专利名称：一组具有抗氧化活性的复方提取物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一组复方提取物，特别是涉及该组提取物的抗氧化活性。
背景技术：
自由基是机体的代谢产物，研究发现很多疾病的发生发展都与机体自由基过量有 关。自由基的产生可导致脂质、蛋白质和核酸过氧化，使细胞膜结构受损。在脑中风发生后， 尤其是脑缺血再灌注后，自由基大量产生，对神经元造成严重损伤，是脑水肿形成和细胞凋 亡的重要原因。抗氧化剂通过清除过量的自由基防止脂质过氧化，可对脑神经细胞起到保 护作用。少数民族药物是我国传统药物的重要组成部分，其资源丰富，特色鲜明，理论独 到，凝结了数千年来少数民族劳动人民与大自然搏斗、与疾病抗争的无数宝贵经验，却未被 外界认识，尚处于原始、落后的状态，亟待发掘、保护。从中发现具有强抗氧化活性和高安全 性的天然抗氧化剂用于中风治疗，应具有重要意义。白脉散为蒙药复方，由诃子、胡黄连、冷蒿等19味药材组成。该方调节赫依、粘、热 交争，固三根，促平衡，具有活血化瘀、镇静安神、纠正昏迷、治心神不安、疏通白脉、黑脉，醒 脑续命之效，可治脑患，愈白脉之海，在临床上用于脑中风的治疗，是具有开发价值的民族 药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一组白脉散复方提取物。为描述该组提取物的特征，本发明提供了提取物的制备方法，但并不对制备方法 本身进行保护。本发明的目的在于所提供的提取物具有抗氧化活性，具有广泛的应用前景，尤其 是在中风的治疗中可能具有潜在的临床价值。本发明的提取物的制备方法按白脉散复方配比称取药材(按重量份)诃子为30 60重量份，胡黄连为20 50重量份，丁香、肉豆蔻、木香、拳参、北沙参均为10 30重量份，冷蒿、檀香、天竺黄、白云 香、黑云香、干兔心、沉香、旋复花、木棉花、人工牛黄、制马钱子、制草乌均为2 20重量份。采用水提醇沉法得到复方提取液加水煎煮3次，合并三次提取液，离心去沉淀。 上清液加乙醇至终浓度为50% 90%，减压抽滤，去除多糖等大分子极性部位。采用有机溶剂萃取法进行初步分离滤液依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，浓缩干燥 得乙酸乙酯组分、正丁醇组分。采用Isolera 4全自动快速制备色谱仪对乙酸乙酯、正丁醇提取部位进行划段分 离色谱柱为SNAP 100g色谱柱(39mmX 157mm,瑞典Biotage公司)，填料为正相柱层析硅 胶200 300目，洗脱前先以2个柱体积的弱极性流动相平衡柱体。各组分以少量硅胶拌样 后装于上样柱内，上样量与硅胶之比为1 10 1 15。洗脱采用线性梯度，流速40ml/min。洗脱程序如表1和表2所示。表1乙酸乙酯组分梯度洗脱程序表
Time (mi^)石油醚(％)ZMlM(%) 甲醇(％)tKW
090“10 —
156040570100 8560 1000
_110_表2正丁醇组分梯度洗脱程序表
Time(min)二氯甲烷(%)甲醇(%)水(%)095545752560505067. 501000750100分别收集乙酸乙酯组分34min 69min、93min 105min的洗脱液，正丁醇组分 35min 57min、67min 73min的洗脱液。依照流出顺序，在相应时间内，每27ml收集为1 个流份，根据峰型与流份溶质浓度的不同对相邻流份进行合并，2 20个流份可合并为1个 提取物，浓缩干燥后，既得到一组复方提取物。本发明所提供的，是一组具有抗氧化活性的提取物，该组提取物可作为抗氧化剂 用于制成多种药物组合物。该药物组合物是由如上所述的方法制得的治疗上有效量的任意 一个或几个提取物和药学上可接受的赋形剂或载体组成。将本发明的上述复方提取物组的 任意一个或几个组分，加入制备不同剂型时所需的各种辅料或药学上可接受的赋形剂或载 体后，以常规的药物制剂方法可制备成任何一种适宜的临床制剂，例如可以是注射剂(粉 针、冻干粉针、水针、输液等)、片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊、滴丸等。其中，所述的 辅料可以是抗氧络合剂、填充剂、骨架材料等；所述的药学上可接受的载体是木糖醇、甘露 醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化钠、葡萄糖酸钙或 磷酸钙中的一种或几种。本组复方提取物来自于对复方全部提取物的整体筛选，并将DPPH法转化为高通 量筛选模型作为筛选方法。复方全组分对DPPH的清除活性分布如附图所示，将清除率大于 50%的提取物作为具有较强抗氧化活性的提取物。体外筛选表明，本发明制得的提取物组 具有较强的抗氧化活性，尤其对自由基有较好的清除作用，其中部分组分清除自由基的能 力远高于自由基清除剂依达拉奉。由于自由基过量生成是多种疾病发生发展的重要原因， 因此该组提取物具有广泛的应用前景；由于该组提取物来自于治疗脑中风的蒙药复方，其 在脑中风及其后遗症的治疗中可能更具有潜在临床价值。
附图为白脉散复方全组分对DPPH的清除活性的分布图。横坐标为复方提取物样 品编号，纵坐标为样品对自由基DPPH的清除率，5 18号样品的活性高于依达拉奉，具有强
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40
100 0 0 100
4抗氧化活性。
具体实施例方式实施例1本发明提取物的制备称取诃子30g 60g，胡黄连20g 50g，丁香、肉豆蔻、木香、拳参、北沙参均为 IOg 30g，冷蒿、檀香、天竺黄、白云香、黑云香、干兔心、沉香、旋复花、木棉花、人工牛黄、 制马钱子、制草乌均为2g 20g。混合均勻并稍粉碎后，加水煎煮提取3次，每次1. 5 2 小时，加水2 4体积份，合并三次提取液，离心去沉淀。上清液加无水乙醇3倍量，充分搅 拌，减压抽滤，滤液部分旋转蒸发至无醇味。乙酸乙酯萃取5次，药液与乙酸乙酯体积比为 1 1，合并萃取液，浓缩干燥得乙酸乙酯组分。正丁醇萃取6次，药液与正于醇体积比为 1 1。合并萃取液，浓缩干燥得正丁醇组分。采用Isolera 4全自动快速制备色谱仪，分离乙酸乙酯组分、正丁醇组分。色谱柱 为SNAPlOOg色谱柱(39mmX 157mm,瑞典Biotage公司)，填料为正相柱层析硅胶200 300 目，洗脱前先以2个柱体积的弱极性流动相平衡柱体。各组分以少量硅胶拌样后装于上样 柱内，上样量为Sg。洗脱采用线性梯度，流速40ml/min。洗脱程序如表1和表2所示。依 照流出顺序，在相应时间内，每27ml收集为1个流份。表1乙酸乙酯组分梯度洗脱程序表
权利要求
一组白脉散复方提取物，其特征须由其制备方法描述步骤1按白脉散复方配比称取药材；步骤2采用水提醇沉法得到复方提取液；步骤3依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到两个提取部位；步骤4采用Isolera 4全自动快速制备色谱仪对乙酸乙酯、正丁醇提取部位进行划段分离，得到特定时间段的洗脱液，制得白脉散复方提取物组。
2.权利要求1的提取物，其特征在于步骤1中所述白脉散复方配比为诃子30 60重 量份，胡黄连20 50重量份，丁香、肉豆蔻、木香、拳参、北沙参均为10 30重量份，冷蒿、 檀香、天竺黄、白云香、黑云香、干兔心、沉香、旋复花、木棉花、人工牛黄、制马钱子、制草乌 均为2 20重量份；步骤2中所述乙醇终浓度为50% 90%。
3.权利要求1的提取物，其特征在于步骤4中使用的色谱柱为SNAPIOOg色谱柱 (39mmX 157mm,瑞典Biotage公司)，填料为正相柱层析硅胶200 300目，上样量与硅胶之 比为1 10 1 15，流速为40ml/min，乙酸乙酯部位划段分离洗脱程序如下
4.权利要求3的提取物，其特征在于可以是权利要求3所述收集时间段内任意时间收 集的任意一段提取物或几段提取物的组合物。
5.药物组合物，其特征在于，所述组合物包含至少一种治疗有效量的权利要求1 4中 任一项所述的提取物与可接受的辅料、赋形剂和添加剂。
6.药物组合物，其特征在于，所述组合物包含至少一种权利要求1 4中任一项所述的 提取物作为活性物质与另一种治疗上相关活性剂的组合。
7.权利要求1 6所述提取物及药物组合物的抗氧化活性。
全文摘要
本发明公开了一组利用快速制备技术从白脉散复方中得到的提取物及其抗氧化活性。该组提取物具有较强的抗氧化活性，尤其对自由基有较好的清除作用，其中部分组分清除自由基的能力远高于自由基清除剂依达拉奉。由于自由基过量生成是多种疾病发生发展的重要原因，因此该组提取物具有潜在的应用价值。
文档编号A61P9/10GK101979021SQ20101053330
公开日2011年2月23日 申请日期2010年11月5日 优先权日2010年11月5日
发明者刘庆山, 张梓倩, 段云霞, 赵多明 申请人:刘庆山