一种用于制备抗流感病毒药物的中药组合物的制作方法

文档序号:844934阅读:217来源:国知局
专利名称:一种用于制备抗流感病毒药物的中药组合物的制作方法
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法与应用,尤其涉及一种含有一枝黄花和野菊花的具有抗流感病毒作用的中药组合物。
背景技术
流行性感冒(influenza),简称流感,是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,为临床常见病、多发病,特别是冬季,每年都有大范围的爆发、流行。流感病毒可通过多种途径传播,特别是可以借助空气飞沫传播,导致其传染性非常强、传播速度特别快,一旦大规模爆发难以控制。流感可使患者全身不适,包括打喷嚏、头痛、呕吐、发热发冷、疲倦乏力、食欲不振、咳嗽等症状,严重影响患者的工作和生活,其危害性更体现在严重时引起的肺炎、充血性心力衰竭及其他并发症,常危及婴幼儿、老年人及免疫力低下者的生命。流感病毒属正黏科病毒,分为甲、乙、丙三型,其中甲型病毒最常见,也易引起世界大流行及地区流行,近年来在全球蔓延的甲型Hmi流感病毒就是其一。它比普通流感、禽流感传染性更强,患者染病后病情进展更迅速,相当凶猛。流感已经严重威胁到人类的生命健康,为此世界各国均投入了大量的人力物力对流感病毒进行研究,希望能找到治疗和预防的有效方法。当前,生物药、化药、中药中都有针对流感的治疗药物,遗憾的是,流感病毒抗原性变异很快,流感疫苗难以达到免疫预防的作用;而化学药物(如达菲、金刚烷胺等)副作用大、易产生耐药性而且价格昂贵,同样难以控制流感的流行,特别是近年来我国抗生素药物的滥用,使得化学药物对流感病毒的抑制作用再打折扣;相比之下,中药以其安全性高,治疗中怯邪与扶正兼顾的特点,得到广大医患的认可,经长期临床实践证明其防治流感疗效肯定。中药,特别是清热解毒类中药,不但具有较强的抗病毒作用,而且其作用往往又是广谱的,能抑制致病菌、抗病毒、抑制炎症反应和解热,与此同时还具有免疫调节功能,从根本上抵制病毒侵害,较单一抗病毒的化学药物优势明显。目前已经有大量的报道记载,一枝黄花和野菊花单一成分均具有较强的疏风清热和消肿解毒的药理作用,以及现代药理研究证实野菊花、一枝黄花具有明确的抗流感病毒作用,如楼士荣公开了一枝黄花在制备治疗和预防H5m禽流感或流感病毒的药物中的应用,例如CN200610127149. 1,广州中医药大学张奉学教授课题组研究证实中药野菊花具有抗甲1型流感病毒FMl株的作用(广州中医药大学硕士论文2008,2010),野菊花水提物在体内外对甲1型流感病毒均有较好的抑制作用(中药材2010,33(11) :1773-1776),但事实证明,其任一药材的疗效尚不能满足临床需求。而有关一枝黄花和野菊花组合物,以及二者以某种特定配比组合用于制备抗流感病毒治疗药物的用途,迄今未见有国内外研究报道。然而常用的治疗流感的中成药组分较多(如莲花清瘟胶囊含有连翘、金银花、炙麻黄、炒苦杏仁、石膏、板蓝根、绵马贯众等13味中药材;抗病毒冲剂含有板蓝根、忍冬藤、 青篙、白芷等9味中药材),导致服用量大,对于吞咽有困难的老年儿童等患者服用困难,不能完全满足临床需要。近年来中药材由于供求关系等因素,价格全面逐年上涨,特别是今年,是十年来涨幅最大的一年,由此大复方中成药也给患者带来了很大的经济负担。因此,为了缓解患者的经济压力、节约大量中药材资源、保障人类的稳定发展,开发一种在确保治疗流感疗效同时组分简单的中成药,十分必要。

发明内容
为了弥补现有治疗流感的药物的不足,发明人根据中医药理论进行了大量的科学试验研究,旨在提供一种疗效确切、服用量小、毒副作用低、不产生耐药性且价格低廉的中药组合物及其制备方法,以满足广大流感病患者尽快缓解症状、恢复健康的需求。为达到本发明的目的、解决目前存在的技术问题,本发明所采用的技术方案为本发明提供了一种抗流感病毒的中药组合物,该中药组合物含有重量比为 1 4 4 1的一枝黄花和野菊花。上述组分中,所述的一枝黄花和野菊花为其原药材的水提物或醇提物,该醇提物包括了醇提取后的粗提物和/或粗提物经过非极性大孔吸附树脂精制除杂后的总黄酮提取物,该总黄酮提取物摒弃了醇提物(粗提物)中的无效成分,经过试验验证,该类成分对本发明所预期达到的抗流感病毒的效果作用甚微,甚至起到负面作用,因此,当本发明的一枝黄花和野菊花为其原药材的醇提物时,优选为其醇提物再经非极性大孔吸附树脂得到的总黄酮提取物。例如,将一枝黄花和野菊花经过常规的水提取或不同浓度乙醇提取,得到一枝黄花和野菊花的水提取物(简称水提物)或乙醇提取物(简称醇提物),优选将一枝黄花和野菊花的用乙醇提取得到的提取液浓缩后再经非极性大孔树脂(如DlOl大孔树脂)分离纯化,得到一枝黄花和野菊花的总黄酮提取物。所述一枝黄花(Solidago decurrens Lour.),为菊科植物一枝黄花的干燥全草, 性凉,味辛、苦,具有疏散风热、清热解毒等功效,常用于感冒头痛、上呼吸道感染、疮疖肿毒、支气管炎等。现代研究表明本品含有芸香甙(芦丁)、一枝黄花甙、苯甲酸苄酯、倍半萜等类化合物,对流感病毒、金葡萄色球菌、白喉杆菌、溶血性链球菌均有不同程度的抑制作用。所述野菊花(Chrysanthemum indicum L.),为菊科植物野菊的干燥头状花序,性微寒,味苦、辛,具有清热解毒、疏风平肝之功效,临床常用于风热感冒、咽喉肿痛、头痛眩晕、痈疖、肺炎等。现代研究表明本品含有蒙花苷、野菊花内酯、苦味素、维生素A等,具有抗病原微生物作用,对金黄色葡萄球菌、流感病毒、痢疾杆菌、伤寒杆菌均有不同程度的抑制作用,此外本品还有显著抗炎、抗氧化、提高机体免疫力等作用。发明人经过大量的理论研究及科学实验,发现将一枝黄花和野菊花按照重量比为 1 4 4 1相互配合使用,与单独使用一枝黄花或野菊花相比,本发明中药组合物抑制流感病毒的作用增强、毒性降低,治疗指数明显提高,特别是当其用量(重量)比为3 4 3 2时,其抑制甲型流感病毒作用更为显著。因此,可以这样认为,本发明研究发现了一枝黄花和野菊花的中药组合物具有显著的协同抗流感病毒作用,较一枝黄花或野菊花单方疗效更好,毒性更低。该中药组合物抗流感病毒作用显著、组分简单、配比合理,安全性高、不产生耐药性,且服用量小,在满足广大流感病患者尽快缓解症状、恢复健康需求的同时,还减轻了患者的经济负担、节约大量的中药材资源,特别还提高了吞咽不便的老年、儿童服用依从性。
本发明中药组合物更优选含有重量比为3 4 4 3的一枝黄花和野菊花。本文所述的中药组合物也可称为药物组合物。本发明的目的还在于提供上述中药组合物的制备方法,包含如下步骤(1)将一枝黄花和野菊花用水或浓度为50% 95% (ν/ν)的乙醇溶液提取,得到该一枝黄花和野菊花的提取液;(2)将步骤(1)得到的一枝黄花和野菊花的提取液浓缩,干燥,粉碎成60 140目的粉末,得到一枝黄花和野菊花的水提物或醇提物,即为所述的中药物组合物。上述制备方法的步骤(1)中,是将一枝黄花和野菊花混合后一起加水或50% 95% (ν/ν)乙醇溶液提取,优选50% 70% (ν/ν)的乙醇溶液提取。 而且,发明人经过大量实验发现并证明,在本发明中,将一枝黄花和野菊花混合后合并提取所得中药组合物的抗流感病毒活性明显优于各自单独提取后再将各自的提取液混合得到的中药组合物的抗流感病毒活性。优选实施例中的上述制备方法的步骤(1)为将所述的一枝黄花和野菊花加5 20倍量(指一枝黄花、野菊花总重量的5 20倍重量)优选6-15倍量的水,煎煮1 3 次,每次煎煮1 2. 5小时,煎液合并,即得到所述的该一枝黄花和野菊花的提取液;该提取液浓缩、干燥,得到一枝黄花和野菊花的水提物,收率为20 40% (重量百分比)。另一优选实施例中的上述制备方法的步骤(1)为将所述的一枝黄花和野菊花加 5 15倍量的浓度为50% 95% (ν/ν)的乙醇溶液,煎煮2 3次,每次煎煮1 2. 5小时,煎液合并,即得到所述的该一枝黄花和野菊花的提取液;该提取液浓缩、干燥后得到一枝黄花和野菊花的醇提物,收率为5 20% (重量百分比)。上述采用乙醇提取的制备方法优选将得到的提取液进一步纯化,S卩,将提取液浓缩至适量,并使其通过非极性大孔树脂柱(如DlOl大孔树脂柱),以水及体积浓度为20%、 70 %的乙醇溶液梯度洗脱,经镁粉/盐酸检测,结果发现70 %乙醇溶液洗脱得到的洗脱液总黄酮含量最高,因此,收集、合并70%的乙醇洗脱得到的洗脱液,该洗脱液浓缩至适量,干燥,粉碎成60 140目的粉末,得一枝黄花和野菊花的总黄酮提取物,即,所述的中药物组合物,该总黄酮提取物的总黄酮含量不低于50%。上述制备方法的步骤(2)为将所述的干燥,可采用本领域技术人员公知的减压干燥、喷雾干燥、微波干燥等方法实现。本发明中药组合物优选采用一枝黄花和野菊花经70% (ν/ν)乙醇溶液提取,提取液浓缩,通过DlOl大孔树脂柱纯化,得一枝黄花和野菊花的总黄酮提取物的制备方法。该制备方法最大程度的保留了抗流感病毒有效成分,弃掉了大量无效成分,在提高疗效的同时降低了服用量。为了方便服用,本发明所述的中药组合物可以是任何一种药物制剂形式,例如,片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、滴丸剂、糖浆剂或口服液等,当本发明的中药组合物采用上述任一种药物制剂形式时,为了制成该制剂的需要,该中药组合物中还含有本领域公知的常规辅料。此时,本发明中药组合物的制备方法,包含如下步骤(1)将一枝黄花和野菊花用水或浓度为50% 95% (ν/ν)的乙醇溶液提取,得到该一枝黄花和野菊花的提取液;(2)将步骤(1)得到的一枝黄花和野菊花的提取液浓缩,干燥,粉碎成60 140目的粉末;(3)在步骤⑵得到粉末中加入常规辅料,通过常规工艺,得到片剂、胶囊、散齐U、 颗粒剂、丸剂、滴丸、糖浆或口服液等剂型的本发明中药组合物。本发明中药组合物,当其制剂形式为固体形式时,所述的常规辅料为微晶纤维素、 乳糖、羟甲基淀粉钠、木糖醇、甘露醇、微粉硅胶、乳糖、硬脂酸镁、聚维酮k30、羟丙甲基纤维素等,其比例为常规辅料原料为3 1 1 3,优选常规辅料原料为2 1 1 2。当其制剂形式为液体形式,则所述的常规辅料是水、蜂蜜、蔗糖、甜菊甙、麦芽糖、 香精、羟丙甲基纤维素、防腐剂等。上述制备方法工艺简单、合理、收率高,其制得的中药组合物的有效成分含量高并且质量稳定、易控。经过本发明的合理配比组合,该中药组合物还大大强化了各原药材本身具有的抗病毒、提高免疫力等方面的作用效果。本发明还提供了上述中药组合物在制备具有抗流感病毒作用的药物中的应用。本发明的发明点和创造性在于尽管有大量的报道记载,一枝黄花和野菊花单一成分具有较强的疏风清热和消肿解毒的药理作用,以及现代药理研究证实野菊花、一枝黄花具有明确的抗流感病毒作用但其疗效尚不能完全满足临床需求。本发明通过试验证实, 将一枝黄花和野菊花两味中药材按照特定用量配比组合,其对流感病毒的抑制作用明显强于各自单独使用,在抗流感病毒方面表现出更为优异的协同作用,此外还降低了毒副作用; 与目前常用的治疗流感的中成药相比,服用量减少1 2倍;而且工艺简单、节约了大量的药材及能源,降低了成本,从而有望给临床医生和患者提供疗效确切且副作用更小的简方治疗流感中药提供新选择。本发明中药组合物疗效确切、毒副作用低,不会因耐受性而效果渐弱,可以满足广大流感病患者尽快恢复健康的需求,从而达到抑制流感大规模流行的目的。本发明的中药组合物在抗流感病毒方面表现出更为优异的协同作用,作用强度优于单一中药组分,且降低了有效剂量的毒性,保证了有效剂量的安全性,即安全性较好。发明人进一步通过具体试验来验证本发明的预期功能性效果。再次重申以下实验只是本发明研制过程中众多试验中的例举性试验,并未涵盖和穷尽了发明人为本发明所做的所有试验,目的仅仅在于用那些数据来阐述本发明的有益效果。
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1、试验材料
毒株甲型流感病毒(A3/京科细胞模型狗肾细胞MDCK细胞阳性对照药利巴韦林原料药, 供试样品1 本发明中药组合物供试样品2 本发明中药组合物供试样品3 本发明中药组合物供试样品4 本发明中药组合物供试样品5 本发明中药组合物供试样品6 本发明中药组合物供试样品7 本发明中药组合物
/30/95),由上海市卫生防疫站提供; (中国医学科学院医药生物技术研究所提供) (广东肇庆星湖制药厂,批号10638);
4支黄花和野菊花重量比1 4支黄花和野菊花重量比4 4支黄花和野菊花重量比2 4支黄花和野菊花重量比1 4支黄花和野菊花重量比1 4支黄花和野菊花重量比1 4支黄花和野菊花重量比2
1水提物) 1水提物) 1水提物) 3水提物) 4水提物) 2水提物) 3水提物
供试样品8 本发明中药组合物(一枝黄花和野菊花重量比3 1水提物)供试样品9 本发明中药组合物(一枝黄花和野菊花重量比3 2水提物)供试样品10 本发明中药组合物(一枝黄花和野菊花重量比3 4水提物)供试样品11 本发明中药组合物(一枝黄花和野菊花重量比4 3水提物)供试样品12 本发明中药组合物(一枝黄花和野菊花重量比1 170%乙醇溶液提取物)供试样品13 本发明中药组合物(一枝黄花和野菊花重量比1 160%乙醇溶液提取物)供试样品14 本发明中药组合物(一枝黄花和野菊花重量比1 150%乙醇溶液提取物)供试样品15 本发明中药组合物(一枝黄花和野菊花重量比1 1总黄酮提取物)供试样品16 —枝黄花水提物供试样品17 野菊花水提物以上供试样品均由西安仁仁药业有限公司提供,其中供试样品1-15依次按照实施例1-15的制备方法制得,供试样品16、17参照实施例1的制备方法制得。2、试验方法2. 1供试样品处理供试样品称取Ig供试样品,用二甲亚砜(DMSO)溶解为20mg/L的储备溶液,临用前再用细胞维持液稀释至各工作浓度,经0. 22 μ m滤膜过滤,取其滤液。阳性对照药利巴韦林原料药用二甲亚砜(DMSO)溶解为20mg/L溶液,临用前再用细胞维持液稀释至工作浓度250 μ g/ml,经0. 22 μ m滤膜过滤,取滤液。2. 2药物对MDCK细胞毒性试验将MDCK细胞按2X 106/ml接种于96孔培养板,每孔100 μ 1,置37°C、5% CO2培养 24h后形成细胞单层,吸弃上清液,加入用细胞维持液稀释的不同工作浓度供试样品及阳性对照药,每孔加药100μ 1。37°C,5% CO2继续培养72h,显微镜观察细胞形态,并用MTT(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)法在590nm测定A值,按下式计算细胞存活率,确定药物致半数细胞中毒浓度(TC5tl)和最大无毒浓度(TCtl)15每个剂量供试样品加入4孔,同时设正常细胞对照。阳性对照药的细胞毒性实验按同法进行。细胞存活率=(实验孔A值/对照孔A值)X 100%。2. 3细胞病变抑制试验将MDCK细胞按2XlOVmL接种于96孔培养板,每孔100 μ 1,置37°C、5 % CO2培养24h后形成细胞单层。用不含血清的MEM液洗涤细胞2次,加入100 X TCID5tl病毒液,每孔100μ 1,37°C、5% CO2吸附2h,然后吸去病毒液,加入用无毒浓度范围倍比稀释的5个剂量的药物;再经37°C、5%C02培养72h,每日显微镜下观察细胞病变(CPE)情况。每个剂量药物设4孔加入,实验同时设细胞对照组,阳性对照药组及病毒对照组与实验组同时观察 CPE0以发生CPE细胞比例表示CPE的程度,按以下6级标准判断1.细胞正常生长,无病变出现㈠;2.病变细胞少于整个细胞单层的10% (士);3.病变细胞少于整个细胞单层的25% (+);
4. 25% -50%细胞产生病变(++);5. 50% -75%细胞产生病变(+++);6. 75% -100%细胞产生病变(++++)。根据CPE的程度,采用Reed-Muench法计算,确定药物半数有效浓度(IC5tl),并结合细胞毒性实验的结果得到药物治疗指数(Ti = TC50/IC50)。3、试验结果以供试样品半数有效浓度(IC5tl)和药物治疗指数(Tl)分别评价供试样品的体外抗病毒活性和安全性。试验表明,药物半数有效浓度IC5tl值越小,表明供试样品抗病毒活性越强;药物治疗指数TI值越大,表明供试样品安全性更好。体外抗流感病毒活性研究结果详见表1。表1体外抗流感病毒活性研究结果
权利要求
1.一种抗流感病毒的中药组合物,其特征在于,该中药组合物含有重量比为1 4 4 1的一枝黄花和野菊花。
2.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物含有重量比为3 4 3 2的一枝黄花和野菊花。
3.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物含有重量比为3 4 4 3的一枝黄花和野菊花。
4.如权利要求1-3任一项所述的中药组合物,其特征在于,所述的一枝黄花和野菊花为其原药材的水提物或醇提物。
5.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,所述的中药组合物是片剂、胶囊剂、 颗粒剂、滴丸或口服液的制剂的形式,且该中药组合物还含有该制剂的常规辅料。
6.权利要求1所述的中药组合物的制备方法,其特征在于,该制备方法包含如下步骤(1)将一枝黄花和野菊花用水或浓度为50% 95%(ν/ν)的乙醇溶液提取,得到该一枝黄花和野菊花的提取液;(2)将步骤(1)得到的一枝黄花和野菊花的提取液浓缩,干燥,粉碎成60 140目的粉末,得到一枝黄花和野菊花的水提物或醇提物,即为所述的中药物组合物。
7.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,该制备方法的步骤(1)为将所述的一枝黄花和野菊花加5 20倍量的水,煎煮1 3次,每次煎煮1 2. 5小时,煎液合并,即得到所述的该一枝黄花和野菊花的提取液;该提取液浓缩、干燥后得到一枝黄花和野菊花的水提物,收率为20% 40% (重量百分比)。
8.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,该制备方法的步骤(1)为将所述的一枝黄花和野菊花加5 15倍量的浓度为50% 95% (ν/ν)的乙醇溶液,煎煮2 3次,每次煎煮1 2. 5小时,煎液合并,即得到所述的该一枝黄花和野菊花的提取液;该提取液浓缩、干燥后得到一枝黄花和野菊花的醇提物,收率为5 20% (重量百分比)。
9.如权利要求8所述的制备方法,其特征在于,所述提取液浓缩后,使其通过非极性大孔树脂柱,以水及体积浓度分别为20%、70%的乙醇溶液梯度洗脱,收集、合并70%乙醇洗脱得到的总黄酮含量高的洗脱液,该洗脱液浓缩至适量,干燥,粉碎成60 140目的粉末, 得总黄酮提取物,即所述中药物组合物,该总黄酮提取物的总黄酮含量不低于50%。
10.权利要求1所述的中药组合物在制备抗流感病毒的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种用于制备抗流感病毒药物的中药组合物,该中药组合物含有重量比为1∶4~4∶1的一枝黄花和野菊花;本发明还提供了上述中药组合物的制备方法,所述一枝黄花和野菊花加水或适宜浓度乙醇提取,浓缩,干燥,粉碎成粉末,将粉末混合均匀即得;该中药组合物可有效抑制流感病毒。
文档编号A61P31/16GK102429946SQ20111037988
公开日2012年5月2日 申请日期2011年11月25日 优先权日2011年11月25日
发明者高渊思 申请人:西安仁仁药业有限公司
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