专利名称：羟基喜树碱柔性脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种羟基喜树碱脂质体制剂及其制备方法。
背景技术：
羟基喜树碱是喜树碱的10-位羟基衍生物，与喜树碱同属细胞度类抗癌药物，近年也有研究发现，羟基喜树碱的作用靶点为拓扑异构酶，在杀死癌细胞的同时，对正常细胞代谢也有影响。有文献报道了羟基喜树碱的制备方法及其理化性能参数(雷英杰，王作全， 刘鸿，等.10-羟基喜树碱的制备及机理，陕西化工，1999, ) :10)，该物质为水不溶、脂难溶性药物，并且具有一定的毒性，而且由于粒径大，稳定性差，在体内易被内皮网状系统吞噬，其临床应用受到了一定局限。因此，如何改善羟基喜树碱的性能，成为人们所十分关注的热点之一。中国专利文献CN100356919C公开的一种羟基喜树碱脂质体和长循环脂质体制备方法，其长循环脂质体以Poloxamer F68作为表面活性剂，该脂质体粒径大至500nm，稳定性差，基本不能用于临床。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种羟基喜树碱柔性脂质体及其制备方法，以克服现有技术存在的上述缺陷，满足医药领域发展的需要。本发明的羟基喜树碱柔性脂质体主要由羟基喜树碱、磷脂、胆固醇及壳聚糖类表面活性剂混合制成，基特征为羟基喜树碱包封于由磷脂与胆固醇类脂双分子层薄膜中，表面履盖壳聚糖类表面活性剂，各组分按重量份配比如下
羟基喜树碱1 10份
磷脂60 100份
胆固醇1 10份
壳聚糖类表面活性剂5 10份。所述壳聚糖类表面活性剂是壳聚糖或其衍生物中的一种或几种；所述磷脂选自天然磷脂，如卵磷脂、蛋磷脂；或者选自合成磷脂，如磷脂酰胆碱或其混合物；本发明羟基喜树碱柔性脂质体的制备方法包括如下步骤1)将羟基喜树碱和磷脂、胆固醇溶于有机溶媒中，蒸发成膜；2)再加入含壳聚糖类表面活性剂的缓冲液，缓冲液中含表面活性剂的重量浓度为 0. 05% 5%，pH 为 3. 0 10. 0 ；3)然后在-5 5°C下冷藏10 60分钟，搅拌混合，即制得羟基喜树碱柔性脂质体。
所述有机溶媒是甲醇、乙醇、氯仿或乙醚中的一种或几种的混合物，蒸发所需的温度为50 60°C。所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。所述搅拌混合是采用涡旋混合(即将载液容器置于旋涡振荡器上进行混合的操作)，混合时间为10 60分钟。本发明所获得的羟基喜树碱柔性脂质体的粒径为10 lOOnm，可经冻干后制备成注射用羟基喜树碱柔性脂质体冻干粉。本发明的羟基喜树碱柔性脂质体制剂为细胞度类抗癌药物，可用于治疗原发性肝癌、乳腺癌、贲门腺癌、结肠癌、胃癌、卵巢癌、肺癌、宫颈癌等疾病，其剂量一般为4 8mg/ 次· 50kg体重。本发明将羟基喜树碱包封于类脂双分子层形成的薄膜中，制成一种超微球状柔性脂质体制剂，使包裹的羟基喜树碱具有靶向性，能选择性到达病变部位、组织和细胞，从而增加羟基喜树碱的疗效，减少羟基喜树碱的治疗剂量和降低药物毒性。本发明所获得的羟基喜树碱柔性脂质体，能够充分改善羟基喜树碱在体内处置方式，减少与血浆中调理成分的结合，从而增加其在血液中的稳定性。柔性脂质体能更持久地延长药物在血流中的时间，避免网状内皮系统(REQ的吞噬，以获得更充足的时间到达靶向部位。本发明的方法的优点是，羟基喜树碱不发生碱性条件下内酯环的开环反应，从而减低羟基喜树碱的毒性。
图1是实施例1制备的羟基喜树碱柔性脂质体(HCPT-Iipo)的粒径大小及分布图。
具体实施例方式实施例11)将1. Omg的羟基喜树碱、100. Omg大豆磷脂、1. Omg胆固醇溶于IOml乙醇中，得溶液A，将溶液A于50°C的水浴中通过旋转蒸发成膜，得膜B。2)将IOmg壳聚糖溶于5ml pH = 6. 8的磷酸盐缓冲液，得溶液C。3)将溶液C加入膜B中，在5°C以下冷藏30分钟使膜充分水合，再涡旋混合15分钟即制得本发明产品。取实施例1制备的羟基喜树碱柔性脂质体(HCPT-Iipo)溶液适量，测定其中HCPT 的含量(Wt)；用0. 22 μ m微孔滤膜直接过滤，测定过膜溶液中HCPT的含量(Wf)，采用ER(% ) =(Wt-Wf)/Wz X 100%求算包封率。结果，HCPT-Iipo中HCPT包封率为71%。取实施例1制备的HCPT-Iipo溶液适量，加适量蒸馏水稀释，用激光粒度分析仪测定HCPT-Iipo的粒径大小及分布。测得粒径为53. 8nm,见图1。实施例21)将10. Omg的羟基喜树碱、60. Omg大豆磷脂、5. Omg胆固醇溶于IOml乙醇中，得溶液A，将溶液A于55°C的水浴中通过旋转蒸发成膜，得膜B。
2)将5mg的羧甲基壳聚糖溶于0. 5ml pH = 3. 0的磷酸盐缓冲液，得溶液C。3)将溶液C加入膜B中，在1°C以下冷藏20分钟使膜充分水合，再涡旋混合60分钟即制得本发明产品。实施例31)将5mg羟基喜树碱、80mg磷脂酰胆碱、IOmg胆固醇溶于IOml乙醇与氯仿混合物中(乙醇与氯仿按体积比为1 1)，得溶液A，将溶液A于60°C的水浴中通过旋转蒸发成膜，得膜B。2)将8mg壳聚糖溶于0. 2ml pH = 9. 0的磷酸盐缓冲液，得溶液C。3)将溶液C加入膜B中，在_4°C以下冷藏50分钟使膜充分水合，再涡旋混合30 分钟制得产品。以下是本发明产品对癌细胞杀伤力和毒性试验将本发明产品采用2小时细胞毒试验方法进行对癌细胞杀伤力和毒性试验，结果如下羟基喜树碱柔性脂质体(HCPT-Iipo)对癌细胞的杀伤力明显优于游离药物，是游离药物的近2倍多，而HCPT-Iipo对正常细胞的毒性远低于游离药物(P < 0. 05)，表明所制备的HCPT-Iipo能提高对癌细胞的杀伤力并能降低药物的毒性。结果见下表1 表1 HCPT-Iipo与游离药物的细胞毒IC5tl(PgAil)"
权利要求
1.一种羟基喜树碱柔性脂质体，其特征在于，它主要由羟基喜树碱、磷脂、胆固醇及壳聚糖类表面活性剂混合制成，各组分按重量份配比是羟基喜树碱1 10份磷脂60 100份胆固醇1 10份壳聚糖类表面活性剂 5 10份。
2.根据权利要求1所述羟基喜树碱柔性脂质体，其特征在于，所述壳聚糖类表面活性剂是壳聚糖或其衍生物中的一种或几种。
3.根据权利要求1或2所述羟基喜树碱柔性脂质体，其特征在于，所述磷脂选天然磷脂或合成磷脂。
4.根据权利要求1所述的羟基喜树碱柔性脂质体的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤1)将羟基喜树碱和磷脂、胆固醇溶于有机溶媒中，蒸发成膜；2)再加入含壳聚糖类表面活性剂的缓冲液，缓冲液中含表面活性剂的重量浓度为 0. 05% 5%，pH 为 3. 0 10. 0 ；3)然后在-5 5°C下冷藏10 60分钟，搅拌混合，即制得羟基喜树碱柔性脂质体。
5.根据权利要求4所述的羟基喜树碱柔性脂质体的制备方法，其特征在于，所述有机溶媒是甲醇、乙醇、氯仿或乙醚中的一种或几种的混合物，蒸发所需的温度为50 60°C。
6.根据权利要求4所述的羟基喜树碱柔性脂质体的制备方法，其特征在于，所述pH为 3. 0 10. 0的缓冲液为磷酸盐缓冲液。
7.根据权利要求4所述的羟基喜树碱柔性脂质体的制备方法，其特征在于，所述搅拌混合是采用涡旋混合，混合时间为10 60分钟。
全文摘要
本发明公开了一种羟基喜树碱柔性脂质体及其制备方法，该方法通过将羟基喜树碱和磷脂、胆固醇等载体材料共同溶于有机溶媒中，于水浴中通过旋转蒸发成膜，再加入含壳聚糖的缓冲液即制得羟基喜树碱柔性柔性脂质体。本发明的羟基喜树碱柔性柔性脂质体毒性较低、体内滞留时间较长，溶液相中稳定性高，粒径小，且冻干后粒径无明显变化。
文档编号A61P35/00GK102397254SQ201110365349
公开日2012年4月4日 申请日期2011年11月17日 优先权日2011年11月17日
发明者奉建芳, 蒋桂秀, 蒋满州 申请人:广西壮都生物科技有限公司