专利名称:治疗系统性红斑狼疮(sle)的人源化抗il-10抗体的制作方法
技术领域:
本发明涉及白细胞介素-10 (IL-10)和IL-10特异性试剂。特别地,本发明涉及人源化IL-10抗体及其应用。本发明还涉及治疗系统性红斑狼疮(SLE)的方法。
背景技术:
系统性红斑狼疮(SLE)据认为是自体免疫疾病,其中B淋巴细胞的异常机能亢进和免疫球蛋白Y(IgG)自体抗体的大量异常产生起着关键作用。该病理学过程导致Ig包覆的细胞的隐没和破坏、补体蛋白的固定和切割以及化学吸引素(chemotaxin)、血管活性妝和破坏性酶在组织中的释放(Hahn BH. Systemic Lupus Erythematosus. In:KasperDL, Braunwald E, Fauci AS, Hauser SL,Longo DL, Jameson, JL Ih ^ In:Harrison’ sPrinciples of Internal Medicine(第 16 版),New York (US) : McGraw-Hi 11; 2005,第 1960-1967 页)。SLE的特征在于多样性表现形式。在疾病进程中,总共95%的患者诉有肌肉骨骼疾病,80%表现出皮肤损伤,85%有血液疾病,60%有神经紊乱,60%有心肺疾病,30% 50%有肾脏疾病,40%有胃肠道疾病,15%有血栓且15%有眼部疾病。大多数的患者(95%)还经受在大多数时候均存在的系统性症状,如疲倦、不适、发烧、厌食和体重减轻。多数患者经历突发与缓解交替的疾病期。永久性缓解(不治疗时没有症状)极为罕见。超过50年之前,多数诊断为SLE的患者存活少于5年。现在,10年存活超过90%,这主要是基于早诊断、对症抗炎和免疫抑制治疗。常见死因为免疫抑制造成的感染(Hahn 2005)。在SLE治疗中常规使用抗疟疾药、抗炎药和免疫抑制药物。当症状难以控制时,对非甾体抗炎剂补充以皮质激素。此外,主要器官受累的活跃的SLE需要采用环磷酰胺的激进性疗法。迄今为止,还没有可用于治愈SLE和/或在长期基础上改善患者的生活品质的病因性治疗。然而,近来在抗体技术中的发展和对引起该自体免疫疾病的因素的进ー步鉴定已经开启了使用单克隆抗体作为治疗选择的可能性。特别地,治疗SLE的有利方法将是与导致多克隆自体抗体的大量过度产生的病理性免疫响应相互作用或将其纠正的特异性治疗。由于SLE的发病机理主要涉及失调的B细胞,特别受关注的是能够靶向B细胞的单克隆抗体。Robak 和 Robak (Current Drug Targets, 2009,第 10 期,第 26-37 页)注意到,潜在的 B 细胞表面抗原靶标是 CD19、CD20、CD21 和 CD22。此外,IL-10、IL-lra、IL-12 (Capper等,Clin. Exp. Immunol. 2004Nov; 138(2) :348-56)和 IL-6 (Chun 等,J. Clin. Immunol. 2007Sep ;27(5) :461-6)是调节免疫响应的重要细胞因子,且尤其在SLE患者的突发期间升高。IL-10和抗双链DNA (dsDNA)的自体抗体的血浆水平往往反映患SLE的患者的疾病活跃性。升高的IL-10水平与SLE患者的疾病活跃性相关(Park等,Clin. Exp. Rheumatol. 1998年5月-6月;16 (3) :283-8)。然而,IL-10是对免疫系统具有多效性的细胞因子,且已知其还參与降低促炎性响应。已对SLE患者进行了采用单克隆抗体的临床试验。特别地,几种试验涉及抗体利妥昔单抗(Rituximab),一种用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤的嵌合小鼠抗CD20单克隆抗体。Robak和Robak (2009)注意到,这些试验的结果显示出该抗体在SLE患者中较高的活性,且已开发了数种新的靶向⑶20的抗体(Ofatumumab、IMMU-106和GA-101)。其它报道了单克隆抗体在SLE中的活性的临床试验采用抗CD22抗体、依帕珠单抗(Epratuzumab)、抗TNF a 抗体、英夫利昔单抗(Infliximab)、抗 IL-10 抗体、B-N10 (Llorente 等,ArthritisRheum. 2000 年 8 月;43 (8) : 1790-800)、抗 CD40L 抗体、IDEC 131 和 BG 9588、BLYS 抑制剂、贝利单抗(Belimumab)、抗IL6受体抗体、妥克利母单抗(Toclimumab)和抗C5抗体依库珠单抗(Eculizumab)完成。本发明的目的在于提供在该领域具有功用的其他试剂、特别是抗体。因此,本发明提供了能够结合白细胞介素-IO(IL-IO)的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中能够将所述抗体或其片段施用于受试对象,而没有促炎性细胞因子水平的无法耐受的增加的情况。由于IL-IO代表抗炎性细胞因子,因此预期的是阻断时细胞因子会显著增加。对·于鼠IL-IO抗体B-NlO而言,施用时可以在未经刺激的细胞培养物(其反映了健康个体的体内状況)中观察到如1し-6或1即-0等促炎性细胞因子的増加。然而,本发明人惊讶地发现当将本发明的抗体在体外被应用于细胞时和体内施用时,细胞因子的释放低得多。这种细胞因子释放的降低是有利的,因此本发明的抗体对于接受施用的个体而言更具可耐受性。将參考以下附图仅通过示例的方式对本发明进行说明,其中图IA显示了鼠B-NlO抗体的轻链可变区的氨基酸序列(SEQ ID No:2)。高变互补决定区(CDR)以下划线标出(其中LCDRl为SEQ ID No: 4 ;LCDR2为SEQ ID No:5;且LCDR3为 SEQ ID No:6)。图IB显示了鼠B-NlO抗体的重链可变区的氨基酸序列(SEQ ID No:3)。高变互补决定区(CDR)以下划线标出(其中HCDRl为SEQ ID No:7 ;HCDR2为SEQ ID No:8;且HCDR3为 SEQ ID No:9)。图2A显示了编码鼠B-NlO抗体的轻链可变区的核苷酸序列(SEQ ID No: 10)。图2B显示了编码鼠B-NlO抗体的重链可变区的核苷酸序列(SEQ IDNo: 11)。图3显示了鼠B-NlO轻链和重链可变区(分别为SEQ ID No: 12和13)以及取自A17(SEQ ID No: 14)、JKl (SEQ ID No: 15)、3-66+04(SEQ ID No:16)和 JH4(SEQ ID No: 17)的序列和在鼠B-NlO抗体的人源化过程中产生的可变区hVLl hVL12 (SEQ IDNo :18 29)和可变区hVHl hVH29 (SEQ ID No:30 58)的氨基酸序列。图4提供了使用hIL-10抗原ELISA的人源化抗体变体与嵌合cB_N10抗体的抗原结合性质的比较。图5提供了使用纯化抗体制备物,与嵌合CB-NlO抗体相比,确定三种人源化变体hVH20/hVL7、hVH20/hVL8 和 hVH26/hVL7 的结合性质的結果。图6A显示与BT-063相比,以B-NlO (50 y g/ml)温育后的健康志愿者的全血培养物释放的TNF-a的水平。图6B显示与BT-063相比,以B-N10 (50 y g/ml)温育后的SLE患者的全血培养物释放的TNF-a的水平。
图7A显示与BT-063相比,以B-N10 (50 u g/ml)温育后的健康志愿者的全血培养物释放的IL-6的水平。图7B显示与BT-063相比,以B-N10 (50 y g/ml)温育后的SLE患者的全血培养物释放的IL-6的水平。图8A显示与BT-063相比,以B-N10 (50 ii g/ml)温育后的健康志愿者的全血培养物释放的IL-I P的水平。图8B显示与BT-063相比,以B-N10 (50 u g/ml)温育后的SLE患者的全血培养物释放的IL-I P的水平。图9A显示与BT-063相比,以B-NlO (50 ii g/ml)温育后的健康志愿者的全血培养物释放的IFNy的水平。
图9B显示与BT-063相比,以B-N10 (50 u g/ml)温育后的SLE患者的全血培养物释放的IFNy的水平。
图10显示了与IL-10结合的BT-063的Fab片段的总体结构。IL-10和Fab片段以带状图显示。图11显示了 BT-063的Fab片段处于IL-10上的与IL-10受体相同的结合位点。IL-10、IL-10R1和Fab片段以带状图显示。图12显示了在健康志愿者中进行BT-063体内施用后血浆中细胞因子浓度的平均cmax与剂量的关系图。图13显示了在健康志愿者中进行BT-063体内施用后血浆中平均IL-10浓度随时间变化的图。
具体实施例方式本发明涉及能够结合白细胞介素IO(IL-IO)的人源化或嵌合抗体或其片段,以及该抗体或其片段在由IL-10水平或活性升高所介导的医学状况的治疗中的应用。人IL-10是具有37kDa分子量的同源ニ聚体。每个单体均由160个氨基酸构成并且分子量为18. 5kDa。IL-10 ニ聚体与IL-10受体a (IL-Ra或IL-10R1)相互作用并随后将IL-10受体P (IL-IOR^或IL-10R2)募集至复合物中。受体在多种细胞特别是免疫细胞上表达(AsadulIah等,Pharmacol. Rev. 2003 Jun; 55 (2) :241-69),包括大多数血源细胞,如单核细胞、巨噬细胞以及T淋巴细胞和B淋巴细胞,但也在非血源细胞上表达,例如表皮细胞或角质细胞。IL-10对IL-10受体a的结合和IL-10受体P的募集导致经由Jakl和Tyk2酪氨酸激酶的信号转导以及随后的对STAT家族的转录因子的活化。IL-10的各种细胞来源是已知的,如T辅助细胞、调节T细胞、单核细胞、巨噬细胞、B细胞、嗜酸性粒细胞、月巴大细胞、角质细胞、树突细胞,甚至癌细胞。B细胞上的IL-10功能包括避免凋亡、提高増殖、类别转换事件和分化为血浆细胞(Asadu 11 ah 等,Pharmaco I. Rev. 2003 Jun; 55 (2) :241-69)以及抑制炎症。本发明提供了能够结合白细胞介素-10 (IL-10)的人源化或嵌合的抗体或其片段,其中能够将所述抗体或其片段施用于受试对象,而没有促炎性细胞因子水平的无法耐受的增加的情况。具体而言,已知治疗性抗体的施用能导致促炎性细胞因子水平的无法耐受的增カロ,从而在受试对象中引起副作用。具体而言,所述无法耐受的増加能导致皮肤变红并引起发烧或流感样症状,包括体温升高。于是,在本发明的优选方面,所述抗体或抗体片段是能够施用于受试对象而没有大于2°C的体温増加的情况的抗体或抗体片段。此外,所述抗体或其片段不会导致施用后受试对象的血浆中促炎性细胞因子的量显著增加。所述细胞因子的无法耐受的水平通常比细胞因子正常上限高(ULN)出数倍,其中ULN被定义为在受试对象群体中測定的细胞因子平均水平加上2X标准偏差。因此,在本发明的优选方面,所述抗体或其片段能能够施用于受试对象,而没有促炎性细胞因子的增加大于正常上限(ULN)的500%、更优选大于其300%的情況。换言之,所述抗体或其片段导致小于促炎性细胞因子ULN的500%、更优选小于300%的该细胞因子水平的増加。优选的是,所述促炎性细胞因子是TNF-a、IFN-Y、IL-I P中的至少ー种,优 选为全部。作为另ー种选择,所述促炎性细胞因子不是IL-6或IL-8。另外,特别优选的是,本发明的抗体或其片段能在受试对象中诱导IL-I受体拮抗剂(IL-lra),后者导致抗炎性响应。在本发明的优选方面,所述人源化抗体或其片段在与PBMC、更特别是免疫细胞在体外接触时不会引起释放自该细胞的促炎性细胞因子(尤其是TNF-a、IL_10、IL_6)水平的大于500%的增加。本发明人令人惊讶地发现,与鼠B-NlO抗体相比,本发明的人源化抗体或其片段在体外测试中引起促炎性细胞因子的水平的更小的増加。利用人全血培养物(例如下述实施例5中的那些研究)或分离的免疫细胞通过体外研究,可以确定促炎性细胞因子的释放水平。具体而言,所述方法包括以下步骤(a)将细胞培养物与抗体或其片段温育;和(b)确定至少ー种促炎性细胞因子的水平。人全血培养物可以取自健康人或患者,如罹患SLE的那些患者。外周血单个核细胞(PBMC)可以为免疫细胞,特别选自巨噬细胞、单核细胞、树突细胞、T辅助细胞和B细胞。所述至少一种促炎性细胞因子可以分别选自白细胞介素13 (IL-1 @ )、IL-I a、IL-6或肿瘤坏死因子a (TNF-a)或T辅助细胞因子(干扰素Y、IFN-Y、IL-4)、巨噬细胞因子(IL-12)、趋化因子(IL-8、MCP-1)。所释放的此类细胞因子的水平可以使用本领域公知的方法在细胞培养物上清液中測定。更具体而言,这种体外方法可以包括以下步骤a)使50 U g/ml所述抗体或片段与人全血培养物接触;b)将所述抗体或片段与所述全血培养物在37°C温育48小时;c)确定所述培养物中一种或多种促炎性细胞因子的量。特别地,同时用未与所述抗体接触过的人全血培养物执行该方法。优选地,当与该对照比较时,本发明的抗体或抗体片段导致小于500%的细胞因子水平増加、更优选导致小于300%的细胞因子水平増加。优选的是,该方法中的细胞因子不是IL-6或IL-8。可以采用Multiplex Bead免疫测试(在96孔过滤板中进行的固相蛋白测试)来在培养物中检测细胞因子。该方法依赖于珠的应用,所述珠首先与针对特定细胞因子的特定抗体连接,其次展示出明确的光谱特性。这使得所述珠能被特异性鉴别,并因此将它们导向已知的连接抗体。借助于检测抗体与所述细胞因子进ー步结合,可以将与珠结合的细胞因子定量。这使得可以同时检测多达10种人细胞因子,包括GM-CSF、IL-I P、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IFN- y和TNF- a。过滤板用于该目的,在过滤板的湿润孔中移注样品、标准物和珠溶液。温育后,用真空泵抽吸液体,将留下的珠洗涤,并添加生物素化检测抗体的混合物。通过抽吸液体除去未结合的检测抗体,并洗涤遗留在孔中的珠,然后添加链霉亲和素缀合的R-藻红蛋白(链霉亲和素-RPE)。链霉亲和素-RPE在温育期间识别生物素化的检测抗体,在再次洗涤后,可以通过Bio-Plex 200系统分析所形成的免疫复合物。免疫测试利用Bio-Plex 200装置进行分析。该装置使用两种激光体系,其首先基于珠的光谱特性来识别珠,然后通过使用ニ抗的检测来确定结合的细胞因子的量。对结合量的定量借助采用已知量的细胞因子平行进行的标准物运行来实现。本发明还提供了能与白细胞介素IO(IL-IO)结合的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中所述抗体或其片段能够在施用于受试对象时提高IL-IO的血浆水平。如下文实施例8所展示,可以施用本发明的抗体而没有促炎性细胞因子水平的无法耐受的增加的情況,同时施用以剂量依赖性方式増加了血浆样品中可检测的IL-10的量。对于IL-10水平会在应用中和抗体时增加的这ー发现是出人意料的。通常预期的是,施用细胞因子中和剂会降低游离细胞因子的水平(Strand等,Nature Reviews Drug Discovery, 2007,第6卷,第75_92页)。虽然不希望受到理论束缚,但据信所述抗体对IL-10的结合阻止了 IL-10与IL-10受体结合并触发了导致B细胞产生更多IL-10的负反馈环。尽管如此,这种上调不会阻止本发明的抗体的治疗性功用,因为也如实施例8所展示,所述抗体在以足以中和所有IL-10的高水平施用时仍是安全的。在本申请中,术语“嵌合抗体”是指这样的抗体其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类别或子类别的抗体中的序列相同,同时该抗体的其余部分与源自另一物种、抗体类别或子类别的抗体中的序列相同。特别优选的是,嵌合抗体的CDR具有ー个来源,而该抗体的其余部分具有不同的来源。特别地,在本发明中,嵌合抗体可以为其中已将非人类抗体的抗原结合序列/可变域移植到人类抗体框架区的人源化抗体。在本申请中,术语“片段”是指仍然保留所需生物活性的抗体的片段或衍生物。所述片段通常包含抗体的抗原结合区,且特别地包含Fab、Fab'、F(ab) ' 2、Fv和scFv片段,以及多价抗体衍生物、特别是双价抗体(diabody)或串联双价抗体。所述片段优选为至少25个、更优选50个且进而更优选200 500个氨基酸。作为另ー种选择,所述片段可以被限定为具有30KDa 150kDa的尺寸的那些片段。此外,抗体片段可以涉及两个或多个肽/多肽链。例如,包含长度各自为200 300个氨基酸的两条链的Fab片段,或包含长度各自为400 500个氨基酸的两条链的TandAbs (四价双特异性抗体形式)。本发明的ー个优选特征在于,所述抗体或其片段源自鼠B-NlO抗体或本文所述的人源化BT-063 (变体hVH26/hVL7)抗体。特别地,此类抗体或其片段包含与B-N10/BT-063可变轻链的CDR1、CDR2和CDR3的同一性为至少80%的CDR,和/或包含与B-N10/BT-063可变重链的⑶RU⑶R2和⑶R3的同一性为至少80%的氨基酸序列。鼠⑶R的氨基酸序列如图I所示。BT-063 CDR的氨基酸序列如实施例6所示。更优选的是,所述序列与B-NlO/BT-063抗体的⑶R的同一性为至少90%或至少95%。本文实施例6中所述的X射线晶体学研究表明了⑶R内的哪些残基对于与IL-10的结合是重要的。作为另ー种选择,本发明的抗体或片段仍然源自B-N10/BT-063抗体,并且可以包含B-N10/BT-063可变轻链的CDRl、CDR2和CDR3的氨基酸序列和/或B-N10/BT-063可变重链的⑶R1XDR2和⑶R3的氨基酸序列,且在这些序列中可选地具有不会显著改变所述抗体或其片段的亲和カ和/或特异性的变异。特别地,与包含鼠B-NlO抗体或BT-063 (变体hVH26/hVL7)抗体的CDR的抗体或片段的亲和カ或特异性相比,序列中的所述变异不会降低所述抗体或片段对IL-10的亲和カ或特异性。在具体实施方式
中,本发明提供了包含B-N10/BT-063可变轻链和/或重链的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的人源化或嵌合的抗体或其片段。更优选地,本发明提供了人源化或嵌合的抗体或其片段,所述抗体或其片段包含鼠抗体B-NlO的可变域的氨基酸序列,如图I所示。最优选地,所述抗体或片段包含BT-063的可变域的氨基酸序列(SEQ IDNo:69和SEQ ID No:70)中的ー个或两个。通常,本发明的抗体还包含人恒定区(Fe)。这可以选自来自任何类型的免疫球蛋白(包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE以及包括IgGl、IgG2、IgG3和IgG4在内的任何同种型)的恒定区。优选的恒定区选自IgG、特别是IgGl的恒定区。
其它产物本发明还提供了编码上述抗体或抗体片段的核酸序列。所述核酸序列可以为DNA或RNA,但优选DNA。所述序列可以用在表达盒或载体中,且特别可用于制备本文所公开的抗体及其片段。本发明还提供了用这些多核苷酸、表达盒或载体转化的宿主细胞。合适的宿主细胞可以为原核细胞和真核细胞。作为另ー种选择,所述宿主细胞可以为通过将产生本发明的抗体的细胞与骨髄瘤细胞融合而获得的杂交瘤。上述宿主细胞可以用于制备抗体或其片段的方法中。特别地,此类方法可以包括在允许抗体或其片段表达的条件下在合适的培养基中培养宿主细胞并从所述培养基中分离所述抗体或片段的步骤。这类型的方法在本领域中公知且有所描述。医学用途本文所述的抗体及其片段可应用于治疗由IL-10水平或活性升高所介导的疾病或医学状況。结果,本发明提供了一种治疗或预防受试对象中的医学状况的方法,其中所述医学状况由IL-10水平或活性升高所介导,所述方法包括施用治疗有效量的本文所述的抗体或其片段。特别地,由IL-10水平或活性升高所介导的所述医学状况是SLE。因此,本发明还提供了用于SLE的治疗的本文所述的抗体或其片段。其它实例为血小板减少性紫癜、狼疮肾炎、HIV、hCMV和丙型肝炎。另ー个实例是通过直接支持增殖或抑制免疫响应而对依赖于IL-10的肿瘤细胞的治疗。本发明的另ー个实施方式是包含上文所述的抗体或其片段以及药物可接受载剂或稀释剂的药物组合物。在一个实施方式中,所述组合物包含偶联有抗体或其片段的脂质体。此类组合物可以通过胃肠外、静脉内或皮下对患者施用。优选地,在SLE治疗中,抗体或其片段通过静脉内或皮下施用。所述抗体或其片段特别可用于治疗疾病,其原因在于,由于其不会导致促炎性细胞因子水平的显著增加,它们无需共施用皮质激素以避免对于患者将无法耐受的“细胞因子风暴(cytokine storm) ”。因此,在ー个特定方面,本发明提供了用于治疗或预防受试对象中的医学状况的方法,其中所述医学状况由IL-10的水平或活性升高所介导,所述方法包括对所述受试对象施用治疗有效量的本文所述的抗体或其片段,其中所述受试对象未同时或另行接受皮质激素治疗,即所述患者是没有在同时接受皮质激素治疗的患者。在该优选方面的实施方式中,由IL-10水平或活性升高所介导的医学状况是SLE。皮质激素目前在许多患者中被用来治疗SLE。然而,本发明的该方面在其中施用皮质激素不再理想的患者的治疗中具有特殊功用。非医学用途本发明还提供了经标记的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其包含本文所述的抗体或其片段和标签。所述标签可以为本领域内已知的用于检测样品中抗体的存在的任何合适类型的标签。特别地,所述标签为荧光标签。 标记的或未经标记的抗体、特别是经标记的抗体在检测样品中是否存在抗体的体外方法中具有特定功用。所述方法可以包括以下步骤使未经标记的或经标记的抗体或其片段与样品接触,洗涤样品以除去未与样品结合的抗体及其片段(即未结合的抗体或抗体片段),和检测样品中是否存在所述抗体(或片段)(例如经由所述标签进行检测)。作为另ー种选择,未经标记的抗体或片段可以在中和样品中IL-10的体外方法中使用。此类方法包括使样品与抗体或其片段接触以使所述抗体或其片段与IL-10结合的步骤。现在将结合以下具体实施方式
对本发明进行描述。实施例实施例I.鼠抗IL-10抗体B-NlO的表征I. I编码B-NlO可变抗体域的DNA的分离为鉴定鼠BN-10的可变序列,使用了细胞沉淀。将样品(3XB-N10,传代3,IX IO7个细胞)储存在_80°C,直至将mRNA从细胞中分离,并且在cDNA合成后,通过PCR扩增B-NlO的可变序列,然后进行克隆。对于可变轻链和可变重链,对总共14个克隆体进行测序(SEQLaboratories, Gottingen )和分析。明确确定了 B-N10的可变序列。偏差仅出现在N端引物区中(见表I)。在可变重链的情形中,序列变体QVQLKQ (SEQ ID No: 59)在引物区出现9次,但其它变异仅出现一次或两次。选择该变体用于进行亚克隆。在可变轻链的情形中,两种变体以相等比例存在。在所述序列与鼠种系序列进行比较后,仅具有3个突变的crl序列展示出与所鉴定的VL序列很大的同源性。这意味着DVLMTQ(SEQ ID No:60)序列最有可能是正确的序列。序列DIVMTQ(SEQ ID No:61)是典型的另ー类种系序列并因此被排除。表I.经测序的B-N10可变轻链和重链的N端序列变体的出现(所选序列以粗体表示)
权利要求
1.一种人源化的或嵌合的抗体或其片段,所述抗体或其片段能够结合白细胞介素-10 (IL-IO),其中能够将所述抗体或其片段施用于受试对象,而没有促炎性细胞因子水平的无法耐受的增加的情況。
2.如权利要求I所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中,所述抗体或其片段能够施用于受试对象,而没有大于2°C的体温増加的情況。
3.如权利要求I或权利要求2所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中,所述抗体或其片段能够施用于受试对象,而没有促炎性细胞因子増加大于正常上限(ULN)的500%的情况,其中所述促炎性细胞因子选自TNF- a、IFN- y、IL-I ^。
4.如权利要求3所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中,所述抗体或其片段能够施用于受试对象,而没有促炎性细胞因子増加大于正常上限(ULN)的300%的情況。
5.如前述权利要求中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,所述抗体或其片段能够在所述受试对象中诱导IL-I受体拮抗剂(IL-Ira)。
6.如权利要求I所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中,所述抗体在与外周血单个核细胞(PBMC)在体外接触时不会引起释放自所述细胞的促炎性细胞因子水平的大于500%的增加。
7.如前述权利要求中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中,所述促炎性细胞因子是TNF-a、IFN-Y、IL-I ^中的至少ー种。
8.如权利要求I 7中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中,所述抗体或其片段源自鼠B-NlO抗体。
9.如前述权利要求中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中,所述抗体或其片段包含与鼠抗体B-NlO可变轻链的⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列,和/或包含与鼠抗体B-NlO可变重链的⑶R1XDR2和⑶R3的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列。
10.如权利要求9所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中,所述抗体或其片段包含鼠抗体B-NlO可变轻链和可变重链的⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列。
11.如权利要求I 7中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中,所述抗体或其片段包含鼠抗体B-NlO可变轻链的CDRl、CDR2和CDR3的氨基酸序列和/或鼠抗体B-NlO可变重链的⑶R1XDR2和⑶R3的氨基酸序列,并且在这些序列中可选地具有基本上不会改变所述人源化抗体或其片段的亲和カ和/或特异性的变异。
12.如前述权利要求中任一项所述的人源化的或嵌合的抗体或其片段,其中,所述抗体或其片段包含鼠抗体B-NlO可变轻链的氨基酸序列和/或鼠抗体B-NlO可变重链的氨基酸序列。
13.ー种核酸,所述核酸编码权利要求I 12中任一项所述的抗体或其片段。
14.ー种载体,所述载体包含权利要求13所述的核酸。
15.—种宿主细胞,所述宿主细胞包含权利要求13所述的核酸或权利要求14所述的载体。
16.ー种制备权利要求I 12中任一项所述的抗体或其片段的方法,所述方法包括以下步骤在允许所述抗体或其片段表达的条件下在培养基中培养权利要求15所述的宿主细胞,和从所述培养基中分离所述抗体或其片段。
17.ー种药物组合物,所述药物组合物包含权利要求I 12中任一项所述的抗体或其片段,并且还包含药物可接受载剂。
18.一种治疗或预防受试对象中的医学状况的方法,其中,所述医学状况由IL-IO的水平或活性升高而介导,所述方法包括对所述受试对象施用治疗有效量的权利要求I 12中任一项所述的抗体或其片段。
19.一种治疗或预防受试对象中的医学状况的方法,其中,所述医学状况由IL-10的水平或活性升高而介导,所述方法包括对所述受试对象施用治疗有效量的权利要求I 12中任一项所述的抗体或其片段,其中所述受试对象未同时或另行接受皮质激素治疗。
20.如权利要求18或权利要求19所述的治疗或预防受试对象中的医学状况的方法,其中,所述医学状况是系统性红斑狼疮(SLE)。
21.用于医学应用的权利要求I 12中任一项所述的抗体或其片段。
22.用于治疗患者的SLE应用的权利要求I 12中任一项所述的抗体或其片段。
23.如权利要求22所述的应用的抗体或其片段,其中,所述患者未同时或另行接受皮质激素治疗。
24.权利要求I 12中任一项所述的抗体或其片段在制备用于治疗患者的SLE的药物中的应用。
25.如权利要求24所述的应用,其中,所述患者未同时或另行接受皮质激素治疗。
26.—种经标记的抗体或其片段,其包含权利要求I 12中任一项所述的抗体或其片段以及标签。
27.—种中和样品中的IL-10的体外方法,所述方法包括下述步骤使所述样品与权利要求I 12中任一项所述的抗体或其片段接触,以便将所述抗体或其片段与IL-10结合。
28.一种用于检测样品中是否存在IL-10的体外方法,所述方法包括以下步骤使权利要求I 12中任一项或权利要求26所述的未经标记的或经标记的抗体或其片段与所述样品接触,洗涤以除去未与所述样品结合的抗体或抗体片段,和检测所述样品中是否存在所述抗体或其片段或者所述标签。
全文摘要
本发明提供了能够结合白细胞介素-10(IL-10)的人源化或嵌合的抗体或其片段,其中能够将所述抗体或其片段施用于受试对象,而没有促炎性细胞因子水平的无法耐受的增加的情况。此外,本发明提供了涉及应用所述抗体或其片段的治疗方法。
文档编号A61K39/395GK102811736SQ201080062098
公开日2012年12月5日 申请日期2010年11月30日 优先权日2009年11月30日
发明者弗兰克·奥斯特罗斯, 克里斯托夫·尤尔克, 克里斯托夫·布鲁切尔, P·罗特根, 本杰明·德尔肯, A·英格利恩, 尚塔尔·祖伯, 尼古拉斯·蔡洛特, 安德里亚·瓦滕贝格-德曼特, M·古特斯切尔, J·维赛斯-卡安茨 申请人:生物测试股份公司