专利名称：一种同时制备芍药内酯苷和芍药苷的方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，涉及化学领域化合物的分离提取方法，具体涉及植物天然生理活性物质芍药苷和芍药内酯苷的制备工艺。
背景技术：
芍药是毛茛科芍药亚科芍药属多年生草本植物，常用其干燥根入药。中国药典2010年版中收录2种芍药。一种是白芍(Radix Paeoniae Alki)，为毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall.的干燥根；一种是赤芍(Radix Paeoniae Rubra),为毛茛科植物川赤芍I^aeonia veitchii Lynch的干燥根。目前市场上已有多种含芍药的中药制剂，如脑血栓片、益脑复健胶囊、偏瘫复原片、回生再造丸、大活络丸等。主要用于治疗心脑血管疾病、神经痛、高血压、流产、痛经等症。现代化学研究表明芍药主要含有芍药苷、芍药内酯苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等成分。由于芍药苷在药材中含量高，纯品较易获得，所以对芍药苷的研究报道较多。长期以来，大多数研究认为芍药苷是芍药的主要有效成分，从而以芍药苷作为指标来测量含芍药药物，并以其含量的高低来评价药物的质量性能。近年来，现代药理研究发现芍药内酯苷具有镇痛、镇静、抗惊厥作用，对免疫系统的作用，对平滑肌的作用，抗炎作用，抗病原微生物，护肝作用，临床上主要用于抗癫痫，镇痛、戒毒，止眩晕，治疗类风湿性关节炎，治疗细菌性痢疾及肠炎，治疗病毒性肝炎，老年性疾病，抗硫酸钡絮凝和溶解粘液的作用。因此，对芍药内酯苷的药理研究越来越受到重视，芍药内酯苷的研究日益增多，例如申请号为200510045840.0的发明专利申请公开了一种从白芍(毛茛科芍药属植物芍药 Paeonia lactifora Pall)中提取分离得到的含有活性化合物芍药苷(paeoniflorin)和芍药内酯苷(albiflorin)的组合物，两组分含量之和在50%-95%之间，并且芍药苷与芍药内酯苷在该组合物中的比例为1 10 10 1，该组合物用于制备治疗各种原因引起的白细胞减少、血小板和血红球蛋白降低的病症的药物。又如申请号为20071013^10. 2的发明专利申请公开了一种含有芍药苷和芍药内酯苷药物组合物，该组合物中芍药苷与芍药内酯苷的重量之比为10 1-50 1，该明药物组合物可用于预防和治疗心脑血管疾病。但是上述研究仅仅是对芍药苷、芍药内酯苷的药理用途进行了研究，制备的是芍药苷和芍药内酯苷的组合物。由于芍药内酯苷的化学特性，制备纯度高的芍药内酯苷的方法困难，现有的研究中还没有一种简便易行的工艺方法，可以低成本、大规模制备得到高纯度的芍药内酯苷。例如申请号为200910100680. 3的发明专利申请公开了一种模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法。该方法模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷，采用白芍总苷提取物作为原料，应用模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷，模拟移动床色谱的固定相采用C18硅胶，流动相采用甲醇或乙腈与水、甲酸、异丙醇的混合溶液，混合溶液中按体积百分计甲醇或乙腈10% 50%、水50% 90%、甲酸0 1%、异丙醇0 2%，上述的各组分的总和为 100%，该方法制备的芍药内酯苷的纯度虽然可以达到90%以上，但因为该技术需要使用大量价格昂贵的反相硅胶(RP-C18)，且制备工艺流程复杂，操作工艺控制条件苛刻，导致产品成本高，不适合大规模生产。迄今为止，尚未有一种适合产业化生产同时制备高纯度芍药内酯苷和高纯度芍药苷的工艺路线披露。
发明内容
本发明的目的在于提供一种同时制备高纯度芍药苷和芍药内酯苷的方法，本发明方法操作工艺过程简单，生产周期短。运用本发明方法，可在一个工艺流程中，分别制备得到公斤级的芍药苷和芍药内酯苷，且所得到的芍药苷和芍药内酯苷纯度可达到90%以上。 采取这种制备方法提取纯化芍药苷和芍药内酯苷，显著地降低了生产成本，适宜批量制备和工业化生产。为实现本发明的目的，本发明提供一种同时制备芍药苷和芍药内酯苷的方法，包括以柱层析方法对芍药药材或芍药提取物进行分离、纯化。其中，柱层析选择大孔树脂柱层析和硅胶柱层析。当采用芍药药材作为原料进行提取，提取溶液选择水、质量百分比浓度为20-70% 的乙醇或质量百分比浓度为20-70 %的甲醇，优选用水提取。提取方法可以采用回流提取法或渗漉提取法进行所述的提取处理。采用回流提取法提取时，每次回流提取过程中药材重量与提取溶剂的体积之比为1 5-8，提取时间2-3h/次。为避免药材提取后的浓缩液经大孔吸附树脂柱时，因过浓或浑浊，而导致树脂柱堵塞。可采取以下两种预处理方法(1)药材浓缩液，按常规的酒精沉淀去杂方法，加适量高浓度乙醇(95%乙醇或无水乙醇)，使乙醇终浓度达到70-75%，静置后，取上清液，减压回收，去除乙醇，回收液再经大孔吸附树脂柱。( 药材浓缩液，加2-4倍量水，静置过夜，取上清液，再经大孔吸附树脂柱。大孔树脂柱层析选用的树脂型号可以为非极性、弱极性、中等极性的大孔树脂，如 D101、AB-8、DM130H、XAD-2、D201、HP-20、X-5、H103、DM11 或 ADS-17 型树脂。优选为非极性大孔吸附树脂，如AB-8、DlOl型树脂。大孔树脂柱层析过程中，大孔树脂柱的柱直径与柱高之比为1 10-50。大孔树脂的柱体积与芍药药材重量之比为8-25 10，即当芍药药材重量为100g，则大孔树脂柱的柱体积为80-250ml ；当芍药药材重量为100kg，则大孔树脂柱的柱体积为80-250L。大孔树脂柱层析洗脱剂可以为不同浓度的含水乙醇、含水甲醇或含水丙酮。在上样结束后，先用3-6倍量柱体积的水洗涤，除去树脂不吸附的杂质(包括多糖等)，然后再用洗脱剂洗脱，洗脱方法可采用单一浓度洗脱，或采用梯度洗脱。为避免树脂柱在洗脱过程中，因高浓度洗脱剂遇水会产生气泡，影响树脂柱洗脱效果；优先使用较低浓度的洗脱剂洗脱1-2个柱床体积，再使用较高浓度的洗脱剂洗脱。亦可采用高浓度甲醇或者高浓度乙醇对药材进行加热提取，得到的提取液中糖分较少，可不经过大孔吸附树脂柱层析步骤，而直接进行1-3次硅胶柱层析，得到符合质量要求的芍药苷与芍药内酯苷。硅胶柱层析使用的硅胶粒度对分离效果亦有较大影响，理论上，粒度越细的硅胶， 分离效果越好，但是柱压会明显升高，对设备的要求也相应增加，且硅胶的成本也会显著增加。本发明优选粒度为100-200目硅胶。硅胶柱层析的洗脱溶剂选择乙酸乙酯与甲醇的混合物，其中甲醇与乙酸乙酯的体积之比为0-15 100。亦可选择乙酸乙酯与乙醇的混合物，其中乙醇与乙酸乙酯的体积之比为0-10 100。或选择乙酸乙酯与丙酮的混合物，其中丙酮与乙酸乙酯的体积之比为 0-20 100。或选择乙酸乙酯与水的混合物，其中水与乙酸乙酯的体积之比为0-3. 5 100。硅胶柱层析使用的硅胶与待纯化样品的重量之比为5-50 1。当硅胶与待纯化样品的重量份之比较低时，会影响目标产品的分离效果，即得到的产品的纯度会有下降。提高硅胶与待纯化样品的重量份之比，能提高目标产品，尤其是芍药苷与芍药内酯苷之间的分离效果。但成本(包括柱层析的硅胶使用量，洗脱溶剂用量)均会相应增加。本发明优选硅胶与待纯化样品的重量之比为8-20 1。为进一步提高芍药苷或芍药内酯苷的纯度，可对产品再经过1-2次硅胶柱层析步骤，得到的产品纯度可达到98. 0%以上，但生产成本亦会相应增加。本发明制备芍药苷和芍药内酯苷所用的原料包括从植物、特别是药用植物芍药和川赤芍中分离提纯得到，所选取的原料可以是这些药材的根茎、根、叶、枝、茎、果实、花等任一部位或全部植株，其中优选的部位是根与根茎。制备工艺中所述的提取溶剂可以是水或任一种常用醇类、酮类及酯类溶剂、或由这些溶剂按一定比例配成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱配成的酸性或碱性溶剂，因为芍药苷与芍药内酯苷为水溶性成分，综合考虑提取成本，优选为水，其次为含水甲醇或含水乙醇。本发明制备芍药苷和芍药内酯苷使用的原料也可以直接采用芍药提取物。所涉及的芍药提取物，包括(1)直接以芍药药材经过常规溶剂提取后浓缩得到；( 芍药药材经过溶剂提取后，再采用常规的溶剂萃取方法，浓缩后得到；C3)芍药药材经过溶剂提取，再经过大孔吸附树脂吸附、洗脱，浓缩后得到。当使用直接以芍药药材提取浓缩得到的芍药提取物为原料时，则可将原料直接溶解后经过大孔树脂柱层析，再经过硅胶柱层析，得到芍药苷与芍药内酯苷。当使用芍药药材经过溶剂提取后再采用常规溶剂萃取方法浓缩后得到的芍药提取物作为原料，或使用已经经过大孔树脂柱处理后的芍药提取物(如芍药总苷)作为原料时，则可不需要再经过大孔吸附树脂柱，直接将原料溶解，硅胶拌样后，再经1-3次硅胶柱层析，分别得到芍药苷与芍药内酯苷。得到的芍药苷与芍药内酯苷的纯度均可达到 50-99. 9%。本发明具有如下优点1、应用本发明方法，可在同一个工艺流程中，制备得到芍药苷和芍药内酯苷，充分利用药材资源的综合使用价值。2、应用本发明方法，可在同一个工艺流程中，分别得到公斤级的芍药苷和公斤级的芍药内酯苷。3、应用本发明方法，得到的芍药苷和芍药内酯苷纯度高，芍药苷和芍药内酯苷含量达到50-99. 9%o4、本发明制备工艺方法简单，精制效率高，耗能低，环保，操作工艺条件容易控制， 质量可控性强。5、本发明所述的高纯度芍药苷和芍药内酯苷，可以单独用于制备药物和功能性保健食品，也可以与其它任何中西药物或食物，尤其是与某些具有活血化淤和保护心脑血管疾病的中药或是与镇静安神和抗抑郁抗焦虑的中药配伍，起到协同或者增效之目的，用于制备药物和功能性保健食品。
附图1为实施例1制备所得芍药苷的HPLC检测图谱附图2为实施例1制备所得芍药内酯苷的HPLC检测图谱附图3为实施例2制备所得芍药苷的HPLC检测图谱附图4为实施例2制备所得芍药内酯苷的HPLC检测图谱附图5为实施例7制备所得芍药内酯苷的HPLC检测图谱
具体实施例方式下面通过实施例对本发明进行进一步说明。实施例11、药材的提取干燥的芍药根150公斤，粉碎成粗粉后，装入2吨不锈钢中药提取罐中，加入质量百分比浓度为70%的乙醇溶液，加热回流提取三次，提取用的乙醇溶液的体积依次为 1200L，900L，900L，提取时间依次为 3h、2. 5h、2h。将三次提取液合并后，采用真空减压浓缩罐(无锡市华新药化设备有限公司产) 进行减压浓缩，浓缩至无醇味，制得芍药浓缩液，其中减压浓缩的温度为70°C，相对真空度为-0. 09 -0. 075MPa，芍药浓缩液的相对密度为1. 25，体积为220L。2、分离处理1)向芍药浓缩液加入95%乙醇700L，静置过夜，取上清液，浓缩至200L，加入400L 水稀释。经大孔吸附树脂柱进行分离处理。其中，大孔吸附树脂选择AB-8型大孔吸附树脂， 大孔吸附树脂柱的柱体积为200L (柱直径0. 4米，柱高1. 6米)，上样结束后，先用500L水洗涤至流出液清澈透明后，再用1000L质量百分比浓度为60%的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱流速为150L/h，每50L洗脱液收集为一流份；2)采用薄层色谱法(TLC法)检测收集的洗脱液中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况，将含有芍药苷与芍药内酯苷的洗脱液流份合并到一起，得到树脂柱洗脱液。其中，TLC法使用的薄层板为硅胶G板，展开剂为氯仿、甲醇的混合液，氯仿与甲醇的体积比为4 1，上行展开后，喷以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加热5分钟后显色；3)将含芍药苷与芍药内酯苷组分的树脂柱洗脱液置于真空减压浓缩罐(无锡市华新药化设备有限公司产)内进行减压浓缩，浓缩后水浴蒸干、粉碎，得到芍药苷和芍药内酯苷的混合物粗品7. 5公斤，其中，减压浓缩的温度为70°C，相对真空度为-0. 095 -0. 08Mpa ；3、纯化处理1)将芍药苷和芍药内酯苷的混合物粗品用20L甲醇全部溶解后加入8. 9公斤硅胶粉(100-200目)，搅拌均勻，干燥，得到混合物样品；2)将混合物样品进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯与甲醇的混合物为洗脱剂进行洗脱，其中，硅胶柱内的吸附剂硅胶的粒度为100-200目，硅胶柱的柱直径与柱高之比为 1 8;吸附剂硅胶与混合物样品的重量之比为6 1，洗脱剂为乙酸乙酯与甲醇的混合溶剂(体积比为20 1)，洗脱剂用量4000L，洗脱流速为200L/h，每50L洗脱液收集一流份；3)采用薄层色谱法(TLC法)检测洗脱液中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况，将洗脱液合并为三个部分含有芍药苷的部分、芍药苷和芍药内酯苷混合部分、含芍药内酯苷部分，分别蒸干，得芍药苷1.74公斤、芍药苷和芍药内酯苷混合物0. 37公斤、芍药内酯苷0. 86 公斤，其中，TLC法使用的薄层板为硅胶G板，展开剂为氯仿、甲醇的混合液，氯仿与甲醇的体积比为4 1，上行展开后，喷以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加热5分钟后显色。经HPLC检测芍药苷含量为88.沈％，见附图1 ；芍药内酯苷含量为92. 23%，见附图2。HPLC检测条件为仪器Water 515泵，2487检测器；色谱柱KromasilRP-C 18 ；流动相乙腈0. 磷酸水溶液(13 87)；检测波长:230nm ；流速1. Oml/min。实施例21、药材的提取新鲜的杭白芍根300公斤，切碎后，装入3吨中药提取罐中，加入质量百分比浓度为40%的乙醇，加热回流提取三次，提取用的乙醇的体积依次为2200L，1800L，1800L，提取时间依次为3h,3h,2h ；将三次提取液合并后，采用真空减压浓缩罐进行减压浓缩，浓缩至无醇味，制得芍药浓缩液，其中减压浓缩的温度为60°C，相对真空度为-0. 09 -0. 08MPa，芍药浓缩液的相对密度为1.21，体积为250L。2、分离处理1)向芍药浓缩液加入95%乙醇800L，静置过夜，取上清液，浓缩至250L，加入500L 水稀释。采用大孔吸附树脂柱进行分离处理，其中，大孔吸附树脂选择D-IOl型大孔吸附树脂，大孔吸附树脂柱的柱体积为225L (直径0. 4米，高2. O米)，上样结束后，先用700L水洗涤至流出液清澈透明后，再1200L质量百分比浓度为50%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱流速为200L/h，每50L洗脱液收集为一流份；2)采用薄层色谱法(TLC法)检测收集的洗脱液中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况，将含有芍药苷或芍药内酯苷(或两者混合)的洗脱液流份合并到一起，得到树脂柱洗脱液，其中，TLC法使用的薄层板为硅胶G板，展开剂为氯仿、甲醇的混合液，氯仿与甲醇的体积比为4 1，上行展开后，喷以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加热5分钟后显色；3)将含芍药苷和芍药内酯苷组分的树脂柱洗脱液置于真空减压浓缩罐(无锡市华新药化设备有限公司产)内进行减压浓缩，浓缩后水浴蒸干、粉碎，得到芍药苷和芍药内酯苷的混合物粗品8. 1公斤，其中，减压浓缩的温度为70°C，相对真空度为-0. 09 -0. 075MPa ；3、纯化处理1)将芍药苷和芍药内酯苷的混合物粗品用15L乙酸乙酯与甲醇混合液(其中乙酸乙酯、甲醇体积比为4 1)全部溶解后加入10公斤层析用硅胶粉Q00-300目)，搅拌均勻，干燥，得到混合物样品；2)将混合物样品进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯与乙醇混合溶剂为洗脱剂，进行梯度洗脱，其中，硅胶柱内的吸附剂硅胶的粒度为100-200目，硅胶柱的柱直径与柱高之比为 1 8;吸附剂硅胶与芍药内酯苷粗品的重量之比为12 1，洗脱剂中乙酸乙酯与乙醇的体积比为10 1，洗脱剂用量6000L，洗脱流速为每小时200L/h，每50L洗脱液收集为一流份；3)采用薄层色谱法(TLC法)检测洗脱液中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况，将洗脱液合并为两个部分含有芍药苷的部分、含芍药内酯苷部分(两者交叉部分并入芍药苷部分)，分别蒸干，得芍药苷2. 42公斤、芍药内酯苷1. 16公斤，其中，TLC法使用的薄层板为硅胶G板，展开剂为氯仿、甲醇的混合液，氯仿与甲醇的体积比为4 1，上行展开后，喷以 5%的硫酸乙醇溶液，150°C加热5分钟后显色。经HPLC检测芍药苷含量为84. 78%，见附图3 ；芍药内酯苷含量为94. 71%，见附图4。HPLC检测条件为仪器Water 515泵，2487检测器；色谱柱KromasilRP-C 18 ；流动相乙腈0. 磷酸水溶液(13 87)；检测波长:230nm ；流速1. Oml/min。实施例31、药材的提取干燥的芍药根100公斤，粉碎成粗粉后，用400L去离子水浸泡5小时后，装入1吨不锈钢渗漉罐中，用去离子水渗漉，收集渗漉液约1500L。2、分离处理1)将渗漉液采用大孔吸附树脂柱进行分离处理。其中，大孔吸附树脂选择AB-SS 大孔吸附树脂，大孔吸附树脂柱的柱体积为150L，上样结束后，先用500L水洗涤至流出液清澈透明后，再用800L质量百分比浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为100L/h，收集洗脱液，每50L洗脱液收集为一流份；2)采用薄层色谱法(TLC法)检测收集的洗脱液中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况，将含有芍药苷或芍药内酯苷(或两者混合)的洗脱液流份合并到一起，得到树脂柱洗脱液，其中，TLC法使用的薄层板为硅胶G板，展开剂为氯仿、甲醇的混合液，氯仿与甲醇的体积比为4 1，上行展开后，喷以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加热5分钟后显色；3)将含芍药苷和芍药内酯苷组分的树脂柱洗脱液置于真空减压浓缩罐内进行减压浓缩，浓缩后水浴蒸干、粉碎，得到芍药苷和芍药内酯苷的混合物粗品4. 81公斤，其中， 减压浓缩的温度为70°C，相对真空度为-0. 09 -0. 075MPa ；3、纯化处理1)将混合物粗品用适量甲醇全部溶解后加入6. 4公斤硅胶粉(100-200目)，搅拌均勻，干燥，得到混合物样品；2)将混合物样品进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯为洗脱剂，进行梯度洗脱，其中，硅胶柱内的吸附剂硅胶的粒度为100-200目，硅胶柱的柱直径与柱高之比为1 10;吸附剂硅胶与混合物粗品的重量之比为20 1，洗脱剂为乙酸乙酯，用量6000L，洗脱流速为300L/ h，每50L洗脱液收集一流份；3)采用薄层色谱法(TLC法)检测洗脱液中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况，将洗脱液合并为两个部分含有芍药苷的部分、含芍药内酯苷部分(两者无交叉)，分别蒸干，得芍药苷1. 73公斤、芍药内酯苷1. 02公斤，其中，TLC法使用的薄层板为硅胶G板，展开剂为氯仿、甲醇的混合液，氯仿与甲醇的体积比为4 1，上行展开后，喷以5%的硫酸乙醇溶液， 150°C加热5分钟后显色。经HPLC检测芍药苷含量为93. 42% ；芍药内酯苷含量为92. 77%。
实施例4以市售芍药总苷为原料(经测定芍药苷含量24. 2%、芍药内酯苷15. 9% )。1、纯化处理1)芍药提取物10公斤，以70%乙醇全部溶解后加入12. 1公斤硅胶粉(100-200 目)，搅拌均勻，蒸干，得混合物样品；2)将混合物样品进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯与水的混合物为洗脱剂，进行梯度洗脱，其中，硅胶柱内的吸附剂硅胶的粒度为100-200目，硅胶柱的柱直径与柱高之比为 1 6;吸附剂硅胶与混合物样品的重量之比为16 1，洗脱剂中乙酸乙酯与水的体积比为 100 3. 5，洗脱剂用量为5000L，洗脱流速为200L/h，每50L洗脱液收集一流份；3)采用薄层色谱法(TLC法)检测洗脱液中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况，将洗脱液合并为两个部分含有芍药苷的部分、含芍药内酯苷部分(两者交叉部分并入芍药内酯苷部分)，分别蒸干，得芍药苷2. 53公斤、芍药内酯苷1. 08公斤，其中，TLC法使用的薄层板为硅胶G板，展开剂为氯仿、甲醇的混合液，氯仿与甲醇的体积比为4 1，上行展开后，喷以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加热5分钟后显色。经HPLC检测芍药苷含量为93. 4% ；芍药内酯苷含量为82. 9%。实施例51、药材的提取干燥的毫白芍根100公斤，粉碎后，装入2吨中药提取罐中，加入质量百分比浓度为95%的乙醇，加热回流提取三次，提取用的乙醇的体积依次为800L，600L，600L，提取时间依次为3h，3h，2h ；将三次提取液合并后，采用真空减压浓缩罐进行减压浓缩，浓缩至干，制得芍药提取物18公斤，其中减压浓缩的温度为60°C，相对真空度为-0. 09 -0. 08MPa，芍药浓缩液的相对密度为1. 21，体积为250L。2、纯化处理1)向芍药提取物中加入70%乙醇25L全部溶解后，加入20公斤层析用硅胶粉 (100-200目)，搅拌均勻，干燥，得到混合物样品；2)将混合物样品进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯与水混合溶剂为洗脱剂，进行洗脱， 其中，硅胶柱内的吸附剂硅胶的粒度为100-200目，硅胶柱的柱直径与柱高之比为1 8; 吸附剂硅胶与芍药内酯苷粗品的重量之比为6 1，洗脱剂中乙酸乙酯与水的体积比为 100 2.5，洗脱剂用量25001^，洗脱流速为每小时200171!，每5(^洗脱液收集为一流份；3)采用薄层色谱法(TLC法)检测洗脱液中芍药苷和芍药内酯苷的含有情况，将洗脱液合并为两个部分含有芍药苷的部分、含芍药内酯苷部分(两者交叉部分并入芍药内酯苷部分)，分别蒸干，得芍药苷3. 61公斤、芍药内酯苷2. 16公斤，其中，TLC法使用的薄层板为硅胶G板，展开剂为氯仿、甲醇的混合液，氯仿与甲醇的体积比为4 1，上行展开后，喷以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加热5分钟后显色。经HPLC检测芍药苷含量为72. 83% ；芍药内酯苷含量为64. 59%。3、精制处理1)取上一步骤得到的芍药内酯苷粗品2公斤，以70%乙醇3. 5L完全溶解后，加入 2. 5公斤层析用硅胶粉(100-200目)，搅拌均勻，干燥，得到芍药内酯苷样品；
2)将芍药内酯苷样品进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯与丙酮混合溶剂为洗脱剂，进行洗脱，其中，硅胶柱内的吸附剂硅胶的粒度为100-200目，硅胶柱的柱直径与柱高之比为 1 10;吸附剂硅胶与芍药内酯苷粗品的重量之比为15 1，洗脱剂中乙酸乙酯与丙酮的体积比为10 1，洗脱剂用量1000L，洗脱流速为每小时200L/h，每50L洗脱液收集为一流份；3)采用薄层色谱法(TLC法)检测洗脱液中芍药内酯苷的含有情况，得到芍药内酯苷洗脱部分，蒸干，得芍药内酯苷1. 17公斤，其中，TLC法使用的薄层板为硅胶G板，展开剂为氯仿、甲醇的混合液，氯仿与甲醇的体积比为4 1，上行展开后，喷以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加热5分钟后显色。经HPLC检测芍药内酯苷含量为93. 。实施例6除了药材提取步骤采用新鲜的川赤芍枝叶、根的混合物500公斤为原料，切碎后， 装入3吨渗漉罐中，以去离子水为渗漉提取液进行渗漉提取，渗漉提取液的体积为3800L， 渗漉提取的流速为50L/h ；渗漉液合并后进行减压浓缩，浓缩至无醇味，制得芍药浓缩液， 其中减压浓缩的温度为80°C，相对真空度为-0. 095 -0. 08MPa，芍药浓缩液的相对密度为 1. 25之外，其余与实施例3相同，精制得到的芍药苷1. 96公斤、芍药内酯苷0. 67公斤。经 HPLC检测，芍药苷含量为79. 4% ；芍药内酯苷含量为73. 7%。实施例71)取实施例3得到的芍药内酯苷(纯度92.77%)1.0公斤作为试样，用少量甲醇将芍药内酯苷试样全部溶解后加入1. 2公斤硅胶粉(100-200目)，搅拌均勻，干燥，制得芍药内酯苷样品；2)将芍药内酯苷样品进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯-水的混合物为洗脱剂进行洗脱，其中，硅胶柱内的吸附剂硅胶的粒度为100-200目，硅胶柱的柱直径与柱高之比为 1 5;吸附剂硅胶与芍药内酯苷试样的重量之比为30 1，洗脱剂中乙酸乙酯与水的体积比为100 3，洗脱体积为2000L，洗脱流速为80L/h，每50L洗脱液收集一流份；3)采用薄层色谱法(TLC法)检测洗脱液中芍药内酯苷的含有情况，合并含有芍药内酯苷的洗脱液，蒸干后得芍药内酯苷0. 65公斤，其中，TLC法使用的薄层板为硅胶G板， 展开剂为氯仿、甲醇的混合液，氯仿与甲醇的体积比为4 1，上行展开后，喷以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加热5分钟后显色。经HPLC检测，芍药内酯苷含量为99. 3%，见附图5。HPLC检测条件为仪器Water 515泵，2487检测器；色谱柱KromasilRP-C 18 ；流动相乙腈0. 磷酸水溶液(13 87)；检测波长:230nm ；流速1. Oml/min。实施例8芍药内酯苷片取实施例2所得的芍药内酯苷400克，加入淀粉100克，硬脂酸镁30克，混合均勻，在压片机上压制10000粒。每粒含芍药内酯苷约40mg，患者每日服用3粒，用于治疗冠状动脉硬化性心脏病及心绞痛。实施例9芍药苷复方制剂的制备芍药苷(纯度93· 4%)克丹参酚酸B (纯度98. 1)70克人参皂苷Rgl (纯度99. 3)50克
冰片45克淀粉120克上述组分混合均勻，装入硬明胶胶囊中，制得4000粒胶囊，用于治疗冠状动脉硬化性心脏病及心绞痛。
权利要求
1.一种同时制备芍药内酯苷和芍药苷的精制方法，包括以硅胶柱层析方法对芍药药材或芍药提取物进行分离、纯化。
2.一种同时制备芍药内酯苷和芍药苷的精制方法，包括如下顺序进行的步骤1)将粉碎的芍药药材加入到提取溶液中，进行提取处理，提取液浓缩后采用大孔吸附树脂进行除杂分离处理，收集、合并含有芍药苷和芍药内酯苷的树脂柱洗脱液，得到树脂柱洗脱物；2)将树脂柱洗脱物进行1-2次硅胶柱层析纯化处理，洗脱剂洗脱，分段收集洗脱液，经薄层检测后，分别合并含有芍药苷和芍药内酯苷的硅胶柱洗脱液；3)硅胶柱洗脱液减压浓缩，分别得到芍药苷和芍药内酯苷。
3.一种同时制备芍药内酯苷和芍药苷的精制方法，包括如下顺序进行的步骤1)将粉碎的芍药药材加入到提取溶液中，进行提取处理，提取液浓缩后进行进行1-3 次硅胶柱层析纯化处理，洗脱剂洗脱，分段收集洗脱液，经薄层检测后，分别合并含有芍药苷和芍药内酯苷的硅胶柱洗脱液；2)硅胶柱洗脱液减压浓缩，分别得到芍药苷和芍药内酯苷。
4.一种同时制备芍药内酯苷和芍药苷的精制方法，包括如下顺序进行的步骤1)将白勺总苷直接进行进行1-3次硅胶柱层析纯化处理，洗脱剂洗脱，分段收集洗脱液，经薄层检测后，分别合并含有芍药苷和芍药内酯苷的硅胶柱洗脱液；2)硅胶柱洗脱液减压浓缩，分别得到芍药苷和芍药内酯苷。
5.如权利要求2所述的精制方法，其特征是步骤1)中所述的提取溶液选择水、质量百分比浓度为20-70%的乙醇或质量百分比浓度为20-70%的甲醇，优选为水提取。
6.如权利要求2所述的精制方法，其特征是步骤1)中所述的大孔吸附树脂选择D101、 AB-8、DMl30H、XAD-2、D201、HP-20、X_5、H103、DMll 或 ADS-17 型树脂。
7.如权利要求3、4所述的精制方法，其特征是步骤1)中所述的提取溶液选择质量百分比浓度为90-99. 9%的乙醇或质量百分比浓度为90-99. 9%的甲醇，优选为95%的乙醇提取。
8.如权利要求2、3、4所述的精制方法，其特征是所述的硅胶柱层析纯化处理的硅胶与待纯化样品的重量之比为5-50 1，优选为6-20 1。
9.如权利要求2、3、4所述的精制方法，其特征是所述的硅胶柱层析纯化处理的洗脱剂为乙酸乙酯与甲醇的混合物，其中，甲醇与乙酸乙酯的体积之比为0-15 100，按照单一浓度配比进行洗脱。
10.如权利要求2、3、4所述的精制方法，其特征是所述的硅胶柱层析纯化处理的洗脱剂为乙酸乙酯与乙醇的混合物，其中，乙醇与乙酸乙酯的体积之比为0-10 100，按照单一浓度配比进行洗脱。
11.如权利要求2、3、4所述的精制方法，其特征是所述的硅胶柱层析纯化处理的洗脱剂为乙酸乙酯与丙酮的混合物，其中，丙酮与乙酸乙酯的体积之比为0-20 100，按照单一浓度配比进行洗脱。
12.如权利要求2、3、4所述的精制方法，其特征是所述的硅胶柱层析纯化处理的洗脱剂为乙酸乙酯与水的混合物，其中，水与乙酸乙酯的体积之比为0-3. 5 100，按照单一浓度配比进行洗脱。
13.如权利要求1、2、3、4所述的的精制方法，其特征在于制备得到的芍药内酯苷的纯度为50-99.9%，其中优选纯度为86% -99%，进一步优选纯度为91-97%。
14.如权利要求1、2、3、4所述的的精制方法，其特征在于制备得到的芍药苷的纯度为 50-99. 9%，其中优选纯度为86% -99%,进一步优选纯度为91-97%。
全文摘要
本发明公开了一种同时制备芍药苷和芍药内酯苷的提纯方法，包括以芍药药材或芍药提取物为原料，采用柱层析方法进行芍药苷和芍药内酯苷的纯化。本发明的精制工艺简单，易于操作，纯化效率高，精制时间短，可在同一个工艺流程中低成本、低能耗得到高纯度的芍药内酯苷与芍药苷，既环保，又提高了经济效益。
文档编号A61K31/343GK102372750SQ20101024942
公开日2012年3月14日 申请日期2010年8月10日 优先权日2010年8月10日
发明者顾正兵 申请人:张作光