专利名称：一种连翘酯苷a及其制备方法
技术领域：
本发明涉及从药用植物中提取连翘酯苷A的制备方法，属医药领域范畴。
背景技术：
连翘是中国临床常用传统中药之一，又名黄花条、连壳、青翘、落翘、黄奇丹等。《中 华人民共和国药典》2010年版一部收载的连翘为木犀科(Oleaceae)连翘属O^rsythia) 植物连翘(Forsythia suspensa (Thunb. ) Vahl)的干燥果实，果实初熟尚带绿色时采收称为 青翘，果实熟透颜色发黄时采收称为老翘。连翘有抗菌、强心、利尿、镇吐等药理作用，常用连翘治疗急性风热感冒、痈肿疮 毒、淋巴结结核、尿路感染等症，为双黄连口服液、双黄连粉针剂、清热解毒口服液、连草解 热口服液、银翘解毒冲剂等中药制剂的主要原料。最新的研究表明，连翘中抗病毒的主要活 性成分是连翘酯苷A，因此，采用合理的中药分离纯化技术，从中药连翘中制备出纯度高、质 量可控、疗效确切的连翘酯苷A，开发成临床用于抗病毒的药物，将具有很好的社会价值。本 发明提供的高纯度连翘酯苷A能更好的保障连翘酯苷制剂的临床疗效，更好的为广大患者 服务，使其发挥更大社会价值。目前，国内外均有文献报道连翘酯苷A提取分离方法，采用的方法有直接水提 法、有机溶剂提取法、超声提取法、微波提取法等，提取物经过硅胶、氧化铝、大孔树脂、反向 柱或色谱制备等一系列方法分离得到产物。上海玉森新药开发有限公司申请了三项名为“从连翘提取物中纯化连翘酯苷A的 方法”的专禾U (200610027024. 1,200610027036. 4,200610027037. 9)，该系列专利工艺主要采用硅胶柱层析法、色谱制备法，其使用材料昂贵，制备成本高，而且操作复杂，难以进行产 业化生产，只适用于少量样品的制备。上海凯宝药业有限公司申请了名为“一种连翘提取物的制备方法”的专利 (200610027331. X)，该专利是将连翘加水煎煮提取，经醇沉初步纯化，最后采用水饱和正丁 醇萃取进一步精制。虽然该专利也采用了萃取步骤，但其最终产品为连翘提取物，与本发明 的目标产物具有本质的不同，操作方法也不相同。北京太兆天元知识产权代理有限公司申请了名为“一种连翘及其有效部位的制备 方法及新用途”的专利(200610086245. 4)，其工艺为连翘药材用水蒸馏提取挥发油，水提 液拌硅藻土，醇洗，醇洗液过树脂柱，将连翘油、连翘酚和连翘提取物混合得最终产物连翘 有效部位。该专利提取连翘有效部位的操作繁琐，步骤多，不利于工业化生产，且与本发明 的目的产物连翘酯苷A，具有本质的差别。山西大学申请了名为“一种连翘酯苷A制备方法”的专利(2008100544 . 9)，其工 艺为采用连翘壳为原料，用去离子水或者水醇作为提取溶剂提取，过大孔树脂柱，浓缩流 出液，上反向层析材料，浓缩流出液，冷冻干燥得产物。众所周知，该专利中分离所用反向材 料价格极其昂贵，因此制备费用很高，而且该专利中运用了多次过柱的方法，操作繁琐，再 加上其干燥工艺中采用冷冻干燥技术，对仪器设备要求高，能耗较大，因此该发明专利的实用性较差。综上所述，以往工艺制备成本高、操作复杂、对仪器设备要求高、能耗大，不利于工 业化大生产。本发明利用中药现代化分离纯化技术，以中药连翘为原料，制备得到一种高纯 度的连翘酯苷A。采用萃取技术及大孔树脂纯化技术，将提取液在一定条件下萃取去除部 分杂质，再通过大孔树脂纯化，然后结晶处理，从而得到一种含量高、稳定性好、成本低的连 翘酯苷A。本发明克服以往工艺的不足，提供了一种制备高含量连翘酯苷A的方法，工艺新 颖，操作简便，节能环保，有很好的实用性，目前尚无相关专利或文献报道。
发明内容
本发明的目的在于克服以往工艺的不足，通过提取、萃取、分离、结晶、重结晶等一 系列步骤，提供一种高含量的连翘酯苷A及其制备方法。根据本发明的比较优选的实施方案，制备连翘酯苷A的方法包括如下步骤取连翘药材，加入适量的溶剂提取数次，每次提取一定时间，过滤，合并提取液。调节提取液pH值，用一定量的溶剂萃取数次，回收有机溶剂，得到稠膏。取稠膏，加入一定量水，加热溶解，放置，冷却。取冷却液，过一定型号的树脂柱，上柱完成后，加水充分洗脱后，改用不同浓度的 水醇溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩至稠膏。取稠膏，加入适量有机溶剂，加热溶解，过滤，滤液冷却，加入少量纯度大于90% 的连翘酯苷A作为晶种，静置，结晶，得连翘酯苷A粗品，粗品重结晶1 3次，可得到含量 60 99. 8%的连翘酯苷A。上述步骤(1)中，提取溶剂可用水、甲醇、乙醇或正丁醇，从生产成本角度考虑，优 先使用水作溶剂进行提取，提取方法可以是回流提取或保温提取方式，每次提取ai;提取 溶剂的用量为药材量的5 12倍量(V/M)，优选为7倍量；提取次数为1 3次，优选2次。上述步骤(2)中，用氢氧化钠调节提取液PH值的范围在8.0 11.0，优选pH值为 9. 0，其中调节pH值可用氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠或者氨水，优选为氢氧化钠。所用萃取 溶剂可以为乙酸乙酯或正丁醇，优选为乙酸乙酯；萃取溶剂用量为提取液的0. 5 2倍量， 优选为1倍量；萃取2 4次，优选为3次。上述步骤(3)中，加入一定量的水加热溶解，水的用量可为药材量的1 3倍，优 选为2倍量，水太少则溶液过于粘稠，过柱阻力大，水太多则溶液上柱量太大，生产周期长。上述步骤中，一定型号的树脂柱可以为HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600， 或D101、D1300。通过正交试验优选，综合上样量、吸附率、解吸速度等各方面因素，优选树 脂型号为HPD-100大孔树脂。上柱完成后，用水洗净杂质，然后使用一定比例的乙醇洗脱， 通过对洗脱率、样品得率、样品含量的综合筛选，洗脱液乙醇的浓度为20 60%，优选浓度 为50%。洗脱溶剂用量为药材量的2 5倍(V/M)，优选为3倍量。根据本发明优选的技 术方案，将事先处理好的大孔树脂装柱，对所用层析柱的规格和材质无特殊要求，可根据实 际生产的需要选定，并按常规操作方法装填，装柱量不少于柱高的2/3，最好选用直径与柱 高比在1 6 1 7的柱子。上述步骤(5)中，结晶所用的溶剂可以为水、甲醇、乙醇、丙酮，或是以上溶剂中两 种或几种溶剂的组合，优选为甲醇-水组合，更优选为甲醇水(75 25)；重结晶所用晶种纯度一般不低于99. 5% ；结晶时间为8 18小时，优选为12小时。根据本发明的技术方案，采用科学可行的方法从连翘果实中经提取、萃取、分离、 结晶、重结晶等一系列步骤，制得连翘酯苷A的含量大于60%，最高可达99.8%。与之前 的制备工艺相比，具有节能环保、生产成本低、操作简便的优点。本发明的制备工艺已经通 过多批生产验证，证明其重复性、稳定性都好，适合工业化生产，易于推广，具有很强的实用 性。具体实施方案以下实施例中所用连翘药材购于安徽毫州，含量测定用对照品由本公司提供。所 用乙醇为药用级，水为纯化水，其他溶剂为分析纯。以下实施内容是为了对权利要求的技术特征给予说明，并进一步说明本发明的实 用性，不应理解为对本发明的原料来源或对本发明权利要求的限制。实施例1取连翘药材50kg，分别加350L水加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液， 过滤，冷却；将滤液用NaOH调节PH值到9. 0，分别加350L乙酸乙酯萃取3次，上层萃取液 于65°C下浓缩至稠膏，称重5. 4kg ；向稠膏中加入IOOkg纯化水，40°C下加热溶解，过滤；滤 液上HPD-100大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加水充分洗脱去除大极性杂质后，改用浓度为 50%的乙醇150L洗脱至洗脱液中无连翘酯苷A，收集洗脱液，减压浓缩至稠膏；向稠膏中加 入甲醇2L，加热溶解，冷却，加入少量纯度为90. 2%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静置 结晶12h，过滤，干燥，即得连翘酯苷A粗品315g。取连翘酯苷A粗品，用浓度为75%的甲醇1575ml加热溶解，过滤，滤液冷却，加入 微量纯度为99. 8%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静置结晶12h，过滤，并按上述操作步 骤重结晶2次，即得连翘酯苷A227g，含量为99. 8%。取连翘酯苷A结晶50g，淀粉80g，硬脂酸镁2. Og,微粉硅胶1. Og,糊精117g混勻， 制粒，过60目筛，干燥后压成1000片(250mg/片)，即得。用法用量为口服，每次1 2 片，每日3次。实施例2取连翘药材50kg，加入350L乙醇，在75°C下保温提取1次，提取2小时，收集提取 液，过滤，冷却；将滤液用NaOH调节PH值到11.0，分别加350L正丁醇萃取2次，上层萃取 液于85°C下浓缩至稠膏，称重5. ^cg ；向稠膏中加入IOOkg纯化水，40°C下加热溶解，过滤； 滤液上HPD-400大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加水充分洗脱去除大极性杂质后，改用浓度 为20%的乙醇150L洗脱至洗脱液中无连翘酯苷A，收集洗脱液，减压浓缩至稠膏；向稠膏中 加入丙酮2L，加热溶解，冷却，加入少量纯度为90. 5%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静 置结晶10h，过滤，干燥，即得连翘酯苷A粗品256g。取连翘酯苷A粗品，用浓度为50%的丙酮1280ml加热溶解，过滤，滤液冷却，加入 微量纯度为99. 5%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静置结晶12h，过滤，并按上述操作步 骤重结晶2次，即得连翘酯苷A142g，含量为99. 7%。实施例3取连翘药材100kg，加700L水加热回流提取1次，提取2小时，收集提取液，过滤，冷却；将滤液用碳酸钠调节PH值到8. 0，分别加700L乙酸乙酯萃取3次，上层萃取液于65°C 下浓缩至稠膏，称重10. Ag ；向稠膏中加入200kg纯化水，40°C下加热溶解，过滤；滤液上 HPD-500大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加水充分洗脱去除大极性杂质后，改用浓度为35% 的乙醇300L洗脱至洗脱液中无连翘酯苷A，收集洗脱液，减压浓缩至稠膏；向稠膏中加入乙 醇4L，加热溶解，冷却，加入少量纯度为91. 4%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静置结晶 15h，过滤，干燥，即得连翘酯苷A粗品586g。取连翘酯苷A粗品，用浓度为65%的乙醇加热溶解，过滤，滤液冷却，加入 微量纯度为99. 8%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静置结晶15h，过滤，干燥，即得连翘 酯苷A371g，含量为89.2%。实施例4取连翘药材100kg，分别加700L甲醇，在60°C下保温提取2次，每次2小时，合并 提取液，过滤，冷却；将滤液用碳酸氢钠调节PH值到9. 0，分别加700L正丁醇萃取2次，上 层萃取液于85°C下浓缩至稠膏，称重10. ^g;向稠膏中加入200kg纯化水，40°C下加热溶 解，过滤；滤液上D-101大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加水充分洗脱去除大极性杂质后，改 用浓度为50%的乙醇300L洗脱至洗脱液中无连翘酯苷A，收集洗脱液，减压浓缩至稠膏；向 稠膏中加入甲醇4L，加热溶解，冷却，加入少量纯度为91. 6%的连翘酯苷A结晶作为晶种， 搅拌，静置结晶16h，过滤，干燥，即得连翘酯苷A粗品674g。取连翘酯苷A粗品，用浓度为75%的甲醇3370ml加热溶解，过滤，滤液冷却，加入 微量纯度为99. 6%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静置结晶10h，过滤，干燥，并即得连 翘酯苷A453g，含量为91.4%。实施例5取连翘药材200kg，分别加1400L水加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液， 过滤，冷却；将滤液用NaOH调节PH值到9. 0，分别加1400L乙酸乙酯萃取3次，上层萃取液 于65°C下浓缩至稠膏，称重20. 2kg ；向稠膏中加入400kg纯化水，40°C下加热溶解，过滤； 滤液上HPD-100大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加水充分洗脱去除大极性杂质后，改用浓度 为50%的乙醇600L洗脱至洗脱液中无连翘酯苷A，收集洗脱液，减压浓缩至稠膏；向稠膏中 加入甲醇8L，加热溶解，冷却，加入少量纯度为90. 7%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静 置结晶10h，过滤，干燥，即得连翘酯苷A粗品l.^kg。取连翘酯苷A粗品，用浓度为75%的甲醇6450ml加热溶解，过滤，滤液冷却，加入 微量纯度为99. 6%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静置结晶12h，过滤，干燥，并即得连 翘酯苷A984kg，含量为94. 3 %。实施例6取连翘药材200kg，分别加1400L水加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液， 过滤，冷却；将滤液用NaOH调节PH值到9. 0，分别加1400L乙酸乙酯萃取3次，上层萃取液 于65°C下浓缩至稠膏，称重20. 3kg ；向稠膏中加入400kg纯化水，40°C下加热溶解，过滤； 滤液上D-101大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加水充分洗脱去除大极性杂质后，改用浓度为 50 %的乙醇600L洗脱至洗脱液中无连翘酯苷A，收集洗脱液，减压浓缩至稠膏；向稠膏中加 入甲醇8L，加热溶解，冷却，加入少量纯度为90. 4%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静置 结晶12h，过滤，干燥，即得连翘酯苷A粗品1412g。
取连翘酯苷A粗品，用浓度为75%的甲醇7060ml加热溶解，过滤，滤液冷却，加入 微量纯度为99. 8%的连翘酯苷A结晶作为晶种，搅拌，静置结晶10h，过滤，并按上述操作步 骤重结晶2次，即得连翘酯苷A863g，含量为99. 8%。
权利要求
1.一种高含量的连翘酯苷A，其特征在于采用高效液相色谱法测定，含量范围为 60% 99. 8%。
2.根据权利要求1所述的连翘酯苷A，其特征在于可以加入适量药学上可接受的载体 进一步制成各种适合于临床应用的制剂，包括片剂、胶囊、滴丸、软胶囊、粉针或注射液。
3.一种用连翘制备连翘酯苷A的方法，其制备方法由以下几步组成(1)取连翘药材，加入适量的溶剂提取数次，每次提取一定时间，过滤，合并提取液。(2)调节提取液至一定PH值，用一定量的溶剂萃取数次，回收有机溶剂，得到稠膏。(3)取稠膏，加入一定量水加热溶解，放置，冷却。(4)取冷却液，过一定型号的树脂柱，上柱完成后，加水充分洗脱后，改用不同浓度的水 醇溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩，得稠膏。(5)取稠膏，加入适量有机溶剂，加热溶解，过滤，滤液冷却，加入少量纯度大于90% 的连翘酯苷A作为晶种，静置，结晶，得连翘酯苷A粗品，粗品重结晶1 3次，可得到含量 60 99. 8%的连翘酯苷A。
4.根据权利要求3所述的用连翘制备连翘酯苷A的方法，其特征在于步骤(1)中的提 取溶剂可以是水、甲醇、乙醇或正丁醇，优选水作为提取溶剂；提取方法可以是保温提取或 回流提取；提取溶剂的用量为药材量的5 12倍量(V/M)，优选为7倍量；提取次数为1 3次，优选2次。
5.根据权利要求3所述的用连翘制备连翘酯苷A的方法，其特征在于步骤⑵中，调节 提取液PH值所用的试剂可以为氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠或者氨水，优选为氢氧化钠；pH 值的范围为8. 0 11. 0，优选为9. 0 ；萃取溶剂可以为乙酸乙酯或正丁醇，优选为乙酸乙酯； 萃取溶剂的用量为提取液的0. 5 2倍量，优选为1倍量；萃取次数为2 4次，优选为3 次。
6.根据权利要求3所述的用连翘制备连翘酯苷A的方法，其特征在于步骤(3)中，加入 水的用量为药材量的1 3倍(V/M)，优选为2倍量。
7.根据权利要求3所述的用连翘制备连翘酯苷A的方法，其特征在于步骤(4)中，所 用树脂的型号可以为HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600，或D101、D1300，优选树脂型号 为HPD-100 ；洗脱液乙醇的浓度为20 60%，优选浓度为50% ；洗脱溶剂用量为药材量的 2 5倍(V/M)，优选为3倍量。
8.根据权利要求3所述的用连翘制备连翘酯苷A的方法，其特征在于步骤(5)中，结晶 所用的溶剂可以为水、甲醇、乙醇、丙酮，或是以上溶剂中两种或几种溶剂的组合，优选为甲 醇-水组合，更优选的比例为甲醇水(75 25)；重结晶所用品种纯度一般不低于99. 5%; 结晶时间为8 18小时，优选为12小时。
全文摘要
本发明提供一种连翘酯苷A及其制备方法，属医药领域范畴。本制备方法是以中药连翘果实为原料，经提取、萃取、分离、结晶、重结晶等一系列步骤，制备得到具有良好清热解毒功效、能预防急慢性肝损伤的高含量连翘酯苷A，采用高效液相色谱法测定，其含量范围为60～99.8％；本发明提供的连翘酯苷A及其制备方法采用中药现代化分离纯化技术，工艺新颖，操作简便，适合工业化生产，具有很强的实用性。
文档编号A61P31/12GK102050849SQ20101057943
公开日2011年5月11日 申请日期2010年12月9日 优先权日2010年12月9日
发明者季浩, 杨永安, 柏强强, 袁红波, 钟慧 申请人:江苏天晟药业有限公司