二次。水相采用IOOmL乙醚洗 涤。通过加入固体氢氧化钾使得水相的PH为12-13。水相采用250mL乙酸乙酯萃取三次。 合并的有机相采用IOOmL水洗涤，然后采用IOOmL饱和氯化钠水溶液洗涤。有机相经硫酸 镁干燥，过滤并浓缩。获得顺式/反式混合物形式的目标产物，可以直接用于下一步骤。步骤E:l-(4-{[苄基氧基)羰基}氨基} 丁基)-2_羟基-环戊烷甲酸苄基酯在烧瓶中，将上面步骤中获得的产物(62. 3mmol)溶于160mL 二氧六环。加入碳 酸钠(13. 16g ； 124mmol ；2eq.)的160mL水溶液。于0°C，缓慢加入氯代甲酸苄基酯(12mL ； 84. 4mmol ；1. 35eq.)的30mL 二氧六环溶液。将反应混合物于室温下搅拌12小时，然后部分浓缩。水相采用250mL乙醚萃取二次。将合并的有机相洗涤，干燥，过滤并浓缩。将产物经硅胶色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯9/1_2/8梯度洗脱)，获得为黄色油 状物的目标产物。步骤F: 1-(4-{[苄基氧基)羰基]氨基} 丁基)-2_[(甲基磺酰基)氧基-环戊 烷甲酸苄基酯(外消旋顺式非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤F中所述方法，获得目 标产物。该顺式非对映异构体为洗脱过程中的第一组分。步骤G:2_(乙酰基硫代)-1-(4_{[(苄基氧基)羰基]氨基} 丁基)环戊烷甲酸 苄基酯(外消旋反式非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤G中所述方法，获得目 标产物。步骤H :1-(4_氨基丁基)-2-巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋反式非对映异 构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤I和J中所述方法，获 得目标产物。 实施例8 1-(4-氨基丁基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式非对映 异构体)步骤A 1- (4- {[(苄基氧基)羰基]氨基} 丁基)-2-[(甲基磺酰基)氧基环戊烷 甲酸苄基酯(外消旋反式非对映异构体)目标产物为实施例7步骤F中获得的另一个非对映异构体(反式非对映异构体)。步骤B :1-(4_氨基丁基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式非对映异 构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤G、I和J中所述方法， 获得目标产物。 实施例9 (4-氨基丁基)-2-巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(顺式非对映异构体， 对映异构体1)步骤A:2-(乙酰基硫代)-1-(4_{[(苄基氧基)羰基]氨基} 丁基)环戊烷甲酸 苄基酯(顺式非对映异构体，对映异构体1)采用实施例8步骤A中获得的化合物为原料，根据实施例1步骤G和H中所述方 法，获得目标产物。对映异构体1为洗脱过程中的第一组分。
步骤B :1-(4_氨基丁基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(顺式非对映异构体，对 映异构体1)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤I和J中所述方法，获 得目标产物。[M+H]+的CAD/MS/MS谱=218，与预期结构相符。实施例10 :1-(4_氨基丁基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(顺式非对映异构 体，对映异构体2)步骤A:2-(乙酰基硫代)-1-(4_{[(苄基氧基)羰基]氨基} 丁基)环戊烷甲酸 苄基酯(顺式非对映异构体，对映异构体2)目标产物为实施例9步骤A中获得的另一个对映异构体。步骤B :1-(4_氨基丁基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(顺式非对映异构体，对 映异构体2)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤I和J中所述方法，获 得目标产物。[M+H]+的CAD/MS/MS谱=218，与预期结构相符。实施例11 :1-[(4_氨基甲基)苄基]-2-巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺 式非对映异构体)步骤A:l-(4-溴甲基)苄基-2-氧代-环戊烷甲酸苄基酯根据实施例7步骤A中所述方法，采用2-氧代-环戊烷甲酸苄基酯和1，4_ 二溴 甲基苯为原料，获得目标产物。步骤B :1-(4_溴甲基)苄基-2-羟基-环戊烷甲酸苄基酯(外消旋反式非对映异 构体)根据实施例1步骤E中所述方法，获得目标产物，随后将如此获得的化合物通过快 速硅胶色谱纯化，采用环己烷/乙酸乙酯(90/10-65/35梯度洗脱)作为洗脱液进行非对映 异构体分离。反式非对映异构体为洗脱过程中的第一组分。步骤C:l-[(4_氨基甲基)苄基]-2-巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式非 对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例7步骤C-H中所述方法，获得 目标产物。[M+H]+ 的 CAD/MS/MS 谱=266. 1，与预期结构相符。实施例12 2-巯基-1-(哌啶-4-基甲基)_环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋反式 非对映异构体)步骤A :4_ ({1-[(苄基氧基)羰基} -2-羟基-环戊基}甲基)哌啶甲酸苄基 酯(外消旋顺式非对映异构体)采用2-氧代_环戊烷甲酸苄基酯和4-溴甲基-1-哌啶甲酸苄基酯为原料，根据 实施例7步骤A和B中所述方法，获得目标产物。顺式非对映异构体为洗脱过程中的第二组分。步骤B:4-({1-[(苄基氧基)羰基]_2-[(甲基磺酰基)氧基]环戊基}甲基)-1_哌啶甲酸苄基酯(外消旋顺式非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤F中所述方法，获得目 标产物。步骤C :2_巯基-1-(哌啶-4-基甲基)_环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋反式非 对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤G、I和J中所述方法， 获得目标产物。 实施例13 2-巯基-1-(哌啶-4-基甲基)_环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式 非对映异构体)步骤A:4-({1-[(苄基氧基)羰基]_2-[(甲基磺酰基)氧基]环戊基}甲 基)-1_哌啶甲酸苄基酯(外消旋反式非对映异构体)目标产物为实施例12步骤B中获得的另一个非对映异构体(反式非对映异构 体)。步骤B 2-巯基-1-(哌啶-4-基甲基)_环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式非 对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤G、I和J中所述方法， 获得目标产物。
元素微量分析CHNS计算值47. 056. 23. 928. 97实测值46. 586. 244. 027. 78实施例14 :1-(5_氨基戊基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋反式非对映 异构体)步骤A:l-(5-{[苄基氧基)羰基]氨基}戊基)-2_羟基-环戊烷甲酸苄基酯采用2-氧代-环戊烷甲酸苄基酯和1，5-二溴戊烷作为原料，根据实施例7步骤 A-E中所述方法，获得目标产物。步骤B:l-(5-{[苄基氧基)羰基]氨基}戊基)-2_[(甲基磺酰基)氧基环戊烷 甲酸苄基酯(外消旋顺式非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤F中所述方法，获得目 标产物。顺式非对映异构体为洗脱过程中的第二组分。步骤C 1-(5-氨基戊基)-2-巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋反式非对映异 构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤G、I和J中所述方法， 获得目标产物。[M+H]+ 的 CAD/MS/MS 谱=232. 1，与预期结构相符。
实施例15 :l-(5-氨基戊基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式非对映 异构体)步骤A 1- (5- {[(苄基氧基)羰基]氨基}戊基)-2-[(甲基磺酰基)氧基环戊烷 甲酸苄基酯(外消旋反式非对映异构体)目标产物为实施例14步骤B中获得的另一个非对映异构体(反式非对映异构 体)。步骤B :1-(5_氨基戊基)-2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式非对映异 构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤G、I和J中所述方法， 获得目标产物。
元 实施例16 :2_巯基-l-(2-哌啶-4-基乙基)_环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺 式非对映异构体)步骤A :4_ (2- {1-[(苄基氧基)羰基]_2_羟基-环戊基}乙基)哌啶甲酸苄
基酯采用2-氧代-环戊烷甲酸苄基酯和4- (2-溴乙基)-1-哌啶甲酸苄基酯为原料， 根据实施例7步骤A和B中所述方法，获得目标产物。反式非对映异构体为洗脱过程中的第一组分。步骤Β:4-(2-{1-[(苄基氧基)羰基]_2_[(甲基磺酰基)氧基]环戊基}乙 基)-ι-哌啶甲酸苄基酯(外消旋反式非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤F中所述方法，获得目 标产物。步骤C 2-巯基-l-(2-哌啶-4-基乙基)-环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式 非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤G、I和J中所述方法， 获得目标产物。[M+H]+的CAD/MS/MS谱=258，与预期结构相符。实施例17 2-巯基-1-(吡啶-3-基甲基)_环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式 非对映异构体)步骤A:2-氧代-l-(3-吡啶基甲基)环戊烷甲酸苄基酯在惰性氮气环境中，在配备磁力搅拌和冷凝器的1-升的三颈烧瓶中，将氢化钾 32% (25g ；200mmoles ； 1. Ieq.)悬浮于无水THF(200mL)中。将反应混合物冷却至_78°C， 然后滴加2-氧代环戊烷甲酸苄基酯(39.7g;182mmoles)，同时保持温度低于-78°C。将反 应混合物于室温下搅拌1小时。将3_(氯代甲基)_吡啶碱(38. 7g ；226mmoles ；1. 24eq.) 的IOOmL无水THF溶液加至澄清的黄色溶液。将反应混合物于回流下搅拌12小时。冷却至 室温后，将反应混合物蒸发至干，溶于80mL水和500mL乙酸乙酯中。水相采用50mL乙酸乙 酯萃取三次。合并的有机相采用饱和的氯化钠溶液洗涤，然后经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。
26将产物经硅胶色谱纯化，采用二氯甲烷/乙醇化合物(98/2-95/5梯度洗脱)作为洗脱液， 得到为黄色油状物的目标产物。步骤B :2_羟基-l-(3-吡啶基甲基)环戊烷甲酸苄基酯(外消旋反式非对映异构 体)根据实施例1步骤E中所述方法，获得目标产物。产物经硅胶色谱纯化，采用二氯 甲烷/乙酸乙酯混合物(7/3-5/5梯度洗脱)作为洗脱液，得到为无色油状物的目标产物。 反式非对映异构体为洗脱过程中的第二组分。步骤C 2-巯基-1-(吡啶-3-基甲基)_环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式非 对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤F、G、I和J中所述方 法，获得目标产物。 [M+H]+ 的 CAD/MS/MS 谱=238. 1，与预期结构相符。实施例18 :2_巯基-l-(2-吡啶-2-基乙基)_环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺 式非对映异构体)步骤A:2-氧代-l-(2-吡啶-2-基乙基)环戊烷甲酸苄基酯采用2-氧代_环戊烷甲酸苄基酯和甲磺酸2-吡啶-2-基乙基酯作为原料，根据 实施例17步骤A中所述方法，获得目标产物。步骤B :2_羟基-l-(2-吡啶-2-基乙基)环戊烷甲酸苄基酯(外消旋反式非对映 异构体)根据实施例17步骤B中所述方法，获得目标产物。反式非对映异构体为洗脱过程 中的第二组分。步骤C 2-巯基-l-(2-吡啶-2-基乙基)-环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式 非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤F、G、I和J中所述方 法，获得目标产物。
[M+H]+ 的 CAD/MS/MS 谱=252. 1，与预期结构相符。 实施例19 1- [ (6-氨基吡啶-3-基甲基)]_2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消 旋顺式非对映异构体)步骤A 2-氧代_环戊烷甲酸叔_ 丁基酯1)己二酸二叔丁基酯于室温下，将己二酰氯(629. 8g ；3. 44moles)滴加至叔-丁醇(3. 27L ； 34. 4moles-10eq.)和吡啶(800mL ； 10. 32moles-3eq.)的3L无水甲苯溶液中。将反应混合物于70°C加热搅拌过夜。冷却后，滤出吡啶氯化物的沉淀物，用甲苯洗涤。甲苯相用IN盐 酸溶液(4X500mL)、10%碳酸钠溶液(lX500mL)、水(lX500mL)洗涤，然后用饱和的氯化 钠溶液洗涤(lX500mL)。将有机相干燥，过滤，然后蒸发。获得的粗品油状物经减压分馏纯 化(100°C /2 X I(T2HimHg)。2) 2-氧代-环戊烷甲酸叔_ 丁基酯于室温下，将叔-丁醇(5. 66mL ；0. 06mole-0. 05eq.)和14g己二酸二叔丁基酯倒 Λ NaH(108. 54g的60%悬浮液；2. 71moles 2. 15eq.)的1. IL无水甲苯悬浮液中。将反应混 合物于回流下加热。于此温度下，滴加溶于500mL无水甲苯的己二酸二叔丁基酯(324. 6g ； 1. 26moles)，同时控制气体选出。加入时间约为3小时。注意在己二酸二叔丁基酯的加入过程中，观察到大量反应混合物凝聚，但逐渐形 成悬浮液。一旦加入完成，将反应混合物于回流下保持5小时。冷却后，将反应混合物于0°C 采用10%乙酸溶液(IL)水解。分离有机相，水相采用甲苯(300ml)萃取。合并的甲苯相用 水洗涤(2X300ml)，然后采用饱和的氯化钠溶液(300ml)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过 滤，然后蒸发。橙色油状物经减压分馏纯化(65_70°C /1 X 1 O^mmHg)。步骤B:l-({6-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-3-吡啶基}甲基)-2_氧代环戊烷甲 酸叔_ 丁基酯采用2-氧代-环戊烷甲酸叔-丁基酯和[5_(氯代甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸 叔_ 丁基酯作为原料，根据实施例17步骤A中所述方法，获得目标产物。步骤C:l-({6_[(叔-丁氧基羰基)氨基]-3-吡啶基}甲基)-2_羟基环戊烷甲 酸叔_ 丁基酯根据实施例17步骤B中所述方法，获得目标产物。产物经硅胶色谱纯化，采用二 氯甲烷/乙醇(98/2-95/5梯度洗脱)，得到为无色油状物的目标产物。反式非对映异构体 为洗脱过程中的第二组分。步骤D 1- ({6-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-3-吡啶基}甲基)_2_ [(甲基磺酰基) 氧基]_环戊烷甲酸叔丁基酯(外消旋反式非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤F中所述方法，获得目 标产物。步骤E :1_[ (6-氨基吡啶-3-基甲基)]_2_(乙酰基硫代)_环戊烷甲酸(外消旋 顺式非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物作为原料，根据实施例1步骤G中所述方法，获得目 标产物。步骤F :1_[ (6-氨基吡啶-3-基甲基)]_2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋 顺式非对映异构体)酸和胺官能团的去保护于室温下，向上面步骤中获得的化合物(2. 40g ；4. 72mmoles)的20mL无水二氯甲 烷溶液中滴加4M HCl/ 二氧六环溶液(35. 5mL ；141. 6mmoles ；30eq.)。将反应混合物于室 温下搅拌，直到两个(胺和酸)官能团完成脱保护(通过LC/MS检测，大约时间为过夜)，然后蒸发除去溶剂。硫醇的去保护将蒸发后的产物溶于4M HCl水溶液，然后于45°C加热过夜。反应混合物用水稀 释，然后冷冻干燥。将产物在BIOGEL P2上采用水/乙腈(1/1)混合物作为洗脱液纯化。将含有目标 产物的组分冷冻干燥。[M+H]+ 的 CAD/MS/MS 谱=253. 1，与预期结构相符。实施例20 :(lR，2S，r R,2' S)-2, 2' - 二硫烷二基二 [1_ (3_ 氨基丙基)环戊
烷甲酸]二盐酸盐将实施例1步骤J中所述化合物(0. 44g ；1. 39mmoles)的3mL IN氢氧化钠溶液于 65°C加热过夜。冷却后，将反应混合物采用3mL IN盐酸溶液中和。将产物在BIOGEL P2上采用水/乙腈(1/1)混合物作为洗脱液纯化。将含有目标 产物的组分冷冻干燥。 实施例21 :(lR，2S)-l-[3_( 二甲基氨基)丙基]_2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐步骤A:(lR，2S，r R,2' S)-2, 2' - 二硫烷二基二 [1_ (3_ ( 二甲基氨基)丙基 环戊烷甲酸于室温下，向实施例20中获得的化合物(0. 57g ；0. 70mmole)的4. 5mL甲酸溶液中 滴加0.2mL的37%甲醛水溶液。将反应混合物于回流下加热搅拌1小时。冷却后，反应混 合物用IOmL水稀释，然后蒸发除去溶剂。产物无需纯化可以直接用于下一步骤。步骤B (1R，2S) [3_ ( 二甲基氨基)丙基]_2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐于室温下，向上面步骤中获得的化合物的35mL水/THF(1/1)混合物溶液中滴加 2mL三丁基膦。将反应混合物于50°C加热搅拌过夜。冷却后，将反应混合物用IOOmL水稀 释，然后水相用乙醚洗涤(3X25mL)。蒸发水相。粗品产物经制备性HPLC 在 Kromasil 柱(lkg_600mmX 60mm-70ml/min)上纯化，采 用水/乙腈/三氟乙酸(85/15/0-1)混合物作为流动相。将含有目标产物的组分冷冻干燥。[M+H]+ 的 CAD/MS/MS 谱=232. 1，与预期结构相符。实施例22 1-[3-(甲基氨基)丙基]_2_巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺 式非对映异构体)步骤A:2-[(甲基磺酰基)氧基]-l-(3-吡啶基甲基)环戊烷甲酸苄基酯(外消 旋反式非对映异构体)采用2-氧代_环戊烷甲酸苄基酯和3_[[(苄基氧基)羰基](甲基)氨基]丙基 甲烷磺酸酯作为原料，根据实施例17步骤A、B和C中所述方法，获得目标产物。反式非对映异构体为洗脱过程中第二组分。步骤B 1-[3-(甲基氨基)丙基]-2-巯基环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋顺式非 对映异构体)
采用上面步骤中获得的化合物为原料，根据实施例1步骤G、I和J中所述方法，获 得目标产物。[M+H]+ 的 CAD/MS/MS 谱=218. 1，与预期结构相符。实施例23 :2_巯基-1-(氮杂环丁烷-3-基甲基)_环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消 旋顺式非对映异构体)步骤A :3_ ({1-(叔-丁基氧基羰基)-2-羟基-环戊基}甲基)氮杂环丁烷甲 酸苄基酯采用2-氧代-环戊烷甲酸苄基酯和3_{[(甲基磺酰基)氧基]甲基}氮杂环丁 烷-1-氨基甲酸叔_ 丁基酯作为原料，根据实施例7步骤A和B中所述方法，获得目标产 物。步骤B :3_ ({1-(叔-丁基氧基羰基)-2-[(甲基磺酰基)氧基]环戊基}甲基)_1 氮杂环丁烷甲酸苄基酯(外消旋反式非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物为原料，根据实施例19步骤D中所述方法，获得目 标产物。产物经硅胶色谱纯化，采用二氯甲烷/乙酸乙酯(9/1-8/2梯度洗脱)混合物作为 洗脱液，得到为无色油状物的目标产物。反式非对映异构体为洗脱过程中的第二组分。步骤C 2-巯基-1-(氮杂环丁烷-3-基甲基)_环戊烷甲酸三氟乙酸盐(外消旋 顺式非对映异构体)采用上面步骤中获得的化合物为原料，根据实施例19步骤F中所述方法，获得目 标产物。[M+H]+ 的 CAD/MS/MS 谱=216. 1，与预期结构相符。药理学研究实施例24 =TAFIa的抑制在氯化钙存在下，纯化的人类TAFI (25ng)通过加入凝血酶-血栓调节蛋白复合物 激活。于20°C温育20分钟后，反应通过加入不可逆转的凝血酶抑制剂PPACK(TAFI活性试剂盒，American Diagnostica)中it。将实验化合物加至(3. 2nM)TAFIa溶液中，于20°C温育5分钟。加入显色TAFIa底 物，然后于37°C温育30分钟。通过加入硫酸(TAFI活性试剂盒，American Diagnostica) 中止反应。采用分光光度计(Spectramax，Molecular Devices)于490nm处测定溶液的光 密度(OD)。自每一个测定的OD值减去含有试剂不含TAFI的孔中的OD值。采用下列方程 式测定给定浓度的实验化合物的TAFIa抑制百分率抑制％ = 100-[(化合物的ODX 100) /载体的0D]根据S形四参数方程(作用_剂量)，采用非线性回归，自浓度逐渐增加的实验化 合物的测定OD值的抑制百分率计算能够抑制50% TAFIa的酶活性的本发明化合物的浓度 (IC50) 0获得的本发明的具有代表性的化合物的IC5tl值在下表中以nM表示 实施例25:药用组合物-片剂
制备1000粒片剂的配方，每片含有IOmg活性成分
实施例1-23之一的化合物IOg
羟丙基纤维素2g
小麦淀粉IOg
乳糖IOOg
硬脂酸镁3g
滑石粉3g
实施例26 药用组合物-片剂，含有华法令
制备1000粒片剂的配方，每片含有IOmg活性成分
实施例1-23之一的化合物IOg
华法令2g
羟丙基纤维素2g
小麦淀粉IOg
乳糖IOOg
硬脂酸镁3g
滑石粉g
实施例27 药用组合物-片剂，含有阿司匹林
制备1000粒片剂的配方，每片含有IOmg活性成分
实施例1-23之一的化合物IOg
阿司匹林IOOg
羟丙基纤维素2g
小麦淀粉IOg
乳糖IOOg
硬脂酸镁3g
滑石粉3g
实施例28 注射液，含有阿替普酶
制备IOmL溶液的配方
实施例1-23之一的化合物20mg
阿替普酶IOmg
L-精氨酸350 μ g
吐温80Img
磷酸q. s. p. pH7
注射用水10mL。
权利要求
式(I)化合物、其光学异构体以及其与可药用酸形成的加成盐其中R1代表氢原子或式COR4基团，其中R4代表线性或支链C1 C6烷基或芳基，或者R1代表式(A)基团R2代表式NR5R6基团，其中R5和R6为相同或不同的，每一个均代表氢原子或直链或支链C1 C6烷基，或者R2代表含氮杂环基团、芳基或杂芳基，R3代表氢原子或线性或支链C1 C6烷基，m代表1 6的整数，包含1和6，n代表0、1或2。FSA00000160097800011.tif,FSA00000160097800012.tif
2.权利要求1的式(I)化合物，其中R代表氢原子。
3.权利要求1或权利要求2的式(I)化合物，其中R2代表氨基或吡啶基。
4.权利要求1-3中任一项的式(I)化合物，其中R3代表氢原子。
5.权利要求1-4中任一项的式(I)化合物，其中m代表3。
6.权利要求1-4中任一项的式(I)化合物，其中n代表1。
7.权利要求1的式(la)化合物
8.权利要求1的式(I)化合物，所述化合物选自(1R，2S)-1-(3-氨基丙基)-2-巯基环戊烷甲酸、其光学异构体及其与可药用酸形成的 加成盐，和(1R，2S) -2-乙酰基硫代-1- (3-氨基丙基)-环戊烷甲酸、其光学异构体及其与可药用 酸形成的加成盐。
9.合成权利要求1的式(I)化合物的方法，采用式(II)化合物作为起始原料 其中n代表0、1或2，G代表羧基官能团的保护基团， 使其与式(III)化合物反应 其中X代表卤素原子或三氟甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基或甲磺酸酯基， m代表1-6的整数，包括1和6，R' 2代表式NR' 5R' 6基团，其中R' 5和1 ' 6可以是相同或不同的，每一个均代表 氨基官能团的保护基团或直链或支链Ci-Ce烷基，或R' 2代表被氨基官能团的保护基团任 选取代的含氮杂环基团，或R' 2代表芳基或杂芳基， 获得式(IV)化合物 其中R' 2、G、m和n如上文所定义， 将其采用用于氧代官能团的还原剂处理， 获得式(V)化合物 其中R' 2、G、m和n如上文所定义，将其与甲磺酰氯、甲苯磺酰氯、三氟甲磺酸酐或卤化试剂反应， 获得式(VI)化合物RV(CH2)m\ /C°2G(VI)其中R' 2、G、m和n如上文所定义，X代表甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基或三氟甲磺酸酯 基或卤素原子，当需要时，将其非对映异构体分离获得单一非对映异构体形式的式(I)化合物，然后，将其与式(VII)化合物反应MS-(CO)-R' ！ (VII),其中M代表钾、钠或锂，R'工代表烷基或芳基，获得式(VIII)化合物 (viii)其中r' i、r' 2、g、m和n如上文所定义，当需要时，其对映异构体可以通过手性色谱分离，从而获得单一对映异构体形式的式 ⑴化合物，如果适当的话，可以将其硫醇、氨基和羧基官能团脱保护，获得式(i)化合物，当需要时，将其与相应的酸反应，获得式(i)化合物与可药用酸的加成盐。
10.制备权利要求7的式(la)化合物的方法，该方法采用式(ii)化合物作为起始原料 (ii)其中n代表0、1或2，g代表羧基官能团的保护基团 在不对称催化剂存在下，将其与丙烯醛反应， 获得构型为(1r)或(1s)的式(ix)化合物 (ix)其中n和g如上文所定义， 将其醛官能团还原，获得式(x)化合物 (x)其中n和g如上文所定义，将其与甲磺酰氯、甲苯磺酰氯、三氟甲磺酸酐或卤化试剂反应，获得式(xi)化合物 其中n和g如上文所定义，x代表卤素原子或三氟甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基或甲磺酸匕曰酉将其酮官能团在还原剂的作用下还原，获得式(xii)化合物 其中n、g和x如上文所定义， 将其与式(xiii)化合物反应 nhr" 5r" 6 (xiii)，其中r〃 5和1 〃 6各自代表氨基官能团的保护基团或线性或支链ci-q烷基， 获得式(xiv)化合物 其中n、g、r〃 5和1 〃 6如上文所定义，将其与甲磺酰氯、甲苯磺酰氯、三氟甲磺酸酐或卤化试剂反应，获得式(xv)化合物 其中n、G、R" 5和1 " 6如上文所定义，X代表甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基或三氟甲磺酸 酯基或卤素原子，然后将其与式(VII)化合物反应 其中M代表钾、钠或锂，R'工代表烷基或芳基，获得式(XVI)化合物其中n、R' i、G、R〃 5和1 〃 6如上文所定义，如果适当的话，将其硫醇、氨基和羧基官能团脱保护，获得式(la)化合物，当需要时，将其与相应的酸反应，获得式(la)化合物与可药用酸的加成盐。
11.药用组合物，该药用组合物含有权利要求1-8中任一项的式(I)化合物以及一或多 种惰性、无毒、可药用的赋形剂或载体。
12.权利要求11的药用组合物，其特征在于它另外含有纤溶药物、抗凝药物或抗血小 板药物。
13.可注射形式的权利要求11的药用组合物，其特征在于它另外含有选自重组tPA、重 组uPA和链激酶的纤溶药物。
14.权利要求1-8中任一项的化合物在生产用于预防、二级预防或治疗下列疾病的药 物中的用途心肌梗塞、心绞痛、下肢动脉炎、静脉血栓形成、肺动脉栓塞、脑血管意外、糖尿 病血管并发症、主动脉瘤或痴呆。
15.权利要求14的化合物的用途，所述化合物与纤溶药物、抗凝药物或抗血小板药物 联用。
全文摘要
本发明涉及2-巯基环戊烷甲酸化合物、其制备方法和含有它们的药用组合物。具体而言，本发明涉及式(I)化合物、其光学异构体以及其与可药用酸形成的加成盐，在式(I)中，R1代表氢原子或式COR4基团，或R1代表式(A)基团，R2代表式NR5R6基团，或者R2代表含氮杂环基团、芳基或杂芳基，R3代表氢原子或烷基，m代表1-6的整数，包含1和6，n代表0、1或2。本发明还涉及包含所述化合物的药物。
文档编号A61P9/10GK101928241SQ20101021149
公开日2010年12月29日 申请日期2010年6月22日 优先权日2009年6月26日
发明者A·吕潘, A-F·吉尤齐克, G·德南特伊, J-C·奎恩, J-G·帕尔芒捷, M-O·瓦莱, N·博耶尔, P·朱博, P·格洛阿内克, P·梅内西耶, T·韦伯朗 申请人:瑟维尔实验室;国立鲁昂应用科学学院;国家科学研究中心;国立鲁昂大学