治疗血管损伤的方法

专利名称：治疗血管损伤的方法
技术领域：
本发明涉及治疗血管损伤，诸如病毒相关损伤的方法，其使用抗血管生成性化合物，或血管溶解或消融激光疗法和抗血管生成性化合物的施用的组合来进行。
背景技术：
发音粘膜损伤，诸如病毒相关损伤(例如乳头状瘤)经常用手术治疗，包括显微喉冷器械(例如显微剪、显微钳(Kleinsasser, "Laryngeal Papillomas inChildren，” 于 MicrοIarynROscopγ and EndolarynReal MicrosurRery. 1968，W. B.Saunders Philadelphia.第 70 页-第 75 页；Zeitels 和 Sataloff, J. Voice, 13 :1323-127(1999)； Zeitels, Atlas of PhonomicrosurRery and OtherEndolarynReal Procedures for Benign and Malignant Disease. 2001，Singular :San Diego.)、和显微清创器(ΕI-Bitar 禾口 Zalzal，Arch. Otolaryngol. Head. Neck. Surg. 128(4) :425-8(2002) ；Zweig 等，Am J Rhinol，14(l) :27-32(2000)),消融激光(例如二氧化碳(Strong 等，Otol. Rhinol. Laryngol. 85 :508-516(1976))禾口 丟(Zeitels, Ann Otol Rhinol Laryngol，115 891-896(2006))来治疗。新近，光血管溶解性激光(例如532-nm脉冲磷酸氧钛钾(KTP) 激光(Burns 等，Laryngoscope, 117(8) :1500-1504(2007) ；Zeitels 等，Current Opinion inOtolaryngology & Head & Neck Surgery, 15 :394-400(2007) ；Zeitels φ, AnnOtol Rhinol Laryngol,115 :679-685(2006) ；Zeitels φ, Ann Otol Rhinol Laryngol,115 571-580(2006) ；Zeitels 等，Annals of Otology，Rhinology，& Laryngology，117 ( ±曾干Ij 199) :1-24(2008))或 585-nm脉冲染料激光(PDL) (Franco 等，Ann OtolRhinol Laryngol, 112 :751-758 (2003) ；Franco 等，Annals of Otology, Rhinologyand Laryngology,111 486-492 (2002) :Zeitels, Papillomatosis.于"Atlas ofphonomicrosurgery and other endolaryngeal procedures for benign and malignantdisease" ( M 119 ~ M 131 页).San Diego :Singular (2001) ；Zeitels 等，Ann OtolRhinol Laryngol,113(4) 265-276(2004))已经作为用于治疗这些病症的最好的手术选项出现。由于光血管溶解性激光能够选择性靶向损伤的损伤内血管发生微循环，其在精确治疗喉乳头状瘤病中是特别有价值的。然而，没有手术方法可靠地预防复发，即使在与辅助疗法，例如与抗病毒化合物诸如西多福韦偶联时(De Clercq, Intervirology. 40(5-6) :295-303(1997) ；Gross, Intervirology. 40(5-6) :368-77 (1997))。此外，已经报告了用抗病毒剂的辅助治疗引起无法弥补的声带粘膜瘢痕化和永久的声嘶(Lee和Rosen，J Voice, 18 (4) =551-556 (2004)) 0发明概述如本文中所描述的，单独地或与细胞减少性治疗，例如光血管溶解性激光治疗，例如脉冲KTP激光光血管溶解组合施用抗血管生成剂，例如抗VEGF化合物，例如Avastin增强血管生成性病毒损伤，例如声门乳头状瘤病的治疗。因此，本发明提供了用于治疗血管生成性损伤(包括病毒相关损伤)的方法，其使用抗血管生成性化合物的施用来进行，任选地与减缩血管生成性损伤的细胞减少性治疗，例如冷器械手术、冷冻疗法、射频、电手术、和/ 或激光联合。如此，在一个方面，本发明提供了用于在受试者中局部治疗(例如注射)在实质内器官、粘膜或皮肤内具有血管组分的新生物或损伤(例如病毒诱导的血管损伤，例如上皮血管损伤)的方法。该方法包括对受试者施用一定量的血管发生抑制剂，并酌情将损伤暴露于足以实质性减缩损伤的细胞减少性治疗。在一些实施方案中，所述损伤是由人乳头状瘤病毒(HPV)引起的乳头状瘤。在一些实施方案中，所述血管发生抑制剂是抗VEGF化合物， 例如抗VEGF抗体，例如贝伐单抗。可以通过例如对损伤或对损伤相邻的组织的局部施用来对受试者系统或局部施用血管发生抑制剂。在一些实施方案中，通过选自下组的激光来提供任选的细胞减少性治疗ω2激光、NdiYAG激光、铥激光；和Er，CriYSGG激光；在一些实施方案中，通过选自下组的激光来提供细胞减少性治疗532-nm脉冲磷酸氧钛钾(KTP)激光或585-nm脉冲染料激光(PDL)。在一些实施方案中，通过冷器械，例如显微剪和显微钳或显微清创器来提供任选的细胞减少性治疗。在一些实施方案中，任选的细胞减少性治疗是通过例如冷冻疗法、射频、或电灼术提供的消融组织治疗。在一些实施方案中，损伤是上皮肿瘤，和/或存在于受试者的皮肤上。在一些实施方案中，损伤可以存在于受试者的任何粘膜组织上，或者在器官中，例如在呼吸道、生殖泌尿道、或上消化道或下消化道(即从口腔至直肠)中。在一些实施方案中，损伤存在于内部器官(例如脾、肺、肝或肾)上。在一些实施方案中，受试者患有复发性呼吸道乳头状瘤病。在一些实施方案中，方法进一步包括例如在随后的时间再施用一剂或多剂所述血管发生抑制剂。还可以例如在损伤的复发事件中超过一次实施本文中所描述的方法。除非另有定义，本文中所使用的所有技术和科学术语与本发明所属技术领域普通技术人员的通常理解具有相同的意义。本文中描述了本发明中使用的方法和材料；也可以使用本领域中已知的其它合适的方法和材料。材料、方法、和例子仅是例示性的，而并不意图为限制性的。通过提及而完整收录本文中所提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目、和其它参考文献。在冲突的情况中，应当以本说明书(包括定义)为准。从以下详细的描述和图看，以及从权利要求书看，本发明的其它特征和优点会是明显的。附图简述图IA是显示40岁龄古典歌唱家的声门中的两侧复发性呼吸道乳头状瘤病的照片。他已经经历了多次532-nm脉冲KTP血管溶解性激光规程，其保持发音粘膜柔韧性，但是不预防疾病复发。图IB是显示内收期间与IA中相同的检查的照片。图IC是显示在右声襞的上皮下浅层固有层中给予与图IA中所显示的同一患者的 7. 5mg贝伐单抗的基于诊所的注射的照片。输注已经在视觉上使右侧的疾病在尾侧移位。图ID是显示贝伐单抗注射后在与IC相同的日子(及在同一名患者中)在两侧对疾病完成的基于诊所的532-nm脉冲KTP光血管溶解使用的照片。注意，经激光治疗的区域中的白色焦痂，而且0. 3-mm纤维(箭)与左声襞的前连合区内的外生性损伤接触。图IE是显示外展(打开)期间同一名患者的声襞的照片。在第二次注射后中断激光规程。随后，患者再经历总共3次注射。自最后一次注射起已经过去6个月，并且没有看到活动性疾病。图IF是显示内收(闭合)期间与IE中相同的视图的照片；有声门入口中注意到的实质性分泌，这与回流史一致。图2A和2B是显示使用本文中所描述的方法治疗之前(1A，显示了气道的重度阻塞)和之后(IB)，与图IA-F中所显示的患者不同的患者的声襞的照片。图IB显示了在贝伐单抗的基于诊所的注射期间拍摄的照片。图3是显示来自在治疗之前和之后由患者完成的声音相关生活质量(V-RQOL)调查的结果的柱形图。得分越大指明声音相关生活质量越好。星号标示缺少数据(关于解释， 见实施例1)。图4是显示来自治疗之前和之后阅读标准段期间平均基础频率的声学评估的结果的柱形图。网纹区分开标示男性和女性患者的正常数值的范围。星号标示缺少数据(关于解释，见实施例1)。图5是显示来自治疗之前和之后持续的元音产生期间谐噪比的声学评估的结果的柱形图。网纹区标示正常数值的范围。星号标示缺少数据(关于解释，见实施例1)。图6是显示来自治疗之前和之后标准的音节串的产生期间声音压力水平与声门下空气压力(分贝/厘米水)的比率的空气动力学评估的结果的柱形图。网纹区标示正常数值的范围。星号标示缺少数据(关于解释，见实施例1)。发明详述本发明至少部分基于如下的发现，即单独地或与手术除去(例如使用冷器械、电灼术、射频、激光、或冷冻疗法进行)组合施用抗血管生成性化合物可用于治疗慢性病毒相关的血管生成性微血管损伤，这提供改善的临床结果和降低的复发概率。与血管溶解性激光组合使用抗血管生成性化合物是特别有效的。治疗方法本文中所描述的方法包括施用抗血管生成剂，并任选地，与抗血管生成剂的施用组合使用足以实质性减缩损伤(即降低其大小)的细胞减少性治疗。本文中所描述的方法包括用于治疗粘膜、皮肤、或实质内器官损伤关联的微血管相关生长的方法。在一些实施方案中，这包括受病毒的感染诸如病症乳头状瘤病，例如呼吸道乳头状瘤病。在一些实施方案中，所述方法包括对需要此类治疗或者已经确定为需要此类治疗的受试者施用治疗有效量的抗血管生成性化合物，如本文中所描述的，任选地与激光血管溶解性治疗联合。如本语境中所使用的，“治疗”意为改善病症的至少一项症状。例如，使用本文中所描述的方法的治疗可以导致损伤的大小或数目降低和复发的延迟或预防(即概率降低)。 如本文中所使用的，“预防”不需要在所有情况中100%阻止复发，但是是复发概率的显著降低。可以每周一次或多次(包括每隔一天一次)施用本文中所描述的治疗。熟练技术人员会领会，某些因素可以影响有效治疗受试者需要的剂量和时机，包括但不限于疾病或病症的严重性、先前的治疗、受试者的一般健康和/或年龄、和存在的其它疾病。此外，用本文中所描述的方法治疗受试者可以包括单次治疗或一系列治疗。细胞减少性治疗许多合适的细胞减少性治疗是本领域中已知的，例如光血管溶解性激光、消融激光、电手术、冷冻手术、射频、和冷器械手术规程。如此，本文中所描述的方法可以包括使用已知的光血管溶解性激光治疗，其使用选择性血红蛋白吸收聚焦激光光以破坏损伤。这包括532-nm脉冲磷酸氧钛钾(KTP)激光或 585-nm脉冲染料激光(PDL)。此类方法是本领域中已知的，而且描述用于伴有全身麻醉的显微喉手术(参见例如 Zeitels，“Papillomatosis，”于 Atlas of PhonomicrosurRery and Other EndolarynRealProcedures for BeniRn and MaliRnant Disease. 2001，Singular San Diego.第 119 页-第 131 页；Burns 等，Laryngoscope, 2007. 117(8) :1500-4 ；Franco 等，Ann. Rhinol. Laryngol.，2002 ；111 :486-492)及用作伴有表面局部麻醉的基于诊所的规程(Zeitels 等，Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 2004 Apr ； 113 (4) :265-76 ；Zeitels 等， Ann Otol. Rhinol. Laryngol. 2006 ；115 :679-685 ；Zeitels 等，Curr. Op. Otolaryngol. Head Neck Surg. 2007 ；15 :394-400)。在一些实施方案中，光血管溶解性激光治疗包括将损伤暴露于一次或多次来自血管溶解性激光源的脉冲。在一些实施方案中，应用血管溶解性激光治疗，直至观察到损伤(例如乳头状瘤)的转白。在一些实施方案中，细胞减少性治疗是消融激光治疗，例如使用CO2激光、Nd:YAG 激光、或Er，Cr YSGG激光进行，其是本领域中已知的。在其它实施方案中，细胞减少性治疗是采用冷器械(Kleinsasser， "Laryngeal Papillomas in Children,，， 于 Micro laryngoscopy and EndoIaryngealMicrosurgery. 1968, W. B. Saunders !Philadelphia.第 70 页-第 75 页，Zeitels 和 Sataloff，J. Voice，13 1323-127 (1999) ；Zeitels，2001，见上文)或消融激光诸如二氧化碳(Zeitels,2001,见上文；Strong 等，Otol. Rhinol. Laryngol. 85 508-516(1976))或铥激光(Zeitels 等，Ann Otol Rhinol Laryngol. 115(12) 891-6(2006))的手术治疗。也可以使用光显微手术，参见例如Zeitels和Sataloff， J. Voice. 13(1) :123-7(1999)。一般而言，应用任何治疗，直至实现足够的减缩或除去，即损伤的大小显著缩小。 在一些实施方案中，应用激光治疗，直至观察到损伤(例如乳头状瘤)的转白。关于更多信息，参见例如Silverman禾口Pitman，Curr Opin Otolaryngol HeadNeck Surg. 12(6) :532-7(2004) ；Gallagher 禾口 Derkay，Curr Opin Otolaryngol HeadNeck Surg. 16(6) :536-42(2008) ；Lee 禾口Smith,Curr Opin Otolaryngol Head NeckSurg. 13(6) 354-9(2005)；及 Goon 等，Eur Arch Otorhinolaryngol. 265(2) : 147-51 (2008)，Epub 2007 Nov 29。抗血管生成剂许多抗血管生成剂是本领域中已知的，其可以在本文中所描述的方法中使用。例如，抗血管生成剂可以包括血管他丁(angiostatin)(例如纤维蛋白溶酶原片段)、抗血管生成性抗凝血酶III (aaATIII)、canstatin、软骨衍生的抑制剂(CDI)、CD59补体片段、内皮他丁(endostatin)(例如胶原XVIII片段)、纤连蛋白片段、Gro-β、肝素酶、肝素及其片段(例如多聚己糖(hexasaccharide)片段)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、干扰素α/β/ Y、干扰素诱导蛋白(IP-IO)、IL-12、kringle 5 (纤维蛋白溶酶原片段)、金属蛋白酶抑制剂、2-甲氧雌二醇、PEDF、胎盘核糖核酸酶抑制剂、血小板因子_4、促乳素16kD片段、增殖蛋白相关蛋白、类视黄醇、四氢皮质醇-S、血小板反应蛋白、转化生长因子-β、肿瘤抑制素 (tumistatin)、血管抑制素(vasculostatin)和血管生成抑制素(vasostalin)(钙网蛋白片段)、烟曲霉素、非糖皮质素类固醇、和针对一种或多种血管生成肽诸如α -FGF, bFGF、 VEGF, IL-8、和GM-CSF的抗体。许多其它抗血管生成剂记载于美国专利No. 7，422，738，通过提及而将其完整收入本文。在一些实施方案中，抗血管生成剂阻断VEGF信号传导。存在有至今已经使用的至少三种用于阻断VEGF信号传导的方法。第一种方法是使用抗体来抑制VEGF(例如 VEGF-A, -B、-C、-D、PGF)禾Π / 或 VEGFR(例如 VEGFR-1、-2、-3)。例子包括Avastin(贝伐单抗(bevacizumab))，即一种重组人源化单克隆抗体，其结合VEGF-A，而且阻止 VEGF-A 对 VEGFR-I 和 VEGFR-2 的相互作用(参见例如 Presta 等，Cancer Res. 57 4593-4599(1997) ；Hurwitz 等，N. Engl. J. Med. 350 :2335-2342(2004)) ；2C3,即一种针对 VEGF-A 的小鼠单克隆抗体(Zhang 等，Angiogenesis. 5 :35-44(2002) ；Brekken 等，Cancer Res. 58 :1952-9(1998)) ； IMC-1121B,即一种针对 VEGFR-2 的人单克隆抗体(Rockwell 和 Goldstein，美国专利 No. 6，811，779) ；CDP-791,即结合 VEGFR-2 的 PEG 化的、人源化二 Fab 片段 CTon 等，Clin. Cancer Res. 13 :7113-711 (2007)) Lucentis (兰尼单抗 (ranibizumab))是一种结合VEGF-A的重组人源化单克隆抗体，但是其批准的用法用于治疗新血管年龄相关的黄斑变性患者(可获自Genentech)。第二种方法使用蛋白质激酶抑制剂来抑制VEGFR(例如VEGFR-1、_2、_3)。出售至少两种已知的得到FDA批准的小分子抑制剂=Sutent (舒尼替尼(sunitinib)) (Goodman 等，Clin. Cancer Res. 13 :1367-1373(2007))和 Nexavar (索拉非尼(sorafenib)) (Kane
Clin. Cancer Res. 12 :7271-8 (2006))。其它激酶抑制剂包括但不限于瓦他拉尼 (Vatalanib) (PTK787/ZK222584)，其抑制 VEGFR-U _2、和-3 (Wood 等，Cancer Res. 60 2178-2189(2000)) ；CEP-7055，即 VEGFR_1、_2、和-3 的抑制剂(Ruggeri 等，Cancer Res. 63 5978-5991 (2003)) ；CP-547, 632，即 VEGFR-2 和 FGF 的抑制剂(Beebe 等，Cancer Res. 63 7301-7309(2003))ο第三种方法使用所谓的“VEGF-陷阱”，即可溶性杂合VEGF受体，其结合VEGF配体， 而且阻止结合 VEGFR (Holash 等，Proc. Natl. Acad. Sci. 99 11393-11398 (2002)) 在一些实施方案中，抗血管生成剂是抗血管内皮生长因子(VEGF)剂，例如用于抑制VEGF结合KDR和/或fit受体的抗VEGF抗体或其抗原结合部分(诸如Fv、Fab、 或scFv部分)，例如Avastin (贝伐单抗)。Avastin是一种在体外和在体内都结合人 VEGF，而且抑制人VEGF的生物学活性的重组人源化单克隆IgGl抗体。贝伐单抗含有人框架区和结合VEGF的鼠抗体的互补决定区O^resta等，Cancer Res 57:4593-9 1997)。 Avastin 可获自 Genentech(South SanFrancisco, CA)。还可参见Schlaeppi 禾口 Wood, Cancer and Metastasis Rev. 1999 ；18 :473-481 ；美国专利 No. 7，169，901 ；7，056，509 ； 及 7，297，334 ；美国专利公开文本 No. 20020032315 ；20080187966 ；及 20090010883 ；及PCT NO.W094/10202。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合VEGF，并阻断结合VEGFRl、 VEGFR2,或者阻断结合VEGFRl和VEGFR2两者。其它抗VEGF剂包括VEGF拮抗剂，其可以与VEGF竞争结合KDR和/或fit受体 (例如结合VEGF的可溶性截短形式的fit受体，如记载于例如W094/21679的)；和酪氨酸激酶抑制剂。在一些实施方案中，抗血管生成剂不是环加氧酶(C0X)_2的抑制剂，例如不是塞来考昔(celecoxib) (4_ (5_ (4_甲基苯基)_3_ (三氟甲基)-IH-吡唑-1-基)苯磺酰胺，CELEBREX )。抗血管生成剂也不是干扰素、吲哚_3_甲醇、甲氨蝶呤、或西多福韦 (Cidofovir)。在一些实施方案中，抗血管生成剂是一种靶向VEGF或VEGFR的小干扰 RNA(siRNA)，例如 Bevasiranib (Cand5 ；ΟΡΚΟ Health ；一种靴向所有 VEGF-A 剪接形式的经修饰的 siRNA)或 AGN-745 (Sirna-027 ；Merck ；一种靶向 VEGFR-I 的经化学修饰的 siRNA)， 参见例如 de Fougerolles,Human GeneTherapy 19 :125-132(2008)；和抗 VEGF 适体(例如 Macugen (喊力口他尼(pegaptanib) ；OSI Pharmaceuticals,—种 PEG 化的抗 VEGF—A 适体)， 参见例如 Tremolada 等 Am. J. Cardiovasc. Drugs 7 :393-398 (2007))。邏可以对要治疗的组织例如系统或局部施用抗血管生成剂。施用路径的例子包括胃肠外，例如静脉内、粘膜内、粘膜下、皮内、皮下、经粘膜(例如吸入)、口服、经皮(表面)、和直肠施用。例如，可以通过注射入损伤中或在损伤周围注射来施用抗血管生成剂。例如，可以在皮肤或粘膜损伤、良性或恶性新生物、或炎性疾病的表面内或正好在皮肤或粘膜损伤、良性或恶性新生物、或炎性疾病的表面下注射抗血管生成剂。或者，它们可以通过血管造影术或通过直接手术达到供应病理区的动脉来动脉内施用。这些损伤内和/或损伤下注射，或动脉内注射可以导致完全退化、部分退缩或体积缩小。抗血管发生药物的这些局部和区域性注射可以伴有粘膜消融规程诸如冷器械(例如钳、剪、自动化清创器)、激光、电灼术、射频、和/或冷冻疗法。在一些实施方案中，可以使用抗血管生成剂向实体瘤或粘膜癌中的动脉内、损伤内和损伤下注射来增强其它癌症治疗诸如放射疗法、细胞毒性消融化学疗法、或者甚至手术。在所述后一种模型中，可以在切除粘膜肿瘤时使用抗血管生成剂以增强局部控制。若癌症周边有区域性发育异常(fielddysplasia)，并且切除包括发育异常的整个该区域会由于涵盖癌前和癌性组织的整个区域而导致极端的发病率，可以将抗血管发生剂注射入癌症中，以及施用至围绕发育异常的周边。这可以减少与软组织的宽边缘完全除去直至边缘完全正常有关的发病率。此情况在呼吸消化道和生殖泌尿肿瘤中不罕见。与侵入性癌症相邻的判定(condemned)粘膜或真皮的发育异常边缘的此情况在呼吸消化和生殖泌尿道及皮肤中是普通的。在治疗粘膜疾病中使用抗血管生成剂的方法的一些实施方案中，将药剂局部且表面应用于粘膜或皮肤表面。通过改变抗血管生成剂的递送，可以使用它来表面治疗皮肤、呼吸消化道或生殖泌尿系统的疾病。以气道中的乳头状瘤为例，可以作为吸入剂使用抗血管生成剂以经由粘膜来表面吸收至损伤中。对于炎性疾病、癌前发育异常或癌症区域，也可以在要直接对皮肤应用的乳膏中施用抗血管生成剂。临床医生也可以将其表面放置于皮肤或粘膜表面，诸如喉、咽、膀胱、和宫颈。配制剂警控释放配制剂通常，将药物组合物配制成与其意图的施用路径相容。配制合适的药物组合物的方法是本领域中已知的，参见例如系列书籍Drugs and thePharmaceutical Sciences :a Series of Textbooks and Monographs (Dekker, NY)。例如，用于胃肠外、皮内、或皮下应用的溶液或悬浮液可以包括下列组分无菌稀释剂诸如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成的溶剂；抗细菌剂诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐和用于调节张力的试剂诸如氯化钠或右旋糖。可以用酸或碱，诸如氢氯酸或氢氧化钠来调节PH。一种用于提高抗血管生成剂治疗皮肤或粘膜损伤的效力的策略是使用受控释放配制剂来延迟药物向组织的释放。存在有多种用于延长药物在软组织中的停留时间的选项。可以以本领域技术人员熟悉的多种方式来实现抗血管生成剂的延迟释放，包括使用微球或毫微粒，或者将药物包埋在合适的载体(诸如组织扩张剂/填充剂)中，所述载体对于局部组织是惰性的或者对局部功能甚至可能是有益的，诸如会恢复声带功能的生物材料。在受控释放配制剂中使用的生物可降解聚合物是本领域中已知的，例如对于聚合植入物或微囊剂或毫微球或微球，包括聚(乳酸共乙醇酸)PLGA微球；D，L-乳酸低聚物；聚乳酸或共聚(乳酸/乙醇酸)的微囊剂；聚(α-羟酸)微球；聚酐微球；透明质酸水凝胶。参见例如Putney和 Burke, Nature Biotechnology 16 153-157(1998) ；Talmadge, Adv. Drug Del. Rev. 10 247-299(1993) ；Cleland 和 Jones，Pharm. Res. 13 :1462-1473(1996) ；Tian 等，J. Control-Release, 102 (1) :13-22(2005) ；Grainger, Exp. Op. Biol. Ther. 4(7) :1029-1044(2004)；美国专利申请公开文本 No. US20050019400 ；20070160617 ；EP0659406B1 ；EP0765659A1 ；美国专利 No. 5980945 ；及 W0/2006/047279A2 等。在一些临床情况中，组织需要用恢复功能的生物材料或细胞构建物来增大和重建，并且这些生物材料或细胞构建物可以充当抗血管生成剂的载体。在一些实施方案中，在除去具有进行中的局部疾病生长的肿瘤(例如皮肤)后可以有软组织缺陷，并且可以期望使用组织增大填充剂来降低缺陷的出现。组织增大填充剂可以携带抗血管生成剂。若存在有病理诸如粘膜乳头状瘤病(例如在呼吸消化或生殖泌尿道中)、皮肤损伤、或胃肠损伤 (例如血管发育不良、腺瘤、或巴雷特(Barrett)氏食管)的收缩，则使用此类配制剂可以是特别想要的。延迟或受控的药物递送甚至可以减少粘膜或皮肤消融的量或者可能消除对粘膜消融规程的需要。这些观念通过喉中的复发性呼吸道乳头状瘤病、癌前发育异常和癌症的例子来例示。在这些情况中，用于治疗前述疾病的常见规程常常导致声襞的分层显微结构的实质性丧失，这导致发音粘膜僵硬。然而，尽管有现有的减少规程，但是仍经常有进行中的粘膜疾病。在此情况中，生物材料植入物或细胞移植物在携带用于使疾病退化的抗血管生成剂时可以恢复丧失的上皮下软组织。MS可以通过例如细胞培养物或实验动物中的标准药物规程(例如用于测定LD50(50%的群体致死的剂量)和ED50(在50%的群体中治疗有效的剂量))来测定化合物的剂量、毒性和治疗功效。毒性与治疗效果之间的剂量比率是治疗指数，而且它可以表示为比率LD50/ED50。展现出高治疗指数的化合物是优选的。虽然可以使用展现出毒性副作用的化合物，应当注意设计如下的递送系统，其将此类化合物靶向至受影响的组织的部位以使对未感染的细胞的潜在损伤最小化，并且由此降低副作用。虽然对于本文中所描述的许多药剂，关于合适剂量的指导会是本领域中可获得的，也可以凭经验确定最佳的剂量。可以在配制用于人的一系列剂量中使用自细胞培养测定法和动物研究获得的数据。优选地，此类化合物的剂量位于包括ED50的循环浓度范围内，具有很少的毒性或没有毒性。剂量在此范围内可以有所变化，这取决于所采用的剂量形式和所利用的施用路径。对于本发明方法中所使用的任何化合物，最初可以自细胞培养测定法评估治疗有效剂量。可以在动物模型中配制剂量以达到循环血浆浓度范围，其包括 IC50(即，测试化合物实现对症状的半最大抑制时的浓度)，如细胞培养物中所测定的。可以使用此类信息来更精确地确定可用于人的剂量。可以通过例如高效液相层析来测量血浆中的水平。“有效量”指足以实现有益的或想要的结果的量。例如，治疗量是实现想要的治疗效果的量。此量可以与预防有效量相同或不同，预防有效量是预防(即降低概率)疾病或疾病症状的发作必需的量。可以在一次或多次施用、应用或剂量中施用有效量。组合物的治疗有效量取决于所选定的组合物。病毒相关损伤在哺乳动物中诱导损伤(例如肿瘤)的病毒是相当普遍的。在一些实施方案中， 病毒相关损伤是由人乳头状瘤病毒(HPV)引起的。可以导致肿瘤的其它病毒类型包括多种 RNA病毒及疱疹病毒。在一些实施方案中，损伤不是癌性的。虽然此类肿瘤也可以在其它方面健康的个体中出现，但是具有受阻抑的免疫系统的人，诸如那些被人免疫缺陷病毒(HIV)感染的人易于HPV感染，其能在他们的整个身体里引起肿瘤生长，这对受累及个体产生极大的精神和身体痛苦。人乳头状瘤病毒(HPV)人乳头状瘤病毒(HPV)是一种对上皮细胞具有向性的双链DNA病毒，而且与肿瘤形成有关。已经鉴定出超过100类HPV，其中68种能诱导肿瘤形成。已经将这些 HPV中的一些，例如6和11型与良性肿瘤(诸如常见的疣)联系起来，其可以在粘膜组织诸如上胃肠和呼吸道及生殖泌尿道中，以及在所有年龄组中发生(参见例如Dickens 等，J Pathol. 165(3) :243-6 (1991))。其它病毒已经被强烈暗示为受感染的哺乳动物的口腔(参见例如 Gi 1 Iison，Semin. Oncol. 31(6) :744-54(2004)；及 Gillison 和 Lowy, Lancet, 363 (9420) :1488-9(2004))和生殖粘膜的发育异常和癌瘤中的病因学媒介物； 将 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、和 82 型分类为“高风险”HPV。参见 例如"Supplement !Assessing the Burden of HPV-Associated Cancers in the UnitedStates. ” Cancer. 113 (SlO) :2837-3057(2008) ；Munoz 等，New Engl. J. Med. 348 (6) 518-527(2003)。可以使用标准的方法，例如ALA-D-光荧光诊断来做出乳头状瘤病的诊断。复发性呼吸道乳头状瘤病(RRP)是常见的，而且事实上是儿童中最常见的喉良性新生物(在儿科群体中约十万分之 3. 96) (ffiatrak, Curr. Opin. Otolaryngol. Head Neck Surg. 11(6) :433-41 (2003))。因为青少年和成人都发作的喉RRP不是常规可治愈的，所以流行性实质上大于每年的新病例发生率。虽然为良性，但是显著的发病率和偶然的死亡率与多次复发有关，这可以需要医院收治以进行手术除去。生长散布或延伸入下气道中一般指明较差的预后。临床行为是可变的，并且损伤可以消退，持续以及在罕见的情况中，若牵涉其它环境因素诸如吸烟或照射的话，进展成癌瘤。单纯疱疹病毒已经描述了单纯疱疹病毒相关的多形性红斑(HAEM)，参见例如Aurelian 禾口 Burnett, ‘‘Current understanding of herpes simplex virus-associated erythemamultiforme, " Exp. Rev. Derm. Aug. 3 (4) :491-499(2008)。其它病毒相关的损伤其它病毒相关的损伤包括埃巴病毒(EBV)相关的损伤，例如EBV相关的牛痘样水疱病(HV)样皮肤损伤。非病毒损伤也可以使用本文中所描述的方法来治疗可以与病毒感染有关或无关的血管损伤 (例如生长或肿瘤)。例如，其它血管发生新血管过程包括消化道的血管发育不良、肺和气管支气管树的血管损伤、遍及呼吸消化道的腺瘤性息肉、血管瘤(皮肤、粘膜、器官)、和血管炎诸如韦格纳(Wegener)氏肉芽肿病和贝切特(Behcet)氏病。在一些实施方案中，损伤是上皮细胞肿瘤，例如非癌性上皮细胞肿瘤。
实施例本发明在以下实施例中进一步描述，所述实施例不限制权利要求书中所描述的发明范围。实施例1 =AVASTINn的显微喉镜检杳的且基于诊所的注射以增强声襞乳头状瘤病的血管溶解(532nm KTP激光，585nm脉冲染料激光)激光治疗光血管溶解性激光通过在保持发音粘膜的柔韧性的情况中使疾病退化来有效治疗声门乳头状瘤病。然而，此方法没有可靠地阻止复发。因此，评估抗血管生成剂贝伐单抗 (AVASTIN )的损伤内/损伤下注射以确定对疾病复发和发音粘膜柔韧性/功能的影响。材料和方法在10名顽固性声门复发性呼吸道乳头状瘤病(RRP)患者的试验组中实施回顾调查，所述患者具有先前的血管溶解性激光治疗及建立的复发样式。10名中的3名呈现患有气道阻塞，而正在对10名中的7名治疗与频繁的疾病复发有关的声功能障碍。与相隔4至 6周的脉冲KTP激光光血管溶解治疗一起使用向患病声襞中的上皮下(在浅层固有层内) 贝伐单抗注射(5至IOmg)，直至激光消融因它对于维持最佳的声功能不是必需的而被中断 (

图1A-F)。患者经历5至10mg(0. 2至0. 4mL :2. 5mg/0. 1上皮下浅层固有层中由于在先规程而存在的瘢痕化的量，并且治疗时间间隔部分基于患者的旅行约束的实际考虑因素) 的5次贝伐单抗注射的初始系列。与在先的描述(Zeitels等，Arm OtolRhinol Laryngo 1, 113 :265-76(2004))类似地，通过比较使用贝伐单抗之前和之后的诊所喉显微镜检查的发现来量化疾病评估。
与使用通用模块声门镜(EndocraftLLC) (Zeitels，Ann Otol RhinolLaryngol Suppl，108(增刊179) :2-24(1999)) —起在手术室中用显微喉镜输注针(Endocraft LLC, Winter Park, Florida)(Zeitels 禾口 Vaughan, Otolaryngol HeadNeck Surg,105 478-9(1991))完成贝伐单抗注射。先前已经详述了解剖基本原理和规程技术(kitels， Laryngoscope, 105( ±曾干Ij 67) 1—51 (1995))。用 Ford 系统(Medtronic Inc,Minneapolis, Minnesota) (Ford, Otolaryngol Head Neck Surg，103 : 1；35_7 (1990))及严格的窥镜指导 (KayPENTAX, Lincoln Park, New Jersey ；Ford φ, Laryngoscope, 108 :1584-6(1998))或通过Amin的经颈技术及灵活的喉镜控制(KayPENTAX) (Amin，Ann Otol Rhinol Laryngo 1, 115 :699-702(2006))来给予基于诊所的注射。患者在一系列的贝伐单抗注射之前和之后经历标准的声音评估。这些包括电视动态镜检法、完成声音相关生活质量调查(V-RQOL) (Hogikyan和kthuraman，J Voice, 13 :557-69(1999))、和声功能的客观声学和空气动力学测量。由于其依赖于主观判断，不使用来自电视动态镜检记录的观察结果作为正式的数据，并且仅包含在讨论声功能测量的结果的背景中。先前已经描述了用于获得声功能的声学和空气动力学测量的方案的详情 (Zeitels 等，AnnOtol Rhinol Laryngol Suppl，107 (增刊 173) :2_24 (1998))。在可能时， 对个体患者描述性比较注射后测量与注射前测量及历史标准(同上)。结果与他们仅激光治疗的先前声门复发样式相比，所有10名患者(20个声襞)在维持或改善粘膜柔韧性的同时具有超过90%的复发降低。另外，10名患者中的7名(20个声襞中的14个)具有疾病的完全临床消退。在那7名患者中，4名具有临床消退，而3名在停止贝伐单抗注射后8至10周形成轻度复发。然而，所有3名通过使用诊所注射而不用激光消融以卓越的功能得到维持。10名患者中在一系列的5次注射后没有实现临床消退的所有三名都已经呈现出患有气道阻塞。随着时间的过去，3名中的1名表明非常有限的上皮疾病， 其证明进行中的注射正当(见图2A-B)，但是不需要发音粘膜的手术消融治疗。因此，目前消退10例病例中的4例，并且10名患者中的4名具有有限的复发性或持续性疾病，而且以 8至12周时间间隔注射贝伐单抗，在某种程度上如在张力失常模型中的。10名患者中的2 名继续接受与贝伐单抗注射组合的基于诊所的KTP激光治疗。这两个个体最初已经呈现出具有气管切开术。总之，没有患者需要伴有全身麻醉的显微喉手术，并且10名患者中仅2 名(20个声襞中的4个)仍需要声襞膜的基于诊所的激光治疗。由于贝伐单抗注射而没有系统或局部并发症。在此试验研究中，利用四项主要声音评估测量的亚组来评估新的治疗方案对声功能的影响。测量包括总体V-RQOL评分、阅读标准段期间的平均基础频率尔0:声音调)、持续的元音期间的谐噪比(NHR 声音质量)、和标准的音节串的产生期间口声压力水平与平均声门下空气压力之间的比率(以分贝/厘米水计声效率)。图3显示了 V-RQOL调查的结果。按此量表，O指明最低的声音相关生活质量，而100指明最高的声音相关生活质量。 在所有患者间，注射前得分(7名患者)范围为观至60，而注射后得分(10名患者)范围为 82至100。在治疗之前和之后完成V-RQOL的所有7名患者展现出注射后得分的显著增加， 范围为+30至+95。治疗前得分对于患者F2和F3 (他们最初在我们开始使用V-RQOL前评估)或对于患者M2 (其呈现出患有气道阻塞，而且被紧急带至手术室，之后可以完成任何治疗前声音评估)不可获得。对于剩余的声功能测量，对于患者Ml和M2没有治疗前声音评估数据，因为这两者都是失音症患者，而且一名呈现出具有气管切开术，而对于M7，因为技术困难而没有治疗后空气动力学测量。图4显示了阅读标准段期间的平均FO的结果，其中分开评估女性和男性数据，这是由于声音调的基于性别的正常差异(即平均女性音调在平均男性音调上约一个八度音)。患者Fl展现出治疗前异常升高的F(K249Hz)，然后，其在治疗后降低至低于正常值(161Hz)。患者F2的FO在治疗前在正常范围内O04Hz)，但是它在治疗后降低至低于正常水平(156Hz)。患者F3在治疗前展现出升高的F(K259Hz)，但是在治疗后展现出正常的 FO (199Hz)。7名女性患者中的6名具有落入正常范围内或者极其接近正常范围的治疗后 FO值。在治疗之前和之后具有FO评估的所有5名男性患者以范围为-3Hz至-122Hz的降低形式显示治疗后FO值的改善。仅患者M2显示显著升高的治疗后FO值。图5中显示了 NHR的声音质量相关测量的结果。10名患者中的9名展现出落入正常范围内或者极其接近正常范围的治疗后NHR值。在治疗之前和之后具有NHR评估的8 名患者中的7名显示范围为-0. 008至-0. 58的治疗后NHR值的改善，而一名患者在治疗之前和之后维持相同的正常NHR值。图6显示了音节产生期间声音压力水平与声门下空气压力的比率(分贝/厘米水)(其反映声效率)的结果。具有治疗后测量的9名患者中仅2 名达到正常的阈值。然而，在治疗之前和之后具有评估的所有7名患者显示范围为+0. 5至 +9. 9的治疗后声效率的改善。鉴于在局部注射西多福韦的情况中观察到的声音问题(已经报告了声襞瘢痕化和顽固性声嘶(Lee和Rosen，J Voice，18 :551-6 ^)04))，虽然根据化合物的先前使用， 有合理的舒适及有限的系统并发症风险，但是本研究在贝伐单抗的初始声门施用中非常慎重地进行。注射策略与眼科模型相当，对于眼科模型，具有关于以最小的困难在标签外使用贝伐单抗的广泛文献，尽管主要对老年群体(Fung等，Br J Ophthalmol 2006 ；90 1344-9(2006) ；Lynch 和 Cheng，Ann Pharmacother，41 :614-25 (2007))。虽然所采用的剂量比对眼所使用的剂量大约5至10倍，但是目前的剂量仍比系统性静脉内癌症治疗的剂量的十五分之一小(Zhu等，Am J Kidney Dis，49 186-93 (2007))。尽管有重复的手术，进行贝伐单抗的局部注射的最初的两名患者具有预示的慢性气道病损，而且其疾病的严重性迫使其尝试新的治疗策略。最初，仅注射一个声襞。观察到疾病复发速度(pace)显著降低及实质性声音改善后，也治疗第二声襞。然而，难以评估贝伐单抗对浅层固有层(发音粘膜柔韧性)的影响，这是因为这些患者在其它机构具有实质性在前手术。在所有10名患者中注意到鼓舞人心的且显著的结果；与在仅KTP激光治疗的情况中的在前复发样式相比，所有人都已经具有大于90%的改善。10名中的4名已经具有消退，使得他们不再具有可辨别的疾病。10名中的另4名患有显微镜疾病，其仅通过以8至 12周时间间隔的贝伐单抗的诊所注射来管理。目前，10名中仅2名需要进行中的声门激光治疗，这仅在诊所中完成，而且与在前的复发样式相比，复发是非常有限的。这些患者最初都呈现出患有表现为气道阻塞的重度疾病，而且他们中的一人具有气管切开术。本文中所报告的病例例示了 RRP患者的呈现和复发样式包括宽谱。基于本文中所显示的数据，不同的手术消融技术基本上不改变复发样式，这背离如下的实情，即较简单的技术经常导致更完全的除去。有效的手术技术主要实现在保持软组织和声音的同时以有时间效益的方式更全面地除去临床上可见的疾病。换言之，本数据没有提示保持声门的分层显微结构的任何目前的手术方法导致乳头状瘤病-宿主关系和/或复发样式的生物学变化。因而，会有对贝伐单抗的响应谱，及与疾病呈现谱相当的不同复发样式。关于声音结果，患者展现出治疗后声功能的实质性改善。这通过新的治疗方案后患者的其声音相关生活质量的自我评估的显著升高而得到最清楚地反映(见图5中的 V-RQOL结果)。大多数患者还具有声音质量(见图7中的HNR结果)和发音效率的治疗后改善，而且大多数患者实际上达到正常的治疗后NHR值。另一方面，即使声效率在每个单一病例中得到改善，仅两名患者达到完全正常的水平(图8)。这些结果与先前的观察结果一致，所述先前的观察结果为轻度持续性发音缺陷患者具有调节基础的空气动力学参数以达到或接近正常的声音质量的能力(Holmberg等，J Voice，17 :269-82 (2003))。动态镜观察结果确证客观声功能测试结果。声音质量(NHR)和声效率(分贝/厘米水)的改善表现为声襞粘膜波活动的幅度和对称的治疗后改善，及发音振动循环期间更完全的声门闭合。女性患者的治疗后FO值降低归因于被略微扩大(质量加载)且更柔韧的振动粘膜，正如它在这些患者的治疗后动态镜检查中的表现。在展现出显著升高的治疗后FO值的一名男性患者中的动态镜观察结果揭示声襞粘膜的动态段的持续及降低的粘膜波运动，其伴随紧张的、高音调的声音的印象，这无疑是初始手术管理对其疾病的结果。导入贝伐单抗作为药理学调控剂以治疗RRP的一个目的是减少基于诊所的激光干预12，23的数目，其中需要消融声门粘膜。先前已经建立了，通常可以避免成人RRP的显微喉镜治疗，这使多种全身麻醉剂的发病率最小化(Zeitels等，Ann Otol Rhinol Laryngol, 113 :265-76 (2004) ；Zeitels φ, Ann OtolRhinol Laryngol,115 679-85 (2006) ) 0本结果指明与对张力失常使用Botox的模型相似，药理剂的周期性基于诊所的注射的使用可用于保持声音和声襞的分层显微结构。实施例2 病例研究患者是一名职业歌手，其在声襞上形成复发性呼吸道乳头状瘤病。由于其对他的发音膜的影响，他不得不放弃他作为歌唱家的职业。他经历了其发音膜的疾病的显微喉镜完全除去。在接着的两个月里，疾病复发并恶化。两个月后，他经历了基于诊所的血管溶解性532nm KTP激光规程以根除该疾病。三个月后，他再次具有实质性复发，并且此后两个月， 该疾病比他8个月前的初始呈现更显著。在那时，患者具有弥散性血管生成性复发性呼吸道乳头状瘤病，其在两侧牵涉实质量的发音粘膜(在右声襞上在内侧及在左声襞上在前面的血管球状块)(图1A-B)。使用AVASTIN 的经口注射，向发音粘膜的右和左浅层固有层中输注AVASTIN (图1C)。使用 532脉冲KTP激光用0. 3mm纤维来使声襞的呼吸道乳头状瘤病消退(图ID ；在声襞上看到来自血管生成性乳头状瘤损伤的激光治疗的少量白色焦痂和有限的出血)。3个月后，他具有有限的复发，并再经历用血管溶解性KTP激光和AVASTIN 的基于诊所的联合治疗。在其下一次访问时，即3个月后，他没有可辨别的疾病，并再经历将 AVASTIN 在两侧注射入发音粘膜中。然后，在1个月后，他经历用AVASTIN 的发音声襞的最终的基于诊所的两侧注射，尽管没有可观察到的其疾病的复发。在贝伐单抗注射前，尽管有KTP激光治疗，此个体在8至10周中形成复发。自完成一系列贝伐单抗注射后，他在其最后一次注射后6个月没有疾病的临床证据，而且在10个月中尚未具有激光规程(图1E-F)。最值得注意的是，其唱歌不受限制，与其疾病前的状态相当。其它实施方案应当理解，虽然本发明已经结合其详述的说明书进行了描述，但是前述说明书意图例示而非限制本发明的范围，其由所附权利要求书的范围所限定。其它方面、优点、和修饰在所附权利要求书的范围内。
权利要求
1.一种在受试者中治疗具有血管组分的损伤的方法，该方法包括对所述损伤局部施用治疗有效量的血管发生抑制剂。
2.权利要求1的方法，进一步包括将所述损伤暴露于足以实质性减缩所述损伤的细胞减少性治疗。
3.权利要求1或2的方法，其中所述损伤是由人乳头状瘤病毒(HPV)引起的乳头状瘤。
4.权利要求1或2的方法，其中所述血管发生抑制剂是抗VEGF化合物。
5.权利要求4的方法，其中所述抗VEGF化合物是抗VEGF抗体。
6.权利要求4的方法，其中所述抗VEGF抗体是贝伐单抗。
7.权利要求1的方法，其中所述对损伤的局部施用是直接注射入所述损伤中或表面应用于所述损伤上，或者直接注射入所述损伤相邻的组织中或表面应用于所述损伤相邻的组织上。
8.权利要求7的方法，其中使用受控释放配制剂来局部施用所述血管发生抑制剂。
9.权利要求2的方法，其中通过选自下组的激光来提供所述细胞减少性治疗0)2激光、Nd:YAG激光、铥激光；Er，Cr:YSGG激光；532-nm脉冲磷酸氧钛钾(KTP)激光；或585-nm 脉冲染料激光(PDL)。
10.权利要求2的方法，其中通过冷器械来提供所述细胞减少性治疗。
11.权利要求2的方法，其中所述细胞减少性治疗是消融组织治疗。
12.权利要求1的方法，其中所述损伤是病毒诱导的血管损伤。
13.权利要求1的方法，其中所述损伤是上皮血管损伤或肿瘤。
14.权利要求1的方法，其中所述损伤存在于所述受试者的皮肤上；存在于所述受试者的粘膜组织上；或者存在于内部器官上。
15.权利要求14的方法，其中所述粘膜组织在所述受试者的呼吸道；消化道；或生殖泌尿道中。
16.权利要求2的方法，其中所述患者患有复发性呼吸道乳头状瘤病。
17.权利要求1-15中任一项的方法，进一步包括在随后的时间再施用一剂或多剂所述血管发生抑制剂。
全文摘要
描述了治疗病毒相关损伤的方法，其使用抗血管生成性化合物的施用，或血管溶解或消融疗法和抗血管生成性化合物的施用的组合来进行。
文档编号A61P31/12GK102333544SQ201080009616
公开日2012年1月25日 申请日期2010年2月5日 优先权日2009年2月6日
发明者S.M.蔡特尔斯 申请人:通用医疗公司