专利名称：Endoglin抗体偶联的脂质体及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种Endoglin抗体偶联的脂质体，尤其是涉及一种Endoglin抗体偶 联的脂质体及其制备方法和应用。
背景技术：
在肿瘤的诊断、药物治疗和基因治疗中，寻找理想的肿瘤靶点和靶向载体一直 是研究热点。Endoglin是20世纪80年代发现的一个和肿瘤新生血管相关的膜表面同型 二聚体糖蛋白分子(分子量约为180kDa)，是转化生长因子-β Ktransforminggrowth factor-β 1，TGF-β 1)和细胞表面受体结合时的辅助分子。Endoglin和TGF-β 1结合 后，可调节TGF-βΙ和其受体结合后下游的信号传导途径，从而促进肿瘤新生血管生 成。现已有许多研究表明Endoglin主要分布于新生血管的内皮细胞和肿瘤周围组织的 细胞表面，其它正常组织几乎均不表达。因此，Endoglin和肿瘤血管生成密切相关， 是肿瘤血管生成的标志性分子之一。由于不同组织来源的肿瘤新生血管均起源于内皮细 胞，各种肿瘤的新生血管具有均质性，所表达的特异抗原物质具有共性，这样就可避免 不同肿瘤由于遗传物质在不断突变所导致的不同组织起源的肿瘤抗原的异质性，因此针 对肿瘤新生血管的治疗手段有可能应用于各种肿瘤。可见，Endoglin是肿瘤抗血管治疗 和靶向治疗的理想靶点，具有诱人的临床应用前景。Pegylatedimmunoliposomes(PILs)是经聚乙二醇(PEG)修饰的、粒径控制在 100
纳米左右的纳米免疫脂质体，是一种新的非病毒基因转移载体系统。在现有研究中，人 们已经将多种抗体结合在脂质体上，制备出各种不同用途的免疫脂质体材料。例如 2009年4月21日提交的中国发明专利申请200910103657.X公开了一种基于内皮抑素基 因的免疫脂质体及其制备方法和应用，该脂质体结合了抗第VIII因子相关抗原单克隆抗 体，可特异性作用于肺血管内皮细胞，抑制血管生成和肺纤维化形成。又如2009年7 月21日提交的中国发明专利申请200910100763.2公开了一种CD19单克隆抗体免疫脂质 体的制备及用途，该脂质体可以特异性作用于恶性B淋巴细胞和B淋巴细胞白血病干细 胞。然而，对于现有技术制备的用于肿瘤治疗的免疫脂质体材料所结合的抗体而 言，其特异性抗原均只存在于特定种类的肿瘤细胞中，故这类脂质体材料均只能针对特 定种类的肿瘤细胞具有靶向性，其适用范围也因此受到了极大限制。如果能够将前面所 述的Endoglin抗体与脂质体进行偶联，可以开发出一种新型的免疫脂质体材料，该材料 能够以各类肿瘤组织中广泛存在的新生血管内皮细胞为靶向，因而对各类肿瘤均具有良 好的靶向性。
发明内容
本发明的目的是提供一种可以特异性作用于肿瘤组织的新生血管内皮细胞的Endoglin抗体偶联的脂质体。本发明的另一目的是提供所述Endoglin抗体偶联的脂质体的制备方法。本发明的另一目的是提供所述Endoglin抗体偶联的脂质体的应用。本发明所述Endoglin抗体偶联的脂质体包括纳米脂质体微粒、Endoglin抗体 分子、将Endoglin抗体偶联在纳米脂质体微粒上的偶联剂以及纳米脂质体微粒装载的质 粒DNA/抗肿瘤药物/成像材料；所述Endoglin抗体偶联的脂质体中，各组分的质量比 为纳米脂质体微粒Endoglin抗体分子偶联剂/装载的物质=(8 12) (0.8 1.2) (0.8 1.2) (0.1 0.3)。所述纳米脂质体微粒的粒径可为50 250nm。 所述Endoglin抗体分子可为单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)或单链抗体 (single-chain antibody, ScAb)，分子量可为 20 180k 道尔顿。所述纳米脂质体微粒装载的物质可选自携带抗肿瘤目的基因的质粒、蛋白质或 多肽、肿瘤治疗药物、肿瘤组织成像材料中的至少一种等，其包封率可为3% 70%， 载药量可为0.7% 3%。所述偶联剂可为聚乙二醇衍生物等，所述聚乙二醇衍生物可选自二硬脂酰磷脂 酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺 (DSPE-PEG-maleimide)等PEG衍生物，偶联剂的PEG的分子量可为1000 4000。本发明所述Endoglin抗体偶联的脂质体的制备方法包括以下步骤1)制备PEG修饰的磷脂薄层；2)装入质粒/药物/成像材料，制备纳米脂质体颗粒；3)纳米脂质体颗粒的均一化和纯化；4)巯基化 Endoglin 抗体；5)将Endoglin抗体分子偶联在PEG修饰的纳米脂质体上。在步骤1)中，所述制备PEG修饰的磷脂薄层的具体方法包括用三氯甲烷 将棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、双十二烷基二甲基溴化铵、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二 醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺分别配制成20mg/mL、 5mg/mL、20mg/mL 禾口 10mg/mL 的相应浓度，并按 18.6ymol、0.6 μ mol> 0.6 μ mol 禾口 0.2 μ mol的量混合于样品瓶中；充分混勻后，通氮气流(时间应不少于IOmin)除去有机 溶剂，并不断旋转样品瓶，直至形成磷脂薄层；而后置于旋转蒸发仪中真空蒸发2h。在步骤2)中，所述装入质粒/药物/成像材料，制备纳米脂质体颗粒的具体方 法包括往步骤1)所述样品瓶中加入50mM、pH = 7.0的TRIS-HCL缓冲液0.2mL，轻 微旋转和震荡后，置水浴超声波仪处理3min，充分重悬磷脂混合物，同时应尽量避免气 泡的产生；依次逐滴加入待装载的物质350 μ g、终浓度为40% 80%的乙醇和200mM CaCl2溶液，并使乙醇的终浓度达到35% (V/V)、CaCl2的终浓度达到4mM ；将瓶盖旋紧 并密封，进行5个循环的反复冻融，得到质粒脂质体，其中，每一个冻融循环包括5min 液氮-2min 37°C水浴-4min室温静置；所述待装载的物质可选自携带抗肿瘤目的基因的 质粒、肿瘤治疗药物、肿瘤组织成像材料等中的至少一种。在步骤3)中，所述纳米脂质体颗粒的均一化和纯化的具体方法包括将步骤2) 得到的质粒脂质体依次通过膜挤出器中的400nm、IOOnm和50nm双层微孔滤膜各20次、20次和21次；在HEPES缓冲液中透析2h回收得到的质粒脂质体，期间更换透析液一次。在步骤4)中，所述巯基化Endoglin抗体的具体方法包括；将Endoglin抗体 1.6mg与200 μ L IOmM的Traut，s Reagent在避光室温巯基化反应lh，随后超滤3次， 除去Traut’ s Reagent的同时，将缓冲液置换成HEPES缓冲液；所述Endoglin抗体可为
单克隆抗体或单链抗体，分子量可为20 180k道尔顿。在步骤5)中，所述将Endoglin抗体分子偶联在PEG修饰的纳米脂质体上的具体 方法包括将步骤4)得到的巯基化Endoglin抗体迅速加入步骤3)得到的脂质体颗粒中， 室温下氮气保护环境中，摇晃偶联反应过夜。所述Endoglin抗体偶联的脂质体对新生血管内皮细胞具有良好的靶向性，因此 所述Endoglin抗体偶联的脂质体可在制备诊断和治疗实体肿瘤药物中应用。该复合脂质 体可以装载有目的脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、寡核苷酸物质、蛋白质、 多肽、药物分子、成像材料。当该复合脂质体特异性作用于肿瘤组织的新生血管内皮细 胞的时候，其装载的特定目的基因能够得到表达，装载的生物分子、药物分子、成像材 料可以得到释放，从而实现对肿瘤进行诊断和/或治疗的目的。由于其装载的DNA、 RNA,蛋白质和多肽类药物形成结合物而被看作是一种新型的载药系统，因此可以包含 两种或更多质粒/蛋白质和多肽/药物/成像材料，从而通过成像材料的生物学作用达到 诊断的目的，通过目的基因的表达和蛋白质和多肽/药物分子的定向释放实现靶向治疗 之功效。
图1为本发明所述Endoglin抗体偶联的脂质体的结构示意图。图2为本发明所述Endoglin抗体偶联的脂质体的制备方法流程图。图3为本发明实施例中的Endoglin抗体偶联的质粒DNA脂质体透射电镜图像 (X10000)。在图2中，标尺为0.2μιη，箭头所指的圆形颗粒都是Endoglin单克隆抗体偶 联的脂质体。图4为使用琼脂糖凝胶电泳和DNA含量测定的方法对本发明实施例中的 Endoglin抗体偶联的质粒DNA脂质体的释放效率进行测定的结果。在图4中，1 DNA marker ； 2 EGFP质粒；3_4 脂质体包装EGFP质粒；5_6 5% Triton处理后脂质体释 放EGFP质粒(图中箭头所示)。图5为使用琼脂糖凝胶电泳和DNA含量测定的方法对本发明实施例中的 Endoglin抗体偶联的质粒DNA脂质体的稳定性进行测定的结果。在图5中，5_1 载有 EGFP质粒的脂质体在人血清，5-2:不含20%胎牛血清和双抗的DMEM培养基，5_3 含20%胎牛血清和双抗的DMEM培养基中的稳定性；1 marker ； 2 EGFP质粒；3 包装质粒的脂质体；4 9:包装后的质粒载体于人血清中lOmin，0.5h, 1.5h，4h，6h， 8h后的稳定性；箭头A示在人血清中释放出来的EGFP质粒带，箭头B示在含20%胎牛 血清和双抗的DMEM培养基中释放出来的EGFP质粒带。图6为本发明实施例中的Endoglin抗体偶联的载LSS670染料脂质体在小鼠体内 Ih的代谢情况。
图7为本发明实施例中的Endoglin抗体偶联的载LSS670染料脂质体在小鼠体内 2.5h的代谢情况。图8为本发明实施例中的Endoglin抗体偶联的载LSS670染料脂质体在小鼠体内 4h的代谢情况。在图6 8中，6-1、7-1和8_1为注射游离染料的对照组，6_2、7-2和8_2为 注射Endoglin抗体偶联的载LSS670染料脂质体的实验组。图9为本发明实施例中的Endoglin抗体偶联的载LSS670染料脂质体在荷瘤小鼠 体内8h的代谢情况。在图9中，从左向右依次为未注射LSS670染料，LSS670标记 的Endoglin MAb偶联的脂质体，只注射染料，肿瘤在右侧腋下(箭头所示)；膀胱部位 信号大小不一与是否小鼠排尿有关，下肢和尾巴的信号是被排除的尿液浸湿所致。
具体实施例方式下面将结合附图和实施例对本发明作进一步说明，这些附图和实施例应当被理 解为是说明性的，而非对本发明的限制。图1所示为所述Endoglin抗体偶联的脂质体的结构示意图。1-1为纳米脂质体微粒，其粒径范围为50 250nm，具有以下特殊性质1)能够提高纳米脂质体颗粒的水溶性和避免体内网状内皮系统的非特异性吞 噬，以及延长纳米脂质体颗粒在体内的循环时间而达到提高靶组织和靶细胞对纳米颗粒 摄取的目的；2)增加此类生物药物的溶解度和稳定性，减弱或消除免疫原性、抗原性和毒 性，提高药物的治疗指数，扩大临床用药范围；3)改善药物的体内药动学性质，延长药物在体内的半衰期等。1-2为所述纳米脂质体微粒装载的物质，包括携带抗肿瘤目的基因的质粒、 蛋白质或多肽、肿瘤治疗药物、肿瘤组织成像材料中的至少一种等，其包封率为3% 70%。1-3为偶联剂，具体为聚乙二醇衍生物，包括二硬脂酰磷脂酰乙醇 胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺 (DSPE-PEG-maleimide)等PEG衍生物，用作本发明偶联剂的PEG的分子量为1000 4000。1-4为Endoglin抗体分子，该抗体为单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)或 单链抗体(single-chain antibody, ScAb)，分子量为约20 180k道尔顿。图2所示为所述Endoglin抗体偶联脂质体的制备方法流程图。2-1为制备PEG修饰的磷脂薄层的步骤，具体包括用三氯甲烷将棕榈酰油酰 磷脂酰胆碱(POPC)、双十二烷基二甲基溴化铵(DDAB)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚 乙二醇2000 (DSPE-PEG2000)和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺 (DSPE-PEG2000-maleimide)分别配制成 20mg/mL、5mg/mL、20mg/mL 和 10mg/mL 的相 应浓度，并按18.6 μ mol、0.6 μ mol、0.6 μ mol和0.2 μ mol的量混合于样品瓶中；充分混 勻后，通氮气流(时间应不少于IOmin)除去有机溶剂，并不断旋转样品瓶，直至形成磷 脂薄层；而后置于旋转蒸发仪中真空蒸发2h。
2-2为装入质粒/药物/成像材料，制备纳米脂质体颗粒的步骤，具体包括 往步骤2-1所述样品瓶中加入0.2mL TRIS-HCL缓冲液(50mM，pH 7.0),轻微旋转和 震荡后，置水浴超声波仪处理3 5min，充分重悬磷脂混合物，同时应尽量避免气泡的 产生；依次逐滴加入待装载的物质350 500 μ g (目的脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸 (RNA)、寡核苷酸物质、蛋白质、多肽和/或药物分子和/或成像材料)、40% 80%乙 醇(终浓度35%，V/V)和200mMCaCl2溶液(终浓度4mM)；将瓶盖旋紧并密封，进行 5 10个循环(每一个循环包括5 8min液氮_2 3min 37°C水浴_4 5min室温静 置)的反复冻融，得到质粒脂质体。2-3为脂质体颗粒的均一化和纯化步骤，具体包括将步骤2-2得到的质粒脂 质体依次通过膜挤出器中的400nm(15 25次)、IOOnm(15 25次)和50nm(15 25 次)双层微孔滤膜，以完成脂质体的均一化；在HEPES缓冲液(25mM HEPES，140mM NaCl, pH 7.0)中透析2 4h回收得到的质粒脂质体，期间更换透析液一次，以完成脂质 体的纯化。2-4为巯基化Endoglin抗体的步骤，具体包括；将Endoglin抗体1.6 2mg与 200 250 μ LlOmM的Traut，s Reagent (2-亚氨氢氯化硫醇经50mM四硼酸钠，pH 9.4
配制而成)，避光室温巯基化反应1 2h，随后超滤2 4次，除去Traut，s Reagent的 同时，将缓冲液置换成HEPES缓冲液。2-5为将Endoglin抗体分子偶联在PEG修饰的纳米脂质体上的步骤，具体包括 将步骤2-4得到的巯基化Endoglin抗体迅速加入步骤2_3得到的脂质体颗粒中，室温下氮 气保护环境中，摇晃偶联反应过夜(10 18h)。所述Endoglin抗体偶联的脂质体中的纳米脂质体微粒可以装载以下材料中的至 少一种1)质粒DNA，携带有能够在肿瘤相关组织的细胞内表达的目的基因，当装载这 些目的基因时，所述Endoglin抗体偶联的脂质体可以进一步用于制备肿瘤靶向性基因治 疗药物；2)药物分子(包括蛋白质和多肽等生物药物分子)，能够作用于肿瘤相关组织进 行肿瘤的治疗，当装载这些药物时，所述Endoglin抗体偶联的脂质体可以进一步用于制 备肿瘤靶向性控制释放药物；3)成像材料，能够被肿瘤相关组织摄入以进行肿瘤的诊断，当装载这些成像材 料时，所述Endoglin抗体偶联的脂质体可以进一步用于制备肿瘤诊断药物/试剂。实施例1 制备粒径为IOOnm的Endoglin抗体偶联的质粒DNA脂质体，具体制 备步骤如下1)用三氯甲烷将 POPC、DDAB> DSPE-PEG2_ 和 DSPE_PEG2_-maleimide 分 别配制成 20mg/mL、5mg/mL、20mg/mL 和 1 Omg/mL 的相应浓度，并按 18.6 μ mol、 0.6 μ mol、0.6 μ mol和0.2 μ mol的量混合于Agilent色谱样品瓶中；充分混勻后，通氮气
流15min除去有机溶剂，并不断旋转样品瓶，直至形成磷脂薄层；而后置于旋转蒸发仪 中真空蒸发2h。2)取出样品瓶，加入0.2mL TRIS-HCL缓冲液(50mM，pH 7.0),轻微旋转和
震荡后，置水浴超声波仪处理3min，充分重悬磷脂混合物，同时应尽量避免气泡的产生；依次逐滴加入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒DNA(350 μ g)、60%乙醇(终浓度 35%, V/V)、200mM CaCl2溶液(终浓度4mM)；将瓶盖旋紧并密封，进行5个循环(每 一个循环包括5min液氮-2min 37°C水浴-4min室温静置)的反复冻融，得到质粒脂质 体。3)将步骤得到的质粒脂质体依次通过膜挤出器中的400nm(20次)、100nm(20 次)和50nm(21次)双层微孔滤膜，完成脂质体的均一化；在HEPES缓冲液(25mM HEPES, 140mM NaCl, ρΗ 7.0)中透析2h回收得到的质粒脂质体，期间更换透析液一 次，完成脂质体的纯化。4)将 Endoglin 抗体 l.6mg 与 200 μ LlOmM 的 Traut，s Reagent (2-亚氨氢氯化硫 醇经50mM四硼酸钠，pH9.4配制而成)，避光室温巯基化反应lh，随后采用Microcon Ultracel YM-30超滤离心管超滤3次，除去Traut，s Reagent的同时，将缓冲液置换成 HEPES缓冲液5)将步骤2-4得到的巯基化Endoglin抗体迅速加入步骤2_3得到的脂质体颗粒 中，室温下氮气保护环境中，摇晃偶联反应过夜。对所制备Endoglin抗体偶联的质粒DNA脂质体进行了电镜观察、粒径测定、释 放效率测定、稳定性测定。图3所示为所制备Endoglin抗体偶联的质粒DNA脂质体的透射电镜图像，可以 看到脂质体颗粒粒径约为lOOnm，且粒径分布均勻。粒径测定采用动态光散射法进行，测得所制备Endoglin抗体偶联的质粒DNA脂 质体的粒径为100.78士 1.94nm，与图3中透射电镜观察结果一致。图4所示为使用琼脂糖凝胶电泳和DNA含量测定的方法对所制备Endoglin抗体 偶联的质粒DNA脂质体的释放效率进行测定，其中1为DNAmarker，2为EGFP质粒，
3 4为EGFP质粒DNA脂质体，5 6为5 % Triton处理后脂质体释放EGFP质粒。可 以看到，5% Triton处理后，载有的质粒被释放。在稳定性检测中，37°C时，所制备的Endoglin抗体偶联的质粒DNA脂质体于 DMEM基础培养基中lOmin、0.5h、1.5h、4h、6h、8h几乎无质粒释放(见表1)，而在人 血清及含20%胎牛血清和双抗的DMEM培养基中则都保持低释放，经超滤沉淀等处理后 测定8h后释放率均低于20%，表现出较好的稳定性。表1 Endoglin抗体偶联的质粒DNA脂质体在不同时间的释放率
权利要求
1.Endoglin抗体偶联的脂质体，其特征在于包括纳米脂质体微粒、Endoglin抗体分 子、将Endoglin抗体偶联在纳米脂质体微粒上的偶联剂以及纳米脂质体微粒装载的质 粒DNA/抗肿瘤药物/成像材料；所述Endoglin抗体偶联的脂质体中，各组分的质量比 为纳米脂质体微粒Endoglin抗体分子偶联剂/装载的物质=(8 12) (0.8 1.2) (0.8 1.2) (0.1 0.3)。
2.如权利要求1所述的Endoglin抗体偶联的脂质体，其特征在于所述纳米脂质体微粒 的粒径为50 250nm ；所述Endoglin抗体分子最好为单克隆抗体或单链抗体，分子量为20 180k道尔顿。
3.如权利要求1所述的Endoglin抗体偶联的脂质体，其特征在于所述纳米脂质体微粒 装载的物质选自携带抗肿瘤目的基因的质粒、蛋白质或多肽、肿瘤治疗药物、肿瘤组织 成像材料中的至少一种，其包封率为3% 70%，载药量为0.7% 3%;所述偶联剂最好为聚乙二醇衍生物，所述聚乙二醇衍生物选自二硬脂酰磷脂酰乙醇 胺_聚乙二醇或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇_马来酰亚胺PEG衍生物，偶联剂的 PEG的分子量为1000 4000。
4.如权利要求1所述的Endoglin抗体偶联的脂质体的制备方法，其特征在于包括以下 步骤1)制备PEG修饰的磷脂薄层；2)装入质粒/药物/成像材料，制备纳米脂质体颗粒；3)纳米脂质体颗粒的均一化和纯化；4)巯基化Endoglin抗体；5)将Endoglin抗体分子偶联在PEG修饰的纳米脂质体上。
5.如权利要求4所述的Endoglin抗体偶联的脂质体的制备方法，其特征在于在步骤 1)中，所述制备PEG修饰的磷脂薄层的具体方法包括用三氯甲烷将棕榈酰油酰磷脂酰 胆碱、双十二烷基二甲基溴化铵、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和二硬脂酰磷 脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺分别配制成20mg/mL、5mg/mL、20mg/mL和 10mg/mL的相应浓度，并按18.6 μ mol、0.6 μ mol、0.6 μ mol和0.2 μ mol的量混合于样 品瓶中；充分混勻后，通氮气流(时间应不少于IOmin)除去有机溶剂，并不断旋转样品 瓶，直至形成磷脂薄层；而后置于旋转蒸发仪中真空蒸发2h。
6.如权利要求4所述的Endoglin抗体偶联的脂质体的制备方法，其特征在于在步骤2) 中，所述装入质粒/药物/成像材料，制备纳米脂质体颗粒的具体方法包括往步骤1) 所述样品瓶中加入50mM、pH = 7.0的TRIS-HCL缓冲液0.2mL，轻微旋转和震荡后， 置水浴超声波仪处理3min，充分重悬磷脂混合物，同时应尽量避免气泡的产生；依次逐 滴加入待装载的物质350 μ g、终浓度为40% 80%的乙醇和200mM CaCl2溶液，并使乙 醇的终浓度达到35% (V/V)、CaCl2的终浓度达到4mM ；将瓶盖旋紧并密封，进行5个 循环的反复冻融，得到质粒脂质体，其中，每一个冻融循环包括5min液氮-2min37°C水 浴-4min室温静置；所述待装载的物质可选自携带抗肿瘤目的基因的质粒、肿瘤治疗药 物、肿瘤组织成像材料等中的至少一种。
7.如权利要求4所述的Endoglin抗体偶联的脂质体的制备方法，其特征在于在步骤 3)中，所述纳米脂质体颗粒的均一化和纯化的具体方法包括将步骤2)得到的质粒脂质2体依次通过膜挤出器中的400nm、IOOnm和50nm双层微孔滤膜各20次、20次和21次； 在HEPES缓冲液中透析2h回收得到的质粒脂质体，期间更换透析液一次。
8.如权利要求4所述的Endoglin抗体偶联的脂质体的制备方法，其特征在于在步骤4) 中，所述巯基化Endoglin抗体的具体方法包括；将Endoglin抗体1.6mg与200 μ L IOmM 的Traut，s Reagent在避光室温巯基化反应lh，随后超滤3次，除去Traut，s Reagent的 同时，将缓冲液置换成HEPES缓冲液；所述Endoglin抗体可为单克隆抗体或单链抗体， 分子量可为20 180k道尔顿。
9.如权利要求4所述的Endoglin抗体偶联的脂质体的制备方法，其特征在于在步骤5) 中，所述将Endoglin抗体分子偶联在PEG修饰的纳米脂质体上的具体方法包括将步骤 4)得到的巯基化Endoglin抗体迅速加入步骤3)得到的脂质体颗粒中，室温下氮气保护环 境中，摇晃偶联反应过夜。
10.如权利要求1 3中任意一条权利要求所述Endoglin抗体偶联的脂质体在制备诊 断和治疗实体肿瘤药物中应用。
全文摘要
Endoglin抗体偶联的脂质体及其制备方法和应用，涉及一种Endoglin抗体偶联的脂质体。Endoglin抗体偶联的脂质体包括纳米脂质体微粒、Endoglin抗体分子、将Endoglin抗体偶联在纳米脂质体微粒上的偶联剂以及纳米脂质体微粒装载的质粒DNA/抗肿瘤药物/成像材料。先制备PEG修饰的磷脂薄层，再装入质粒/药物/成像材料，制备纳米脂质体颗粒，然后将纳米脂质体颗粒的均一化和纯化，再巯基化Endoglin抗体，将Endoglin抗体分子偶联在PEG修饰的纳米脂质体上。所述Endoglin抗体偶联的脂质体可在制备诊断和治疗实体肿瘤药物中应用。
文档编号A61P35/00GK102008441SQ201010579418
公开日2011年4月13日 申请日期2010年12月1日 优先权日2010年12月1日
发明者卓慧钦, 卢小玲, 赵永祥 申请人:赵永祥