合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH₂的方法

专利名称：合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH₂的方法
合成 Ac-Arg-环(Cys-D-AIa-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的方法
背景技术：
本发明涉及使用溶液相肽化学来合成黑皮质素类似物Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的新方法。Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 是高效且药理学选择性的黑皮质素类似物。黑皮质素是一类调节肽，其由激素原前阿片黑素细胞皮质激素(P0MC;长度131个氨基酸)的翻译后加工形成。POMC加工后形成三类激素黑皮质素、促肾上腺皮质激素和多种内啡肽类(例如促脂解素)(Cone等人，Recent Prog. Horm.Res. , 51:287-317，(1996) ；Cone 等人，Ann. N. Y. Acad. Sci. , 31:342-363，(1993))。在许多正常人类组织中已经发现黑皮质素，包括脑、肾上腺、皮肤、睾丸、脾、肾、卵巢、肺、甲状腺、肝、结肠、小肠和胰脏(Tatro, J. B.等人，Endocrinol. 121:1900-1907 ( 1987) ；Mount joy, K. G.等人，Science 257:1248-1251 (1992) ；Chhajlani, V.等人，FEBSLett. 309:417-420 (1992) ；Gantz, I.等人 J. Biol. Chem. 268:8246-8250 (1993)和 Gantz, I.等人，J. Biol. Chem. 268:15174-15179 (1993))。已经证明黑皮质素肽类表现出广泛的生理活性，包括控制行为和记忆，影响神经营养和退热的特性，以及影响免疫系统调节。除了其熟知的对肾上腺皮质功能(促肾上腺皮质激素或“ACTH”)和对黑素细胞(促黑激素或“MSH”)的作用以夕卜，黑皮质素还表现出控制心血管系统、止痛、温度调节以及释放其它神经元介质因子，包括催乳素、促黄体激素和生物胺类(De ffied, D.等人，Methods Achiev. Exp.Pathol.15:167-199(1991) ；De ffied, D.等人，Physiol. Rev. 62:977-1059(1982);Guber, K. A.等人,Am. J. Physiol. 257: R681-R694 (1989) ；ffalker J. M.等人,Science210:1247-1249 (1980) ；Murphy, Μ. T.等人，Science 221:192-193 (1983)；Ellerkmann, E.等人，Endocrinol. 130:133-138 (1992)和 Versteeg, D. H. G.等人，LifeSci. 38:835-840(1986))。已经证明黑皮质素的结合位点分布在许多不同的组织类型中，包括泪腺和颌下腺、胰腺、脂肪、膀胱、十二指肠、脾、脑和生殖腺组织以及恶性黑色素瘤中。迄今为止已经鉴定了五种黑皮质素受体。它们包括黑素细胞特异性受体(MCl-R)、肾上腺皮质特异性ACTH受体(MC2-R)、黑皮质素-3 (MC3-R)、黑皮质素_4 (MC4-R)和黑皮质素_5受体(MC5-R)。全部此类黑皮质素受体都对促黑激素(MSH)类的肽类激素有反应(Cone，R.D.等人，Ann. N. Y. Acad. Sci.，680:342-363 (1993) ；Cone, R. D.等人，Recent Prog. Horm.Res.，51:287-318(1996))。MC1-R，本领域已知作为促黑激素受体(MSH-R)、促黑素细胞激素受体或黑皮质素-I受体，是属于G蛋白偶联受体家族的315个氨基酸的跨膜蛋白。MCl-R是MSH和ACTH受体。MCl-R的活性由激活腺苷酸环化酶的G蛋白介导。MCl-R受体在黑素细胞和肾上腺皮质组织以及其它组织例如肾上腺、白细胞、肺、淋巴结、卵巢、睾丸、垂体、胎盘、脾和子宫中发现。MC2-R，也称作促肾上腺皮质激素受体(ACTH-R)，是在黑素细胞和肾上腺皮质组织中发现的297个氨基酸的跨膜蛋白。MC2-R介导ACTH的促肾上腺皮质作用。在人类中，MC3-R是从脑组织中发现的360个AA的蛋白质；在大鼠和小鼠中，MC3-R是323个AA的蛋白质。MC4-R是332个氨基酸的跨膜蛋白，其在脑以及胎盘和肠组织中也有表达。MC5-R是325个氨基酸的跨膜蛋白，在肾上腺、胃、肺和脾中表达，在脑中以非常低的水平表达。MC5-R还在三层的肾上腺皮质中表达，主要是在产生醛固酮的丝球带细胞中表达。但是，五种已知的黑皮质素受体的功能不同。例如，MCl-R是G蛋白偶联受体，其调节响应于a -MSH的色素沉着，a -MSH是有效的MCl-R激动剂。MCl-R受体的激动导致黑素细胞的刺激，其引起真黑色素并增加罹患皮肤癌的风险。MCl-R的激动还可以具有神经学的效应。刺激MC2-R的活性可以导致肾上腺组织癌。最近的药理学证明已经确认中枢MC4-R受体是分别报道为黑皮质素激动剂和拮抗剂的减食欲的和促进食欲的作用的主要调节物。MC3-R和MC5-R的激动作用还是未知的。黑皮质素受体作为靶点来设计治疗体重紊乱例如肥胖症和恶病质的新的治疗剂引起了很大的兴趣。遗传学和药理学证据都指向中枢MC4-R受体作为首要的靶 点(Giraudo, S. Q.等 A , Brain Res.，809:302-306 (1998) ；Farooqi, I. S.等人，NE JMed.，348:1085-1095(2003) ；MacNeil,D. J.等人,Eu. J. Pharm. , 44:141-157 (2002)；MacNei I, D. J.等 A , Eu . J. Pharm. , 45 O:93-I O 9(2 O O 2) ；Kask,A.等人，NeuroReport, 10:707-711 (1999))。受体选择性的激动剂和拮抗剂的目前进展证实了激活黑皮质素受体、特别是MC4-R的治疗潜力。在美国专利号4，395，403中所述的溶液相合成是使用BTFA/TFA去除保护半胱氨酸的巯基的甲氧基苄基基团，然后环化。然而，已知在例如强酸处理去除保护基团的过程中经常出现色氨酸残基的分解。因此，需要开发制备Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的有效方法。发明概述在本发明的第一方面，提供了合成 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2的新方法，其包括片段缩合方法，其中使用被保护的氨基酸，例如Boc保护的氨基酸、苯甲酰氧基羰基保护的氨基酸、Fmoc保护的氨基酸，与被保护的氨基酸的氟化物，例如Fmoc氨基酸氟化物或Bsmoc氨基酸氟化物，其中使用了混合酸酐偶联方法，且其中提供了被保护的肽片段Trp-Cys或Arg-Trp,例如Boc-Trp-Cys (Acm) -OMe或Boc-Trp (For)-Cys(Acm)-OMe。在本发明的第一方面的优选实施方案中，使用了肽-酰肼偶联方法，其中使用氨将酯官能团转化为酰胺官能团。本发明的第一方面可以包含以下步骤(a)从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-OH和H-His-OH在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-OH ；或者，从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-OH和H-His(Trt)-OH在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-OH ；(b-Ι)从苯甲酰氧基羰基-D-Phe-OH和H-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ；(b-2)通过将在步骤(b-Ι)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe氢化来合成片段H-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ；(c-1)从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-OH和从步骤(b_2)中得到的片段H-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe ；或者，从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His (Trt)-OH和步骤(b_2)中得到的片段H-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg(Pbf)-OMe ；(c-2)通过将在步 骤(c-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 氢化来合成片段 H-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ；或者，通过将在步骤(c-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 氢化来合成片段 H-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ；(d-1)从Fmoc-Arg (Pbf) -OH和H-Cys (Acm) -OBzl在偶联剂的存在下反应然后氢化而合成片段 Fmoc-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH ；(d-2)从在步骤(d-Ι)中得到的片段Fmoc-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-OH在碱的存在下合成片段 H-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH ；(d-3)从在步骤(d-2)中得到的片段H-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH ；或者，从Ac-Arg (Pbf)-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联剂的存在下反应然后用碱水解而合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH ；(e-Ι)从 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH和 H-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 在偶联剂的存在下合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ；或者，从Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH 和 H-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -OMe在偶联剂的存在下合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ；(e-2)通过在碱存在下水解在步骤(e-Ι)中得到的片段Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 来合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OH ；或者，通过在碱存在下水解在步骤(e-Ι)中得到的片段Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 来合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH ；(f)通过在肼存在下从步骤(e-Ι)中得到的片段Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-NHNH2 ；或者,通过在肼存在下从步骤(e-Ι)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -NHNH2 ；(g-1)从Boc-Trp-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联剂存在下合成片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从Boc-Trp (For) -OH和H-Cys (Acm) -OMe在偶联剂存在下合成片段Boc-Trp (For)-Cys(Acm)-OMe ；(g-2)从在步骤(g-1)中得到的片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe在TFA存在下合成H-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从在步骤(g-Ι)中得到的片段Boc-Trp (For)-Cys (Acm)-OMe在TFA存在下合成 H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe ；(h)从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe_Arg(Pbf)-NHNH2 和 H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe,使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe ；或者，从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -NHNH2 和 H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe,使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe ；或者，从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -NHNH2 和 H-Trp-Cys (Acm) -OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -NHNH2 和 H-Trp-Cys (Acm) -OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OH 和H-Trp-Cys (Acm) -OMe 在偶联剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm)-OMe ；或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH 和H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 在偶联剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys (Acm)-OMe ；或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OH 和H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 在偶联剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (For)-Cys(Acm)-OMe ；或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH 和H-Trp-Cys (Acm) -OMe 在偶联剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -OMe ； 或者，从Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm)-OMe 在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -OMe ；或者，从Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm)-OMe 在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp (For) -Cys (Acm)-OMe ；或者，从Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp (For) -Cys (Acm)-OMe ；
(i)从在步骤(h)中得到的 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm) -OMe 在氨存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从在步骤(h)中得到的Ac-Arg-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -OMe 在氨存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从在步骤(h)中得到的Ac-Arg-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp (For)-Cys (Acm) -OMe 在氨存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm)-NH2;或者，从在步骤(h)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Ar g (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe 在氨存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -NH2在 TFA 存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm)-NH2 在 TFA存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -NH2 ；以及(j)从 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -NH2 通过使用氧化剂合成 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2。在上文所述本发明的方面，所述氧化剂优选是碘，所述偶联剂优选是DCC、HBTU、HATU、DIC、EDC或氯甲酸异丁基酯，且所述的碱优选是Et2NH、TAEA、哌嗪、氢氧化钠或氢氧化钾。上文总结的合成次序在图IA中以图解表示。图IB显示了上文总结的合成次序的另一个流程图。在本发明的第二方面，其提供了合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2的新方法，除了提供被保护的肽片段Cys-D-Ala或Arg-Cys以外，其与上文所述的第一方面类似。在本发明的第二方面的优选的实施方案中，所述被保护的肽片段Cys-D-Ala是Boc-Cys (Acm)-D-Ala-OH。本发明的第二方面可以包含以下步骤(a-Ι)从Boc-Cys (Acm) -OH和H-D-Ala-OH在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Cys (Acm)-D-Ala-OH ；(a-2)从在步骤(a-Ι)中得到的片段Boc-Cys (Acm)-D-Ala-OH在TFA的存在下合成片段 H-Cys (Acm) -D-Ala-OH ；(b)从 Ac-Arg (Pbf)-OH 和在步骤(a_2)中得到的片段 H-Cys (Acm)-D-Ala-OH 在偶联试剂的存在下合成片段Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-OH ；(c-1)从Boc-His-OH和H-D-Phe-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Hi s-D-Phe-OMe ；(c-2)从在步骤(c-1)中得到的片段Boc-His-D-Phe-OMe在TFA的存在下合成片段 H-His-D-Phe-OMe ；(d-Ι)从Boc-Trp-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从Boc-Trp (For) -OH和H_Cys (Acm) -OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Trp (For)-Cys(Acm)-OMe ；(d-2)从在步骤(d-Ι)中得到的片段Boc-Trp-Cys (Acm)-OMe在TFA的存在下合成片段 H-Trp-Cys (Acm) -OMe ；或者，从在步骤(d-Ι)中得到的片段Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成片段 H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe ；(e-Ι)从苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-OH和在步骤(d_2)中得到的片段H-Trp-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-Arg (Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-OH和在步骤(d_2)中得到的片段H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe在偶联试剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-Arg (Pbf) -Trp (For)-Cys (Acm)-OMe ；(e-2)通过氢化在步骤(e-Ι)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe 来合成片段 H-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe ；或者，通过氢化在步骤(e-Ι)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 来合成片段 H-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe ；(f-1)从在步骤(b)中得到的片段 Ac-Arg(Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-OH 和在步骤(c-2)中的得到的片段H-His-D-Phe-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe ；(f-2)从在步骤(f-Ι)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe 在餅的存在下合成片段 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-NHNH2 ； 或者，从在步骤(f-Ι)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe 在减的存在下合成片段 Ac-Arg(Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-OH ；(g)从在步骤(f-2)中得到的片段 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-NHNH2和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe使用酸和亚硝酸叔丁基酯合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe ；或者，从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-NHNH2和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe使用酸和亚硝酸叔丁基酯合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe ；或者，从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OH和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe 在偶联试剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf)-Cys(Acm)-D-AIa~Hi s-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OH和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe在偶联试剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe ；(h)从在步骤(g)中得到的 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm) -OMe 在氨的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从在步骤(g)中得到的Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 在氨存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -NH2 ；或者，从在步骤(g)中得到的Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm) -OMe 在氨的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从在步骤(g)中得到的Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 在氨的存在下合成 Ac-Arg(Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -NH2 ； (i)从在步骤(h)中得到的 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm) -NH2 在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm) -NH2 ；以及(j)从在步骤(i)中得到的 Ac-Arg-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -NH2 使用氧化剂来合成 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2。图2是上文所总结的合成次序的流程图。图3-11是使用片段缩合步骤和不同肽片段的多种合成次序的流程图，其全部都得到 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH20在本发明的第三方面，提供了合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的新方法，其包含线性的分步的合成方法。在本发明第三方面的优选的实施方案中，使用了被保护的氨基酸，例如Boc保护的氨基酸、Fmoc保护的氨基酸以及被保护的氨基酸氟化物如Fmoc氨基酸氟化物或Bsmoc氨基酸氟化物，二甲基环丙基甲基胺用于被保护的肽链的C端，并使用了Fmoc-Cys(Trt)-NH-CMe2CP。本发明的第二方面可以包含以下步骤(a)从 Fmoc-Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在碱的存在下合成 H-Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(b)从 Fmoc-Trp (Boc) -OH 和在步骤(a)中的得到的 H-Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(c)从在步骤(b)中得到的Fmoc-Trp (Boc)-Cys (Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成 H-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP ；(d)从 Fmoc-Arg(Pbf)-OH 和在步骤(C)中得到的H-Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(e)从在步骤(d)中得到的 Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP 在减的存在下合成 H-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(f)从 Fmoc-D-Phe-OH 和在步骤(e)中得到的 H-Arg (Pbf)-Trp (Boc)-Cys (Trt)-NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP；(g)从在步骤(f)中得到的 Fmoc-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc)-Cys (Trt)-NH-CMe2CP 在碱的存在下合成 H-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(h)从 Fmoc-His (Trt)-OH 和在步骤(g)中得到的 H-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc)-Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP ；(i)从在步骤(h)中得到的 Fmoc-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc)-Cys (Trt)-NH-CMe2CP 在碱的存在下合成 H-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP;(j)从 Fmoc-D-Ala-OH 和在步骤(i)中得到的 H-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP ；
(k)从在步骤(j)中得到的 Fmoc-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc)-Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在减的存在下合成 H-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(I)从 Fmoc-Cys (Trt)-OH 和在步骤(k)中得到的 H-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-Cys (Trt) -D-Ala-His(Trt) -D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP ；(m)从在步骤(I)中得到的 Fmoc-Cys (Trt)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-TrP (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在减的存在下合成 H-Cys (Trt) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP ；(η)从 Fmoc-Arg (Pbf)-OH 和在步骤(m)中得到的 H-Cys (Trt)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-Arg (Pbf)-Cys (Trt) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(ο)从在步骤(η)中得到的 Fmoc-Arg (Pbf)-Cys (Trt)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在减的存在下合成 H-Arg (Pbf) -Cys (Trt) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP ；(P)从在步骤(ο)中得到的 H-Arg (Pbf)-Cys (Trt)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 和 Ac20、AcCl 或 AcBr 来合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Trt)-D-Ala-His(Trt) -D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys (Trt)-NH-CMe2CP ；或者，从Ac-Arg (Pbf)-OH 和在步骤(m)中得到的 H-Cys (Trt)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Trt) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(q)从在步骤(P)中得到的 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Trt)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys-NH2 ;以及(r)从在步骤(q)中得到的 Ac-Arg-Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys-NH2 在氧化剂的存在下合成 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH20在本发明的第三方面，所述氧化剂优选地是碘、氧、空气或DMSO ;所述偶联试剂优选地是DCC、HBTU、HATU、DIC、EDC或氯甲酸异丁基酯，且所述的碱优选地是Et2NH、TAEA或哌嗪。
附图
简沭图IA是如上文总结的本发明第一方面的流程图。图IB显示了如上文总结的本发明第一方面的另一个流程图。图2是如上文总结的本发明第二方面的流程图。图3-11是使用片段缩合步骤和不同肽片段的多种合成次序的流程图，其全部获得Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2,并且其属于如本文所要求保护的本发明范围之内。发明详沭
本申请使用以下缩写Ac:乙酰基Acm:乙酰氨基甲基AcOH:乙酸Ala或A:丙氨酸Arg或R:精氨酸Boc:叔丁氧基羰基Bsmoc:1，I-二氧代苯并[b]噻吩_2_基甲基氧基羰基BTFA:三-三氟乙酸硼酯Bzl:苄基Cys或C:半胱氨酸DCCI:N，N’ - 二环己基碳二亚胺DIC:N，N’ - 二异丙基碳二亚胺DMF:二甲基甲酰胺EDC:1_乙基_3_ (3_ 二甲基氛基丙基)碳二亚胺盐酸化物Fmoc:9_荷甲氧基羰基For:甲酰基HATU:O-(7-氮杂苯并三唑-I-基)_1，1，3，3-四甲基脲鎗六氟磷酸盐HBTU:2-(1Η-苯并三唑-I-基)_1，1，3，3_四甲基脲鎗六氟磷酸盐His或H:组氨酸HOBtI-羟基苯并三唑HPLC:高效液相色谱Me:甲基MeOH:甲醇Mtr:4-甲氧基_2，3，6_三甲基苯磺酰基Mtt:甲基三苯甲基NH2-CMe2CP:二甲基环丙基甲基胺Pbf 2，2，4，6，7_五甲基二氢苯并呋喃_5_磺酰基Pmc:2，2，5，7，8-五甲基色满_6_磺酰基TAEA:三(2-氨基乙基)胺TFA三氟乙酸
THF:四氢呋喃Trp或W:色氨酸Trt:三苯甲基Z或Cbz :苯甲酰氧基羰基在Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2 中的标注 “NH2” 是指所述肽的C-端被酰胺化。命名环(Cys-Cys) 是指结构
权利要求
1.Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其包括片段缩合方法。
2.如权利要求I 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其中使用了被保护的氨基酸。
3.如权利要求2 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2 的溶液相合成方法，其中所述被保护的氨基酸选自Boc保护的氨基酸、苯甲酰氧基羰基保护的氨基酸、Fmoc保护的氨基酸，以及被保护的氨基酸的氟化物。
4.如权利要求3 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其中所述被保护的氨基酸的氟化物是Fmoc氨基酸氟化物或Bsmoc氨基酸氟化物。
5.如上述权利要求中任一项所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中使用了混合酸酐偶联方法。
6.如上述权利要求中任一项所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中使用了肽-酰肼偶联方法。
7.如上述权利要求中任一项所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中使用氨将酯官能团转化为酰胺官能团。
8.如上述权利要求中任一项所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中提供了被保护的肽片段Trp-Cys或Arg-Trp。
9.如权利要求8 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中所述被保护的肽片段Trp-Cys是Boc-Trp-Cys (Acm) -OMe或Boc-Trp (For)-Cys(Acm)-OMe。
10.如权利要求8或权利要求9所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中提供了被保护的肽片段D-Ala-His或His-D-Phe。
11.如权利要求10 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其中所述被保护的肽片段D-Ala-His是苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-OH或苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His (Trt)-0H。
12.如权利要求8-11 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其包含步骤 (a)从苯甲酸氧基擬基-D-Ala-OH和H-His-OH在偶联剂的存在下合成片段苯甲酸氧基擬基-D-Ala-His-OH ； 或者，从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-OH和H-His (Trt) -OH在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His (Trt) -OH ； (b-Ι)从苯甲酰氧基羰基-D-Phe-OH和H-Arg (Pbf) -OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe ； (b-2)通过将在步骤(b-Ι)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe氢化来合成片段 H-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ； (c-Ι)从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-OH和从步骤(b_2)中得到的片段H-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe ；或者，从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His (Trt) -OH和步骤(b_2)中得到的片段H-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg(Pbf)-OMe ； (c-2)通过将在步骤(c-Ι)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 氢化来合成片段 H-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ；或者，通过将在步骤(c-Ι)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 氢化来合成片段 H-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ； (d-Ι)从Fmoc-Arg (Pbf) -OH和H-Cys (Acm) -OBzl在偶联剂的存在下反应然后氢化而合成片段 Fmoc-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH ； (d-2)从在步骤(d-Ι)中得到的片段Fmoc-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-OH在碱的存在下合成片段 H-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH ； (d-3)从在步骤(d-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH ； 或者,从Ac-Arg (Pbf) -OH和H-Cys(Acm) -OMe在偶联剂的存在下反应然后用碱水解而合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH ；(e-Ι)从 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH和 H-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 在偶联剂的存在下合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ；或者，从 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -OH 和 H-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 在偶联剂的存在下合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -OMe ；(e-2)通过在碱存在下水解在步骤(e-Ι)中得到的片段Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 来合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-0H； 或者，通过在碱存在下水解在步骤(e-Ι)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 来合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg(Pbf)-OH ； (f)通过在肼存在下从步骤(e-Ι)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -NHNH2; 或者，通过在肼存在下从步骤(e-Ι)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -OMe 合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -NHNH2 ； (g-Ι)从Boc-Trp-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联剂存在下合成片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe ； 或者，从Boc-Trp(For)-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联剂存在下合成片段Boc-Trp (For)-Cys(Acm)-OMe ； (g-2)从在步骤(g-Ι)中得到的片段Boc-Trp-Cys (Acm) -OMe在TFA存在下合成H-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从在步骤(g_l)中得到的片段Boc-Trp (For)-Cys (Acm)-OMe在TFA存在下合成H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe ；(h)从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2 和 H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe,使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe ；或者，从步骤(f)中得到的片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -NHNH2 和 H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成 Ac-Arg (Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe ； 或者，从步骤⑴中得到的片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-NHNH2 和 H-Trp-Cys (Acm) -OMe,使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从步骤(f)中得到的片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -NHNH2 和 H-Trp-Cys (Acm) -OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ； 或者，从 Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OH 和H-Trp-Cys (Acm) -OMe 在偶联剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm)-OMe ； 或者，从 Ac-Arg(Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-OH 和H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 在偶联剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys (Acm)-OMe ； 或者，从 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-Hi s~D-Phe-Arg (Pbf)-OH 和H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 在偶联剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (For)-Cys(Acm)-OMe ； 或者，从 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH 和H-Trp-Cys (Acm) -OMe 在偶联剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ；或者，从 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe 在TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -OMe ；或者，从 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe 在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -OMe ；或者，从 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe ；或者，从 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp (For) -Cys (Acm)-OMe ；(i)从在步骤(h)中得到的Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm) -OMe 在氨存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从在步骤(h)中得到的 Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-OMe 在氨存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从在步骤(h)中得到的 Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp(For)-Cys(Acm) -OMe 在氨存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从在步骤(h)中得到的 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe 在氨存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm)-NH2 在TFA 存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -NH2 在 TFA 存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -NH2 ；以及(j)从Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm) -NH2 通过使用氧化剂合成 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2。
13.如权利要求12 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其中 所述氧化剂是碘； 所述偶联剂是DCC、HBTU、HATU、DIC、EDC或氯甲酸异丁基酯；且 所述的碱是Et2NH、TAEA、哌嗪、氢氧化钠或氢氧化钾。
14.如权利要求8或权利要求9所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2的溶液相合成方法，其中提供了被保护的肽片段Cys-D-Ala或Arg-Cys。
15.如权利要求14 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其中所述被保护的肽片段Cys-D-Ala是Boc-Cys(Acm) -D-Ala-OH。
16.如权利要求14或权利要求15所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，包含步骤 (a-Ι)从B0c-Cys(Acm)-OH和H-D-Ala-OH在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Cys (Acm)-D-Ala-OH ； (a-2)从在步骤(a-Ι)中得到的片段Boc-Cys (Acm)-D-Ala-OH在TFA的存在下合成片段 H-Cys(Acm)-D-Ala-OH ； (b)从Ac-Arg (Pbf)-OH和在步骤(a-2)中得到的片段H-Cys (Acm)-D-Ala-OH在偶联试剂的存在下合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-OH ； (c-Ι)从Boc-His-OH和H-D-Phe-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Hi s-D-Phe-OMe ； (c-2)从在步骤(c-Ι)中得到的片段Boc-His-D-Phe-OMe在TFA的存在下合成片段H-His-D-Phe-OMe ； (d-Ι)从Boc-Trp-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段 Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe ； 或者，从Boc-Trp (For) -OH和H-Cys (Acm) -OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Trp (For)-Cys(Acm)-OMe ； (d-2)从在步骤(d-Ι)中得到的片段B0c-Trp-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成片段H-Trp-Cys(Acm)-OMe ； 或者，从在步骤(d-Ι)中得到的片段Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成片段 H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe ； (e-Ι)从苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-OH和在步骤(d_2)中得到的片段H-Trp-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-Arg (Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ； 或者，从苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-OH和在步骤(d-2)中得到的片段H-Trp (For) -Cys (Acm) -OMe在偶联试剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-Arg (Pbf) -Trp (For)-Cys (Acm)-OMe ； (e-2)通过氢化在步骤(e-Ι)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe 来合成片段 H-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe ；或者，通过氢化在步骤(e-Ι)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe 来合成片段 H-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe ；(f-1)从在步骤(b)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-OH和在步骤(c_2)中的得到的片段H-His-D-Phe-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf) -Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe ； (f-2)从在步骤(f-Ι)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe在餅的存在下合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-NHNH2 ； 或者，从在步骤(f-Ι)中得到的片段 Ac-Arg(Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-OMe 在减的存在下合成片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-OH ； (g)从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-NHNH2 和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -OMe使用酸和亚硝酸叔丁基酯合成Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ； 或者，从在步骤(f-2)中得到的片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-NHNH2和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe使用酸和亚硝酸叔丁基酯合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -OMe ；或者，从在步骤(f-2)中得到的片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-OH 和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe ； 或者，从在步骤(f-2)中得到的片段 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-OH 和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe ；(h)从在步骤(g)中得到的Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm) -OMe 在氨的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp-Cys (Acm) -NH2 ； 或者，从在步骤(g)中得到的 Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-TrP (For) -Cys (Acm) -OMe 在氨存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -NH2 ； 或者，从在步骤(g)中得到的 Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys (Acm) -OMe 在氨的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm) -NH2 ；或者，从在步骤(g)中得到的 Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-TrP (For) -Cys (Acm) -OMe 在氨的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (For) -Cys (Acm) -NH2 ；(i)从在步骤(h)中得到的 Ac-Arg (Pbf)-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp-Cys (Acm) -NH2 在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys (Acm) -D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm)-NH2 ;以及(j)从在步 6 骤(i)中得到的 Ac-Arg-Cys (Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys (Acm)-NH2 使用氧化剂来合成 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2。
17.如权利要求16 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其中 所述氧化剂是碘； 所述偶联剂是DCC、HBTU、HATU、DIC、EDC或氯甲酸异丁基酯；且 所述的碱是Et2NH、TAEA、哌嗪、氢氧化钠或氢氧化钾。
18.Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2 的溶液相合成方法，其包含线性的分步的合成方法。
19.如权利要求12 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其中使用了被保护的氨基酸。
20.如权利要求19 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其中所述被保护的氨基酸选自Boc保护的氨基酸、Fmoc保护的氨基酸以及被保护的氨基酸的氟化物。
21.如权利要求20 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2 的溶液相合成方法，其中所述被保护的氨基酸的氟化物是Fmoc氨基酸氟化物或Bsmoc氨基酸氟化物。
22.如权利要求18-21 中任一项所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中二甲基环丙基甲基胺用于被保护的肽链的C端。
23.如权利要求22 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2 的溶液相合成方法，其中使用了 Fmoc-Cys (Trt) -NH_CMe2CP。
24.如权利要求23 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) -NH2 的溶液相合成方法，包含步骤(a)从Fmoc-Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在碱的存在下合成 H-Cys (Trt) -NH-CMe2CP ； (b)从Fmoc-Trp(Boc)-OH和在步骤(a)中的得到的H-Cys (Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ； (c)从在步骤(b)中得到的Fmoc-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP ；(d)从Fmoc-Arg (Pbf)-OH 和在步骤(C)中得到的 H-Trp (Boc)-Cys (Trt)-NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-Arg(Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ； (e)从在步骤(d)中得到的Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP 在碱的存在下合成 H-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(f)从Fmoc-D-Phe-OH 和在步骤(e)中得到的 H-Arg (Pbf)-Trp (Boc)-Cys (Trt)-NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc)-Cys (Trt)-NH-CMe2CP ； (g)从在步骤(f)中得到的Fmoc-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP 在减的存在下合成 H-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ； (h)从Fmoc-His (Trt)-OH 和在步骤(g)中得到的 H-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(i)从在步骤(h)中得到的Fmoc-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc)-Cys (Trt)-NH-CMe2CP 在碱的存在下合成 H-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(j)从 Fmoc-D-Ala-OH 和在步骤(i)中得到的 H-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc)-Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp(Boc) -Cys(Trt)-NH-CMe2CP ；(k)从在步骤(j)中得到的 Fmoc-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc)-Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在减的存在下合成 H-D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt)-NH-CMe2CP ；(I)从 Fmoc-Cys (Trt)-OH 和在步骤(k)中得到的 H-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-Cys (Trt) -D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP ；(m)从在步骤(I)中得到的 Fmoc-Cys (Trt)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在减的存在下合成 H-Cys (Trt) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP ；(η)从 Fmoc-Arg(Pbf)-OH 和在步骤(m)中得到的 H-Cys (Trt)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Fmoc-Arg (Pbf) -Cys (Trt) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(ο)从在步骤(η)中得到的 Fmoc-Arg (Pbf)-Cys (Trt)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在减的存在下合成 H-Arg (Pbf) -Cys (Trt) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(P)从在步骤(ο)中得到的 H-Arg (Pbf)-Cys (Trt)-D-Ala-His (Trt)-D-Phe-Arg (Pbf)-Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 和 Ac20、AcCl 或 AcBr 来合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Trt) -D-Ala-His(Trt) -D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys (Trt)-NH-CMe2CP ； 或者，从 Ac-Arg (Pbf)-OH 和在步骤(m)中得到的 H-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在偶联试剂的存在下合成 Ac-Arg (Pbf) -Cys (Trt) -D-Ala-His (Trt) -D-Phe-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP ；(q)从在步骤(P)中得到的 Ac-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp (Boc) -Cys (Trt) -NH-CMe2CP 在 TFA 的存在下合成 Ac-Arg-Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys-NH2 ;以及 (r)从在步骤(q)中得到的 Ac-Arg-Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys-NH2 在氧化剂的存在下合成 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys) _NH2。
25.如权利要求 24 所述的 Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2 的溶液相合成方法，其中所述氧化剂是碘、氧、空气或DMSO ；所述偶联试剂是DCC、HBTU、HATU、DIC, EDC或氯甲酸异丁基酷；且 所述的碱是Et2NH、TAEA或哌嗪。
全文摘要
本发明涉及使用溶液相肽化学来合成黑皮质素类似物Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的新方法。
文档编号A61K38/12GK102686601SQ201080051643
公开日2012年9月19日 申请日期2010年11月15日 优先权日2009年11月16日
发明者Z·X·董 申请人:益普生制药股份有限公司