专利名称：Glp-1类似物药物组合物的制作方法
GLP-1类似物药物组合物
背景技术：
本发明涉及含有胰高血糖素样肽-1肽类似物和/或其可药用盐的组合物的改进、 药物组合物、用于制备此类组合物的方法及其用途。胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺(GLP-I)在肠L-细胞中通过胰高血糖素前体胰高血糖素原(pr印roglucagon)的组织特异性翻译后加工合成(Varndel 1，J. M.等， J. Histochem Cytochem, 1985 33 1080-6)，并且响应于食物而被释放入循环系统中。GLP-1 的血浆浓度从约15pmol/L的禁食水平上升至40pmol/L的餐后峰值水平。已经证实，就给定的血糖浓度上升而言，当口服施用葡萄糖时血浆胰岛素的增加比静脉内施用葡萄糖时约高3倍(Kreymann，B.等，Lancet 1987 :2，1300-4)。这种被称作肠降血糖素作用的胰岛素释放的饮食性增加主要是体液性的，且认为GLP-I是人最有效的生理肠降血糖素。除了促胰岛素作用外，GLP-I还抑制胰高血糖素分泌、延缓胃排空(Wettergren A.等，Dig Dis Sci
199338 :665-73),并且可以促进外周葡萄糖处理(D' Alessio, D. A.等，J.Clin Invest
199493 :2293-6)。在1994年，在观察到GLP-I的单次皮下(s/c)剂量能完全使具有非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的患者的餐后葡萄糖水平正常后，就提示GLP-I的治疗潜能(Gutniak， Μ. K.等，Diabetes Care 1994:17:1039-44)。认为该作用既受胰岛素释放增加的介导，又受胰高血糖素分泌减少的介导。此外，已经证实静脉内输注GLP-I可延迟NIDDM患者的餐后胃排空(Williams,B.等，J. Clin Endo Metab 1996:81 :327-32)。不同于磺酰脲类，GLP-1 的促胰岛素作用依赖于血糖浓度(Holz, G. G. 4th等，Nature 1993 :361 :362-5)。因此，在低血糖浓度下GLP-I-介导的胰岛素释放损失可防止严重的低血糖。这种联合作用使得GLP-I 具有超过目前用于治疗NIDDM的其它活性剂的独特的潜在治疗优势。大量研究已经证实，在给予健康个体时，GLP-I有效地影响血糖水平以及胰岛素和胰高血糖素浓度(Orskov, C, Diabetologia 35 :701-711,1992 ；Hoist, J. J.等，Potential of GLP-1 in diabetes management in Glucagon III, Handbook of Experimental Pharmacology, Lefevbre PJ 编辑，柏林，Springer Verlag, 1996，第 311-326 页)，这些作用是葡萄糖依赖性的(Kreymann, B.等，Lancet ii 1300-1304，1987 ；Weir, G. C.等， Diabetes38 :338-342，1989)。此外，它在糖尿病患者中也是有效的(Gutniak,M. ,N. Engl J Med 226 :1316-1322,1992 ；Nathan, D. Μ.等，Diabetes Carel5 :270_276，1992)，可使 2 型糖尿病个体的血糖水平正常(Nauck, M.A.等，Diabetologia 36 :741-744,1993)和改善1 型患者的血糖控制(Creutzfeldt, W. 0.等，Diabetes Care 19 :580_586，1996)，从而表明了其尤其可增加胰岛素敏感性/减少胰岛素抵抗的能力。已经提出将GLP-I及其激动剂用于处于发生非胰岛素依赖型糖尿病风险中的个体(参见WO 00/07617)以及用于治疗妊娠糖尿病(美国专利公开No. 20040266670)。除了上述内容外，还提示GLP-I及其激动剂可用于许多哺乳动物例如人中的治疗应用，包括但不限于改善学习、增强神经保护和/或缓解中枢神经系统的疾病或障碍的症状，例如通过调节神经发生，和例如帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿舞蹈病、ALS、中风、ADD和神经精神病综合征(美国专利公开No. 20050009742和2002011560 ；将肝脏干细胞/祖细胞转化成功能性胰腺细胞(W0 03/033697)；预防β -细胞衰退(美国专利公开 No. 20040053819 和 20030220251)和刺激 β -细胞增殖(美国专利公开 No. 20030224983)； 治疗肥胖(美国专利公开No. 20040018975 ；WO 98/19698)；抑制食欲和诱导饱感(美国专利公开No. 200302327Μ)；治疗肠易激性综合征(W0 99/64060)；降低与心肌梗死相关的发病率和/或死亡率(美国专利公开No. 20040162241, WO 98/08531)和中风(参见WO 00/16797)；治疗以不存在Q-波心肌梗死为特征的急性冠状动脉综合征(美国专利公开 No. 20040002454)；减弱术后分解代谢改变(美国专利No. 6，006，753)；治疗冬眠心肌或糖尿病性心肌病(美国专利公开No. 20050096276)；抑制去甲肾上腺素的血浆水平(美国专利公开No. 20050096276)；增加尿钠排泄、降低尿钾浓度(美国专利公开No. 20050037958)； 治疗与中毒性血容量过多(toxic hypervolemia)相关的病症或障碍，例如肾衰竭、充血性心力衰竭、肾病综合征、肝硬化、肺水肿和高血压(美国专利公开No. 20050037958)；诱导变力反应(inotropic response)和增加心脏收缩力(美国专利公开No. 20050037958)； 治疗多囊卵巢综合征(美国专利公开No. 2004(^66678&20040029784)；治疗呼吸窘迫(美国专利公开No. 200402357 )；通过非饮食途经、即通过静脉内、皮下、肌内、腹膜或其它注射或输注途径改善营养(美国专利公开No. 20040209814)；治疗肾病(美国专利公开 No. 20040209803)；治疗左心室收缩功能障碍，例如具有异常左心室射血分数的左心室收缩功能障碍(美国专利公开No. 20040097411)；抑制胃窦十二指肠(antro-duodenal)运动性，例如用于治疗或预防胃肠道障碍如腹泻、术后倾倒综合征和肠易激惹综合征和作为内窥镜检查操作中的术前用药法(美国专利公开No. 20030216292)；治疗危重病多神经病 (CIPN)和全身性炎性反应综合征(S^S)(美国专利公开No. 20030199445)；调节甘油三酯水平和治疗血脂异常(美国专利公开No. 20030036504和2003014318 ；治疗局部缺血后血流再灌注导致的器官组织损伤(美国专利公开No. 20020147131)；治疗冠心病危险因子 (CHDRF)综合征(美国专利公开No. 20020045636)等。 然而，GLP-I代谢不稳定，在体内的血浆半衰期(t1/2)仅为1-2分钟。外源性施用的 GLP-I 也快速降解(Deacon，C. F.等，Diabetes 44:1126-1131,1995)。这种代谢不稳定性限制了天然GLP-I的治疗潜能。已经进行了大量尝试以通过制剂的改进来改善GLP-I和其类似物的治疗潜能。例如，国际专利公开No. WO 01/57084描述了用于生产GLP-I类似物的晶体的方法，据说这些类似物可用于制备包含所述晶体和可药用载体的药物组合物如可注射药物。已经从盐水溶液中生长出了 GLP-I (7-37)0H的非均勻微晶簇并且在用锌和 /或间-甲酚进行晶体浸入处理后进行了检查(Kim和Harem Pharma. Res.第12卷，第11 期(19%))。已经由含有锌或鱼精蛋白的磷酸盐溶液制备了含有针状晶体和无定形沉淀的 GLP (7-36) NH2 的粗结晶悬浮液(Pridal 等，International Journal of Pharmaceutics 第 136卷，第53-59页(1996))。欧洲专利公开No. EP 0619322A2描述了通过混合蛋白质在pH 7-8. 5缓冲液中的溶液与盐和低分子量聚乙二醇(PEG)的某些组合制备GLP-I (7-37)OH的微晶形式的方法。美国专利No. 6，566，490描述了尤其是GLP-I的微晶种晶，据说它有助于生产纯化的肽产品。美国专利6，555，521 (US ‘ 521)中披露了具有四方平杆或板状形状的GLP-I晶体，据说它们具有改善的纯度并且表现出延长的体内活性。US' 521教导了这类晶体相对均勻并且比现有的结晶簇和无定形结晶悬浮液更长时间地保持混悬状态，据说现有的结晶簇和无定形结晶悬浮液快速沉降、聚集或彼此团簇，阻塞注射器针头并且一般加重不可预知的给药量。已经提示将生物可降解的聚[(dl-丙交酯-共-乙交酯)-β -乙二醇-β -(丙交酯-共-乙交酯)]的三嵌段共聚物用于GLP-I的控制释放制剂。然而，类似于其它聚合物系统，三嵌段共聚物的制备涉及复杂的方案和不一致的颗粒形成。类似地，还提示将生物可降解的聚合物例如聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)用于肽的持续递送制剂。然而，在本领域中并不赞成应用这类生物可降解聚合物，因为这些聚合物一般具有较差的水溶性，需要与水不混溶的有机溶剂例如二氯甲烷，和/或在生产过程中需要苛刻的制备条件。认为这类有机溶剂和/或苛刻的制备条件会增加诱导所关注的肽或蛋白质构象改变的风险，从而导致结构完整性下降和生物活性受损(Choi等，Pharm. Research，第21卷，第5期Q004))。泊洛沙姆同样存在缺陷。(Id.)上述参考文献中所述的GLP-I组合物在制备GLP的药物制剂方面不太理想，因为它们趋向于捕获杂质和/或还难以可再现地生产和施用。此外，已知GLP类似物在浓度升高时诱发恶心，因此需要提供具有降低的初始血浆浓度的持续药物作用(Ritzel等， Diabetologia,38 :720-725(1995) ；Gutniak 等，Diabetes Care,17(9) :1039-1044(1994)； Deacon等，Diabetes，44 :1126-1131 (1995))。因此，需要更易于和可靠地生产、更易于和可再现地施用于患者并且提供降低的初始血浆浓度以减少或消除不希望的副作用的GLP-I 制剂。发明概述本发明可概括在下面的段落以及权利要求中。一方面，本发明提供持续释放液体药物组合物，其包含 液体；·根据式(I) [Aib8'35]hGLP-l (7-36) NH2 的肽类似物；· 二价金属和/或二价金属盐；和 乙酸盐和/或乙酸。另一方面，本发明提供包含根据前述权利要求中任一项的药物组合物的容器。又一方面，本发明提供用于制备所述药物组合物的方法，所述方法包括以下步骤A.将液体、乙酸盐和/或乙酸和肽类似物混合；以及B.加入二价金属和/或二价金属盐并将其溶解。再一方面，本发明提供所述药物组合物用于治疗II型糖尿病的用途。附图简述
图1描绘了对犬单次皮下(s. c.)施用约lmg[Aib8’35]hGLP_l (7-36)NH2后获得的血浆特征图(中位值)。在每种情况中，将肽以包含约(wt/vol)肽且具有约1. 5的肽Si摩尔比率的含水锌组合物的形式施用。实心正方形和空心正方形代表如本文所述用NaOH调整pH的组合物；实心三角形代表未用NaOH调整pH的组合物；实心圆圈代表用 AcOH/AcO-缓冲的组合物。图2描绘了对犬单次皮下(s. c.)施用约15mg[Aib8’35]hGLP_l (7-36)NH2后获得的血浆特征图(中位值)。在每种情况中，将肽以包含约10% (wt/vol)肽且具有约1. 5的肽Si摩尔比率的含水锌组合物的形式施用。实心正方形和空心正方形代表如本文所述用NaOH调整pH的组合物；实心三角形代表未用NaOH调整pH的组合物；实心圆圈代表用 AcOH/AcO-缓冲的组合物。图3描绘了对犬单次皮下(s. c.)施用约lmg[Aib8’35]hGLP_l (7-36)NH2后获得的血浆特征图(中位值)。在每种情况中，将肽以如下的半固体含水锌组合物施用实心圆圈 约5% (wt/vol)肽，肽Si摩尔比率约5.4 1，无pH调整；空心圆圈约10% (wt/vol) 肽，肽Si摩尔比率约5.4 1，无pH调整；空心正方形约10% (wt/vol)肽，肽Si摩尔比率约5.4 1，用NaOH调整pH;实心正方形约10% (wt/vol)肽，肽Si摩尔比率约 4 1，用 NaOH 调整 pH。图4提供可用于制备本发明的某些制剂的各种装置的示意图。图5描绘了对犬单次皮下(s. c.)施用约lmg[Aib8’35]hGLP_l (7-36)NH2后获得的血浆特征图(中位值)。将肽以肽浓度为约2%且肽Si摩尔比率为约1.5 1的含水锌组合物的形式施用。图6描绘了对犬单次皮下(s. c.)施用约15mg[Aib8’35]hGLP-l (7-36)NH2后获得的血浆特征图(中位值)。将肽以肽浓度约25%且肽Si摩尔比率为约4 1的半固体锌组合物的形式施用。图7描绘了对犬单次皮下(s.c.)施用约15!^^138’35]1^1^-1(7-36)冊2后获得的血浆特征图(中位值)。将肽以肽浓度约23%且肽Si摩尔比率为约1.5 1的半固体锌组合物的形式施用。图8描绘了对大鼠单次皮下(s.c.)施用约0.3mg(3y 1 10%溶液)下述GLP-1类似物HCl盐测试制剂后获得的全时程血浆特征图(中位值)(1) (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2HCl 盐和 CuCl2 (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2/CuC12 的摩尔比率为1.5 1。在约pH5. 5的水(w/w)中该肽浓度是10% (30mM)。(2) (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2HCl 盐和 ZnCl2 (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2/ZnCl2 的摩尔比率为1.5 1。在约pH5. 5的水(w/w)中该肽浓度是10% (30mM)。图9描绘了对大鼠单次皮下(s.c.)施用约0.3mg(3y 1 10%溶液)下述GLP-1类似物乙酸盐测试制剂后获得的全时程血浆特征图(中位值)
(Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2 乙酸盐和 ZnCl2 (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2/ZnCl2 的摩尔比率为1. 5 1。在约ρΗ5· 5的水(w/w)中该肽浓度是10% (30mM)。图10描绘了对大鼠单次皮下(s.c.)施用0.3mg(3yl 10%溶液)图8中所示的测试制剂后获得的早期血浆特征图(中位值)。图11描绘了对大鼠单次皮下(s.c.)施用0.3mg(3yl 10%溶液)图9中所示的测试制剂后获得的早期血浆特征图(中位值)。图12描绘了对大鼠单次皮下(s.c.)施用0.3mg(3yl 10%溶液)图8中所示的三种测试制剂后注射位置剩余的(Aib8’35)hGLP-1 (7-36)NH2的估计百分比。详细描述本发明提供包含GLP-I类似物的药物组合物。特别优选的是根据式(I)的GLP-I 类似物(Aib835) hGLP-1 (7-36) NH2 (I)
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或其可药用盐，其中所述组合物的制剂提供优良的生产、施用、药动学和药效学特性以及减弱的不良副作用。本发明的药物组合物优选不由具有PH4的澄清ZnCl2水溶液组成，其中所述的[Aib8’35]hGLP-l(7-36)NH2存在浓度为％ig/ml，且所述SiCl2以0. 5mg/ml的浓度存在。本发明的一个优选实施方案提供具有改善的药物释放特性、优选具有减少的初始突释的药物组合物。本发明还提供具有延长作用持续时间、包含式(I)化合物的药物组合物。本发明可概括在下面的段落以及权利要求中。一方面，本发明提供持续释放液体药物组合物，其包含·液体；·根据式(I) [Aib8’35]hGLP_l (7-36) NH2 的肽类似物；· 二价金属和/或二价金属盐；和 乙酸盐和/或乙酸。优选地，本发明提供持续释放液体药物组合物，其包含·液体；·根据式(I) [Aib8’35]hGLP_l (7-36) NH2 的肽类似物；· 二价金属和/或二价金属盐；和 乙酸盐和/或乙酸；其特征在于，· 二价金属和/或二价金属盐是锌和/或氯化锌；·所述药物组合物的最终pH在4至5的范围内； 乙酸盐和/或乙酸与肽类似物的摩尔比率范围为约1 1至6 1; 肽类似物与锌的摩尔比率范围为约6 1至1 1。优选地，肽类似物的一部分与乙酸盐的一部分以肽类似物的盐形式存在。优选地，所述药物组合物的最终pH在3. 5至6的范围内。更优选地，所述药物组合物的最终PH在4至5的范围内。甚至更优选所述药物组合物的最终pH为4.5 士 0. 1。所述药物组合物的最终PH为组合物当其准备被施用时的pH。优选地，乙酸盐和/或乙酸与肽类似物的摩尔比率范围为约0. 5 1至约10 1。 更优选地，药物组合物中乙酸盐和/或乙酸与肽类似物的摩尔比率范围为约1 1至约 6 1。甚至更优选地，药物组合物中乙酸盐和/或乙酸与肽类似物的摩尔比率范围为约 3. 2 1(3. 2 士 0. 32)。优选地，二价金属和/或二价金属盐是锌和/或氯化锌。更优选地，二价金属和/ 或二价金属盐是氯化锌。优选地，肽类似物与锌的摩尔比率范围为约6 1至约1 1。更优选地，肽类似物与锌的摩尔比率范围为约1.5 1(1. 5士0.15)。优选地，本发明提供如上定义的持续释放液体药物组合物，且包含·液体；·根据式(I) [Aib8’35]hGLP_l (7-36) NH2 的肽类似物；· 二价金属和/或二价金属盐是氯化锌；
乙酸盐和/或乙酸；·所述药物组合物的最终pH在4. 5 士0. 1的范围内； 乙酸盐和/或乙酸与肽类似物的摩尔比率范围为约3. 2 1(3. 2士0.32)；以及·肽类似物与锌的摩尔比率范围为约1. 5 1(1. 5士0. 15)。优选地，肽类似物的浓度为约10%重量/体积(mg/ml)。优选地，锌的浓度范围在0.重量/体积至2. 35%重量/体积(mg/ml)。优选地，对所述组合物进行配制以使根据式(I)的肽类似物在个体内释放至少约 1周。优选地，对所述组合物进行配制以使根据式(I)的肽类似物在个体内释放至少约 1周，优选2周。优选地，所述组合物还包含液体(或稀释剂)。所述液体(或稀释剂)用作悬浮液的溶剂或媒介物。优选地，所述液体选自无菌水或包含等渗剂例如NaCl的无菌水。优选地，所述药物组合物适用于胃肠外施用。更优选地，所述药物组合物适用于通过注射施用。优选地，药物组合物适于在使用之前以准备被使用的状态并且在5°C的温度贮存至少1年的时间。优选地，在不冻干所有组分的情况下、优选通过将所有组分混合在一起而制备所述药物组合物。另一方面，本发明提供包含如上定义的药物组合物的容器。优选地，所述容器是预填充注射器。优选地，本发明提供预填充注射器，其含有如上定义的药物组合物，其中所述组合物包含·作为液体的水(qs 210 μ 1)；· 2Img 根据式(I) [Aib8’35]hGLP_l (7-36) NH2 的肽类似物；· 0. 571mg作为二价金属盐的氯化锌；·乙酸；·所述药物组合物的最终pH为4. 5 士 0. 1 ；·乙酸与肽类似物的摩尔比率为约3. 2 1 (3. 2士0. 32)；·肽类似物与锌的摩尔比率为约1. 5 1 (1. 5士0. 15)。另一方面，本发明提供用于制备药物组合物的方法，包括以下步骤A.将液体、乙酸盐和/或乙酸和肽类似物混合；以及B.加入所述二价金属和/或二价金属盐并将其溶解。优选地，所述方法还包括以下步骤C.无菌过滤由步骤B产生的组合物；以及D.用所述组合物填充容器。优选地，在步骤A之前，将乙酸和无菌水混合。更优选地，所述方法包括将另外的无菌水加至溶液中的最终步骤。另一方面，本发明提供药物组合物用于治疗II型糖尿病的用途。
在优选的特征中，本发明也提供药物组合物，其在体内生理pH下形成持续释放药物特性的原位储库(in situ deposit)。本发明的进一步实施方案提供包含式(I)化合物或其可药用盐和可药用载体或稀释剂的药物组合物。优选地，所述载体或稀释剂包含水。在优选的特征中，本发明提供包含药物组合物，包含化合物或GLP-I肽类似物，用所述肽的盐或肽和其盐的混合物制备。优选地，所述药物组合物中GLP-I肽类似物的盐选自有机酸如乙酸、乳酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、苯甲酸、柠檬酸、甲磺酸或甲苯磺酸的可药用盐、或者无机酸如盐酸、 氢溴酸、氢碘酸、硫酸或磷酸的可药用盐。诸如盐酸的强酸的可药用盐是尤其优选的。强酸定义为PKA小于4. 5的酸。所述药物组合物中的其他优选肽盐是有机酸如乙酸或三氟乙酸、 乳酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、苯甲酸或柠檬酸的盐。在一个优选的实施方案中，药物组合物的溶解度、pH和释放特性可调节，通过调节盐形式GLP-I类似物与非盐形式GLP-I类似物的摩尔比以延长释放特性，并降低GLP-I类似物浓度的初始峰(initial spike)。在优选的实施方案中，药物组合物还包含二价金属，以降低组合物的水溶性，由此延长释放特性而同时降低血浆浓度的初始突释或初始峰。优选的二价金属包括锌和铜。二价金属的盐形式是尤其优选的，包括但不限于二价金属的盐酸盐和乙酸盐。CuAc2、CuCl2, ZnAc2和/或ZnCl2是最优选的。优选地，所述药物组合物中的二价金属和/或二价金属盐的浓度为约0. 0005mg/ml至约50mg/m。甚至更优选地，所述药物组合物中的二价金属和/ 或二价金属盐的浓度为约0. 01mg/ml至约0. 50mg/ml。更优选地，所述药物组合物包含稀释液，其中所述稀释液包含可药用的水溶液。稀释液可包含无菌水或作为等渗剂的盐如NaCl 的无菌水溶液。术语“等渗剂”在本文中是指溶液中维持与血液相等渗透压的盐或任何赋形剂。术语“可药用的”在本文中是指为哺乳动物或人生理学上所充分耐受。在又一个实施方案中，所述药物组合物还包含二价金属和/或二价金属盐，其中所述药物组合物中所述GLP-I类似物与所述二价金属和/或二价金属盐的摩尔比率范围为约6 1至约1 1。优选地，所述比率范围为约5. 5 1至约1 1。更优选地，所述比率范围为约5. 4 1至约1.5 1。甚至还更优选地，所述比率为约5.4 1,4.0 1或 1.5 1。最优选地，所述比率为约1.5 1。GLP-I类似物与二价金属和/或二价金属盐的摩尔比率是指药物组合物中肽类似物的摩尔比例与二价金属和/或二价金属盐的摩尔比例。肽类似物的摩尔比例包括任何以肽类似物盐形式存在的肽。本发明该方面中约的含义是1.5 1 士 10%每个目标值的比率，因此期望比率包括涵盖例如1.；35-1.65 0. 85-1. 15 的比率。优选地，所述药物组合物包含水性混合物、悬浮液或溶液，其中所述GLP-I类似物、式(I)化合物或其盐以约0.5%-30% (w/w)的浓度存在。在所述水性混合物、悬浮液或溶液中，所述GLP-I类似物和/或其盐的浓度更优选为约l^d^d^d^j^j^、 7%,8%,9% ,10% ,11% >12% ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18% ,19%,20%,21%,22%, 23 %、24 %、25 %、26 %、27 %、28 %、29 % 或 30 % (w/w)。更优选地，所述水溶液中所述 GLP-I 类似物和 / 或其盐的浓度为约 1%>2%,3%,4%,5%,6%,7%,8%,9%,10%,11%>14%,15%、16%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、29%或 30% (w/w)。还更优选地，所述水溶液中所述GLP-I类似物和/或其盐的浓度为约1 %、2 %、3 %、4 %、5 %、6 %、 9%、10%、11%、22%、23%、对％、25%或洸％ (w/w) 0甚至还更优选地，所述水溶液中所述 GLP-I 类似物和 / 或其盐的浓度为约 1%、2%、3%、4%、5%、6%、10%、22%、23%、24%、 25%或沈(％ (w/v) 0还更优选地，所述水溶液中所述GLP-I类似物和/或其盐的浓度为约 1%、2%、5%、10%、23%或25% (w/w) 0 “约”是指如下含义对于约0. 5%至约4%的浓度而言，士0.5%目标值是期望的范围(例如，0.5%至1.5%为约)；对于约5%和5%以上的目标浓度而言，20%目标值是期望的范围(例如8%至12%是约10%)。优选地，[Aib8'35]hGLP-l (7-36) NH2XLP-I类似物或其盐在药物组合物中的浓度为约1 % (重量/体积)，且[Aib8’35] hGLP-1 (7-36) NH2与所述二价金属和/或二价金属盐的摩尔比率为约1.5 1。更优选地，[Aib8’35]hGLP-l(7-36)NH2或其盐在所述药物组合物中的浓度为约2% (重量/体积)，且[Aib8’35]hGLP-1 (7-36)NH2或其盐与所述二价金属和/或二价金属盐的摩尔比率为约1.5 1。还更优选地，[Aib8’35]hGLP-1 (7-36)NH2或其盐在所述药物组合物中的浓度为约10% (重量/体积)，且[Aib8’35]hGLP-1 (7-36)NH2或其盐与所述二价金属和/或二价金属盐的摩尔比率为约1.5 1。最优选地，[Aib8’35] hGLP-1 (7-36) NH2或其盐在所述药物组合物中的浓度为约23 %或约25 % (重量/体积)，且[Aib8’35] hGLP-1 (7-36) NH2或其盐与所述二价金属和/或二价金属盐的摩尔比率为约1.5 1。在优选的实施方案中，GLP-I类似物、[Aib8’35]hGLP-1 (7-36)NH2或其盐在药物组合物中的浓度为约5 % (重量/体积)，且肽与二价金属和/或二价金属盐的摩尔比率为约 5.4 1。更优选地，[Aib8’35]hGLP-1 (7-36)NH2或其盐在所述组合物中的浓度为约5% (重量/体积)，且所述比率为约4.0 1。还更优选地，[Aib8’35]hGLP-l(7-36)NH2或其盐在所述组合物中的浓度为约10% (重量/体积)，且所述比率为约5. 4 1。还进一步优选地， [Aib8’35]hGLP-l (7-36)NH2或其盐在所述组合物中的浓度为约10% (重量/体积)，且所述比率为约4.0 1。优选地，所述二价金属和/或二价金属盐以氯化锌或乙酸锌提供。更优选地，所述乙酸锌以ZnAc2-2H20的形式提供。在备选的实施方案中，所述二价金属和/或二价金属盐以氯化铜或乙酸铜提供。在一个实施方案中，使用碱向上调整所述药物组合物的pH。更优选地，使用 NaOH进行所述pH调整。还更优选地，使用NaOH调整所述药物组合物的pH，使得当使用 0.9% NaCl稀释至约初始浓度时，使用直接电位测定法(direct potentiometric determination)5. 0-5. 5 白勺 pH {t。本发明的优选实施方案特征在于药物组合物或持续释放制剂，其中对该组合物进行配制以使GLP-I的肽类似物或其盐、例如根据式(I)的化合物或其盐在需要其的个体如哺乳动物、优选人中释放延长的时间。优选地，所述化合物的所述释放延长至少1小时、更优选至少4、6、12或对小时。还更优选地，对所述组合物进行配制以使根据式(I)的化合物在个体内释放至少36、48、60、72、84或96小时。还更优选地，对所述组合物进行配制以使式(I)化合物在个体内释放至少约5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天。还更优选地，对所述组合物进行配制以使式(I)化合物在个体内释放至少约2、3或4周。本文所使用的术语“持续释放”是指这种释放，其导致生物学活性GLP-I类似物的可测量血清水平达至少1周的时间，更优选达至少2周的时间。在本发明的一方面中，调节所述药物组合物中GLP-I肽类似物的盐含量可改善 GLP-I肽类似物在所述药物组合物中的溶解度和稳定性，并且还通过降低初始突释提供改进的体内释放特性。本发明该方面中的词语“调节”意指通过调整盐形式的GLP-I类似物与非盐形式的GLP-I类似物的摩尔比来调整盐含量。甚至更优选地，所述药物组合物中的肽盐是所述式(1)肽的盐酸或乙酸的盐，或氯化物或乙酸盐。在所述药物组合物中，乙酸盐或氯化物与所述式(I)化合物的最终摩尔比率在约0.5 1至约10 1的范围。更优选地，所述比率为约0.8 1至约9 1。甚至更优选地，所述比率为约1 1至约6 1。最优选地，所述比率为约3.0 1，尤其是在本发明的这个方面，乙酸盐或氯化物与肽的摩尔比率意味着药物组合物中乙酸盐(CH3COO-)或氯化物(Cl—)的摩尔比例与药物组合物中肽的摩尔比例。例如，药物组合物中3 1的摩尔比，乙酸盐按比例是肽摩尔含量的三倍。这是化合物与其他物质的化学计量比。乙酸盐的摩尔比例与肽的摩尔比例包括任何以肽类似物的盐形式存在的乙酸盐和肽。最初制备的肽中乙酸盐的浓度可根据用于制备肽的方法而变化。因此，必须改变加入制剂中的乙酸盐的量以使获得适当的肽与乙酸盐的最终比率。另一方面，本发明涉及使用此类组合物治疗哺乳动物的方法。在该优选的实施方案中，词语“约”意指1.5 1 士 10%每个目标值的比率，因此期望的比率包括涵盖例如1. 35-1. 65 0. 85-1. 15的比率。在本发明的另外优选方面，药物组合物的pH通过调节组合物的乙酸盐含量来调节。优选地，所述药物组合物的PH范围是pH 3至pH 6。更优选地，所述药物组合物的所述 PH范围是pH 3. 5至5. 5。最优选地，所述药物组合物的所述pH范围是pH 4. 2至pH 4. 6。优选地，为了酸化药物组合物，可通过加入乙酸增加乙酸盐的含量。在一个实施方案中，所述药物组合物的pH可通过调整乙酸盐含量、从具有低乙酸盐含量或没有乙酸盐含量的GLP-I类似物的肽盐开始增加。在优选的实施方案中，通过调节乙酸盐或氯化物的含量来调整最终药物组合物的 PH，可以调节参数如肽浓度、锌浓度、化学稳定性、物理稳定性和通过降低初始突释来调节体内释放特性。在本发明的一个方面中Si或Cu的含量是固定的，通过调节乙酸盐的含量控制pH。 增加的乙酸盐含量显示改进的溶解度和物理稳定性，而降低的乙酸盐含量显示对PH的增加作用和对Cmax的降低作用。在优选的实施方案中，所述药物组合物包含水性混合物、悬浮液或溶液。本发明还提供引发GLP-I激动剂作用的方法，所述方法包括使GLP-I (7-36)NH2配体的受体与GLP-I类似物或其盐直接或间接接触。在前述方法中，所述GLP-I (7-36) NH2配体的受体存在于动物个体中，优选存在于灵长类中，更优选存在于人中。因此，在该实施方案中，本发明提供了在需要其的个体中引发来自GLP-I受体的激动剂作用的方法，该方法包括对所述个体施用本发明的组合物，其中所述组合物包含有效量的GLP-I类似物或其可药用盐。在前述方法的优选方面中，所述个体是罹患或处危罹患选自以下的疾病或病症的人1型糖尿病、II型糖尿病、妊娠糖尿病、肥胖、食欲过盛(excessive appetite)、饱感不足(insufficient satiety)和代谢紊乱。优选所述疾病是I型糖尿病或II型糖尿病。在前述方法的另一更优选的方面，所述个体是罹患或处危罹患选自下组的疾病的人1型糖尿病；II型糖尿病；肥胖；胰高血糖素瘤(glucagonomas)；气道分泌性障碍；关节炎；骨质疏松症冲枢神经系统疾病；再狭窄；神经变性疾病；肾衰竭；充血性心力衰竭；肾病综合征；肝硬化；肺水肿；高血压；和其中需要减少食物摄入的障碍；中枢神经系统疾病或障碍(例如通过调节神经发生，并且例如帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿舞蹈病、ALS、 中风、ADD和神经精神病综合征)；肠易激惹综合征；心肌梗死(例如降低与其相关的发病率和/或死亡率)；中风；急性冠状动脉综合征(例如以不存在Q-波心肌梗死为特征)；术后分解代谢改变；冬眠心肌或糖尿病性心肌病；尿钠排泄不足、尿钾浓度过高；与中毒性血容量过多相关的疾患或障碍(例如肾衰竭、充血性心力衰竭、肾病综合征、肝硬化、肺水肿和高血压)；多囊卵巢综合征；呼吸窘迫；肾病；左心室收缩功能障碍(例如具有异常左心室射血分数)；胃肠道障碍如腹泻、术后倾倒综合征和肠易激惹综合征(即通过抑制胃窦十二指肠运动性)；危重病性多发性神经病(CIPN)；全身性炎性反应综合征(S^S)；血脂异常；局部缺血后血流再灌注导致的器官组织损伤；和冠心病危险因子(CHDRF)综合征。在本发明的另一方面中，本发明的特征在于在需要其的个体中将肝脏干细胞/祖细胞转化成功能性胰腺细胞、预防β-细胞衰退和刺激β-细胞增殖、抑制去甲肾上腺素血浆水平、诱导变力反应和增加心脏收缩力、通过非饮食途径(例如通过静脉内、皮下、肌内、 腹膜或其它注射或输注途径)改善营养、预处理进行内窥镜检查操作的个体和调节甘油三酯水平的方法，所述方法包括对所述个体施用本发明的包含有效量的式(I)化合物或其可药用盐的制剂。所述个体优选是哺乳动物，更优选是灵长类动物，还更优选是人。用作本发明的肽盐的优选的GLP-I肽在本文中由下式表示，例如(Aib8’35) hGLP-1 (7-36)NH2，其中来自天然序列的被置换的氢基酸位于第一组圆括号之间(例如 Aib8,35表示Aib置换hGLP-Ι中的Ala8和Gly35)。Aib是α -氨基异丁酸的缩写。缩写GLP-I 意指胰高血糖素样肽-1 ；hGLP-Ι意指人胰高血糖素样肽-1。第二组圆括号之间的数字指的是存在于肽中的氨基酸的编号(例如hGLP-1 (7-36)指人GLP-I的肽序列的第7到第36个氨基酸。hGLP-1 (7-37)的序列列在 Mojsov，S.，ht. J. P印tide Protein Res. 40，1992，第 333-342页中。hGLP-1 (7-36)NH2中的命名"NH2”表示肽的C-末端被酰胺化。hGLP-1 (7-36) 意指C-末端是游离酸。在hGLP-1 (7-38)中，除非另有说明，否则第37和38位上的残基分别为Gly和Argo本发明中所用的GLP-I肽类似物尤其优选是可药用盐的形式。此类盐的实例包括但不限于那些与有机酸(例如乙酸、乳酸、马来酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、苯甲酸、甲磺酸、甲苯磺酸或扑酸)、无机酸(例如盐酸、硫酸或磷酸)和聚合酸(例如单宁酸、羧甲基纤维素、聚乳酸、聚乙醇酸或聚乳酸-乙醇酸共聚物)形成的盐。制备本发明的肽盐的典型方法在本领域中是众所周知的并且可以通过盐交换的标准方法进行。因此，可以通过将肽溶于少量0. 25N乙酸水溶液中而将本发明肽的TFA盐(TFA盐由使用制备型HPLC、用含有TFA的缓冲溶液洗脱纯化肽而得到)转化成另一种盐，如乙酸盐。将所得的溶液应用在半-制备型HPLC柱(Zorbax,300SB,C-8)上。用如下溶液洗脱柱(1) 0. IN乙酸铵水溶液， 0. 5小时；(2)0. 25N乙酸水溶液，0. 5小时；和(3)线性梯度(20%M 100%的溶液B，30分钟内)，流速細1/分钟(溶液A为0. 25N乙酸水溶液；溶液B为0. 25N在乙睛/水80 20 中的乙酸)。收集含有肽的级分并且冷冻至干。如本领域技术人员众所周知，GLP-I的已知和潜在用途可以改变并且是多种多样的(参见！"odd，J. F.等，Clinical Science，1998，95，第 325-3 页；和！"odd，J. F.等， European Journal of Clinical Investigation, 1997, 27, H 533-536 M ) 因此，以引起激动剂作用为目的的本发明化合物的施用可以具有与GLP-I本身相同的作用和用途。可以将GLP-I的这些可变的用途概括如下，治疗1型糖尿病、II型糖尿病、肥胖、胰高血糖素瘤、气道分泌性障碍、代谢紊乱、关节炎、骨质疏松症、中枢神经系统疾病、再狭窄、神经变性疾病、肾衰竭、充血性心力衰竭、肾病综合征、肝硬化、肺水肿、高血压、其中需要减少食物摄入的障碍以及本文所述的各种其它病症和障碍。因此，本发明在其范围内包括本文所定义的包含式(I)化合物作为活性成分的药物组合物。本发明的制剂中活性成分的剂量可以改变；然而，活性成分的量必须使得可获得合适的剂量。选择的剂量取决于所需的治疗作用、施用途径和治疗持续时间，并且一般由主治医师决定。一般而言，用于本发明活性的有效剂量在1X10_7至200mg/kg/天、优选 1 X ΙΟ"4至100mg/kg/天的范围内，可以将其作为单剂量或分成多个剂量进行施用。本发明的制剂优选胃肠外施用，例如肌内、腹膜内、静脉内、皮下施用等。用于胃肠外施用的本发明的制剂包括无菌水性或非水性溶液、混悬剂、凝胶剂或乳剂，条件是可达到所需的体内释放特性。非水性溶剂或媒介物的实例有丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和玉米油、明胶和可注射有机酯类如油酸乙酯。这类剂型还可以含有辅剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可以通过例如经截留细菌滤器过滤、通过向组合物中掺入灭菌剂、通过照射组合物或通过加热组合物对它们进行灭菌。也可以将它们制成无菌固体组合物形式，可在使用前即刻溶解在无菌水或一些其它无菌可注射溶媒中。肽的合成可用于实施本发明的肽可以且已通过标准固相肽合成制备。例如参见Mewart， J. Μ.等 Solid Phase Synthesis (Pierce Chemical Co.，第 2 版 1984)。下列实施例描述了可用于或已用于制备可用其有利实施本发明的肽的合成方法， 所述合成方法是本领域技术人员众所周知的。其它方法也是本领域技术人员众所周知的。 提供实施例的目的在于进行举例说明，并不意味着以任何方式限制本发明的范围。所述肽如GLP-I类似物可通过本领域技术人员已知的不同合成法获得，所述合成包括肽的最终沉淀、冻干过程、真空干燥或其他本领域已知的干燥过程。在本发明中离子交换层析、缓冲液的渗透交换和脱滤(difiltration)可以是纯化或选择不同盐形式的肽的合适方法。Boc-β Ala-0H、Boc-D-Arg(Tos)-OH 禾口 Boc-D-Asp(OcHex)购自 Nova Biochem, San Diego, California。 Boc-Aun-ΟΗ 购自 Bachem, King of Prussia, PA。 Boc-Ava-OH 禾口 Boc-Ado-OH 购自 Chem-Impex International, Wood Dale, IL。 Boc-2Nal_0H 购自 Synthetech, Inc. Albany, 0Ro本文中使用的其它缩写的全名如下Boc 叔丁氧羰基；HF :氟化氢；Fm 甲酰基；Xan 咕吨基；Bzl 苄基；Tos 甲苯磺酰基；DNP :2，4_ 二硝基苯基；DMF 二甲基甲酰胺； DCM:二氯甲烷；HBTU :2-(1Η-苯并三唑-1-基-1，1，3，3-四甲基脲鐺六氟磷酸盐；DIEA 二异丙基乙基胺；HOAc 乙酸；TFA 三氟乙酸；2C1Z :2_氯苄氧羰基；2BrZ :2_溴苄氧基羰基； OcHex 0-环己基；Fmoc :9_芴基甲氧羰基；HOBt =N-羟基苯并三唑；PAM树脂4_羟基甲基苯基乙酰氨基甲基树脂；Tris:三(羟甲基)氨基甲烷；和Bis-Tris:双(2-羟乙基)氨基-三(羟甲基甲烷)(即2-双(2-羟乙基)氨基-2-(羟甲基)-1，3_丙二醇)。术语“卤代”或“卤素”包括氟、氯、溴和碘。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域普通技术人员通常理解的相同的含义。另外，将本文提及的所有公开物、专利申请、专利和其它参考文献均通过引入并入。实施例1(Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2(Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2的详细合成操作已经在国际专利公开No. WO 00/34331 (PCT/EP99/09660)中提供，将该文献的内容完整地并入本文。简言之，在Applied Biosystems (Foster City, CA) 430A型肽合成仪上合成化合物，调节所述仪器以进行加速 Boc-化学固相肽合成。参见 khnolzer 等，Int. J.P印tide Protein Res.，40 180 (1992)。 使用具有0. 91mmol/g取代度的4-甲基二苯甲基胺(MBHA)树脂(Peninsula，Belmont, CA)。使用具有下列侧链保护的 Boc 氨基酸(Bachem，CA, Torrance, CA ；Nova Biochem.， LaJolla, CA) :Boc-Ala_0H、Boc-Arg (Tos)-0H> Boc-Asp (OcHex)-0H> Boc-Tyr (2BrZ) _0H、 Boc-His (DNP)-OH、Boc-Val_0H、Boc-Leu_0H、Boc_Gly-0H、Boc-GIn_0H、Boc-lle_0H、 Boc-Lys (2CIZ) -OH、Boc-Thr (Bzl)-OH、Boc-Ser (Bzl)-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Aib-OH、 Boc-Glu (OcHex)-OH 和 Boc-Trp (Fm)-OH。通过用 100% TFA 处理 2X 1 分钟除去 Boc 基团。 使用在4ml DMF中的HBTU (2. Ommol)和DIEA (1. Oml)预活化Boc氨基酸(2. 5mmol)，并且在不对肽-树脂TFA盐进行预先中和的情况下将其偶联。偶联时间为5分钟，Boc-Aib-OH残基和下列残基除外Boc-Lys (2C1Z)-OH和Boc-His (DNP)-0H，其中偶联时间为2小时。在肽链装配结束时，用20%巯基乙醇/10% DIEA在DMF中的溶液将树脂处理 2X30分钟以除去His侧链上的DNP基团。然后通过用100% TFA处理2X2分钟除去N-末端Boc基团。在用含10% DIEA的DMF中和肽-树脂(1 X 1分钟)后，通过用15%乙醇胺 /15%水/70% DMF的溶液处理2X 30分钟除去Trp侧链上的甲酰基。用DMF和DCM洗涤肽-树脂并且在减压下干燥。通过在O"C将肽-树脂在含有Iml茴香醚和二硫苏糖醇O^ig) 的IOml HF中搅拌75分钟，进行最终的裂解。用氮气流除去HF。用乙醚(6X10ml)洗涤残余物并且用4N HOAc (6 X IOml)萃取。使用反相制备型高效液相色谱法(HPLC)、应用反相VYDAC C18柱(Nest Group, Southborough, ΜΑ)纯化水性萃取物中的肽混合物。用线性梯度(20%至50%的溶液B，105分钟)、以IOml/分钟的流速(溶液A =含0. 1 % TFA的水；溶液B =含0. 1 % TFA 的乙腈)洗脱柱。收集级分并且用分析型HPLC检验。合并那些含有纯产物的级分并且冷冻至干。在该化合物合成的一个实例中，获得了 135mg白色固体。基于分析型HPLC分析的纯度为98.6%。电喷雾质谱仪(MS(ES))S分析得到分子量为3339.7(与计算的分子量 3339. 7 一致)。
实施例2配制操作I2. 1材料、储备溶液、计算A)材料=ZnCl2, NaOH 片状物和；35 % 盐酸获自 Panreac Quimica, Barcelona, Spain。WFI (无菌注射 / 灌洗用水)获自 B. Braun Medical, Barcelona, Spain。B)储备溶液(i)ZnCL, pH = 3 1.在搅拌下，将HCl加入到WFI中以达到pH= 3。2.在容量瓶中，转移称量量的&iCl2。在搅拌下，加入pH = 3HC1以达到约Hmg ZnCl2/ml的终浓度。(ii)ZnCL, pH = 2 1.在搅拌下，将HCl加入到WFI以达到pH = 2。2.在容量瓶中，转移称量量的&iCl2。在搅拌下，加入pH = 2HC1以达到约4_12mg ZnCl2/ml的终浓度。(iii)Na0H,0. 1 至 lOmg/ml 1.在容量瓶中，转移称量量的NaOH。在搅拌下，加入WFII以达到约0. I-IOmg Na0H/ml的终浓度。(iv)冷冻干燥的 2011^ 等分试样(Aib—) HGLP-I (7-36) Mi/ 小瓶1.制备WFI和乙酸的0. 04% (ν/ν)稀释液。2.在容量瓶中，转移称量量的(Aib8’35) HGLP-I (7-36) NH2 (乙酸盐)。在搅拌下，加入足量的0. 04%乙酸以使终浓度达到20mg (Aib8’35) HGLP-I (7-36) NH2/ml。在使用0. 45微米滤器进行无菌过滤后，将Iml该溶液的等分试样转移入冻干小瓶，冷冻干燥，将干燥的产物储存在-22 °C。(ν)冷冻干燥的 5011^ 等分试样(Aib_) HGLP-I (7-36) NH2/ 小瓶1.制备WFI和乙酸的0. 1% (ν/ν)稀释液。2.在容量瓶中，转移称量量的(Aib8’35) HGLP-I (7-36) NH2 (乙酸盐)。在搅拌下，加入足量的0. 乙酸以使终浓度达到50mg(Aib8’35)HGLP-I (7-36)NH2/ml。在进行无菌过滤后，将Iml该溶液的等分试样转移至冻干小瓶，冷冻干燥。C)计算(i)确定用于组合物的赋形剂(E)的总重量/体积E = (AX100/T)-(A/P)其中E=以mg计的赋形剂A=纯肽的含量(mg);T =组合物的目标浓度；例如，如果目标为2% ；则该值为2 ；且P =纯肽的浓度(mg肽/IOOmg制剂)。关于赋形剂的总体积，使用Iml = Ig的假设。(ii)确定向每ml或g组合物溶液中加入的SiCl2的体积/重量(W)a)对于其中不进行pH调整的组合物而言，W= 100% E ；
b)对于其中肽为约或约2%或高至约10%且使用碱调整pH的液体制剂而言， W = 80% E ；c)对于其中肽为约或约2%或高至约10%且使用碱调整pH的半固体或凝胶制剂而言，W = 50% E ；d)对于其中肽为约25%且使用碱调整pH的半固体或凝胶制剂而言，W = 66. 66% E ；e)对于其中肽是由冻干制剂重构且使用碱调整pH的制剂而言，W = 90% E0(iii)确定向每ml或g组合物溶液中加入的NaOH的体积/重量(W)a)对于其中肽为约或约2%或高至约10%且使用碱调整pH的制剂而言，W = 20% E ；b)对于其中肽为约或约2%或高至约10%且使用碱调整pH的半固体或凝胶制剂而言，W = 50% E ；c)对于其中肽为约25%且使用碱调整pH的半固体或凝胶制剂而言，W = 33. 33% E ；d)对于其中肽是由冻干制剂重构且使用碱调整pH的制剂而言，W= 10% E0(iv)确定用于各组合物中的SiCl2的浓度(mg/ml或mg/g)[ZnCl2] = (136. 29 XA) / (WX 3339. 76 XR)其中A=纯肽的含量(mg)R=肽/Zn的摩尔比率对于其中肽为约或约2%或约10%或高至约23%的制剂而言，R = 1. 5 ；对于其中肽为约25%的制剂而言，R = 4. 0 ；且W =每g或ml组合物溶液中加入的SiCl2溶液的重量(g)或体积(ml)。2. 2具有1-10%冻干肽和SiCL、不进行pH调整的组合物的制备如本文所用，包含一定百分比的肽的制剂描述了每组合物总重量包含一定重量的肽的制剂，例如肽描述了每IOOg总组合物包含Ig肽的制剂。如下制备包含约或约 2%高至约10%肽的制剂。将如所述的那样制备的(Aib8’35)HGLP-I (7-36)NH2的冷冻干燥样品与PH 3的SiCl2储备溶液以100%的总赋形剂体积和[肽Zn]=1.5 1进行充分混
口 OA)通过混合 20mg 冻干的(Aib8’35) HGLP-1 (7-36) NH2 (参见上文 2. IB (iv))与 2ml ZnCl2溶液(0. 272mg/ml ；参见上文2. IB⑴)制备组合物；B)通过混合 20mg 冻干的(Aib8’35) HGLP-1 (7-36) NH2 (参见上文 2. IB (iv))与 Iml ZnCl2溶液(0. 544mg/ml ；参见上文2. IB⑴)制备2%组合物；C)通过混合 50mg 冻干的(Aib8’35) HGLP-I (7-36) NH2 (参见上文 2. IB (v))与 0. 45ml ZnCl2溶液(3. 023mg/ml ；参见上文2. IB⑴)制备10%组合物。使冻干的肽和溶液平衡至室温。将指定体积的SiCl2溶液注入含有冻干肽的小瓶， 允许或2%肽组合物水化约2分钟，允许10%肽组合物水化约60分钟，或直到所有冻干肽完全水化并且溶液中不含肽的团块。在水化后，将重构的肽振摇约1分钟。可取出适量的溶解的肽进行给药，例如，100 μ 1按照上文A制备的肽溶液等
17于Img剂量，50 μ 1按照上文B制备的2%肽溶液等于Img剂量，150 μ 1按照上文C制备的 10%肽溶液等于15mg剂量等。使用本申请中的教导，本领域技术人员可以改变肽和ZnCl2的量以获得下文详述的1%、2%和10%组合物以外的组合物以及所需的剂量。2. 3具有1-10%冻干的肽和ZnCL的讲行DH调整的组合物的制备 如下制备包含约1 %或约2 %高至约10 %肽的制剂。将如所述的那样制备的(Aib8’ 35)HGLP-I (7-36)NH2的冻干样品与pH 3的ZnCl2储备溶液以90%的总赋形剂体积充分混合。通过添加稀NaOH溶液达到所需的溶液pH。Α)通过混合 20mg 冻干的(Aib8’35) HGLP-1 (7-36) NH2 (参见上文 2. IB (iv))与 1. 8ml ZnCl2溶液(参见上文2. IBa))制备组合物；B)通过混合 20mg 冻干的(Aib8’35) HGLP-1 (7-36) NH2 (参见上文 2. IB (iv))与 0. 9ml ZnCl2溶液(参见上文2. IBa))制备2%组合物；C)通过混合 50mg 冻干的(Aib8’35) HGLP-1 (7-36) NH2 (参见上文 2. IB(V))与 0. 40ml ZnCl2溶液(参见上文2. lB(i))制备10%组合物。向上述溶液中加入必需体积(10%的赋形剂总体积)的稀NaOH溶液以达到目标浓度和pH。例如，对每种情况而言1 %组合物加入0. 2ml合适浓度的NaOH溶液2%组合物加入0. Iml合适浓度的NaOH溶液10%组合物加入0. 05ml合适浓度的NaOH溶液使用本申请中的教导，本领域技术人员可以改变肽和ZnCl2的量以获得下文详述的1^^2%和10%组合物以外的组合物。2. 4具有1-10%肽和SiCL、不进行pH调整的液体组合物的制备如下制备包含约1 %或约2 %高至约10 %肽的液体制剂。称量(Aib8’35) HGLP-I (7-36)NH2样品并且与pH 3的ZnCl2储备溶液混合以达到l^d1^、高至10%肽的目标浓度。在混合后，将组合物无菌过滤，储存备用。2. 5具有1-10%肽和SiCL、进行pH调整的液体组合物的制备如下制备包含约1 %或约2 %高至约10 %肽的液体制剂。称量(Aib8’35) HGLP-I (7-36)NH2样品并且与pH 3的SiCl2储备溶液以80%的总赋形剂体积充分混合。锌溶液可以为SiCl2或ZnAc2 ·2Η20。通过添加稀NaOH溶液达到溶液的所需pH。使用这种方法制备制剂C5至C13。使用本申请中的教导，本领域技术人员可以改变肽和ZnCl2的量以获得本文所述的1%、2%和10%以外的组合物。2. 6具有25%肽和SiCL、不进行pH调整的半固体/凝胶组合物的制备如下制备包含约25%肽的半固体或凝胶制剂。称量(Aib8’35)HGLP-I (7-36)NH2样品并且与PH 2的SiCl2储备溶液以66. 66%的总赋形剂体积充分混合。锌溶液可以是SiCl2 或ZnAc2 · 2H20。使用这种方法制备制剂Cl和C2。更具体地，使用“推-拉(push-pull)，，混合法制备半固体或凝胶组合物a)将所需量的肽称量入预先安装了专用双路手动阀HV(I. D. = 0. 5mm)的一次性注射器Sl的柱桶，并且将管放入注射器Luer孔内；
b)使用不锈钢杆SR固定注射器柱塞；c)使Sl中的HV与真空源连接并且打开HV。10分钟后，关闭HV;d)将锌溶液准确称量入第二支一次性注射器S2的柱桶；e)然后使S2与HV的游离部分连接；f)打开HV，用真空将溶剂抽入包含肽粉末的Sl柱桶；g)关闭HV，取出溶剂注射器S2，从而水化Sl中的肽粉末；h)取出SR，缓慢释放注射器柱塞；i)在不打开HV的情况下移动注射器柱塞(推和拉)，以便粉末物料被溶剂完全浸湿；J)将双路不锈钢连接器SC(I. D. = 1. 0mm)放入注射器Luer孔内放置管的注射器 S2中，并且将其柱塞推至末端；k)打开Sl中的HV以排出真空，然后取出HV。使注射器柱塞移动以便将注射器柱桶中的空气减少至最低限度；和1)通过SC连接Sl和S2并且使组合物从Sl通过SC到S2进行捏合。使用本申请中的教导，本领域技术人员可以改变肽和ZnCl2的量以获得本文所述的25%以外的组合物。2. 7具有25%肽和SiCL、讲行dH调整的半固体/凝胶组合物的制备如下制备包含约25%肽的半固体或凝胶制剂。称量(Aib8’35)HGLP-I (7-36)NH2样品并且与PH 2的SiCl2储备溶液以66. 66%的总赋形剂体积充分混合。锌溶液可以是SiCl2 或ZnAc2 ·2Η20。通过添加稀NaOH溶液达到所需的溶液ρΗ。在本实施例中，必须在锌与NaOH 溶液之间分割加入到粉末中的液体总体积。因此，调整锌溶液的浓度，以便所需的锌溶液的总体积降至添加至肽粉末中的总液体积的50% (步骤d)。如下所详述，加入NaOH溶液作为加入到肽粉末中的剩余50%的总液体体积。使用这种方法制备制剂C3和C4。使用“推-拉”混合法制备ρΗ调整的半固体或凝胶组合物a)将所需量的肽称量入预先安装了专用双路手动阀HV(I. D. = 0. 5mm)的一次性注射器Sl的柱桶，并且将管放入注射器Luer孔内；b)使用不锈钢杆SR固定注射器柱塞；c)使Sl中的HV与真空源连接并打开HV。10分钟后，关闭HV ；d)将锌溶液准确称量入第二支一次性注射器S2的柱桶；e)然后使S2与HV的游离部分连接；f)打开HV，用真空将溶剂抽入包含肽粉末的Sl柱桶；g)关闭HV，取出溶剂注射器S2，从而水化Sl中的肽粉末；h)取出SR，缓慢释放注射器柱塞；i)在不打开HV的情况下移动注射器柱塞(推和拉)，以便粉末物料被溶剂完全浸湿；j)将双路不锈钢连接器SC(I. D. = 1. 0mm)放入注射器Luer孔内放置管的注射器 S2中，并将其柱塞推至末端；k)打开Sl中的HV以排出真空，然后取出HV。使注射器柱塞移动以便将注射器柱桶中的空气减少至最低限度；
1)通过SC连接Sl和S2并且使组合物从Sl通过SC到S2进行捏合。m)在勻化后，取出混合产物的等分试样以测定肽的浓度；η)准确称量剩余的中间主体产物，计算达到期望ρΗ所需的NaOH溶液的量；ο)将NaOH溶液准确称量入第三支一次性注射器S3 ；和ρ)将注射器柱塞缓慢压缩以将注射器腔中的空气减少至最低限度。通过SC连接两支注射器并且通过SC捏合组合物。使用本申请中的教导，本领域技术人员可以改变肽和ZnCl2的量以获得本文所述的25%以外的组合物。表权利要求
1.持续释放液体药物组合物，其包含 液体； 根据式⑴[Aib8’35]hGLP-l (7-36)NH2的肽类似物； 二价金属和/或二价金属盐；和 乙酸盐和/或乙酸； 其特征在于， 所述二价金属和/或二价金属盐是锌和/或氯化锌； 所述药物组合物的最终PH在4至5的范围内； 所述乙酸盐和/或乙酸与所述肽类似物的摩尔比率范围为约11至61; 所述肽类似物与锌的摩尔比率范围为约6 1至1 1。
2.根据权利要求1的药物组合物，其中所述肽类似物的一部分和所述乙酸盐的一部分以肽类似物的盐形式存在。
3.根据权利要求1或2的药物组合物，其中所述药物组合物的最终pH为4.5士0. 1。
4.根据前述权利要求中任一项的药物组合物，其中所述液体选自无菌水或包含等渗剂如NaCl的无菌水。
5.根据前述权利要求中任一项的药物组合物，其中所述乙酸盐和/或乙酸与所述肽类似物的摩尔比率为约3. 2 1。
6.根据前述权利要求中任一项的药物组合物，其中所述肽类似物与锌的摩尔比率范围为约1. 5至1。
7.根据前述权利要求中任一项的药物组合物，其中所述二价金属和/或二价金属盐为氯化锌。
8.根据前述权利要求中任一项的药物组合物，其中 所述二价金属和/或二价金属盐为氯化锌； 所述药物组合物的最终pH范围为4. 5士0. 1 ； 所述乙酸盐和/或乙酸与所述肽类似物的摩尔比率范围为约3. 2 1 ； 所述肽类似物与锌的摩尔比率范围为约1.5 1。
9.根据前述权利要求中任一项的药物组合物，其中所述肽的浓度为10%重量/体积。
10.根据权利要求1至9中任一项的药物组合物，其中所述锌的浓度范围为0.重量/体积至2. 35%重量/体积。
11.根据前述权利要求中任一项的药物组合物，其中所述组合物在5°C的温度稳定至少1年的时间。
12.根据前述权利要求中任一项的药物组合物，其中对所述组合物进行配制以使根据式(I)的化合物在个体内释放至少约1周，优选2周。
13.根据前述权利要求中任一项的药物组合物，其中在不冻干所有组分的情况下、优选通过将所有组分混合在一起而制备所述药物组合物。
14.根据前述权利要求中任一项的药物组合物，其被置于容器中，所述容器优选为预填充注射器。
15.用于制备根据前述权利要求中任一项的药物组合物的方法，包括以下步骤 A.将液体、乙酸盐和/或乙酸和肽类似物混合；以及B.加入所述二价金属和/或二价金属盐并将其溶解。
16.权利要求15的方法，其还包括以下步骤C.无菌过滤由步骤B产生的组合物；以及D.用所述组合物填充容器。
17.预填充注射器，其含有根据权利要求1至9中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含 作为液体的水(qs 210 μ 1)； 21mg 根据式(I) [Aib8'35] hGLP-1 (7-36) NH2 的肽类似物； 0. 571mg作为二价金属盐的氯化锌； 乙酸； 所述药物组合物的最终pH为4. 5 士 0. 1 ； 所述乙酸与所述肽类似物的摩尔比率为约3. 2 1 ； 所述肽类似物与锌的摩尔比率为约1.5 1。
全文摘要
本发明涉及持续释放液体药物组合物，其包含液体、根据式[Aib8，35]hGLP-1(7-36)NH2的肽类似物、二价金属和/或二价金属盐、以及乙酸盐和/或乙酸。本发明还涉及包含药物组合物的容器和用于制备药物组合物的方法。
文档编号A61K38/26GK102405055SQ201080006820
公开日2012年4月4日 申请日期2010年2月8日 优先权日2009年2月9日
发明者A·布罗沙尔, N·莫恩多利 申请人:益普生制药股份有限公司