专利名称：沙生蜡菊花提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物，尤其涉及一种沙生蜡菊花提取物及其制备方法，本 发明还涉及该沙生蜡菊花提取物用于肥胖、高血脂、动脉粥样硬化及相关并发症的辅助治 疗中的用途，属于沙生蜡菊花提取物的医药用途领域。
背景技术：
高脂血症是指血浆中的脂类物质尤其是总胆固醇、甘油三酯的浓度超出正常的范 围所引起的疾病。血脂升高主要是由于饮食不当、脏气衰减和肝肾阴虚所造成的脂肪、胆 固醇等物质在体内蓄积过多所致，可导致脂肪肝、肝硬化、胆石症、周围血管疾病以及高尿 酸血症。动脉粥样硬化是指动脉内膜脂质沉积、单核细胞和淋巴细胞浸润以及低密度脂蛋 白被氧化、血管平滑肌细胞的迁移和增生等，形成泡沫细胞和纤维斑块，进而引起血管壁硬 化、官腔狭窄和血栓的形成。主要是由于环境因素与遗传因素相互作用的多因素、多基因表 达异常所致。动脉粥样硬化是心及脑血管疾病的主要病理学基础，可导致冠心病、脑溢血、 心肌梗塞等一系列心脑血管系统疾病。迄今为止，有关中药沙生蜡菊花及其总提物的降血脂及抗动脉粥样硬化作用未见 文献和史料记载。
发明内容
本发明目的之一是提供一种中药沙生蜡菊花提取物的一种新的医药用途。本发明目的之二是提供一种制备上述中药沙生蜡菊花提取物的方法；本发明上述目的是通过以下技术方案来实现的本发明通过大量的动物试验发现沙生蜡菊花提取物能有效降低动物肝细胞中的 中性脂肪含量且呈一定的剂量依赖关系；沙生蜡菊花还能够显著降低高血脂大鼠血中总胆 固醇及甘油三酯的含量，具有降低血脂的功效。口服沙生蜡菊总提物与空白组比较，在不影 响大鼠进食量的同时，能够降低大鼠的体重增长率；沙生蜡菊花总提物及各部分能够显著 性降低高血脂家兔血中Tc、TG的含量，证明沙生蜡菊花总提物及各馏分具有降血脂功效。 此外，沙生蜡菊花总提取物及各部分给药组动物主动脉粥样斑块面积百分比显著小于模型 组动物，证明沙生蜡菊花具有抗动脉粥样硬化作用。上述药效学试验结果表明沙生蜡菊花提取物能用于肥胖、高血脂、动脉粥样硬化 及相关并发症的辅助治疗。本发明所述的“沙生蜡菊花提取物”可以是将沙生蜡菊花用醇类物质进行加热回 流后所提取得到醇提取物；其中，所述的醇类物质优选是甲醇或乙醇，更优选的，所述的甲 醇是浓度为100%的甲醇，所述的乙醇优选是体积百分比为30-75%的乙醇；本发明所述的“沙生蜡菊花提取物”也可以是将上述醇提取物进行如下处理后所 得到的提取物将醇提取物经有机萃取物质萃取脱脂分别得到有机萃取部分和水层部分； 其中，所述的有机萃取物质可以是乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷等有机萃取物质；本发明所述的“沙生蜡菊花提取物”还可以是将所得到水层部分进行如下处理所 得到的提取物水层部分经大孔吸附树脂吸附，分别以水和醇类物质洗脱，收集醇洗脱物即 得；其中，所述的大孔吸附树脂优选为HP-20大孔吸附树脂；所述的醇类物质优选为乙醇或 甲醇，更优选为体积百分比为90%乙醇或100%甲醇。本发明所述的“沙生蜡菊花提取物”可以加入制备不同剂型时所需的各种辅料和 药学上可接受的赋形剂或载体后，以常规的中药制剂方法制备成任何一种适宜的临床制剂，例如可以是注射剂(粉针、冻干粉针、水针、输液等)、片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软 胶囊或滴丸等；其中，所述的辅料可以是抗氧络合剂、填充剂、骨架材料等；所述的药学上 可接受的载体是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋 糖酐、氯化钠、葡萄糖酸钙或磷酸钙中的一种或几种。
具体实施例方式下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术 人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式 进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。实施例1沙生蜡菊花提取物的制备将沙生蜡菊干燥花用75%乙醇加热回流提取得到乙醇提取物(即沙生蜡菊花 总提取物)，将乙醇提取物经乙酸乙酯萃取脱脂后，分别得到乙酸乙酯萃取物部分和水层部 分；水层部分经HP-20大孔吸附树脂，分别以水和体积分数为90%乙醇洗脱，得到90%乙醇 洗脱物。实施例2沙生蜡菊花提取物的制备将沙生蜡菊干燥花用30%乙醇加热回流提取得到乙醇提取物(即沙生蜡菊花 总提取物)，将乙醇提取物经乙酸乙酯萃取脱脂后，分别得到乙酸乙酯萃取物部分和水层部 分；水层部分经HP-20大孔吸附树脂，分别以水和体积分数为90%乙醇洗脱，得到90%乙醇 洗脱物。实施例3沙生蜡菊花提取物的制备将沙生蜡菊干燥花用50%乙醇加热回流提取得到乙醇提取物(即沙生蜡菊花 总提取物)，将乙醇提取物经乙酸乙酯萃取脱脂后，分别得到乙酸乙酯萃取物部分和水层部 分；水层部分经HP-20大孔吸附树脂，分别以水和体积分数为90%乙醇洗脱，得到90%乙醇 洗脱物。实施例4沙生蜡菊花提取物的制备将沙生蜡菊干燥花用100%甲醇加热回流提取得到甲醇提取物(即沙生蜡菊花 总提取物)，将甲醇提取物经氯仿萃取脱脂后，分别得到氯仿萃取物部分和水层部分；水层 部分经HP-20大孔吸附树脂，分别以水和体积分数为100%甲醇洗脱，得到100%甲醇洗脱 物。实施例5沙生蜡菊花提取物的制备将沙生蜡菊干燥花用45%乙醇加热回流提取得到乙醇提取物(即沙生蜡菊花 总提取物)，将乙醇提取物经二氯甲烷萃取脱脂后，分别得到二氯甲烷萃取物部分和水层部 分；水层部分经HP-20大孔吸附树脂，分别以水和体积分数为90%乙醇洗脱，得到90%乙醇 洗脱物。试验例1、沙生蜡菊花各提取物对小鼠肝脏中肝细胞中脂肪含量的影响试验一、试验材料1、供试样品实施例1-5所制备的沙生蜡菊花总提取物；乙酸乙酯萃取物；醇洗脱 物和水层部分；
2、其它试验材料ddy系小鼠(35 40g)，雌雄不限。pH计(PHS-2ST，数显酸度 计)、离心机、二氧化碳细胞培养箱(NuAir, USA), 48孔培养板(Nunc, Denmark)，超声仪 (MISONIX, Microson Ultrasonic cell disruptor)，酶标仪(Tecan，Austria)，显微镜 (Leica, Germany)，流式细胞仪(BectonDickinson，USA)。戊巴比妥钠，HEPES ((2- [4- (2-hyd roxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid)，轻乙基哌嗪乙石黄酸)，EGTA (ethylene glycol bis ( β -aminoethyleaster) -N, N, N'，N' -tetraacetic acid，乙二醇双(2_ 氨 基乙醚)四乙酸、胶原酶 IV(sigma-Aldrich)，FCS(胎牛血清，life technologies), Williams' E培养基(美国sigma公司)，甘油酸酯，盘尼西林(life technologies)。二、试验方法将ddy系雄性小鼠(35 40g)，用戊巴比妥钠(50mg/ml)腹腔注射麻醉(0. Iml/ 只)，经翻正反射消失证明麻醉后，开腹，利用Seglen、Oka的胶原酶灌流法。门静脉插管 后，在 37°C恒温条件下用肝脏灌流液(pH 7. 2，137mMNaCl ；5. 4mM KCl ；0. 34mM Na2HPO4 ； 0. 44mM KH2PO4 ；4. 2mM NaHCO3 ； IOmMHEPES ；0. 5mM EGTA ；5. 6mM glucose ；56mM phenol red) 灌流，流速为5ml/min，在2min内灌流使肝脏失血，然后用胶原酶溶液(pH 7. 5,0. 5mg/ml ； 137mM NaCl ；5. 4mM KCl ；0. 34mM Na2HPO4 ；0. 44mM KH2PO4 ；4. 2mM NaHCO3 ； IOmM HEPES ；0. 5mM CaCl2 ；5. 6mM glucose ；56mM phenol red)交换肝脏灌流液，当肝脏开始消化的时候停止灌 流，取出肝脏，得肝细胞置于含有10% FCS (胎牛血清)，100U/ml的青霉素和100 μ g/ml的 链霉素的Williams' E的培养基中，纱布滤过。将滤液中的肝细胞离心(700rpm，lmin, 4°C )，弃去上清液后，用IOml的培养液将 细胞清洗，离心，得到的细胞置于IOml细胞培养液中培养，细胞的存活是通过台盼蓝活细 胞计数实验进行确认的，将肝细胞液调成细胞密度为6. 67X 105cells/ml，然后将细胞接种 于48孔板中，每孔150μ l/well，37°C以5% CO2培养箱中培养4小时，然后将不同浓度样 品的DMSO溶液在每孔添加50 μ 1，DMSO的浓度为0. 5% (ν/ν)。将加入待测样品的培养板 置于5% CO2的培养箱中37°C培养20小时，除去上清液，每孔再加入100 μ 1的蒸馏水，超 声，使细胞破碎，然后再在每孔中加入蒸馏水100μ 1(计200μ Ι/well)，所得细胞破碎液中 的脂肪浓度是根据标准物甘油酸酯来定量的，给药组的数值是用相对于对照组脂肪浓度的 百分比来表示的，利用Durmette法比较分析，ρ < 0. 05为显著性差异。三、试验结果表1沙生蜡菊花各部分提取物对小鼠肝脏中甘油三酯(TG)含量的影响 (X 士S.E.M,n=4)
权利要求
沙生蜡菊花提取物用于制备辅助治疗肥胖、肥胖并发症、高血脂、高血脂并发症、动脉粥样硬化或动脉粥样硬化并发症的药物中的用途。
2.按照权利要求1所述的用途，其特征在于，所述沙生蜡菊花提取物的制备方法包括 沙生蜡菊花用醇类物质进行加热回流后所提取得到醇提取。
3.按照权利要求2所述的用途，其特征在于所述醇类物质是甲醇或乙醇。
4.按照权利要求3所述的用途，其特征在于所述的甲醇是浓度为100%的甲醇，所述 的乙醇是体积百分比为30-75%的乙醇。
5.按照权利要求2所述的用途，其特征在于还包括将醇提取物经有机萃取物质萃取 脱脂后分别得到有机物萃取部分和水层部分。
6.按照权利要求5所述的用途，其特征在于所述的有机萃取物质包括乙酸乙酯、氯仿 或二氯甲烷。
7.按照权利要求5所述的用途，其特征在于，还包括将所得到水层部分进行如下处理 水层部分经大孔吸附树脂吸附，分别以水和醇类物质洗脱，收集醇洗脱物即得。
8.按照权利要求7所述的用途，其特征在于所述的大孔吸附树脂为HP-20大孔吸附 树脂；所述的醇类物质包括乙醇或甲醇。
9.按照权利要求8所述的用途，其特征在于所述乙醇为体积百分比为90%乙醇；所 述甲醇为100%甲醇。
10.按照权利要求1-9任何一种所述的用途，其特征在于所述沙生蜡菊花提取物按照 中药制剂方法制备成临床上可接受的口服制剂或注射制剂。
全文摘要
本发明公开了沙生蜡菊花提取物及其制备方法和用途。本发明通过大量的动物试验发现沙生蜡菊花提取物能有效降低动物肝细胞中的中性脂肪含量，还能够显著降低高血脂大鼠血中总胆固醇及甘油三酯的含量，具有降低血脂的功效。此外，沙生蜡菊花还具有抗动脉粥样硬化作用。药效学试验表明，沙生蜡菊花提取物能用于肥胖、高血脂、动脉粥样硬化及相关并发症的辅助治疗。本发明所述沙生蜡菊花提取物可以是将沙生蜡菊花用醇类物质进行加热回流后所提取得到醇提取物，加入制备不同剂型时所需的各种辅料和药学上可接受的载体后，可将其按常规的中药制剂方法制备成任何一种适宜的临床制剂。
文档编号A61P3/04GK101972291SQ201010297578
公开日2011年2月16日 申请日期2010年9月30日 优先权日2010年9月30日
发明者侯云龙, 吴立军, 朱久新, 杨宝峰, 王立波 申请人:哈尔滨医科大学