斑蝥酸钠的制备方法

专利名称：斑蝥酸钠的制备方法
技术领域：
本发明涉及医药、食品、保健品、饮料技术领域，具体地说是涉及一种化合物的制备方法，更具体地说是涉及一种来源于中药斑蝥提取物的抗肿瘤药物的制备方法，再具体地说是涉及化合物斑蝥酸钠的一种高效制备方法。
背景技术：
(一 )斑蝥与斑蝥素的研究概况1、概述斑蝥(Canthari)在汉英词典中的解释(来源百度词典)a Chinese blister beetle ;CantharideS。斑蝥具有破结攻毒、除血积、利水道的功能。据现代药理研究表明 斑蝥还具有抗肿瘤、抗病毒的作用。斑蝥素则是从中药斑蝥中提取的具有抗肿瘤活性的化合物。但斑蝥素的有效剂量和毒性剂量相近，对泌尿系统刺激作用强烈，限制了其应用。2、斑蝥的基本概况斑蝥为动物界节肢动物门(Arthropoda)单枝动物亚门昆虫纲(Insecta)有翅亚纲(Pterygote)鞘翅目(Coleoptera)芫青科(Mylabris)昆虫南方大斑蝥(Mylabris phalerata Pallas) ^HH/JnJS^ (MyIabris cichorii Linnaeus)白勺〒 &。(1)基本信息来源中药材斑蝥为芫青科昆虫南方大斑蝥(大斑芫青)Mylabrisphalerata Pallas或黄黑小斑蝥(眼斑芫青)M. cichorii Linnaeus的干燥体。夏、秋二季于清晨露水未干时捕捉。闷死或烫死，去头、足、翅，晒干生用或与糯米同炒至黄黑色，去米，研末用。性味、归经辛，热；有大毒。归肝、胃、肾经。功效破血逐瘀消漱，攻毒散结。产地分布全国大部分地区均有，主产于河南、广西、安徽、江苏、湖南、贵州等省区。药材特征南方大斑蝥呈长圆形，长约为15 22毫米，宽5 8毫米。头及口器向下垂，有较大的复眼及触角各一对，触角多已脱落。背部具革质鞘翅1对，黑色，有3条黄色或棕黄色的横纹；鞘翅下面有棕褐色薄膜状透明的内翅2片。胸腹部乌黑色，胸部有足 3对。有特殊的臭气。黄色小斑蝥体型较小，长1 1. 5cm，是一种有特殊臭气的昆虫。化学成分南方大斑蝥主含斑蝥素(Caantharidin)1 1. 2%。此外，尚含脂肪油12%、树脂、蚁酸、色素等。黄黑小斑蝥含斑蝥素0.97 1.3%(2)市场供应斑蝥对农作物和蔬菜来说是一种害虫，它往往把寄主植物的花朵花蕾全部吃完后又转移到其他植株为害，造成严重减产。
近年来，农民对斑蝥防治加强，目前农作物上使用大量杀虫药剂，斑蝥数量锐减， 价格不断上涨，市场仍供不应求。据商家反映，近二三年里，年上市量正以20%以上向下递减，故使市场上的销势年比年看好，价一年上一个新的台阶。斑蝥各地有产，是近年来广西市场上的走销品种。(3)早期应用情况①发现19世纪采集斑蝥的情况古希腊时期，医学家希波克拉底早在记载西班牙苍蝇的药效，而斑蝥的翅亦会用作研制消退水泡的膏布，并用作抗刺激药。在古代中国，曾出现世上首个有记录的臭弹(stinkbomb)，就是以这些斑蝥昆虫类，混合砒霜、附子和人类的粪便而成。在桑特利亚(Santeria)，这些斑蝥则会用作制香。②最初药用而斑蝥更早已是世界知名的春药，罗马帝国开国君主屋大维的妻子莉薇规，会将斑蝥混入宾客的食物当中，引诱宾客轻薄自己，其后再以此勒索。据记载，神圣罗马皇帝亨利四世(1050 1106)亦因曾服用斑蝥而有损健康。1572年，法国外科学医生巴雷 (AmbroisePare)曾记录了一位男子服用一定份量的荨麻(nettle)和斑蝥后，出现一种最可怕的淫乱症。670年代，法国黑魔法师La Voisin会混和烘乾的鼹鼠(moles)和蝙蝠的血液制成，渗入路易十四的食物，以维持路易十四对他的情妇蒙提斯斑夫人(Fran&ccedil ； oise-Athena&iuml ；s,marquis de Montespan)的需索。18世纪斑蝥昆虫在欧洲流行，在法国称之pastillesRichelieu，萨德侯爵更被指在1772年，给妓女服用大茴香(anise)味的香碇和西班牙苍蝇，强行与妓女群交及鸡奸她们，萨德侯爵因此被判处死，但及后上诉得到缓刑。③弊端除了用于畜牧业和供注册医护人员治疗疣外，美国法例禁止使用斑蝥。一些以邮购或网路售卖催情药，以西班牙苍蝇的名称作招徕，但不少都是由卡宴辣椒粉 (cayennepepper)制成的胶囊，有时则混以人参、巨藻(kelp)、姜、崩大碗。在德国有一种产品名为《Spanische Fliege (西班牙苍蝇)》，只是顺势疗法的药物，有效成份极低，一般服用风险不大。而一种产自北非的果酱《Dawamesk》，除大麻制剂(Hashish)、杏仁浆、开心果、砂糖、橙或罗望子皮、丁香外，有时亦会加入西班牙苍蝇。在摩洛哥以及其他北非地方，其中一种名为《Rasel hanout))的香料，成份亦曾包括斑蝥，不过摩洛哥已在1990年代禁售。(4)物种特征斑蝥为芫青科昆虫的一种小昆虫，和蚂蚱、蝗虫一样，是一种危害农作物的害虫， 斑蝥分两个品系，分南方大斑蝥和北方黄黑小斑蝥，两者体长虽有长短之分。但体貌基本一致，体被黑毛，头呈圆三角形，有粗密刺点，复眼大，略呈肾形，触角一对，前胸长稍大于宽，鞘翅基部各有二个大黄斑，翅中前后各有一黄色波纹状横带。翅面黑色部分刻点密集，黄色部分刻点甚粗，鞘翅下面有2片薄膜状透明的内翅，胸部突起，足3 对。(5)应用与配伍①用于症积，经闭等。本品丰散而入血分，能破血瘀，消症散结，通经。治经闭不适《济阴纲目》以本品配桃仁、大黄用之。近代用治多种癌肿，尤以肝癌为优，可以斑蝥1 3 只放入鸡蛋内煮食，若以斑螯素片内服更佳，(每次0. 25 0. 5mg)能使症状改善，部分病例瘤体缩小。②用于痈疽恶疮，顽癣，等。本品为辛散有毒之品，能以毒攻毒，消肿散结。治痈疽肿硬不破，《仁斋直指方》用本品研末，和蒜捣膏贴之，可攻毒拔脓；治顽癣，《外台》以本品微炒研末，蜜调敷，近代有以本品配甘遂研末，醋调外搽治牛皮癣者；治瘰疬瘘疮，配白矾、白砒、青黛等，研末外掺，如《证治准绳》生肌干脓散。(6)药用价值斑蝥喜群体栖息和取食，每年春季开始孵化，危害大豆、花生、茄子、棉花等作物的叶、芽及花等器官，分布甚广，中国各地几乎均有，在庄稼叶上产卵繁殖，它是一种害虫。同时还是一种贵重的中药材，明代大医学家李时珍在《本草纲目》巨著中称斑蝥性味辛、寒有大毒，有主治寒热、鬼疰盅毒、鼠瘘、疮疽、蚀死肌、破石癃、血积、伤人肌、治疥癣、 堕胎、治瘰疬、通利水道、疗淋疾、傅恶疮瘘烂、治疝、解疖毒，治狂犬病等功效。现代科学研究，斑蝥素对治疗恶性肿瘤、皮肤病、白癜风及顽癣有特效，同时对斑秃还有毛发再生的功效，对病毒性肝炎亦有较好抑制作用，因其有毒，临床一般提倡以外用为主，一个患者身患牛皮癣，花了几万元不能治愈，后用斑蝥和酒精泡制，小面积涂抹，然后扩大外用，药到病除。上述属民间流传小偏方，因人而异，还是谨遵医嘱。(7)药理研究①药理斑蝥的现代药理研究人类用斑蝥治疗疾病已有2000多年的历史，斑蝥为芫青科昆虫南方大斑蝥或黄黑小斑蝥的干燥体。《木经》中称其昧辛，热、有大毒，归肝、胃。肾大肠和小肠经，具有攻毒蚀疮，逐瘀散结的功效。近年来对斑蝥的研究主要集中于对其有效成分斑蝥素抗癌机制的探讨、衍生物的研制和新剂型的开发方面，相继合成了多种斑蝥素衍生物，如斑蝥酸钠、羟基斑蝥胺、甲基斑蝥胺、去甲斑蝥素等…。现代临床研究证实斑蝥在治疗一些疑难杂症方面，具有独特的疗效，如治疗风湿痛、神经痛、梅核气、斑秃、乳腺增生、鼻炎、传染性疣、肝炎、癌肿等。利用斑蝥及其衍生物制成的一些疗效显著的中成药、化学药、 生化药等相继问世，如鹅掌风药水、治癣药用红膏、治癌药斑蝥素及斑蝥素片、斑蝥素注射液、去甲斑蝥素片、斑蝥酸钠片、复方斑蝥酸钠片、斑蝥素乳膏等”。现就其现代药理研究和临床研究的近况作一综述。②化学成分化学成分的研究20世纪70年代人们将斑蝥粉碎，经浓盐酸酸化、丙酮提取、浓缩、 重结晶，得到了斑蝥的药用成分斑蝥素。而后又相继合成了多种斑蝥素衍生物，去甲斑蝥素和斑蝥酸钠等。其中去甲斑蝥素便是由呋喃及顺丁烯二酸酐通过Diles Aider反应经催化加氢合成制得。而斑蝥酸钠是斑蝥素经过氢氧化钠水解生成。目前我国正在研究开发的新型钼类抗癌药物斑钼是斑蝥素衍生物与钼配合而成的一类化合物。最近又有报道，周氏”’等选择有机磷基团对斑蝥素的结构骨架进行修饰改造，以外式双环庚-5-烯_2，3- 二甲酸酐为原料，设计合成出了一系列含膦二肽的斑蝥素类似物。去甲斑蝥素(NCTD) =NcTD 是斑蝥素的衍生物，是从斑蝥中提取斑蛰素并经人工合成的一种新型低毒的抗癌药物，由呋喃与马来酸酐按iels Alder’加成反应后催化氢化制得的人工全合成的一种新化合物，构型与斑蝥素相似，唯一，2位无甲基。具有抗癌和升高白细胞数的作用，是当今国际上第1个有升高白细胞作用的抗癌药物。③范氏研究范氏等研究发现，DNTD对GBC SD细胞的生长有明显的抑制杀伤作用，而且随浓度升高或时间延长作用增强，具有剂量一时间效应关系。说明NcTD抑制胆囊癌GB-SD细胞增殖的作用机制可能与干扰细胞的有丝分裂，将细胞阻滞于生长周期的G2/M期，并抑制、 干扰细胞DNA合成、代谢有关。此后，范氏等又发现，NC’ rD能够降低MVD，抑制肿瘤血管生成，可通过诱导肿瘤细胞凋亡，或通过抑制细胞PcNA表达而抑制肿瘤细胞增殖，从而遏制肿瘤生长。安氏等采用MTT法、形态学观察、DNA凝胶电泳、乳酸脱氢酶(LDH)检测及免疫印记法(westemblot)，研究去甲斑蝥素通过半胱氨酸天冬氨酸酶(caspasc)途径诱导人宫颈癌细胞(Hela)凋亡的机制发现，去甲斑蝥素能显著诱导Hela细胞发生凋亡。④赵氏研究赵氏等研究表明，去甲斑蝥素对体外人肝癌细胞SMM-7721的生长有抑制作用。李氏等报道，去甲斑蝥素微球介入治疗能够延长肝癌大鼠的生存期；其介入治疗肝癌的机制与抑制Ki-67、6c-2其因表达，上调caspase-3表达，从而抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡有关。刘氏等研究发现，NcTD具有诱导人早幼粒白血病细胞株HL60细胞凋亡的作用。此外，NCTD能刺激骨髓引起白细胞数升高。误服斑蝥中毒的病例，几乎白细胞数全部升高，在斑蝥素的动物实验中，骨髓检查可见白细胞增生活跃斑蝥酸钠斑蝥酸钠是斑蝥素与氢氧化钠共热时水解生成。斑蝥酸钠不仅保持了斑蝥素特有的抗癌活性，且不良反应比斑蝥素小。⑤研究现代研究中，本品含有斑蝥素、单萜烯类脂肪、树脂、蚁酸及色素等成份，但抗癌活性成份为斑蝥素(亦称芫青素)。近十余年来，国内已经合成的各种斑蝥素衍生物达100余种，主要有斑蝥酸纳、甲基斑蝥胺、丙烯基斑蝥胺、羟基斑蝥胺等。实验研究表明，本品的水醇或丙酮提取物，体外试验结果证明能抑制Hela细胞和人体食道癌、贲门癌、胃癌、肝癌、 肺癌、乳腺癌等细胞的代谢。斑蝥素对小鼠腹水型肝癌和网织细胞肉瘤ARS均有一定的抑制作用，并能引起肝癌细胞明显萎缩、退化、胞浆多空泡等形态学改变，其作用机制与抑制癌细胞的蛋白质合成，影响RNA和DNA的合成有关。而斑蝥素的衍生物均有与斑蝥素类似的抗肿瘤作用，以羟基斑蝥胺的化疗指数较高及毒性最小。斑蝥素纳的抗肿瘤谱比较广，除能抑制小鼠腹水肝癌和ARS外，还能抑制小鼠肉瘤S180、宫颈癌U14、艾氏腹水癌实体型等肿瘤株，体外亦能抑制Hela细胞株、人食管鳞癌CaEsl7细胞株及人肝癌BES7402细胞株；同时能使小鼠外周白细胞明显增多，对红细胞数目没有影响，发现此药对骨髓造血干细胞有一定的刺激作用，在抗癌药物中，这种具有升高白细胞的药物尚不多见。(8)医学药理作用化学成分含斑蝥素(斑蝥酸酐cantharidirOl^ 2%；尚含脂肪12%、甲酸、 色素及树脂等。另含Fe、Al、Zn、Mn、P等微量元素。斑蝥素为抗癌有效成分。另报道尚含羟基斑蝥素，亦具抗癌活性。斑蝥素毒性大，其半合成品羟基斑蝥胺(hydroxylcantharamine) 的毒性只有斑蝥素的1/500，疗效类似。尚有斑蝥酸钠、甲基斑蝥胺等衍生物，目的均为减小毒性。另报道如在结构中连接氨基酸如谷氨酸可增强对靶细胞的作用。理化鉴别粉末行微量升华，得柱形或棱形斑蝥素结晶。①将升华物用石油醚洗2 3次，加硫酸2 3滴，微热溶解，转入试管内，小火加热至发生气泡，稍冷，加二甲氨基苯甲醛硫酸溶液1滴，显樱红色或紫红色。②将升华物加硫酸2 3滴，微热溶解，转入试管内，加间苯二酚粉末少许，小火加热至沸，溶液显红色，在紫外灯下观察显绿色荧光。③将升华物滴加氢氧化钡水溶液封藏后镜检，可见斑蝥酸钡盐的针晶束。④薄层层析(i)斑蝥素(ii)斑蝥(对照药材)(iii)斑蝥(商品)样品液取斑蝥粉末0. 5g，加氯仿15ml，振摇提取15分钟，室温放置过夜，过滤，滤液作为供试液。对照品液取斑蝥素对照品lmg，加氯仿1ml，作为对照品液。展开硅胶薄层板，以氯仿丙酮(97 3)为展开剂，展开。显色喷以0. 04%溴甲酚绿乙醇试液，110°C加热10分钟，供试品色谱在与对照品色谱相应位置上显1个黄色斑点。含量测定色谱条件与系统适用性试验以甲基硅橡胶(SE—30)为固定液，涂布浓度为3.5% ；柱温为175°C 士 10°C。理论板数按斑蝥素峰计算应不低于2600。对照品溶液的制备取斑蝥素对照品适量，精密称定，加氯仿制成每Iml含Img的溶液，即得(必要时可稀释)。供试品溶液的制备取本品粗粉约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氯仿30ml， 振摇15分钟，置6小时，滤过，滤液置50ml量瓶中，用氯仿洗涤残渣与滤纸，洗液滤人同一量瓶中，加氯仿至刻度，勻，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2 μ 1，注人气相色谱仪，计算， 即得。本品含斑蝥素(CltlH12O4)不得少于0.35%。药理作用①斑蝥对多种实验动物移植性肿瘤有明显抑制作用；斑蝥素对小鼠肉瘤-ISOHela细胞，腹水型网状细胞瘤和腹水型肝癌有抑制作用，因斑蝥素干扰癌细胞中蛋白质和核酸的合成。②水浸剂(1 4)试管内对堇色毛癣菌等皮肤致病真菌有抑制作用。③斑蝥有强烈刺激性，但对组织的穿透力较小，故刺激皮肤生成的泡很快痊愈，不留疤痕；口服可引起胃肠炎和肾炎。此外尚有抗病毒，升高白细胞，促进雄性激素样作用，有用于治疗乙肝。(9)临床应用①临床临床运用中，斑蝥素及其衍生物对肝癌确有较好疗效。据统计以斑蝥素制剂为主治疗原发性肝癌中，有效率60%左右，可改善肝癌患者的临床症状，延长生存期，部份病例肿块缩小，白细胞多不下降，治疗后1年生存率为12. %。也有用甲基斑蝥胺治疗II、III 期原发性肝癌时，半年以上生存率明显高于5-Fu组，若将甲基斑蝥胺的单次用量增大5 10倍，半年以上生存率可得到明显提高(由18. 9%升至57. )，且未见明显毒副作用。
②民间偏方民间早就有用斑蝥治疗肝癌的偏方技法(i)斑蝥蒸鸡蛋法，鲜鸡蛋一个，斑蝥2 3只。在蛋壳上开一小孔，将斑蝥去头足翅后，放入蛋中，用纸封口，隔水蒸熟，去斑蝥，吃鸡蛋，每日或隔日1次，连服5天停5天，3 个月为一疗程。(ii)斑蝥炒糯米，斑蝥100克，糯米100克，陈皮100克。斑蝥合糯米入锅微火炒黄，去斑蝥，将炒黄的糯米与陈皮混合为未，每次服5 6克，每天3次。以上均为前人的经验，不得不承认，均有一定疗效，但书本的东西和听来的经验， 一定要经自己临床证实才可放心使用。曾有一年的临床试验，既使用了斑蝥生品，又使用了斑蝥成药，没发现明显有效病例，此后已有6年没再使用。据了解，曾喧嚣一时的斑蝥及斑蝥制剂，由于有效率有限，临床医生已很少使用。因此，不必一味追求“民间偏方”。医生选用什么药，不是凭道听途说，而按自己的临床体验决定。③抗癌机制其抗癌机制主要包括以下三个方面①减少癌细胞DNA、RNA的前体物摄入，抑制核酸的代谢；②减少癌细胞对氨基酸的摄取，抑制蛋白质的合成；③影响线粒体膜的通透性，增强氧化磷酸化的偶联过程，从而影响癌细胞的能量代谢平衡，控制和缓解癌变发生。陈氏等报道，斑蝥酸钠注射液配合放疗治疗中晚期恶性肿瘤(肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、食道癌等)，能提高治疗效果，降低放疗不良反应，改善患者生活质量，具有抗肿瘤和免疫调节双重作用。赵氏等也报道(中国社区医师2007 第16期(综台版)(第9卷总第169 1)， 用胃癌细胞原代培养药敏检测，结果显示斑蝥酸钠的敏感率高于5-Fu、DNR、DDP、ADM等常规化疗药物。梁氏等研究结果也证实，斑蝥酸钠对人胃癌BGC823细胞生长有抑制作用，可诱导胃癌细胞凋亡。陈氏等报道，斑蝥酸钠联合肝动脉化疗栓塞治疗中晚期肝癌，能明显对化疗栓塞起到增效作用，同时可减轻化疗药对白细胞抑制作用。桂氏等报道，斑蝥酸钠在体外作用于人肝癌细胞系Bel-7402，不仅可诱导肝癌细胞的凋亡，还能抑制肝癌细胞的生长增殖。④升白作用此外，斑蝥酸钠亦有升白作用，能减轻放、化疗对骨髓造血系统的毒性，改善患者一般状况。梁氏等报道，斑蝥酸钠升高白细胞的机制主要是缩短白细胞的骨髓成熟、释放时间，促进骨髓造血干细胞(cFu s)向粒一单核系祖细胞(cFu GM)分化，从而导致白细胞升高。甲基斑蝥胺甲基斑蝥胺系斑蝥素的衍生物，对动物实体瘤作用优于斑蝥素，毒性则较低，对肝脏毒性小，但对肾脏仍有一定毒性。对肝癌细胞的核酸和蛋白质合成有干扰作用，且能增强机体巨噬细胞的吞噬作用，对肿瘤细胞有抑制和杀伤作用。目前，对甲基斑蝥胺的报道较少。综上所述，斑蝥的主要成分斑蝥素及其衍生物对多种肿瘤，尤其是原发性肝癌有肯定的治疗效果。诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞蛋白质合成以及升高白细胞数，提高免疫力可能是其抗肿瘤的机制。但其更详细的抗癌机制尚待深入研究。对斑蝥类药物的研究方面，应该是开发斑蝥素的新衍生物，既要发挥其抗肿瘤作用，又能最大可能的降低毒性。目前我国正在研究开发的新型抗癌药物斑钼，是斑蝥素衍生物与钼配合而成的一类化合物，期望能够接近这个目标。
(10)现代研究①化学成分主要含有斑蝥素(Canthavidin)O. 060% 1. 825 %，并含羟基斑蝥素(Hydroxycan-thavidin)，其含量为斑蝥素含量的1/2 1/3。尚含脂肪12%及树脂、蚁
酸、色素等。南方大斑蝥除去头、足和翅的虫体含磷23. 785mg/g、镁7. 114mg/g、钙1. 691mg/g, 并含有铁、铝、锌、铬、锰、镉、锶和铜等微量元素。全虫及头、足、翅等部分亦含有一定量的上述元素和铅元素。人工合成的斑蝥素的衍生物有斑蝥酸钠、羟基斑蝥胺、甲基斑蝥胺、去甲斑蝥、丙烯基斑蝥胺等。②药理作用1. 1斑蝥素(cantharidin)研究表明斑蝥素是斑蝥抗癌的有效成分，也是其毒性的主要成分。斑蝥素为无色无味发亮结晶，是斑蝥酸的内酐，其化学成分为单萜烯类，结构为外型-1，2-顺-二甲基-6-氧桥六氢化邻苯二甲酸酐。此外，斑蝥虫体内还含有脂肪、蜡质、乙酸、色素和多种微量元素等物质。斑蝥虫体内含有17种微量元素，总量为10. 53mg ·_、 其中与抗癌作用有关的元素Mn和Mg的含量均较高，分别为0. 41和27. 7 μ g ·、与此相反， 致癌元素Ni、Cr，As、Cd和Be等极低，其他有害元素Hg、Pb、Sn含量也很低。因此，斑蝥能治疗癌症的原因，可能与其所含Mn、Mg元素的量较高有关。传统的斑蝥炮制方法是净选后去除头、足、翅再入药，这是非常重要的。药化研究表明，去除头、足和翅的斑蝥与未去者相比，其抗癌成分Mg、Zn、Cu等元素的含量均有所提高，因而抗癌作用增强。临床应用研究业证实。同时，对缺乏Zn、Mg、Cu而致癌的患者，使用该种斑蝥还有扶正抗癌的双重作用。斑蝥素有抗癌作用，尤其对小鼠腹水型肝癌及网状细胞肉瘤有抑制作用，它能抑制癌细胞蛋白质的合成，从而抑制其生长分化；斑蝥素还有免疫增强作用、抗病毒、抗菌作用以及促雌激素样作用。此外，斑蝥素可刺激人和动物皮肤发红起泡。斑蝥素能引起小鼠腹腔积液肝癌细胞明显萎缩、退化，胞质多空泡等形态学改变。 其抗癌的机制主要是抑制癌细胞的蛋白质合成，降低癌毒激素水平及影响癌细胞的核酸代谢。然而，斑蝥素毒性强烈。内服斑蝥可引起胃肠炎症，黏膜坏死，可使肾小球上皮细胞产生严重浊肿白细胞升高，出现蛋白尿、管型尿、血尿及血清非蛋白氮升高。中毒的动物还可发生肝细胞肿胀，肝淋巴细胞纤维性损伤和肝细胞坏死，心肌肿胀、出血，肺淤血，并可引起毛细血管和神经系统的损害。其中毒量为1.(^，致死量为3.(^。有鉴于此，人们合成了一系列毒性较低的斑蝥素衍生物以满足临床需要。斑蝥素的各种衍生物能刺激骨髓而有升高白细胞的作用。斑蝥丹灸对家兔实验踝关节炎有明显消肿作用。临床研究(抗肿瘤方面)，斑蝥素对胃癌、肺癌、乳腺癌、食管癌效果好。而羟基斑蝥胺毒性仅为斑蝥素的1/500，对原发性肝癌有一定疗效，对贲门癌、胃癌及肠癌等略有疗效。1. 2去甲斑蝥素(norcantharidin，简称NCTD) NCTD是由呋喃与马来酐按 Diels-Alder加成反应后催化氢化制得的人工全合成的一种新化合物。孙铭等以聚乳酸聚乙醇酸共聚物(简称PLGA)作为基质材料，采用超声乳化/溶剂挥发法制备PLGA包载NCTD 的纳米级微粒(简称NP)，观察微粒形态、粒径分布、载药率及体外释放曲线，进行体内抑瘤实验、动物急性毒性等试验表明，PLGA纳米粒子可以作为抗肿瘤药物NCTD的有效载体， 并可成功制备其静脉注射剂型，发挥药物更佳的抗肿瘤作用。NCTD在体内外对人卵巢癌细胞株3A0和AO均有较强的抑制作用，其抑制作用呈剂量和时间依赖性。梁福佑等用大鼠单克隆抗体3A5与NCTD制备偶联物，实验表明该偶联物在肿瘤的导向治疗中有较好的疗效。 关于NCTD抗癌作用机制的报道已经有很多。NCTD抗肿瘤细胞增殖的机制可能与其将肿瘤细胞特异阻抑于G2+M期有关。诱导肿瘤细胞凋亡可能是NCTD抗肿瘤作用的分子机制之一。 孙震晓等的实验表明，NCM能够诱导人红白血病K562细胞凋亡，凋亡大部分发生在细胞周期的M期，也有少量发生在间期，是多点启动的，另外，NCTD可以诱导人肝癌细胞发生凋亡， 该凋亡过程与癌基因蛋白bcl-2表达下调相关。可诱导人早幼粒白血病细胞株HLbO细胞凋亡，抑制瘤细胞分裂生长，且有明显的时间和剂量效应。黄雪强等报道，一定剂量范围内的NCM可在直接杀伤作用较小的情况下明显诱导人T淋巴细胞白血病细胞株(6T-CEM)细胞凋亡，不会因细胞坏死而引起炎症反应，这对于NCM应用于临床将有十分重要意义。戴书静等报道，NCM有良好的抗肿瘤效应，其作用机制可能与其能增强核转录因子NF-γ B的抑制分子I κΒ α的表达有关。1.3甲基斑蝥胺(methylcantharidimide)甲基斑蝥胺系斑蝥素的衍生物，对动物实体瘤作用优于斑蝥素，毒性则较低，对肝脏毒性小，但对肾脏仍有一定毒性。对肝癌细胞的核酸和蛋白质合成有干扰作用，且能增强机体巨噬细胞的吞噬作用，对肿瘤细胞有抑制和杀伤作用，其抗癌机制有待进一步深入研究。临床研究(抗肿瘤方面)，甲基斑蝥胺对原发性肝癌有一定疗效，能使患者症状减轻，体征改善。以下是具有抗肿瘤作用的常见斑蝥制剂。表1-1、斑蝥制剂一览表
权利要求
1.一种斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的斑蝥酸钠的制备方法包括如下步骤将斑蝥素加入氢氧化钠水溶液中，加热溶解后，再加活性炭回流脱色0. 5 1小时，热滤，水洗，减压浓缩，加入乙醇，冷却至室温，析出固体烘干得到白色粉末，即为斑蝥酸钠；所述的斑蝥素与氢氧化钠的当量比为12 3;所述的斑蝥素与乙醇的重量比为1 3 10。
2.根据权利要求1所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的斑蝥素与氢氧化钠的当量比为1 2 2. 2.
3.根据权利要求1或2所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的斑蝥素与乙醇的重量比1 3 5。
4.根据权利要求1或2所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的斑蝥酸钠的制备方法包括如下步骤将斑蝥素20克加入500毫升三口瓶中，加入220毫升IN氢氧化钠，加热回流反应lh， 加活性炭1克脱色回流30分钟，热滤，水洗两次，减压浓缩至20 30毫升，加入80毫升乙醇，冷却至室温，搅拌30分钟，过滤，用乙醇洗涤2 3次，60°C真空干燥得白色粉末23. 4g。 收率89%。
5.根据权利要求3所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的斑蝥酸钠的制备方法包括如下步骤将斑蝥素20克加入500毫升三口瓶中，加入220毫升IN氢氧化钠，加热回流反应lh， 加活性炭1克脱色回流1分钟，热滤，水洗两次，减压浓缩至20 30毫升，加入80毫升乙醇，冷却至室温，搅拌30分钟，过滤，用乙醇洗涤2 3次，烘干得到白色粉末23. Sg,收率 88. 7%。
6.根据权利要求1或2所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的斑蝥素是通过常规制备方法，从斑蝥虫中提取并结晶得到斑蝥素精品。
7.根据权利要求6所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的斑蝥素精品的常规制备方法包括如下步骤将斑蝥虫粉碎成40 60目粗粉，然后用3倍量丙酮30 40°C保温12小时，保温期间每隔1小时搅拌5分钟；过滤，收取提取液，再重复以上操作两次，合并提取液，加压浓缩回收提取中的丙酮，得到深色浓缩油状物，油状物中有大量结晶析出，加石油醚10倍量，洗涤，过滤，产物再用石油醚洗涤两次，收集结晶，即得斑蝥素粗品；粗品用34倍量丙酮结晶得到精品。
8.根据权利要求1或2所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的斑蝥素是直接从市场购买的斑蝥素。
全文摘要
本发明涉及医药、食品和保健品等技术领域，公开了抗肿瘤药物斑蝥酸钠的高效制备方法。将斑蝥素精品加入氢氧化钠水溶液中，加热溶解后，再加活性炭回流脱色0.5～1小时，热滤，水洗，减压浓缩，加入乙醇，冷却至室温，析出固体烘干得到白色粉末。其中斑蝥素精品与氢氧化钠的当量比为1∶2～3，斑蝥素与乙醇的重量比为1∶3～10。斑蝥酸钠合成和活性碳脱色精制同步完成，并用乙醇-水体系进行结晶。本发明提供了斑蝥酸钠合成和活性碳脱色精制同步进行的方法，制备工艺更简单，缩短了反应周期，反应过程中省去了大量的丙酮和异丙醇的应用，降低了生产成本，减小对环境的污染，质量控制更简便，提高了生产效率，便于工业化生产。
文档编号A61K31/34GK102276619SQ20111016796
公开日2011年12月14日 申请日期2011年6月21日 优先权日2011年6月21日
发明者张涛涛, 张芝庭 申请人:贵州金桥药业有限公司