专利名称：预防和治疗神经退行性疾病的组合物和方法
预防和治疗神经退行性疾病的组合物和方法技术领域和
背景技术：
许多疾病是由蛋白和多肽结构的遗传性或获得性修饰引起的。当成分蛋白经历大小变化或形状变动并伴随所引起的自缔合及组织沉积例如淀粉样纤维时，就会发生构象病。在神经退行性疾病中，蛋白沉积在一大类病因不同的疾病中的作用越来越明显， 包括阿尔茨海默氏病、亨廷顿舞蹈症、帕金森氏病、克-雅二氏病、朊病毒病和二型糖尿病。 在每一种不同的疾病中，不同的内源性蛋白自组装成高度有序的纤维状结构。虽然在与这些疾病中的每一种相关的蛋白之间无特定的序列同源性，但是认为它们都涉及蛋白质中的重要构象变化，通常产生具有聚集成水不溶性纤维聚合物的强烈倾向的β-片层结构。帕金森氏病(PD)是继阿尔茨海默氏病(AD)后的第二最常见的神经退行性疾病， 其是一种无法治愈的破坏性的神经系统疾病，侵袭1-2%的老年人口。神经病理学标志的特征为在存活神经元中称为路易体(LB)和营养缺陷型路易神经炎(LN)的嗜酸性包涵体、胞浆内包涵体、蛋白质包涵体的存在下,黑质致密部(substantia nigra pars compacta)中含有多巴胺能神经元的神经黑素的进行性和严重损失。PD的临床特征为运动障碍，其涉及休息性震颤、运动迟缓、姿势不稳、以及伴有非运动性症状如自主的、认知的和精神病学问题的强直。这些病理特征的原因尚未完全弄清，但认为环境因素以及遗传原因或两者的结合会导致上述临床综合征。目前已知小于10%的PD病例具有严格的家族性病因，而多数病例是散发性的。在与家族性PD有关的突变中，已被普遍表征的是α -核突触蛋白(a -syn) 基因中的被称为A53T、A30P和E46K的三个错义突变[Lotharius, J.，和Brundin，P. (2002) Nat Rev Neurosci 3 (12)，932-942]。ci-syn蛋白由140个氨基酸残基组成。其是一种小而高电荷的天然非折叠蛋白。 最初确定其为LB和LN的主要组分。α -syn能够分为三个主要区域包含序列KTKEGV的若干不完整重复的氨基末端区域、称为非淀粉样组分(NAC)区域的疏水中心结构域以及特征为高度带负电荷氨基酸的羧基末端。其在中枢神经系统(CNQ神经元中显著表达，其位于突触前末梢，与突触囊泡接近并可通过形成两亲性α-螺旋而与类脂膜联系。α -syn与β -突触核蛋白(β -syn)和γ -突触核蛋白(Y -syn)是突触核蛋白的家族成员。β-syn和Y-syn最初在脑组织中发现，其主要位于突触前神经末梢，而α-syn 最初在外周神经系统和视网膜中发现，然而也发现其在某些肿瘤组织中高度表达，包括乳腺、卵巢和膀胱组织。三种突触核蛋白的序列高度保守，尤其是在它们的N末端结构域中。当比较 α -syn和β -syn的序列时，在疏水中心结构域具有主要差异；β -syn为134个氨基酸的蛋白，其缺少α-syn的NAC区域，因此在不同的应激条件下(如自由基或浓度升高)不会聚集形成淀粉样纤维。在多种神经退行性疾病的病例中，个体突触核蛋白之间定量比例的改变发生以达到α-突触核蛋白的相对比例增加的程度。可在体外检测到突触核蛋白能够以剂量依赖的方式抑制α-突触核蛋白的聚集(Hashimoto等，Neuron 32(2) :213-23 [2001])。由α-突触核蛋白过表达而引起正常细胞增殖和分化被破坏的细胞培养物的试验也显示了突触核蛋白在治疗意义上具有有利作用，其使这些培养物中神经突的粘附、存活和生长进一步正常化。α-突触核蛋白转基因的小鼠显示该白蛋白的产生升高，从而呈现出α-突触核蛋白和突触核蛋白之间的数量比例被破坏。在衰老的过程中，它们形成与路易体相似的神经元内包涵体并且也表现出进行性运动障碍，与帕金森氏病中的功能破坏相似。 如果将这些具有α-突触核蛋白的动物与具有β-突触核蛋白的转基因小鼠(显示该白蛋白的产生升高)杂交，显著升高的突触核蛋白总表达水平能够恢复稳态。因此，包涵体数量显著减少，并且可完全防止特征神经元功能丧失。认为α -突触核蛋白在阿尔茨海默氏病的病理学中发挥了极其重要的作用。这由这样的事实表明，即该蛋白的一部分，NACP(非淀粉样组分蛋白)结构域，显示为部分老年斑(Yoshimoto 等，Proc. Natl. Acad Sci 92，9141-5 [1995]和 W0-9506407)，以及另外的事实，即在约70%患有阿尔茨海默氏病的患者脑内的不同区域显示路易体，还发现了 α-突触核蛋白(Eizo等，Neurosci. Lett. 290(1)，41-4[2000])。在转基因小鼠模型中，β-淀粉样蛋白使α-突触核蛋白的聚集和神经毒性增加(Masliah等，Proc. Natl. Acad. Sci 98(21) :12245-50[2001])ο已描述了 β-突触核蛋白以及特别是由其衍生以破坏α-突触核蛋白聚集的肽。 参见，例如，W0/02/04482所述的八肽和W002/04625中的三种另外的肽。W0002/0020和 W001/60794描述了 β-突触核蛋白作为完整分子的应用或增加其体内表达以治疗与α-突触核蛋白相关的神经系统疾病的方法。特别是W0-A-01/60794还教导了使用相当于β-突触核蛋白的N末端氨基酸1至15的肽，以防止α-突触核蛋白和β-淀粉样蛋白聚集。同样，US2006/0036073和US20080200397教导了衍生自β -突触核蛋白的N末端氨基酸1至 15的短肽片段，以防止α-突触核蛋白和β-淀粉样蛋白的结合。U. S. 20010047032教导了用于治疗淀粉样变性和α -突触核蛋白原纤维病的芳香族化合物。Windisch等教导了集中于蛋白N末端氨基酸1至15的β -syn的缺失突变实验。他们创建了包含衍生自β -syn 的该序列的氨基酸组合物不同变异的肽库，其明确的目的是为了寻找能够立即用于治疗性应用的或能够用作发展模拟肽小分子的基础的肽(Windisch等，2004，J Mol Neurosci 24(1)，155-165)。
发明内容
根据本发明的某些实施方式的一个方面，提供了长度小于20个氨基酸的分离肽， 该肽包含氨基酸序列 GVLYVGSKTREGV(SEQ ID NO 12), AAATGLVKREE (SEQ ID N0:13)或 GVVAAAEKTKQG(SEQ ID NO 14)、它们的模拟物和/或片段，该肽能够抑制α -突触核蛋白聚集。根据本发明的某些实施方式的一个方面，提供了一种包含作为活性成分的如本发明所述的肽以及药学上可接受的载体的药物组合物。根据本发明的某些实施方式的一个方面，提供了一种抑制α-突触核蛋白聚集的方法，该方法包括使α-突触核蛋白与如本发明的肽接触，从而抑制α-突触核蛋白聚集。根据本发明的某些实施方式的一个方面，提供了一种治疗或预防与α-突触核蛋白聚集有关的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的对象给予治疗有效量的本发明的肽，从而治疗与α-突触核蛋白聚集有关的疾病。根据本发明的某些实施方式的一个方面，提供了一种检测α-突触核蛋白单体的方法，该方法包括(a)在允许单体和所述肽之间形成复合物的条件下，使所选的怀疑包含α -突触核蛋白单体的生物样品与本发明的肽接触；和(b)检测该复合物的存在或水平，从而检测α -突触核蛋白单体。根据本发明的某些实施方式，该肽包含至少一个芳香族氨基酸。根据本发明的某些实施方式，该肽包含至少一个碱性氨基酸。根据本发明的某些实施方式，该肽包含至少一个β-断裂子氨基酸(β-breaker amino acid)。根据本发明的某些实施方式，该β -断裂子氨基酸是合成氨基酸。根据本发明的某些实施方式，该β -断裂子氨基酸是天然存在的。根据本发明的某些实施方式，该氨基酸序列包含至少一个D-氨基酸残基。根据本发明的某些实施方式，该肽具有末端帽修饰。根据本发明的某些实施方式，该肽包含KTR或其模拟物。根据本发明的某些实施方式，该肽包含KTRE或其模拟物。根据本发明的某些实施方式，该肽包含KTREG或其模拟物。根据本发明的某些实施方式，该肽选自由SEQ ID NO :1、2、3、4、8、9、10、12和13组成的组。根据本发明的某些实施方式，该肽选自由SEQ ID NO 5和6组成的组。根据本发明的某些实施方式，该肽选自由SEQ ID NO :1、2、3和4组成的组。
根据本发明的某些实施方式，所述疾病选自由帕金森氏病(PD)、阿尔茨海默氏病 (AD)、弥漫性路易体病、混合性AD-PD、多系统萎缩和哈-斯二氏病组成的组。除非另有定义，本文中使用的所有技术和/或科学术语与本发明涉及的本领域普通技术人员所公知的术语具有相同的含义。虽然与本文描述相似或等同的方法或材料可用于实施或测试本发明的实施方式，但在下文中叙述了示例性方法和/或材料。在发生冲突的情况下，以专利说明书(包括定义)为准。此外，材料、方法和实施例仅仅是描述性的，并非意图做必要的限制。
本文中仅以举例的方式参照附图对本发明进行描述。本文中对附图的详细内容进行具体参考，是强调以实施例的方式显示详细内容并且仅意图对本发明的优选实施方式进行描述性讨论，并且是为了提供认为最有用和最容易理解的本发明的原理说明和概念层面而提出的。在这方面，与基本理解本发明所必需的细节相比，未试图更加详细地显示本发明的结构细节，结合附图进行的描述使得如何使本发明的几种形式在实施中体现对本领域技术人员是显而易见的。在图中图IA-图ID是作为α -Syn聚集抑制剂的β衍生肽的示意图。图ΙΑ. β -syn抑制α-syn聚集的形成。图1B.使用肽阵列分析进行β-syn结合序列对α-syn的分子定位。图1C.潜在的基于肽的α-syn聚集抑制剂。图1D.肽阵列技术的示意图(http:// worldwidewebdotjptdotcom/products/peptidearrays/pepspotsdothtm) 0
图2A-图2B是β-syn蛋白内的α-syn结合序列的筛选结果照片。图2A 在纤维素膜上合成与β -syn的连续重叠序列相对应的十聚体肽，并与β -syn孵化。α -syn序列中每个斑点的序列及其位置在斑点下方提及。在前十五个氨基酸中，有一个氨基酸在该十聚体肽内移位。余下的有五个氨基酸移位。图2B.使用严格条件进行了另一个筛选，一个氨基酸沿整条蛋白移位。此处将氨基酸序列提供如下。MDVFMKGLSM--SEQIDNO23
DVFMKGLSMA--SEQIDNO24
VFMKGLSMAK--SEQIDNO25
FMKGLSMAKE--SEQIDNO26
MKGLSMAKEG--SEQIDNO27
KGLSMAKEGV--SEQIDNO28
GLSMAKEGVV--SEQIDNO29
LSMAKEGVVA--SEQIDNO30
SMAKEGVVAA--SEQIDNO31
MAKEGVVAAA--SEQIDNO32
AKEGVVAAAE--SEQIDNO33
KEGVVAAAEK--SEQIDNO34
EGVVAAAEKT--SEQIDNO35
GVVAAAEKTK--SEQIDNO8
VVAAAEKTKQ--SEQIDNO9
VAAAEKTKQG--SEQIDNO10
KTKQGVTEAA--SEQIDNO36
VTEAAEKTKE--SEQIDNO37
EKTKEGVLYV--SEQIDNO38
GVLYVGSKTR--SEQIDNO1
GSKTREGVVQ--SEQIDNO40
EGVVQGVASV--SEQIDNO41
GVASVAEKTK--SEQIDNO7
LGGAVFSGAG--SEQIDNO11
FSGAGNIAAA--SEQIDNO42
NIAAATGLVK--SEQIDNO43
TGLVKREEFP--SEQIDN ‘44
REEFPTDLKP--SEQIDNO45
TDLKPEEVAQ--SEQIDNO46
EEVAQEAAEE--SEQIDNO47
EAAEEPLIEP--SEQIDNO48
PLIEPLMEPE--SEQIDNO49
LMEPEGESYE-SEQ ID NO 50GESYEDPPQE-SEQ ID NO 51DPPQEEYQEY-SEQ ID NO 52EYQEYEPEA-SEQ ID NO 53VLYVGSKTRE-SEQ ID NO 2LYVGSKTREG-SEQ ID NO 3YVGSKTREGV-SEQ ID NO 4AAATGLVKRE-SEQ ID NO 5AATGLVKREE-SEQ ID NO 6图3A-图I为描绘了 α -Syn纤维装配的体外抑制的照片和图表。图3A.筛选出对α-syn聚集有抑制作用的β-syn肽(摩尔比为20 1)。图3B.在肽36和39 (SEQ ID N0:1和4)的存在下，α-syn聚集的动力学分析。对照为( )，肽β-syn 39与α-syn 为(▲)，肽β -syn 36与α -syn为(■)。图3C.肽β -syn 36对α -syn聚集的剂量依赖性抑制作用。图3D-图3K.具有若干肽的α -syn原纤维TEM图像；仅有α -syn, β -syn 6短肽、36、37、38、39、77、78。6短肽、37和38条带=500nM。余下的肽条带=1 μ Μ。图4Α-图4Β为抑制剂存在和不存在时，α-syn聚集的生化分析结果的照片。图 4A.随着时间推移的α-syn的聚集。37C下摇动时形成可溶性寡聚体。使用蛋白印迹分析进行检测。图4B.使用β-syn肽孵化M小时后对寡聚体装配的抑制作用。使用蛋白印迹分析进行检测。图5A-图5B为描述β -syn修饰肽的分析的图表。图5A.使用ThT荧光试验检测对α -syn纤维装配的抑制作用。筛选三种对α -syn聚集有抑制作用的β -syn 36修饰肽。 仅有α -syn为黑色，β -syn 36与α -syn为深灰色，修饰肽和α -syn为浅灰和白色，顺序从左至右为β-syn 36D、逆反肽(retro-inverso)、酰胺化和乙酰化的逆反肽。α-syn 肽的摩尔比分别为1 20和1 10。图5B.使用荧光各向异性法测定包含色氨酸而非酪氨酸的β -syn36与α -Syn单体的亲和力。Kd = 1 μ M。图6Α-图6C为HPLC谱图，其描绘了在小鼠脑提取物中肽的稳定性。对WT ICR小白鼠的脑提取物进行提取，并与肽β-syn 36和β-syn 36逆反肽孵化两小时，并在C18色谱柱上载样。图6A.小鼠脑提取物的图谱(红色)。图6B. β-syn 36肽(蓝色)和与脑提取物孵化的β-syn 36肽(红色)的图谱。图6C. β-syn 36逆反肽(蓝色)和与脑提取物孵化的β-syn 36逆反肽(红色)的图谱。图7A-图7F为随后的NMR分析的图表和图谱。结合了 α-syn后的逆反肽的骨架原子Ha (灰色)和HN (黑色)化学位移偏移(图7A)；结合后(绿色)β-syn衍生的逆反肽 (红色)和α -syn (蓝色)的TOCSY图谱重叠的Ha-HN区域(图7B)，并且结合后显示偏离的所有逆反肽峰发生扩张(图7C-图7E)。在α -syn 36D和缺少氨基酸G、V、L的β -syn 36D短肽存在和不存在时，α -syn的ThT分析(图7F)。图8A-图8E为描绘了 β-syn 36逆反肽进入细胞的内化作用的照片。使用50 μ M 和250 μ M结合了 FITC的β -syn 36逆反肽对过表达WT α -syn细胞的分化型SHSY5Y孵化0. 5小时、2小时和4小时。固定后，检测细胞中FITC结合肽(绿色)的存在。使用cy5 结合抗体(紫色)检测细胞α -syn,并用鬼笔环肽标记膜(红色)。(图8A) 37°C下30分钟后，没有肽染色(绿色)。(图8B-图8C)孵化2小时后，在细胞内未检测到或仅检测到少量肽(绿色)。(图8D-图8E)孵化4小时后，在细胞内明确检测到肽。使用LSM-510蔡司共聚焦显微镜使肽的内化可视化。图9为描绘了果蝇运动攀爬行为的分析结果的条形图。用攀爬试验对四种果蝇进行分析，每种包含五支试管，每支试管十只果蝇。在常规培养基上生长并表达α-syn A53T 的雌性后代为黑色。在含有β-syn逆反肽的培养基上生长并表达α-syn A53T的雌性后代为灰色。在常规培养基上生长的对照雌性后代为条纹线。在含有β-syn逆反肽的培养基上生长的对照雌性后代为白色。结果显示了沿试管攀爬20秒以上的果蝇百分比。图10为β -syn 36逆反肽的NMR归属图谱在相同条件下(根据该条件进行归属)采集的TOCSY (红色)和NOESY (绿色)谱的HN-Ha相互作用区域的重叠。
具体实施例方式本发明的某些实施方式涉及用于治疗和预防神经退行性疾病的组合物及方法。在详细解释本发明的至少一个实施方式之前，应理解本发明并非将其应用限于如下说明书所陈述的或由实施例举例说明的细节。本发明可有其他实施方式或以不同方式实施或进行。α -突触核蛋白的细胞内寡聚化与帕金森氏病和其他神经退行性疾病有关，因此被认为是疾病的病情改善疗法的重要靶标。由于β-突触核蛋白已表现出以剂量依赖方式抑制α-突触核蛋白的聚集，本发明人将整条β-syn的序列进行系统性地定位以确定具有介导β-syn和α-syn的分子识别事件潜力的所有结构域。使用常见的肽阵列技术并发现了若干相互作用区域(图2A)。 使用第二张膜以在严格条件下证实这些结果(图2B)，该严格条件可准确定位出现在两张膜上的斑点。合成了与相互作用区域相对应的十聚体肽，并且使用ThT和TEM试验测试了其抑制α-syn聚集的能力。两种方法均显示相关的结果，表明该肽对原纤维形成具有抑制作用(图3A-图3K)。本发明人进一步示出了某些肽仅能够抑制一种类型的聚集，而其他肽能够抑制蛋白的可溶性和不溶性聚集(图4)。为了将分子识别模块发展成为药物候选物，设计了最好的肽抑制剂的逆反类似物。虽然该肽与天然肽相比显示出难以区分的活性，但显示其在人血清中是稳定的(图 6A-图6C)并且可穿透过表达α -突触核蛋白的细胞(图8Α-图8Ε)。NMR分析定位了 D-氨基酸肽和α -突触核蛋白间相互作用的交会处(界面，interface)(图7A_图7F)。最后， 将该肽给予表达突变型A53T α -突触核蛋白的果蝇模型导致所处理的果蝇攀爬表型显著改善(图9)。本发明人提出根据本发明的教导而生成的改造肽能够作为发展新型治疗剂的先导，以治疗通常的神经退行性疾病，特别是帕金森氏病。本发明的实施方式提供长度小于20个氨基酸的分离肽，该肽包含突触核蛋白的氨基酸序歹Ij GVASVAEKTK(SEQ ID NO 7)、GVLYVGSKTREGV(SEQ ID NO 12)、 AAATGLVKREE(SEQ ID NO :13)或GVVAAAEKTKQG(SEQ ID NO 14)、它们的模拟物和/或片段， 该肽能够抑制α-突触核蛋白聚集。如本文中所使用的，“ β -突触核蛋白”是指SNCB基因的蛋白产物，该SNCB基因的GenBank 登陆号为 NP_001001502. 1 (SEQ ID NO :15)、NP_003076. 1 (SEQ ID NO :16)。短语“能够抑制α-突触核蛋白聚集”是指使α-突触核蛋白聚集(例如，寡聚化和/或纤维形成)降低至少10 %，更优选至少20 %，更优选至少30 %，更优选至少40 %，更优选至少50 %，更优选至少60 %，更优选至少70 %，更优选至少80 %，更优选至少90 %，更优选至少100%的能力。根据一个实施方式，本发明这方面的肽能够抑制α -突触核蛋白聚集。如本文中所使用的，术语“原纤维”是指细线样的丝状结构，在电子显微镜下通常可见其由高度有序的聚集体构成。在实施例3 (通过透射电子显微镜(TEM)分析)、实施例4 (通过蛋白印迹分析)和实施例6中(ThT结合试验)描述了监测本发明所述的肽下调α-突触核蛋白聚集的方法。 其他方法在美国专利第6，184，351号以及美国专利申请第2002151464号和第20030027210 号中提供，将其全部内容以引用方式并入本文。术语“分离的”是指从生理环境或分离或基本上没有其他生物材料。本文中所使用的术语“肽”包括天然肽(降解产物、以合成方法合成的肽或重组肽)和模拟肽(通常为以合成方法合成的肽)，以及类肽(P印toid)和半类肽 (semipeptoid)，其为肽类似物，可具有例如使肽在体内更稳定的修饰。这类修饰包括但不限于N末端修饰，C末端修饰，肽键修饰，包括但不限于CH2-NH、CH2-S、CH2-S = 0、0 = C-NH、CH2-0、CH2-CH2、S = C_NH、CH = CH或CF = CH，骨架修饰，和残基修饰。制备模拟肽化合物的方法是本领域公知的，并且在例如Quantitative Drug Design, C. A. Ramsden Gd., Chapter 17. 2，F. Choplin Pergamon Press (1992)中具体说明，此处以引用方式并入本文， 如同本文完全阐述。这方面的进一步详细情况提供如下。其他修饰(例如，末端加帽)进一步描述如下。所述肽的长度可为2-20、2-15、4-15、5-15、4_10和5_10个氨基酸残基。因此，该肽可由 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 个氨基酸残基构成。因此，该肽可包含以下的示例性肽或由以下的示例性肽组成36--46.GVLYVGSKTR(SEQIDNO:1)
37--47.VLYVGSKTRE(SEQIDNO:2)
38--48.LYVGSKTREG(SEQIDNO:3)
39--49.YVGSKTREGV(SEQIDNO:4)
77--87.AAATGLVKRE(SEQIDNO:5)
78--88.AATGLVKREE(SEQIDNO:6)
51--61.GVASVAEKTK(SEQIDNO:7)
14--24.GVVAAAEKTK(SEQIDNO:8)
15--25.VVAAAEKTKQ(SEQIDNO:9)
16--26.VAAAEKTKQG(SEQIDNO:10)根据示例性的实施方式，该肽不是YVGSKTREGVV(SEQ ID NO :17)； VAAAEKTKQGV(SEQ ID NO 18), LS (SEQ ID NO 19), GL(SEQID NO :20)禾口 KEG(SEQ ID NO: 21)，尽管根据本教导，这些肽中的至少一些能够用于治疗性应用中。根据另外的实施方式，该肽包含氨基酸序列KTR(SEQ ID NO :58)或由氨基酸序列KTR(SEQ ID NO 58)组成。根据另外的实施方式，该肽包含氨基酸序列KTRE(SEQ ID NO :59)或由氨基酸序列 KTRE (SEQ ID NO 59)组成。根据另外的实施方式，该肽包含氨基酸序列KTRG(SEQ ID NO :60)或由氨基酸序列 KTRG (SEQ ID NO 60)组成。肽内的肽键(-C0-NH-)可被以下键所代替，例如N-甲基化键(_N(CH3)-C0-)、 酯键(-C (R) H-C-O-O-C (R) -N-)、酮亚甲基键(-C0-CH2-)、α -氮杂键(-ΝΗ-Ν (R) -C0-) 其中R为任意烷基例如甲基、卡巴键(碳胺键，carba bond) (-CH2-NH-)、羟基亚乙基键 (-CH(OH) -CH2-)、硫代酰胺键(-CS-NH-)、烯族双键(_CH = CH-)、逆酰胺键(-NH-C0-)、肽衍生物(_N(R)-CH2-C0-)其中R是天然存在于碳原子上的“正常”侧链，。这些修饰可在沿肽链的任意键上发生，甚至同时在若干个)个键上发生。芳香族氨基酸可以是任何天然存在的或合成的芳香族残基，包括但不限于苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯基甘氨酸或它们的修饰体、前体或功能性芳香部分。如下的表2中提供了能够形成本发明的肽的一部分的芳香族残基的实例。因此，天然芳香族氨基酸Trp、Tyr和Phe可被合成的非天然氨基酸置换，如苯基甘氨酸、Tic，萘基丙氨酸(Nal)、苯基异丝氨酸、苏氨醇(threoninolhPhe的环状甲基化衍生物、Phe的卤化衍生物或ο-甲基-Tyr。除上述以外，本发明的肽还可包括一个或多个修饰氨基酸或一个或多个非氨基酸单体(例如，脂肪酸、复杂碳水化合物，等)。如在本文说明书和权利要求书部分所使用的，术语(一种或多种)“氨基酸”应理解为包括20种天然存在的氨基酸；那些经常在体内翻译后修饰的氨基酸，包括例如，羟脯氨酸、磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸；以及其他罕见的氨基酸，包括但不限于2-氨基己二酸、羟基赖氨酸、异锁链赖氨素、正缬氨酸、正亮氨酸和鸟氨酸。此外，术语“氨基酸”包括D-和 L-氨基酸。所述肽还可包含保守的氨基酸取代，其可包括天然存在的保守取代或合成取代， 见于例如 Karlin, S.禾口 Ghandour, G. , (1985), Multiple alphabet amino acid sequence comparison of the immunoglobulin κ chain constant domain. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 82,8597—8601。氨基酸分类按化学性质酸性(DE)、脂肪族(AGILV)、酰胺(NQ)、芳香族(FWY)、碱性(RHK)、羟基(ST)、亚氨基(imino) (P)、硫(CM)；按功能酸性、碱性、疏水性(A、I、L、M、F、P、W、V)4M4(N、C、Q、G、S、T、Y)；按电荷酸性、碱性、中性；按结构不定的(A、C、G、P、S、T、W、Y)、外部的(R、N、D、Q、E、H、K)、内部的(I、L、
Μ、F、V)。单个氨基酸编码提供如下。以下表1和表2列出了可用于本发明的天然存在的氨基酸(表1)和非常规的或修饰的氨基酸(例如，合成的，表2)。表权利要求
1.一种长度小于20个氨基酸的分离肽，所述肽包含氨基酸序列GVLYVGSKTREGV(SEQ ID NO 12) ,AAATGLVKREE (SEQ ID NO :13)或 GWAAAEKTKQG(SEQ ID NO :14)、它们的模拟物和/或片段，所述肽能够抑制α-突触核蛋白聚集。
2.根据权利要求1所述的肽，包含至少一个芳香族氨基酸。
3.根据权利要求1所述的肽，包含至少一个碱性氨基酸。
4.根据权利要求1所述的肽，包含至少一个断裂子氨基酸。
5.根据权利要求4所述的肽，其中，所述断裂子氨基酸是合成氨基酸。
6.根据权利要求4所述的肽，其中，所述断裂子氨基酸是天然存在的。
7.根据权利要求1所述的肽，其中，所述氨基酸序列包含至少一个D-氨基酸残基。
8.根据权利要求1所述的肽，其具有末端帽修饰。
9.根据权利要求1所述的肽，其包含KTR或其模拟物。
10.根据权利要求1所述的肽，其包含KTRE或其模拟物。
11.根据权利要求1所述的肽，其包含KTREG或其模拟物。
12.根据权利要求9所述的肽，选自由SEQID NO =USEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :12 和 SEQ ID NO :13 组成的组。
13.根据权利要求1所述的肽，其选自由SEQID NO 5和SEQ ID NO 6组成的组。
14.根据权利要求2所述的肽，其选自由SEQID NO =USEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3和 SEQ ID NO 4组成的组。
15.一种药物组合物，包含作为活性成分的权利要求1-14中任一项所述的肽以及药学上可接受的载体。
16.一种抑制α-突触核蛋白聚集的方法，所述方法包括使α-突触核蛋白与权利要求 1-14中任一项所述的肽接触，从而抑制α-突触核蛋白聚集。
17.一种治疗或预防与α-突触核蛋白聚集有关的疾病的方法，所述方法包括向对其有需要的对象给予治疗有效量的权利要求1-14中任一项所述的肽，从而治疗与α -突触核蛋白聚集有关的疾病。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述疾病选自由帕金森氏病(PD)、阿尔茨海默氏病(AD)、弥漫性路易体病、混合性AD-PD、多系统萎缩和哈-斯二氏病组成的组。
19.一种检测α-突触核蛋白单体的方法，所述方法包括(a)在允许所述单体和所述肽之间形成复合物的条件下，使所选的怀疑包含所述 α-突触核蛋白单体的生物样品与权利要求1所述的肽接触；和(b)检测所述复合物的存在或水平，从而检测α-突触核蛋白单体。
全文摘要
本发明提供了一种长度小于20个氨基酸的分离肽。该肽包含氨基酸序列GVLYVGSKTREGV(SEQ ID NO12)、AAATGLVKREE(SEQ ID NO13)或GVVAAAEKTKQG(SEQ ID NO14)、其模拟物和/或片段，该肽能够抑制α-突触核蛋白聚集。还提供了包括上述物质的药物组合物及其用途。
文档编号A61K38/17GK102348720SQ201080011343
公开日2012年2月8日 申请日期2010年3月9日 优先权日2009年3月9日
发明者埃胡德·加齐特, 罗尼特·沙尔蒂尔-卡里奥 申请人:雷蒙特亚特特拉维夫大学有限公司