专利名称：3,15-二羰基赤霉酸甲酯在逆转肿瘤多药耐药中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及到新合成的赤霉酸甲酯的用途，具体是3，15-二羰基赤霉酸甲酯在逆 转肿瘤多药耐药中的用途。
背景技术：
恶性肿瘤严重危害人类生命和健康，已成为当今疾病死亡的主要原因之一。随着 对恶性肿瘤本质认识的加深，恶性肿瘤是全身而非局部性疾病的认识已被普遍认同。因此， 较手术和放射疗法相比，肿瘤的药物治疗即化疗在治疗肿瘤、延长生存时间和提高患者的 生活质量方面具有肯定的和不可替代的作用[1]。但是，在肿瘤的化疗过程中产生的多药耐 药(Multi-drug resistance, MDR)是肿瘤化疗失败的主要原因之一 M。MDR是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时，对结构和作用机制不同 的抗肿瘤药物产生交叉耐药性。MDR多针对天然药物，如阿霉素、柔红霉素、长春新碱、长春 碱、紫杉醇、鬼臼毒素等产生[11]。MDR是肿瘤化学治疗的主要障碍，也是肿瘤化疗亟待解决 的难题。MDR形成的机制复杂，肿瘤细胞可通过不同途径导致MDR产生。MDR的产生与P-糖 蛋白(P-gp)的过度表达有关，还与多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)、耐药细胞 的抗凋亡机制、拓扑异构酶II(TC)PO II)、蛋白激酶C(PKC)、金属硫蛋白、谷胱甘肽(GSH)、 谷胱甘肽-S转移酶(GST)等有关[2]。但多数肿瘤细胞MDR的产生主要与P-gp的过表达或 与MDR介导的抗凋亡机制有关。P-gp表达在细胞膜上，为一能量依赖性转运蛋白，类似于药 泵，能将多种结构和作用机制不同的天然药物排出细胞外，使细胞内药物浓度降低，导致肿 瘤细胞对多种化疗药物不敏感，产生MDR_。而抗凋亡基因过表达和促凋亡基因的低表达 均能抑制肿瘤细胞凋亡，并影响化疗药物对肿瘤细胞的杀伤，从而亦能产生MDR[3]。其中以 抑制凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax的表达失衡为多见。人类P-gp分为两类，分别由mdr-1和mdr_3基因编码。mdr_l编码的P-gp与MDR 有关，分子量为170kD，是一能量依赖性的药物外排跨膜蛋白，有12个跨膜区，膜内有两个 ATP结合区。多数MDR逆转剂能抑制P-gp活性，恢复或部分恢复肿瘤细胞对抗癌药物的敏 感性[4]。近年来研究的MDR逆转剂大致可分为①钙离子通道阻滞剂其代表是维拉帕米 (verapami 1，VER)，是最早发现的MDR逆转药物，其逆转MDR作用与钙拮抗作用无关，而是通 过竞争性地与P-gp结合，成为MDR细胞外排泵的竞争性底物，从而增加细胞内药物的聚积 量来实现逆转作用。但本类药物由于严重的心血管系统毒性，妨碍了其临床应用。②环孢 菌素类药物是一种高度亲脂性物质，可与抗肿瘤药物竞争P-gp上的结合位点，从而抑制 跨膜泵作用，使细胞内药物累积增加，逆转MDR。其代表药物为环孢菌素A(CsA)及其衍生 物Valspodar (SDZ-PSC833)和bircodar (Vx710)。临床观察发现CsA比传统的逆转剂维拉 帕米有更强的逆转作用。但由于Valspodar和Bircodar是细胞色素氧化酶P4503A4的底 物，因此也抑制该酶的活性，导致经该酶代谢相关药物的体内代谢和消除受抑制，用药者体 内相关药物浓度升高而产生严重的毒性反应。由于这些药物间的相互作用极其复杂，在临 床上难以确定安全有效的给药剂量，限制了此类药物的应用[12]。③新近通过构效关系和组合化学原理研制的对P-gp更具有特异性和更强作用的P-gp抑制剂Tariquidar (XR9576)， 能高亲和性地结合P-gp，强效抑制其活性。不同于前两类竞争性抑制机制，Tariquidar与 P-gp的结合是特异性、非竞争性的，其亲和力远大于其它底物。Tariquidar在临床研究中 观察到其抑制P-gp的能力和时间明显超过前两类MDR逆转剂，并在I期和II期临床实验中 均收到良好的效果。但在III期临床实验中发现其与一线化疗药物联用时毒性增强，甚至出 现严重的毒副反应，以致最终临床疗效依然不理想[5]。在研究的MDR逆转剂中，绝大多数均为非抗癌药，而对于已知的抗癌药，肿瘤细胞 又几乎都可产生耐药性，即使是应用时间不长、疗效又很好的抗癌药紫杉醇也是如此。迄今 几乎没有对耐药肿瘤有效的抗癌药，更无法得知其逆转肿瘤耐药的机制[6]。有报道，治疗慢 性粒细胞性白血病的有效成分-靛玉红显示出逆转耐药的作用，临床试验中，其在剂量小 于其它抗癌药时却有高于它们的疗效，表现出逆转耐药和抗肿瘤的双重效应，此类药物值 得期待，是寻找抗耐药肿瘤新药的重要方向[7]。诱导细胞凋亡是众多化疗药物杀伤肿瘤细胞的共同通路，从这个意义上说，凋亡 受抑或凋亡逃逸可能是肿瘤细胞产生耐药的机制之一 [8]。目前，细胞凋亡调控基因与肿瘤 多药耐药的关系已被许多学者所证实。Bcl-2基因家族是目前研究较深入的细胞凋亡相关 基因，与肿瘤细胞耐药密切相关[3]。而Bax作为凋亡促进基因的代表，其过度表达可诱导多 种肿瘤细胞产生凋亡，反之则产生耐药。化合物3，15_ 二羰基赤霉酸甲酯(GA13315)是从合成的一系列赤霉素衍生物中筛 选出的新四环二萜类化合物，已获中国发明专利保护，专利名称3，15-二羰基赤霉酸类化 合物及其酯和盐，专利号ZL 200410021939.2。
发明内容
本发明的目的是提供3，15- 二羰基赤霉酸甲酯在制备治疗肿瘤药物中的应用。前期发明人在对GA逆转肿瘤MDR的探索中发现，耐多柔比星(ADM)的人慢性粒细 胞性白血病细胞株-K562/A02，在对多种结构和作用机制不同的经典化疗药产生耐药的情 况下，对化合物GA仍然敏感，其半数抑制浓度IC5tl明显低于其它化疗药，并呈现较好的剂量 依赖性。本申请在此基础上，以化疗药ADM耐药的细胞株K562/A02和相应的敏感株K562 为模型，以维拉帕米(VER)为阳性对照，在验证K562/A02模型的MDR特性及程度的基础上， 进一步检测GA作用于K562/A02细胞的药物敏感性以及逆转其ADM耐药的效应及机制。采 用流式细胞术(FCM)、直接免疫荧光法、AnnexinV/PI双染法、实时定量逆转录聚合酶链反 应(RQ-PCR)多种细胞分子生物学方法，检测GA对K562/A02细胞P-gp表达、功能、MDR细 胞凋亡抗性的缓解及mdr-Ι基因mRNA转录各方面的影响。本发明对于寻找同时兼有抗肿瘤和克服肿瘤多药耐药的候选化合物，研发新的具 有自主知识产权的肿瘤多药耐药逆转剂，提高肿瘤治疗的疗效奠定基础，具有重要的科学 意义。此外，由于化合物GA的合成原料价廉易得、反应步骤少、产物得率高，因此本发明亦 具有可期待的应用前景。本发明所述的GA在制备肿瘤药物中的应用的有益效果如下化疗药ADM、表阿霉 素(EPI)和依托泊苷(VP-16)对K562/A02细胞生长的半数抑制浓度(IC50)均> 100 μ g/ml，而对K562细胞的IC5tl分别为0. 33,2. 08和2. 21 μ g/ml，K562/A02对各化疗药的耐药指 数(RI)分别为303. 03，48. 08，45. 25，表明K562/A02为MDR细胞模型，K562即为相应的敏 感细胞模型。化合物GA对K562/A02细胞的IC5tl仅为4. 43 μ g/ml，提示在对多种化疗药耐 药的同时，K562/A02对GA仍然具有较高的敏感性。ADM与10 μ g/mlVER联合或与3. 125、 6. 25,12. 5 μ g/ml 浓度的 GA 联合作用于 K562/A02 细胞的 IC50 分别为 1.68,24. 13,2. 38， 0. 84，逆转倍数(FR)分别为32. 4,2. 26, 39. 45，64. 81倍，提示化合物GA能显著逆转K562/ A02对ADM的耐药(P < 0. 01)；在蓄积实验中，ADM与VER或GA联用均能显著提高ADM在 K562/A02细胞内的蓄积量，且GA显示出较为明显的剂量依赖性(ρ < 0. 01)，而相同浓度的 GA和VER在同等条件下与ADM联用对Κ562敏感株无此效应(P > 0. 05) ；RH-123外排实验 结果显示，Κ562细胞内的RH-123含量显著高于Κ562/Α02细胞(P < 0. 01)，而6. 25 μ g/ml 的GA即可明显提高P-gp高亲和力底物RH-123在K562/A02细胞内的含量(P < 0. 05)，并呈 现良好的剂量依赖性；P-gp表达检测结果显示，K562/A02较K562高表达P_gp (P < 0. 01)， 而12. 5 μ g/ml的GA对K562/A02细胞P-gp表达的影响与阴性对照组比较无显著差异(P > 0. 05)；凋亡检测结果显示，ADM自身并不能缓解K562/A02细胞由于耐药所引发的凋亡受阻 (P > 0. 05)。但ADM在与GA联合作用于K562/A02细胞后，即可剂量依赖性地缓解由MDR 所导致的K562/A02细胞的抗凋亡作用，12. 5 μ g/ml的GA联合ADM作用于K562/A02细胞 48h后，耐药株由10 μ g/ml ADM引发的凋亡从20. 15%增加到74. 41 %，P < 0. 05 ；RQ-PCR 结果显示，ADM单独或与GA联合作用于K562/A02细胞后，其mdr-ImRNA的表达出现轻微下 调，但与对照组相比，此下调作用不明显(P >0.05)。因此，新四环二萜类化合物GA具有逆 转K562/A02细胞多药耐药的效应，此作用与增加耐药细胞内化疗药的含量、阻止其外排及 促进耐药细胞凋亡有关，但与下调耐药基因mdr-Ι的表达无明显相关，提示其作用机制与 抑制耐药细胞P-gp的外排泵功能及诱导耐药细胞凋亡有关。
图1为化合物GA对K562和K562/A02细胞增殖的IC50 ( μ g/ml)；图2为化合物GA对K562/A02细胞中ADM蓄积量的影响；图中从左往右各峰依次 为阴性对照组，GA-3. 125，6. 25，VER (阳性对照)-10，GA-12. 5 ( μ g/ml)；图3为化合物GA对K562细胞中ADM蓄积量的影响；图4为化合物GA对K562/A02细胞中ADM蓄积量的影响(三次实验平均值)；图5 图8为GA对K562/A02细胞P糖蛋白(P_gp)表达的影响；图9为GA对K562/A02和K562细胞内RH123含量的影响；图10为GA对P-gp蛋白泵外排功能的影响；图11 图15为GA对ADM诱导的K562/A02细胞凋亡的影响；图16为RQ-PCR中各实验组溶解曲线图；图17为RQ-PCR中各实验组扩增曲线图；图18为RQ-PCR检测GA对K562/A02细胞mdr_lmRNA表达的抑制作用。
具体实施例方式下面结合具体实施例及附图对本发明作进一步说明。
一、实验材料(一 )细胞株K562 (The Drug Sensitive Human Myelogenous Leukemia Cell line) :ΑΙ# 4 系白血病细胞株；Κ562/Α02(The Drug Resistant Human Myelogenous Leukemia Cell line) -M^ 柔比星的人慢性髓系白血病细胞株。两株细胞均引自中国科学院上海药物研究所。K562细胞置于含体积分数10%胎 牛血清RPMI1640培养液中，37°C，5% CO2，饱和湿度下培养。K562/A02细胞培养基中加入 1 μ g/ml的多柔比星(ADM)维持培养，并于实验前2周去除ADM、用常规RPMI1640完全培养 液进行培养。(二)样品与试剂1、样品化合物GA13315，化学名3，15- 二羰基赤霉酸甲酯，为新四环二萜类化合物，分子 量为370. 4，由云南大学提供。2、主要药品及试剂(1)注射用盐酸多柔比星(ADM)浙江海正药业股份有限公司，批号080202B ；(2)依托泊苷注射液(VP-16)江苏恒瑞医药股份有限公司，批号08020691 ；(3)注射用硫酸长春新碱(VCR)浙江海正药业股份有限公司，批号070501 ；(4)盐酸维拉帕米注射液(VER)哈药集团三精制药，批号080107A8 ；(5)连接有荧光素PE的P-gp单克隆抗体(Anti-Pgp-PE) =BD公司；(6)罗丹明 123 试剂(RH-123) =Sigma 公司，127k5752 ；(7)改良型RPMI 1640培养基赛默飞世尔生物化学制品(北京)有限公司，批号 NTE0099 ；(8) 二甲基亚砜(DMSO) =Amresco 产品，批号:0718A01 ；(9)碘化丙啶(PI) Sigma公司生产；(10)核糖核酸酶A(RNase A) :Sigma公司生产；(11)无水乙醇天津市北方天医化学试剂厂生产，批号20090515 ；(12)胎牛血清杭州四季青生物工程材料有限公司生产，批号080619 ；(13) 二甲基四氮唑蓝(MTT) =Amresco公司生产，批号1708B015 ；(14)十二烷基硫酸钠(SDS)汕头市达濠精细化学品公司生产，批号20080210 ；(15)异丁醇上海化学试剂公司生产，批号0804253 ；(16)浓盐酸(HCl)成都市欣海兴化工试剂厂生产；(17)0. 9%氯化钠注射液(N · S)昆明南疆制药有限公司生产，批号0806270 ；(18)NaCl 重庆川东化工(集团)有限公司生产，批号=20080901 ；(19)TRIzol 试剂，invitrogen 公司生产，Lot. No 50300413 ；(20)焦碳酸二乙酯(DEPC)，Promega公司产品；(21)M-MLV Reverse Transcriptase (200U/ul)试剂盒，invitrogen 公司生产， Cat. No 28025-021 ；(22)5XFirst-Strand Buffer[250Mm Tris-HCl,375Mm KCl，15mm MgC12],invitrogen 公司产品，Cat. No :28025_021 ；(23)DTT(0. ImM)，invitrogen 公司产品，Cat. No :28025_021 ；(24)Random primer，中国上海生物工程技术有限公司产品，Lot. No 0701 ；(25) dNTPs (IOmM)，中国上海生物工程技术有限公司产品，Lot. No =3080901 ；(26) β -actine及mdr_l上、下游引物，中国上海生物工程技术有限公司合成；(27) SYBR Green I (20X)，Generay 公司产品，Lot. No :RS0975 ；(28)MgC12(25mM)，Fermentas 公司产品，Lot. No :00031664。(29) TaqDNA 聚合酶、PCR 反应缓冲液(IOx)，北京 BioDev(29) Platinum Taq DNA Polymerase (5U/ul), invitrogen ^ W] Λ ηππ, Lot. No 266632。(三)主要仪器和设备1. C02培养箱德国Hereaus公司生产；2.电子天平常熟市双杰测试仪器厂生产，JJ200型；3.医用净化工作台苏州净化设备公司生产，YJ-1450型；4.低温高速离心机德国Hereaus公司生产，Biofuge 15R型；5.倒置相差显微镜日本Olympus公司生产，BH-2型；6.酶标板自动读数仪美国伯乐公司生产，Bio-Rad 680型；7.热空气干燥消毒箱德国Hereaus公司生产，D-6450型；8. 一次性6孔、96孔培养板美国Corning公司生产；9.超低温冰箱美国 Thermo Electron 公司生产，Forma_86C991 型；10.光学显微镜德国莱卡(Leica)公司生产，DM400B型；11.流式细胞仪=Beckman coulter 公司生产，Coulter EpicsXL 型；12.台式高速低温离心机，德国Heraeus公司产品，型号Biofuge Stratos ；13.常温高速离心机，美国热电公司产品，型号IEC Multi ；14.实时荧光定量PCR仪，美国ABI公司产品，型号7300 ；15.海尔冰箱(4°C )，中国青岛海尔集团产品；16. UV2000紫外分析仪，上海天能科技有限公司产品；17.电泳仪、电泳槽，上海天能科技有限公司产品；18.紫外分光光度仪，BIO-RAD有限公司产品；19.漩涡混合器，其林贝尔仪器制造公司产品，QL-901。(四)试剂配制1. RPMI 1640完全培养液的配制[11]RPMI 1640培养液中加入10%胎牛血清、青霉素(100 μ g/ml)和链霉素(100 μ g/ ml)，pH 为 7.4。2. 0. Imol PBS平衡盐溶液配制。NaCl 8. 00g、KCl 0. 20g、Na2HP04 · H20 2. 89g、KH2P040. 20g,用 IL 三蒸水溶解后 调pH值7. 2左右。3.三联液配制0. 012mol/l 盐酸、10% SDS、5%异丁醇，即加 1. 2ml 36%-37%浓盐酸、100g SDS、
750ml异丁醇，用IL三蒸水溶解。4. MTT 配制取5mgMTT粉末，加入ImlPBS配成5mg/ml浓度溶液。5.配制多柔比星(ADM)溶液注射用多柔比星规格10mg，加入IOml灭菌生理盐水(N. S)于安瓿瓶内，溶解后 浓度为lmg/ml，分装至1.5ml印管内，于0°C冰箱保存待用，每次取1印管内的ADM使用， 融化后不可再冻存，作K562/A02细胞株的维持培养和实验用。6. TAE 储存液(50x)24. 2gTris碱(三羟甲基铵基甲烷)，57. Iml冰醋酸，37. 2gNa2EDTA. 2H20，加水至 1000ml，4°C保存。用时加水稀释至Ix工作液。7.溴酚蓝上样缓冲液(6X)0.25%溴酚蓝，0.25% 二甲苯青，30%甘油溶于水中，4°C保存。用时和样品以 1 5混合上样。8.琼脂糖凝胶配制2%琼脂糖凝胶0. 9g琼脂糖干粉，45ml去离子水，900ulTAE混合于烧瓶中，于微 波炉中煮沸，待凝胶温度降至60°C左右加入EB，使终浓度达10mg/ml。摇勻后立即倒入准备 好的胶膜中，待冷却后，拔出上样梳，取出凝胶于4°C冰箱中保存。二、实施方式实施例一 K562/A02的多药耐药特性及程度1.药物及配制化疗药ADM、EPI、VP-16 均设 100、50、25、12. 5、6. 25 μ g/ml 5 个受试浓度，此浓度 根据预试验结果设定。具体配制如下称取一定量药物加入一定量的N. S溶解后，再加入 一定量的RPMI1640完全培养液配制成高浓度溶液，其余浓度等比稀释配制而成。2.实验方法参照文献[13]，以改良MTT法测定各化合物对细胞增殖的影响。取处于对数生 长期的K562及K562/A02细胞株调整为一定浓度的细胞悬液接种于96孔培养板，90 μ 1/ 孔，种板后立即加入不同受试药物，各受试物均设100、50、25、12· 5,6. 25 μ g/ml 5个受试 浓度，每种浓度设3个平行复孔，10 μ 1/孔。阴性对照为等体积培养基。加药后继续置于 37°C,5% C02培养箱培养，在药物作用48h后，每孔加入MTT(5mg/ml)20l·! 1，继续培养4h， 每孔加入三联液[10% SDS-5%异丁醇-0.012mol/L HCl (W/V/V) ] 100 μ 1溶解还原产物甲 臜。用酶标仪在570nm单波长下测定各孔的OD值。3.结果处理(1)计算各受试样品不同浓度的平均OD值及标准差，按下列公式计算细胞增殖抑 制率抑制率(％ ) = (OD值对照孔-OD值加样孔)/OD值对照孔X 100%采用Microsoft Excel 2003计算抑制率，采用Logit法计算半数抑制浓度IC50 ；(2)按下列公式计算以上三种化疗药物的耐药指数(Resistance Index, RI)
结果化疗药ADM、EPI、VP-16在对K562敏感株作用时均表现出良好的药物敏感 性，其IC5tl值分别为0. 33，2. 08，2. 21 μ g/ml。而同等实验条件作用于K562/A02耐药细胞 的半数抑制浓度IC5tl均> 100 μ g/ml。按公式计算各化疗药物的RI均大于30 (IC5tl值大于 100 μ g/ml时按100计RI)(表1)。参照文献证实耐药细胞模型成立。表1K562/A02细胞对各化疗药物的耐药指数(RI)
~m\IC50 (pg/ml)耐药指数
K562K562/A02(RI)
ADM 033>100303.03
EPI 2.08>10048.08
VP-16 2.21>10045.25实施例二 K562/A02细胞对化合物GA的敏感性1.药物及配制ADM、VCR、VP-16、GA 均设 100、50、25、12. 5、6. 25μ g/ml 5 个受试浓度(此浓度根 据预试验结果设定)，具体配制方法同前。2.实验方法改良的MTT法同前。结果化合物GA作用于K562/A02细胞表现出较高的药物敏感性，IC50值仅为 4. 43 μ g/ml (表2)，而对于其它三种结构和作用机制不同的化疗药，K562/A02细胞对其药 物作用均不敏感。提示K562/A02细胞在对多种化疗药耐药的同时，对化合物GA仍然具有 较高的敏感性，为后续实验提供了依据。
0122]表2K562/A02细胞对各受试物的药物敏感性
0123]组别IC5tl(PgAil)
0124]ADM> 100
0125]VCR72. 74
0126]VP-16> 100
0127]GA4. 43
0128]_
0129]实施例三化合物GA逆转K562/A02细胞ADM耐药的效应及强度
0130]1.药物及配制
0131](1)化合物G
0132]设12.5、6.25、3. 125 μ g/ml3个受试浓度(此浓度根据预试验结果设定)。具体配 制如下称取一定量GA，加入一定量的DMSO待其溶解后，再加入一定量的RPMI1640完全培 养液配制成高浓度溶液，各低浓度溶液则按比例稀释配制而成；
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(2)阳性对照VERVER为初始浓度2. 5mg/ml的注射用液体制剂，加入一定量的RPMI1640完全培养液 将其稀释为10 μ g/ml浓度的工作液；(3) ADM原液浓度lmg/ml，加入一定量的RPMI1640完全培养液将其稀释为10 μ g/ml浓度 的工作液。2.实验方法将K562及K562/A02细胞悬液以2X 105/ml接种于96孔板，并将其分为五个实验 组[14] =A 组(阴性对照组):cell+10 μ g/mlADM ；B 组(阳性对照组):cell+10 μ g/mlADM+10 μ g/ml VER ；C 组(低剂量组):cell+10 μ g/mlADM+3. 125 μ g/ml GA ；D 组(中剂量组):cell+10 μ g/mlADM+6. 25 μ g/ml GA ；E 组(高剂量组):cell+10 μ g/mlADM+12. 5 μ g/ml GA。加药后置于37°C，5% CO2培养箱中孵育48h，采用改良的MTT法检测药物对肿瘤 细胞生长增殖抑制的影响，方法同前。3.计算公式(1)计算IC5tl，软件及公式同前；(2)通过下列公式计算化合物GA逆转K562/A02细胞MDR的逆转倍数(Fold Resistance, FR)
权利要求
化合物3，15 二羰基赤霉酸甲酯GA在逆转肿瘤多药耐药中的用途。
2.根据权利要求1所述的化合物GA在逆转肿瘤多药耐药中的用途，其特征是在制备用 于抗肿瘤细胞多药耐药药物中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的化合物GA在逆转肿瘤多药耐药中的用途，其特征是化 合物GA与至少一种药物上可接受的载体制成的药物制剂，制剂形式为液体制剂、颗粒剂、 片剂、冲剂、胶丸、胶囊、缓释剂、滴丸剂或注射剂。
全文摘要
3，15-二羰基赤霉酸甲酯GA在逆转肿瘤多药耐药中的用途，本发明提供的化合物GA具有良好的逆转肿瘤多药耐药(Multi-drug Resistance，MDR)的活性，GA作用于K562/A02具有较高的药物敏感性并能显著逆转K562/A02对ADM的耐药；GA逆转K562/A02细胞多药耐药的效应机理是通过增加耐药细胞内化疗药的含量、阻止其外排及促进耐药细胞凋亡而实现的，但与下调耐药基因mdr-1的表达无明显相关，提示其作用机制是与抑制耐药细胞P-gp的外排泵功能及诱导耐药细胞凋亡有关，化合物GA具有较低的毒性，因此，化合物GA具有良好的临床肿瘤化疗、尤其是抗临床肿瘤耐药的应用前景。
文档编号A61K31/365GK101933920SQ20101024081
公开日2011年1月5日 申请日期2010年7月30日 优先权日2010年7月30日
发明者仇笳熙, 卿晨, 张洪彬, 张雁丽, 陈亚娟, 陈静波 申请人:昆明医学院;云南大学