专利名称：抗紫外光毒性的肽保护的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有生物学及治疗活性的肽。特别地，本发明涉及一种防护诱变物(mutagen)诱发的细胞/组织毒性的短肽。例如，本发明的肽可防护在暴露UV光之后发生的皮肤中毒性。本发明肽的一种功能为阻断磷酸化作用，及因此活化某些细胞周期调节蛋白质。本发明进一步涉及一种使用本发明肽降低在暴露诱变物(例如UV光)后的细胞/组织毒性程度的方法。
背景技术：
当将角质细胞暴露至诸如紫外线(UV)照射的DNA损伤元素(诱变物)时，会使细 胞周期检查点活化，从而阻碍细胞分裂。在诱变物诱发损伤之后，细胞周期会停滞在G2阶段，让DNA有时间修复。然而，若检查点过程被中断或抑制，则发生癌症(例如DNA突变)的频率会降低。此点已经在活体外及活体内通过在UV照射之前及之后将咖啡因施用至皮肤上而证实(LU 等人，2008，CANCER RES. 68 :2523-2529 ;HEFFERNAN 等人，2009，J. INVEST.DERMATOL. 129 :1805-1815)。此现象系根据咖啡因可抑制有丝分裂检查点途径，从而使DNA受损的细胞进行有丝分裂并经由细胞凋亡死亡，这是因为其DNA不能进行符合要求的复制过程。尽管有DNA突变/受损，但仍可进行细胞周期进程，及由此出现的凋亡细胞死亡可防止经诱变物诱发的突变在受影响的组织中固着。此过程从而减少否则可能发展成癌病变(诸如癌)的遗传上改变的细胞数量。在皮肤护理治疗及美容皮肤护理应用中使用此试剂，已经提升咖啡因减少UV光对皮肤的癌变影响的能力。然而，由于缺乏特异性，在皮肤护理产品中使用咖啡因遭到质疑。除了其有益作用外，咖啡因可诱发皮肤中的非所欲作用(例如血管舒张、干燥等)。基于这些缺点，已寻求其它方法用于预防诱变物在皮肤及相关组织中的损伤作用。使用短肽发展皮肤护理产品的用途已由于其以天然氨基酸为主的结构、特异性、无毒性及无副作用，而非常受欢迎。这些质量可使肽作为发展用于补充皮肤护理组合物的新颖化学预防试剂的适宜起始点。本文中阐述具有化学预防及化学治疗特性且可施用于保护皮肤不受太阳光的损伤作用的肽。发明概述本发明的实施方案涉及一种减少细胞周期检查点激酶的活性的方法。该方法可包括使检查点激酶暴露至长度为五至九个氨基酸残基且包括SEQ ID N0:13的肽。在此实施方案及其它实施方案中的细胞周期检查点激酶可呈活化状态。可应用于文中所述的此方法及其它方法中的肽的实例包括SEQ ID NO :2、3、5、6、8、或10或由其组成。可用于文中所述方法的肽的其它实例为具有与SEQ ID NO :13序列直接邻接的组氨酸残基的那些。其它肽可在其羧基末端酰胺化。该酰胺化肽的特定实例为包括SEQ IDNO :2、3、5、6、8、或10或由其组成的那些。
本公开方法靶向的检查点激酶可包括检查点激酶-I(ChkI)或检查点激酶-2 (Chk2)或由其组成。该检查点激酶可因细胞中的DNA受损而活化。该DNA受损可由诱变剂引起。诱变剂的实例为能够在皮肤中诱发DNA受损的那些(例如紫外线照射)。所公开的方法亦可包括使cdc25(细胞分裂周期25)磷酸酶暴露至文中所描述的肽；cdc25c为可在本发明中被靶向的cdc25c的实例。本发明的另一实施方案涉及一种处理哺乳动物的皮肤的方法。该方法包括通过使检查点激酶暴露至所公开的肽，而减少皮肤中细胞周期检查点激酶(例如Chk2)的活性。本发明的另一实施方案涉及一种通过将所公开的肽施用至皮肤而处理哺乳动物皮肤的方法。本发明的另一实施方案涉及一种长度为五至九个氨基酸残基及包括SEQ ID NO13的肽。该肽的实例包括SEQ ID N0:2、3、5、6、8、或10或由其组成。本发明的肽的其它实例具有与SEQ ID NO :13序列直接邻接的组氨酸残基。其它的肽可在其羧基末端酰胺化。该酰胺化肽的特定实例为包括SEQ ID NO :2、3、5、6、8、或10或由其组成的那些。本发明的另一实施方案涉及一种包括本发明的肽及药学上可接受载体的组合物。 该组合物可呈喷雾剂、乳液(emulsion)、液体、洗液(lotion)、乳膏、糊剂(paste)、软膏、粉末或泡沫的形式。附图
简述图I显示某些通常彼此比对的本发明肽(SEQ ID NOS : 1-10)及SEQ ID NO :11(人酪氨酸酶)的氨基酸序列。在某些肽(SEQ ID NOS :1-7)中，下面划线的残基构成SEQ IDNO 11的保守性氨基酸取代物。图2显示星形孢菌素(staurosporine)或某些本发明肽对检查点激酶2 (Chk2)活性的抑制。对照组Chk2活性用第一个长条表示。图中所示肽(SEQ ID NOS :2-6及8-10)在羧基末端酰胺化(-CONH2)。图3显示人Chk2 (SEQ ID NO :17)的氨基酸序列。此序列与美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站(或GENBANK)中以登录号AAH04207所公开的相同。图4显示人Chkl (SEQ ID NO 18)的氨基酸序列。此序列与NCBI网站(或GENBANK)以登录号AAC51736所公开的相同。图5显示人cdc25c(SEQ ID NO :19)的氨基酸序列。此序列与NCBI网站(或GENBANK)以登录号AAR32098所公开的相同。发明详述本发明肽(例如表I及图I中列出的那些)可包括L-或D-氨基酸对映异构体，其包含具有一种对应异构形式或两种形式的组合的残基。所述肽可如以下非限制性实例中所述而进一步强化或修饰，只要未改变其一级氨基酸序列即可；如此，所述肽由某些氨基酸序列组成，但可包括某些修饰。所述肽的羧基末端可为酸性(-C00H)或经酰胺化(例如-CONH2、-C0NHR、或-CONR2)。与其游离酸形式相比，羧基末端的酰胺化作用可使本发明肽较不易受蛋白酶降解的影响及可增加其溶解性，因而提供增强的治疗效力。所述肽亦可经脂质化，从而可增强皮肤渗透。连接各肽的氨基酸的一或多个分子键可为非肽键。该非肽键包括(但不限于)亚氨基、酯肼、氨基脲(semicarbazoide)及偶氮键。表I
权利要求
1.一种降低活化的细胞周期检查点激酶活性的方法，其中所述方法包括使所述检查点激酶暴露于肽，其中所述肽为五至九个氨基酸残基长度且包含SEQ ID N0:13。
2.权利要求I的方法，其中所述肽包含SEQID NO :10。
3.权利要求I的方法，其中所述肽为SEQID NO :10。
4.权利要求I的方法，其中所述肽为SEQID NO :2、3、5、6、或8。
5.权利要求I的方法，其中组氨酸残基与SEQID NO :13序列直接邻接。
6.权利要求I的方法，其中所述肽在羧基端酰胺化。
7.权利要求I的方法，其中所述检查点激酶为检查点激酶-2(Chk2)。
8.权利要求I的方法，其中所述检查点激酶由于紫外线照射引起DNA受损而活化。
9.权利要求I的方法，其中所述检查点激酶存在于人皮肤中。
10.一种处理哺乳动物皮肤的方法，其中所述方法包括将肽施用于所述皮肤，其中所述肽为五至九个氨基酸残基长度且包含SEQ ID NO:13。
11.一种肽，其中所述肽为五至九个氨基酸残基长度且包含SEQ ID NO:13。
12.权利要求11的肽，其中所述肽包含SEQID NO :10。
13.权利要求11的肽，其中所述肽为SEQID NO :10。
14.权利要求11的肽，其中所述肽为SEQID NO :2、3、5、6、或8。
15.权利要求11的肽，其中组氨酸残基与SEQID NO :13序列直接邻接。
16.权利要求11的肽，其中所述肽在羧基端酰胺化。
17.权利要求16的肽，其中所述肽为SEQID NO :10。
18.权利要求16的肽，其中所述肽为SEQID NO :2、3、5、6、或8。
19.一种组合物，其包含权利要求11的肽及药学上可接受载体。
20.权利要求19的组合物，其中所述组合物呈喷雾剂、乳液、液体、洗液、乳膏、糊剂、软膏、粉末或泡沫的形式。
全文摘要
公开了具有生物学及治疗活性的短肽。特别地，所公开肽的活性涉及减少或防护诱变物诱导的细胞/组织毒性(即化学预防)。例如，所公开的肽防护紫外(UV)光暴露所发生的皮肤毒性及/或突变发生。所公开的肽亦阻断某些细胞周期调节蛋白质(诸如Chk2)的活化。该肽的一个实例为Ser-Leu-Tyr-Gln-Ser(SEQ ID NO10)。所公开的肽亦可用于减少或防护暴露诱变物后另外所发生的细胞毒性及突变累积的方法。一种该方法涉及将肽施用至皮肤以预防或减少UV光(例如太阳光)暴露所引起的突变损伤。
文档编号A61K38/08GK102791281SQ201080052918
公开日2012年11月21日 申请日期2010年11月18日 优先权日2009年11月19日
发明者L·张, T·J·法拉 申请人:赫里克斯生物医疗公司