阿德福韦酯脂质体固体制剂的制作方法

专利名称：阿德福韦酯脂质体固体制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种脂质体制剂，特别地涉及以一种阿德福韦酯脂质体固体制剂及其 制法，属于医药技术领域。
背景技术：
乙型肝炎病毒(h印atitis B virus)是指引起人类急、慢性肝炎的DNA病毒，也称 丹氏颗粒，简称HBV，属嗜肝DNA病毒科(h印adnaviridae)，基因组长约3. 21Λ，为部分双链 环状DNA，HBV的抵抗力较强。我国的乙肝病毒感染率约60% -70% ；乙肝表面抗原携带率 约占总人口的7. 18%，以此计算，全国约有9300万人携带乙肝病毒，其中乙肝患者大约有 3000 万。阿德福韦酯是新型核苷类抗乙型病毒性苷类药物，临床研究资料表明，阿德福韦 酯能有效地抑制HBV DNA的复制，使HBV DNA滴度迅速降低，而且在出现拉米夫定耐药的患 者中阿德福韦酯能继续有效地抑制变异株。阿德福韦酯是腺嘌呤磷酸酯化合物阿德福韦的 前药，口服后，在体内转化为阿德福韦发挥抗病毒作用。阿德福韦是单磷酸腺苷的核苷酸类 似物，在体内通过细胞激酶作用被磷酸化为具有活性作用的二磷酸阿德福韦，二磷酸阿德 福韦抑制HBV DNA多聚酶或逆转录酶作用机制包括(1)竞争脱氧腺苷三磷酸底物；(2)终 止病毒DNA链延长。二磷酸阿德福韦对HBV DNA多聚酶的抑制常数为0. lmmol/L ；对人类 DNA多聚酶阿尔法和伽马的抑制作用较弱，其抑制常数分别为1. 18mmol/L和0. 97mmol/L, 因此，治疗剂量对正常细胞没有毒性。目前上市的阿德福韦酯的产品有胶囊和片剂两种形式，单剂口服阿德福韦酯的生 物利用度约为59%，为了提高阿德福韦酯的生物利用度，增强对肝脏的靶向性，本人对阿德 福韦酯脂质体固体制剂进行研究，增强阿德福韦酯的功效。专利文献CN1857^1A公开了一种阿德福韦酯脂质体注射剂及其制备方法，重量 组分为阿德福韦酯0. 01-1%，制备脂质体的脂质0. 05-15%，其中脂质成分选自大豆卵磷 脂、蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、泊洛沙姆、二肉豆蔻酰磷脂酰 胆碱、苄泽类非离子型表面活性剂、胆固醇。该申请中，由上述脂质成分制得的脂质体包封 率较低，渗漏率高，制得的脂质体注射剂稳定性较差。专利文献CN1891225A公开了一种阿德福韦酯乳化制剂及其制备方法，其制剂的 组分按重量配比为阿德福韦酯0. 5-5份，中链油56-85份，乳化剂10-45份，恒温水浴加热 至均一、透明的溶液，常温下冷却、压制成软胶囊。该申请是通过油和乳化剂共同作用将阿 德福韦酯乳化，制成制剂，提高了溶解性，但收率较低，制备工艺较为复杂。

发明内容
本发明人经过长期认真地研究，发现将阿德福韦酯和特定比例的二月桂酰磷脂酰 胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80的组合制成脂质体，再和适于制备固体制剂的其它可药用 赋形剂制成固体制剂，很大程度上提高了阿德福韦酯的溶解性，有利于药物制剂的溶出，改
3善了本制剂的生物利用度，而且还提高了制剂的稳定性，本发明制得脂质体粒径均一，包封 率高，渗漏率低，提高了制剂产品质量，减少了毒副作用。本发明人经过大量的筛选试验，发现采用一般的乳化剂和胆固醇为膜材料制备的 脂质体在高温40°C，相对湿度75%加速试验下，稳定性和包封率不佳。本发明人最终筛选 到二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80这三种材料的组合，出乎意料的发现二 月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80三种材料的组合，解决了脂质体的稳定性和 包封率不佳的问题，获得意想不到的技术效果，从而提供了质量优良的脂质体。虽然不想受 到理论限制，但是本发明的效果可能是特定比例的二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚 山梨酯80三种物质共同和/或协同作用的结果。本发明提供的技术方案如下本发明提供了一种阿德福韦酯脂质体固体制剂，该固体制剂包括阿德福韦酯、二 月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80的组合、及适于制备固体制剂的其它可药用 赋形剂，其中阿德福韦酯、二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80的重量份数比 例为阿德福韦酯1份，二月桂酰磷脂酰胆碱2 22份，去氧胆酸钠0. 5 10份，1. 5-8份 聚山梨酯80。更优选地，所述固体制剂中的阿德福韦酯脂质体包括上述比例的阿德福韦酯、 二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80的组合。作为本发明的一个优选的实施方案，其中阿德福韦酯、二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧 胆酸钠和聚山梨酯80的重量份数比例为阿德福韦酯1份，二月桂酰磷脂酰胆碱3 8份， 去氧胆酸钠1 6份，2. 2-4份聚山梨酯80。上述所述的阿德福韦酯脂质体固体制剂，其中所述的辅料没有特别限制，可以为 药剂学中常用的固体制剂的药剂辅料，比如可以选自填充剂、崩解剂、粘合剂、矫味剂、芳香 剂、润滑剂。在一个上述实施方案中，其中所包含其它可药用赋形剂的重量份比例为(以其 中包含的阿德福韦酯的重量为1份计)填充剂0 15份，崩解剂0 1份，粘合剂0. 1 1份，矫味剂O 100份，芳香剂0 3份，润滑剂0 0. 6份。作为优选，其中所述的填充剂选自微晶纤维素、乳糖、淀粉、预胶化淀粉、山梨醇、甘露醇、糊精、硫 酸钙、磷酸氢钙中的一种或几种，优选乳糖和淀粉；所述的崩解剂选自羧甲基淀粉钠、低取代羟丙纤维素、交联聚维酮、交联羧甲基纤 维素钠、干淀粉中的一种或几种，优选交联聚维酮；所述的粘合剂选自聚维酮K3tl、羟丙甲纤维素、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、糖浆中的 一种或几种，优选聚维酮K3tl;所述的矫味剂选自蔗糖、阿斯帕坦、糖精钠、甜菊素中的一种或几种；所述的芳香剂选自橘子香精、草莓香精、巧克力香精、薄荷香精、牛奶香精中的一 种或几种；所述的润滑剂选自硬脂酸镁、滑石粉、胶性二氧化硅、PEG6000、十二烷基硫酸钠等 中的一种或几种。进一步地，本发明还提供上述阿德福韦酯固体制剂的制备方法，其包括如下步 骤a.脂质体的制备
(1)将阿德福韦酯、二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80溶于溶剂中， 混合均勻，减压除去溶剂后制得磷脂膜；(2)加入缓冲液使磷脂膜完全水化，再用组织捣碎机勻质乳化，制成脂质体混悬 液；(3)将混悬液冷冻干燥或喷雾干燥后得到阿德福韦酯脂质体；b.固体制剂的制备(1’ )将得到的阿德福韦酯脂质体粉碎，过60-80目筛，备用；(2’ )将任选的填充剂、崩解剂、矫味剂粉碎，过60-80目筛，混合，备用；(3’)将上述步骤(1’)和O’)得到的物质混合均勻，加入粘合剂、芳香剂制软材， 过20-30目筛制粒，50-60°C烘干，加入润滑剂混合均勻，整粒(优选18目筛)；(4’ )将干燥的颗粒进行分装，即得阿德福韦酯颗粒剂；或将干燥的颗粒进行压 片，即得阿德福韦酯片剂；或将干燥的颗粒填充入胶囊即得阿德福韦酯胶囊。作为本发明的一个优选的实施方案，其中在a.脂质体的制备的步骤(1)中所述的 溶剂可以为有机溶剂，例如选自乙醇、甲醇、三氯甲烷、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、 苯甲醇、正己烷中的一种或几种，优选的溶剂为三氯甲烷，溶剂的用量优选地为阿德福韦 酯、二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80总重量的5-10倍体积。作为本发明的一个优选的实施方案，其中在a.脂质体的制备的步骤( 中所述的 缓冲液溶液为PH值为4. 5 7. 5的药学上可接受的缓冲液溶液，例如缓冲盐溶液选自磷酸 盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种。优选地，加入上述缓冲 液的量为16-40重量份(相对于阿德福韦酯重量为1份计)。作为本发明的一个优选的实施方案，其中在a.脂质体的制备的步骤( 中组织捣 碎机勻质乳化10-20min，转速为12000_15000r/min。作为本发明的一个优选的实施方案，上述的阿德福韦酯脂质体是通过包括如下步 骤的方法制备的(1)将阿德福韦酯、二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80溶于三氯甲 烷中，混合均勻，于旋转蒸发仪上减压除去三氯甲烷，制得磷脂膜；(2)加入缓冲盐溶液使磷脂膜完全水化，再用组织捣碎机勻质乳化10-20min，转 速为12000-15000r/min，制成脂质体混悬液；(3)将混悬液冷冻干燥或喷雾干燥，得到阿德福韦酯脂质体。本发明的技术方案还包括一种阿德福韦酯固体制剂，由上述所述的阿德福韦酯 脂质体和药学上可接受的其它辅料组成，例如可以为颗粒剂、片剂、胶囊剂。在本发明中，如果没有特别地说明，所使用的装置、设备、制备方法和具体条件、其 它辅料及其用量等都是本领域常规的或者本领域技术人员根据本发明的描述可获得的；在 没有特定的说明下，物质的用量大都以重量计。本发明提供的阿德福韦酯脂质体以及阿德福韦酯固体制剂，与现有技术相比，具 有意想不到的效果，主要优点如下(1)提高了阿德福韦酯的溶解性，有利于药物制剂的溶出；(2)提高了制剂的生物利用度和稳定性；(3)本发明制得的脂质体粒径均一，包封率高，渗漏率低；
(4)生产工艺简单，成本低，可以工业化规模生产；(5)本发明脂质体提高了制剂产品质量，减少了毒副作用。


图1为实施例3中制备的阿德福韦酯脂质体片(在图1中称为“脂质体”)与阿德 福韦酯片剂(上海益生源药业有限公司，批号20091104，在图1中称为“参比片剂”)的血 药浓度-时间曲线图。
具体实施例方式以下通过实施例进一步阐述本发明，但不应将其理解为对本发明的限制。实施例1阿德福韦酯脂质体的制备处方阿德福韦酯IOOg二月桂酰磷脂酰胆碱300g去氧胆酸钠IOOg聚山梨酯80220g制备工艺(1)将IOOg阿德福韦酯、300g 二月桂酰磷脂酰胆碱、IOOg去氧胆酸钠、220g聚山 梨酯80溶于3600ml三氯甲烷中，混合均勻，于旋转薄膜蒸发器上减压除去三氯甲烷，制得 磷脂膜；(2)加入pH = 5. 8醋酸-醋酸钠缓冲液1600ml，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，再 用组织捣碎机高速勻质乳化20min，转速15000r/min，制得脂质体混悬液；(3)将混悬液冷冻干燥，制得阿德福韦酯脂质体。对比例1阿德福韦酯脂质体的制备处方阿德福韦酯IOOg二月桂酰磷脂酰胆碱190g去氧胆酸钠45g聚山梨酯80140g制备工艺同实例1，选取本发明组分范围外的重量份组成，制得阿德福韦酯脂质 体。实施例2阿德福韦酯脂质体的制备处方阿德福韦酯IOOg二月桂酰磷脂酰胆碱800g去氧胆酸钠600g聚山梨酯80400g制备工艺 (1)将IOOg阿德福韦酯、800g二月桂酰磷脂酰胆碱、600g去氧胆酸钠和400g聚山梨酯80溶于19000ml三氯甲烷中，混合均勻，于旋转薄膜蒸发器上减压除去三氯甲烷，制得 磷脂膜；(2)加入pH = 7. 0枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液4000ml，振摇，搅拌使磷脂膜完全水 化，再用组织捣碎机高速勻质乳化lOmin，转速12000r/min，制得脂质体混悬液。(3)将混悬液喷雾干燥，制得阿德福韦酯脂质体。实施例3阿德福韦酯脂质体颗粒剂的制备处方阿德福韦酯脂质体IOg(以阿德福韦酯计)蔗糖850g甘露醇150g聚维酮K3tlIOg橘子香精30g制备工艺(1)将含有IOg阿德福韦酯脂质体(重量以阿德福韦酯计，实施例1制备的)粉 碎，过80目筛，备用；(2)将蔗糖粉碎，称取850g蔗糖和150g甘露醇，过80筛，混合，备用；(3)将上述原辅料混合均勻，加入溶有30g橘子香精的5%聚维酮K3tl的80%醇溶 液200ml制软材，过20目筛制粒，60°C烘干，18目筛整粒，备用；(4)将干燥的颗粒分装，制得阿德福韦酯脂质体颗粒剂。实施例4阿德福韦酯脂质体片剂的制备处方阿德福韦酯脂质体(以阿德福韦酯计)IOg淀粉40g微晶纤维素60g交联羧甲基纤维素钠IOg聚维酮K3tl5g硬脂酸镁2g制备工艺(1)将含有IOg阿德福韦酯的脂质体(重量以阿德福韦酯计，实施例2制备的)粉 碎，过80目筛，备用；(2)称取40g淀粉、60g微晶纤维素、IOg交联羧甲基纤维素钠，过80目筛，混合，备 用；(3)将上述原辅料混合均勻，加入5%聚维酮K3tl的50%乙醇溶液IOOml制软材， 过30目筛制粒，50°C烘干，加入2g硬脂酸镁混合均勻，18目筛整粒；(4)将干燥的颗粒压片，制得阿德福韦酯脂质体片。^MM 5阿德福韦酉旨H旨JIH本1 丨的泡丨备处方阿德福韦酯脂质体(以阿德福韦酯计)IOg
微晶纤维素130g羟丙甲纤维素Ig滑石粉6g制备工艺(1)将含有IOg阿德福韦酯脂质体(重量以阿德福韦酯计，实施例2制备的)粉 碎，过80目筛，备用；(2)称取130g微晶纤维素，过80目筛，混合，备用；(3)将上述原辅料混合均勻，加入2%羟丙甲纤维素60%醇溶液50ml制软材，过 24目筛制粒，55°C烘干，再与6g滑石粉混合均勻，18目筛整粒，备用；(4)将干燥的颗粒填充胶囊，制得阿德福韦酯脂质体胶囊剂。试验例1包封率的测定采用超速离心的方法测定阿德福韦酯脂质体的包封率，具体操作步骤如下(1)离心样品溶液的制备精密量取实施例1-2和对比例1制得阿德福韦酯脂质 体溶液10ml，置冷冻超速离心机中，16000r/min，4°C离心池，取上清液，用于脂质体溶液中 阿德福韦酯的含量测定。(2)未离心的样品溶液精密量取实施例1-2和对比例1制得阿德福韦酯脂质体 溶液10ml，置IOOml棕色容量瓶中，加入5% Triton X-100的乙醇溶液20ml破乳，用蒸馏 水稀释并定容至刻度，摇勻，即得，用于脂质体中阿德福韦酯的含量测定。(3)分别取阿德福韦酯脂质体离心的样品与阿德福韦酯脂质体未离心的样品溶 液，按相应色谱条件测定峰面积，并计算阿德福韦酯脂质体离心的样品溶液中药物浓度(C .8 )及阿德福韦酯脂质体未离心的样品溶液中药物浓度(Cd，分别乘以各自稀释倍数即得 未包封药物的重量(Wsw)及脂质体中药物的总重量(Wg)，计算包封率，包封率=(ff,6-ff.s
表1包封率结果
实例_实施例1_实施例2_对比例1
包封率％90.591.660.3
试验例2粒径的测定
在电子显微镜下观察实施例1-2和对比例1制得的阿德福韦酯脂质体的粒径，结
表2粒径的测定结果
实例实施例1 实施例2对比例1
平均粒径120 土 IOnm130 土 IOnm400 ± IOnm
夕卜观mK均匀剩犬，均匀不均匀，大小不一
试验例3测定本发明的阿德福韦酯脂质体片剂在比格犬体内的血药浓度 将12条雄性比格犬(体重10-13. ^g，来自山东大学实验动物中心)随机分成2
8
果如下
组。在其中一组中，分别灌胃给予每条比格犬以实施例3中制备的阿德福韦酯脂质体片(在 图1中称为“脂质体”)，给药方法为每天灌胃一次，每次IOOmg ；在另外一组中，以相同方式 分别灌胃给予每条比格犬以阿德福韦酯片剂(上海益生源药业有限公司，批号20091104) (在图1中称为“参比片剂”)。给药后分别于0.釙、111、1.釙、211、；311、611、^1、1 1和对11由每 条比格犬腿静脉采血:3ml，血样经处理后，以建立的HPLC-MS法测定血药浓度。做出本发明 的阿德福韦酯脂质体片剂和阿德福韦酯片剂的平均血药浓度与时间的关系曲线，见图1。
由图1可知，与阿德福韦酯片剂(“参比片剂”)相比，服用本发明的阿德福韦酯脂 质体片剂具有以下特点药物吸收迅速，达峰时间快、峰浓度高。表明本发明的制剂具有起 效迅速、生物利用度高等特点。
权利要求
1.一种阿德福韦酯脂质体固体制剂，其特征在于该固体制剂包括阿德福韦酯、二月桂 酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80的组合、及适于制备固体制剂的其它可药用赋形 剂，其中阿德福韦酯、二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80的重量份数比例为 阿德福韦酯1份，二月桂酰磷脂酰胆碱2 22份，去氧胆酸钠0. 5 10份，1. 5-8份聚山梨 酯80。
2.根据权利要求1所述的脂质体固体制剂，其特征在于其中阿德福韦酯、二月桂酰磷 脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80的重量份数比例为阿德福韦酯1份，二月桂酰磷脂酰 胆碱3 8份，去氧胆酸钠1 6份，2. 2-4份聚山梨酯80。
3.根据权利要求1或2所述的脂质体固体制剂，其中所述其它可药用赋形剂选自填充 剂、崩解剂、粘合剂、矫味剂、芳香剂、润滑剂。
4.根据权利要求3所述的脂质体固体制剂，其中所包含组分的重量份比例为阿德福 韦酯1份，填充剂0 15份，崩解剂0 1份，粘合剂0. 1 1份，矫味剂0 100份，芳香 剂0 3份，润滑剂0 0.6份。
5.一种制备权利要求1-4中任一项所述的阿德福韦酯脂质体固体制剂的方法，其特 征在于该制备方法包括脂质体的制备和固体制剂的制备，其中脂质体的制备包括如下步 骤(1)将阿德福韦酯、二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80溶于溶剂中，混合 均勻，减压除去溶剂后制得磷脂膜；(2)加入缓冲液使磷脂膜完全水化，再用组织捣碎机勻质乳化，制成脂质体混悬液；(3)将脂质体混悬液冷冻干燥或喷雾干燥，得到阿德福韦酯脂质体。
6.根据权利要求5所述的阿德福韦酯脂质体固体制剂的制备方法，其中步骤O)中所 述的缓冲液为PH值为4. 5 7. 5的药学上可接受的磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸 盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种。
7.根据权利要求5所述的阿德福韦酯脂质体固体制剂的制备方法，其中步骤(1)中的 溶剂为有机溶剂，选自乙醇、甲醇、三氯甲烷、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、 正己烷中的一种或几种，优选三氯甲烷。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的阿德福韦酯脂质体固体制剂的制备方法，其中固 体制剂的制备包括如下步骤(1)将阿德福韦酯脂质体粉碎，过60-80目筛，备用；(2)将填充剂、崩解剂、矫味剂粉碎，过60-80目筛，混合，备用；(3)将上述步骤(1)和( 得到的物质混合均勻，加入粘合剂、芳香剂制软材，过20-30 目筛制粒，50-60°C烘干，加入润滑剂混合均勻，整粒，干燥；(4)将干燥的颗粒进行分装，即得阿德福韦酯颗粒剂；或将干燥的颗粒进行压片，即得 阿德福韦酯片剂；或将干燥的颗粒填充入胶囊即得阿德福韦酯胶囊。
全文摘要
本发明提供了一种阿德福韦酯脂质体固体制剂，该固体制剂包括阿德福韦酯、二月桂酰磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和聚山梨酯80的组合、及适于制备固体制剂的其它可药用赋形剂。本发明的阿德福韦酯脂质体固体制剂具有提高了阿德福韦酯的溶解性，提高了制剂的生物利用度和稳定性，脂质体的包封率高，渗漏率低，提高了制剂的产品质量，减少了毒副作用等优点。
文档编号A61P31/20GK102068410SQ20111000008
公开日2011年5月25日 申请日期2011年1月4日 优先权日2011年1月4日
发明者廖爱国 申请人:海南美大制药有限公司