专利名称：一种枸杞叶黄酮的提取制备方法
技术领域：
本发明涉及一种黄酮的提取制备方法，尤其涉及一种枸杞叶黄酮的提取制备方法。
背景技术：
枸杞叶是茄科(Solanaceae)枸杞属(Lycium Linn.)植物宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)的叶，俗称天精草，呈淡绿色，无毒，是一味重要的中药材，具有补虚益精、清 热止渴、养肝明目等功效。现代科学研究证明枸杞叶具有抗衰老、抗炎、保护心脑血管、抗 菌及抗病毒等作用，同时也是一种滋补强壮剂，具有很高的药用和食用价值，广泛应用于医 药、化工、食品及化妆品等行业。枸杞叶黄酮是一类天然黄酮类化合物，其含有丰富的黄酮类、黄酮醇类、黄酮醇苷 类、黄烷醇类等抗心脑血管疾病以及抗癌、抗氧化物质，因此枸杞叶黄酮具有较高的保护心 脑血管、抗癌、抗氧化等多种生物活性。目前，对黄酮的提取制备通常采用浸渍法、回流提取法、超声提取法和微波提取 法。其中浸渍法是一种传统的天然产物提取方法，该法是指在室温条件下将粉碎好的原料 放入盛有适当溶剂的密闭容器中浸泡以溶出其中化学成分的方法。该方法操作过程相当费 时，提取效率差，少则几小时，多则需数周时间。同时要达到浸渍提取完全需要消耗大量溶 剂，也可导致所提取化合物和原料的潜在丢失，如某些化合物如果在室温下溶解性很差则 不能被有效提取。另外，浸提液易霉变，需加入适量的防腐剂如甲苯、甲醛或氯仿等。回流提取法是用易挥发的有机溶剂加热回流提取植物成分的方法。该法主要使 用低沸点的有机溶剂如乙醇、氯仿等加热提取天然药物中有效成分。为减少溶剂的挥发损 失，保持与药材持久的接触，通过加热浸出液，使溶剂受热蒸发，经冷凝后变为液体流回浸 出器，如此反复至浸出完全的一种热提取方法。该方法操作较麻烦、提取时间长、溶剂消耗 量较大，并且长时间的加热回流会破坏热不稳定的化合物。超声提取法是采用超声波辅助提取溶剂进行提取的方法。主要利用超声波的空化 作用，破坏植物药材细胞，使溶剂易于渗入细胞内，同时由于超声波的强烈振动能，加强了 胞内物质的释放、扩散和溶解，加速有效成分的浸出。该方法提取温度难以控制，对容器壁 的厚薄及放置位置要求较高，目前尚为实验室小规模使用，大规模生产还有待于解决设备 问题。微波提取法是一种主要利用微波强烈的热效应对天然药物中有效成分进行提取 的方法。当被提取物和溶剂共处于快速振动的微波电磁场中时，目标组分的分子在高频电 磁波的作用下，高速振动产生热能，使分子本身获得巨大能量而得以挣脱周围环境的束缚， 实现分子自内向外的迁移，从而达到提取目的。该方法对仪器设备要求高，运行成本高，且 应用范围较窄。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种以枸杞叶为原料、成本低廉、提取率高的 枸杞叶黄酮的提取制备方法。为解决上述问题，本发明所述的一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步 骤(1)将枸杞叶经人工挑拣除杂后，室内阴干，得到枸杞叶干样；(2)将所述枸杞叶干样经粉碎后，过20 320目筛，得到枸杞粉；(3)将所述枸杞粉与质量浓度为5 100%的乙醇按1 5 100的料液体积比 浸提0. 5 360h后，得到浸提液；(4)所述浸提液经胶体磨研磨1 20次后，得到胶体状的枸杞叶浸提溶液；(5)将所述胶体状的枸杞叶浸提溶液在1 200Mpa的压力下进行均质后，经离心 分离，得到上清液和滤渣；(6)将所述上清液以0. 1 10t/h的流速经孔径为0. 01 10 μ m的陶瓷膜在温度 为15 55°C、压力为0. 005 3Mpa的条件下除杂，得到滤液；(7)所述滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用2 50倍床层体积、质量浓度为20% 100%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄 酮，得到含有枸杞叶黄酮的洗脱液；(8)将所述含有枸杞叶黄酮的洗脱液经真空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液； 该枸杞叶黄酮浓缩液经干燥后，即得枸杞叶黄酮粉末。用下述制备方法代替上述步骤(3)制备浸提液将所述枸杞粉与质量浓度为5 100%的乙醇按1 5 100的料液体积比在10 100°C温度下进行水浴加热，经回流提取 0. 5 72h后过滤即得。用下述制备方法代替上述步骤(3)制备浸提液将所述枸杞粉与质量浓度为5 100%的乙醇按1 5 100的料液体积比在10 100°C温度下进行超声提取，0. 1 48h 后过滤即得。所述步骤(4)中的胶体磨的转子转速为2000r/min 20000r/min。所述步骤(5)中的离心速度为2000 20000r/min，离心时间为1 60min。所述步骤⑶中的真空减压浓缩的条件是真空度为0. 03 0. 07MPa，温度为20 65 "C。本发明与现有技术相比具有以下优点1、由于本发明将胶体磨磨合技术、高压均质技术及膜分离技术联合应用，因此，不 仅有效地缩短了提取时间，减少了工艺过程中的提取溶剂消耗量及能耗，而且所得枸杞叶 黄酮性质稳定，含量高，抗心脑血管疾病、抗癌、抗氧化等生物活性高。2、由于本发明采用陶瓷膜分离，因此，不但有效去除提取液中的鞣质、粘液质、细 菌等杂质，而且有效地降低了设备投资，降低了能耗，同时也使工艺简单化。3、由于本发明采用资源量丰富的枸杞叶为原料，因此，有效地降低了生产成本。4、由于本发明使用胶体磨和高压均质机，因此，不但保证了枸杞叶有效成分的均 一、性质稳定，且所得黄酮抗心脑血管疾病、抗癌及抗氧化的活性高，而且可以显著地缩短 提取时间和提高提取率。
5、本发明所得产品经紫外分光光度计和高效液相色谱检测，枸杞叶总黄酮含量 ^ 60%，黄酮醇苷含量> 30%，芦丁含量> 20%，可广泛应用于食品、医疗、医药保健等行 业。6、本发明仪器设备操作简便，技术参数易于控制，适应范围广，可用于工业化大规 模生产，形成生物产品产业链。
具体实施例方式实施例1 一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将5kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过20目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为80%的乙醇按1 5的料液体积比浸提10h，得到浸提液。(4)浸提液经转子转速为20000r/min的胶体磨研磨1次后，得到胶体状的枸杞叶
浸提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在IOMpa的压力下进行均质， IOmin后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以2000r/min的离心速度对均一的 枸杞叶浸提溶液离心分离5min，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以1. 5t/h的流速经孔径为0. 1 μ m的陶瓷膜在温度为15°C、压力为 0. 005Mpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用2倍床层 体积、质量浓度为30%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞叶 黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 03Mpa、温度为30°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在50°C温度下干燥后，即得 1.05kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为65. 6%，黄酮醇苷含量为32. 4%，芦丁含量为24. 3%。实施例2 —种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将50kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过200目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为45%的乙醇按1 100的料液体积比浸提240h，得到 浸提液。(4)浸提液经转子转速为lOOOOr/min的胶体磨研磨10次后，得到胶体状的枸杞叶
浸提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在5Mpa的压力下进行均质， 300min后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以7200r/min的离心速度对均一 的枸杞叶浸提溶液离心分离30min，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以5. 5t/h的流速经孔径为0. 1 μ m的陶瓷膜在温度为35°C、压力为 3Mpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。
(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用20倍床 层体积、质量浓度为95%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞 叶黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 06Mpa、温度为45°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在30°C温度下干燥后，即得 9. 87kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为68. 6%，黄酮醇苷含量为35. 4%，芦丁含量为23. 7%。实施例3 —种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将20kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过100目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为95%的乙醇按1 10的料液体积比浸提24h，得到浸 提液。(4)浸提液经转子转速为8000r/min的胶体磨研磨5次后，得到胶体状的枸杞叶浸 提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在42Mpa的压力下进行均质， 150min后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以3600r/min的离心速度对均一 的枸杞叶浸提溶液离心分离20min，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以0. 5t/h的流速经孔径为0. 2μπι的陶瓷膜在温度为45°C、压力为 2Mpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用40倍床 层体积、质量浓度为80%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞 叶黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 04Mpa、温度为55°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在60°C温度下干燥后，即得 4. 16kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为68. 2%，黄酮醇苷含量为36. 4%，芦丁含量为22. 1%。实施例4 一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将IOOkg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过320目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为5%的乙醇按1 100的料液体积比浸提0. 5h，得到浸 提液。(4)浸提液经转子转速为2000r/min的胶体磨研磨20次后，得到胶体状的枸杞叶
浸提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在IMpa的压力下进行均质， Imin后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以20000r/min的离心速度对均一的 枸杞叶浸提溶液离心分离lmin，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以10t/h的流速经孔径为0. 01 μ m的陶瓷膜在温度为55°C、压力为3Mpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用50倍床 层体积、质量浓度为20%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞 叶黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 07Mpa、温度为20°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在20°C温度下干燥后，即得 21. 24kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为65. 3 %，黄酮醇苷含量为32.1%，芦丁含量为20. 8 %。实施例5 —种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将40kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过40目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为100%的乙醇按1 6的料液体积比浸提360h，得到浸 提液。(4)浸提液经转子转速为lOOOOr/min的胶体磨研磨3次后，得到胶体状的枸杞叶
浸提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在200Mpa的压力下进行均 质，300min后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以3600r/min的离心速度对均 一的枸杞叶浸提溶液离心分离60min，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以0. lt/h的流速经孔径为ΙΟμπι的陶瓷膜在温度为30°C、压力为 0. IMpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用5倍床层 体积、质量浓度为100%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞叶 黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 06Mpa、温度为65°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在65°C温度下干燥后，即得 8. 03kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为67. 4%，黄酮醇苷含量为33. 5%，芦丁含量为21. 3%。实施例6 —种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将60kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过40目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为80%的乙醇按1 50的料液体积比在85°C温度下进 行水浴加热，经回流提取4h后过滤即得。(4)浸提液经转子转速为lOOOOr/min的胶体磨研磨10次后，得到胶体状的枸杞叶
浸提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在IOOMpa的压力下进行均 质，4h后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以4500r/min的离心速度对均一的 枸杞叶浸提溶液离心分离30min，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。
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(6)将上清液以5t/h的流速经孔径为0. 5μπι的陶瓷膜在温度为40°C、压力为 0. IMpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用10倍床 层体积、质量浓度为80%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞 叶黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 05Mpa、温度为65°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在50°C温度下干燥后，即得 11. 64kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为62. 2%，黄酮醇苷含量为31. 8%，芦丁含量为20. 7%。实施例7 —种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将20kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过20目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为5%的乙醇按1 5的料液体积比在10°C温度下进行 水浴加热，经回流提取0. 5h后过滤即得。(4)浸提液经转子转速为2000r/min的胶体磨研磨1次后，得到胶体状的枸杞叶浸 提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在IMpa的压力下进行均质， Ih后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以2000r/min的离心速度对均一的枸 杞叶浸提溶液离心分离lmin，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以0. lt/h的流速经孔径为0. 01 μ m的陶瓷膜在温度为15°C、压力为 0. 005Mpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用2倍床层 体积、质量浓度为20%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞叶 黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 03Mpa、温度为20°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在40°C温度下干燥后，即得 3. 86kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为61. 2%，黄酮醇苷含量为30. 3%，芦丁含量为19. 8%。实施例8 一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将40kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过320目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为100%的乙醇按1 100的料液体积比在100°C温度下 进行水浴加热，经回流提取72h后过滤即得。(4)浸提液经转子转速为20000r/min的胶体磨研磨20次后，得到胶体状的枸杞叶
浸提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在200Mpa的压力下进行均 质，5h后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以20000r/min的离心速度对均一的枸杞叶浸提溶液离心分离60min，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以10t/h的流速经孔径为ΙΟμπι的陶瓷膜在温度为55°C、压力为 3Mpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用50倍床 层体积、质量浓度为100%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞 叶黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 07Mpa、温度为65°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在50°C温度下干燥后，即得 4. 04kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为63. 1%，黄酮醇苷含量为32. 7%，芦丁含量为20. 8%。实施例9 一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将50kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过40目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为60%的乙醇按1 50的料液体积比在80°C温度下进 行水浴加热，经回流提取IOh后过滤即得。(4)浸提液经转子转速为lOOOOr/min的胶体磨研磨5次后，得到胶体状的枸杞叶
浸提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在IOOMpa的压力下进行均 质，3h后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以5000r/min的离心速度对均一的 枸杞叶浸提溶液离心分离30min，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以2t/h的流速经孔径为5μπι的陶瓷膜在温度为45°C、压力为 0. 5Mpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用5倍床层 体积、质量浓度为50%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞叶 黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 05Mpa、温度为60°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在55°C温度下干燥后，即得 10. 12kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为64. 8%，黄酮醇苷含量为32. 4%，芦丁含量为22. 6%。实施例10 —种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将50kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过30目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为60%的乙醇按1 50的料液体积比在55°C温度下以 360W功率进行超声提取，Ih后过滤即得。(4)浸提液经转子转速为15000r/min的胶体磨研磨5次后，得到胶体状的枸杞叶
浸提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在120Mpa的压力下进行均质，5h后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以5000r/min的离心速度对均一的 枸杞叶浸提溶液离心分离40min，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以8T/h的流速经孔径为0. 2μπι的陶瓷膜在温度为50°C、压力为 0. 3Mpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用20倍床 层体积、质量浓度为30%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞 叶黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 04Mpa、温度为60°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在55°C温度下干燥后，即得 10. 26kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为67. 1 %，黄酮醇苷含量为34. 4 %，芦丁含量为21.5%。实施例11 一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将20kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过20目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为5%的乙醇按1 5的料液体积比在10°C温度下以 100W功率进行超声提取，0. Ih后过滤即得。(4)浸提液经转子转速为2000r/min的胶体磨研磨1次后，得到胶体状的枸杞叶浸 提溶液。(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在IMpa的压力下进行均质， Ih后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以2000r/min的离心速度对均一的枸 杞叶浸提溶液离心分离lmin，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以0. lt/h的流速经孔径为0. 01 μ m的陶瓷膜在温度为15°C、压力为 0. 005Mpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用2倍床层 体积、质量浓度为20%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞叶 黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 03Mpa、温度为20°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在40°C温度下干燥后，即得 4. OOkg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为60. 5%，黄酮醇苷含量为31. 7%，芦丁含量为19. 3%。实施例12 —种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣，去除杂质后，室内阴干，得到枸杞叶干样。(2)将50kg枸杞叶干样放入粉碎机中进行粉碎，粉碎后过320目筛，得到枸杞粉。(3)将枸杞粉与质量浓度为100%的乙醇按1 100的料液体积比在100°C温度下 以360W功率进行超声提取，48h后过滤即得。(4)浸提液经转子转速为20000r/min的胶体磨研磨20次后，得到胶体状的枸杞叶
浸提溶液。
(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液放入高压均质机中，在200Mpa的压力下进行均 质，5h后形成均一的枸杞叶浸提溶液；然后，采用离心机以20000r/min的离心速度对均一 的枸杞叶浸提溶液离心分离60min，得到上清液和滤渣。收集上清液，弃去滤渣。(6)将上清液以10t/h的流速经孔径为ΙΟμπι的陶瓷膜在温度为55°C、压力为 3Mpa的条件下除去悬浮物、鞣质及粘液质，收集渗透侧的溶液，得到滤液。(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用50倍床 层体积、质量浓度为100%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得到含有枸杞 叶黄酮的洗脱液。(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液在真空度为0. 07Mpa、温度为65°C的条件下经真 空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该枸杞叶黄酮浓缩液在60°C温度下干燥后，即得 11. 4kg枸杞叶黄酮粉末。经高效液相色谱和紫外分光光度计检测，该枸杞叶黄酮粉末中枸杞叶总黄酮含量 为61. 9%，黄酮醇苷含量为32. 2%，芦丁含量为20. 7%。
权利要求
1.一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣除杂后，室内阴干，得到枸杞叶干样；(2)将所述枸杞叶干样经粉碎后，过20 320目筛，得到枸杞粉；(3)将所述枸杞粉与质量浓度为5 100%的乙醇按1 5 100的料液体积比浸提 0.5 360h后，得到浸提液;(4)所述浸提液经胶体磨研磨1 20次后，得到胶体状的枸杞叶浸提溶液；(5)将所述胶体状的枸杞叶浸提溶液在1 200Mpa的压力下进行均质后，经离心分离， 得到上清液和滤渣；(6)将所述上清液以0.1 10t/h的流速经孔径为0. 01 10 μ m的陶瓷膜在温度为 15 55°C、压力为0. 005 3Mpa的条件下除杂，得到滤液；(7)所述滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱至无糖，再用2 50倍 床层体积、质量浓度为20% 100%的乙醇溶液洗脱吸附在大孔树脂上的枸杞叶黄酮，得 到含有枸杞叶黄酮的洗脱液；(8)将所述含有枸杞叶黄酮的洗脱液经真空减压浓缩后，得到枸杞叶黄酮浓缩液；该 枸杞叶黄酮浓缩液经干燥后，即得枸杞叶黄酮粉末。
2.如权利要求1所述的一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，其特征在于用下述制备方 法代替权利要求1中所述步骤(3)制备浸提液将所述枸杞粉与质量浓度为5 100%的 乙醇按1 5 100的料液体积比在10 100°C温度下进行水浴加热，经回流提取0.5 72h后过滤即得。
3.如权利要求1所述的一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，其特征在于用下述制备方 法代替权利要求1中所述步骤(3)制备浸提液将所述枸杞粉与质量浓度为5 100%的 乙醇按1 5 100的料液体积比在10 100°C温度下进行超声提取，0. 1 48h后过滤即得。
4.如权利要求1所述的一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，其特征在于所述步骤(4) 中的胶体磨的转子转速为2000r/min 20000r/min。
5.如权利要求1所述的一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，其特征在于所述步骤(5) 中的离心速度为2000 20000r/min，离心时间为1 60min。
6.如权利要求1所述的一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，其特征在于所述步骤(8) 中的真空减压浓缩的条件是真空度为0. 03 0. 07MPa，温度为20 65°C。
全文摘要
本发明涉及一种枸杞叶黄酮的提取制备方法，该方法包括以下步骤(1)将枸杞叶经人工挑拣除杂后，室内阴干，得到枸杞叶干样；(2)将枸杞叶干样经粉碎、过筛，得到枸杞粉；(3)将枸杞粉用乙醇浸提，得到浸提液；(4)浸提液经胶体磨研磨后，得到胶体状的枸杞叶浸提溶液；(5)将胶体状的枸杞叶浸提溶液经均质、分离，得到上清液和滤渣；(6)将上清液用陶瓷膜除杂，得到滤液；(7)滤液经弱极性大孔吸附树脂吸附、乙醇溶液洗脱，得到含有枸杞叶黄酮的洗脱液；(8)将含有枸杞叶黄酮的洗脱液经真空减压浓缩、干燥后，即得枸杞叶黄酮粉末。本发明成本低廉、提取率高，所得枸杞叶黄酮性质稳定，含量高，抗心脑血管疾病、抗癌、抗氧化等生物活性高。
文档编号A61P9/00GK102000208SQ20101054261
公开日2011年4月6日 申请日期2010年11月9日 优先权日2010年11月9日
发明者于瑞涛, 刘增根, 梅丽娟, 王启兰, 邵赟, 陈晨, 陶燕铎 申请人:中国科学院西北高原生物研究所