专利名称：一种肉苁蓉苯乙醇总苷的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种肉苁蓉苯乙醇总苷的制备方法，属于医药、食品、保健食品加工应用技术领域。
背景技术：
肉苁蓉系传统补益中药，用于治疗阴虚阳痿、女子不孕、腰膝酸软、肠燥便秘等病症。随着世界人口老龄化进程加快，与衰老有关的疾病如老年痴呆症等严重影响老年人的生活质量，作为补肾、益精血传统中药肉苁蓉，早在20世纪70年代就引起对汉方药有深入研究的日本学者关注，并系统研究了肉苁蓉植物的化学成分和药理活性，发现苯乙醇苷类化合物是肉苁蓉植物主要活性成分，具有抗氧化、促进物质代谢、改善学习记忆、增强性功能等作用，随后以北京大学屠鹏飞教授为代表的国内学者也开始对肉苁蓉的化学成分和药理作用进行研究，发现肉苁蓉所含的苯乙醇苷类化合物在治疗血管性痴呆方面具有独特的作用，标志着肉苁蓉从传统入药上升到技术附加值较高的现代中药层次，研究比较发现资源量大的管花肉苁蓉与荒漠肉苁蓉主要作用成分相似，并收载于2005版《中华人民共和国药典》。目前已从肉苁蓉属分离鉴定了 70余个化合物，主要有苯乙醇苷类、苯甲醇苷类、环烯醚萜苷类、木脂素及其苷类、生物碱、半乳糖醇、寡糖酯、多糖。肉苁蓉除作药用，也作为功能食品用于抗疲劳、药膳和化妆品中
肉苁蓉传统初加工有盐(腌)制与直接晒干，药材饮片的炮制有醋制、酒制与蒸制，用于中成药、保健酒或食品中，国内相关专利申请量多达1000余项
肉苁蓉现代加工技术基于肉苁蓉物质基础与药理研究成果，日本学者在上世纪80年代发现肉苁蓉苯乙醇苷类化合物具有改善性功能、改善学习记忆、抗氧化与抗疲劳，并对吸附树脂提取工艺与功效就行了专利保护；随后北京大学药学院屠鹏飞等在“一组中药肉苁蓉苯乙醇苷类化合物”专利(02117641.8)中，保护了 27个苯乙醇苷类化合物在抗神经细胞凋亡功效，接着韩国庆熙大学在“显示提高轴突生长活性和神经营养作用的含有荒漠肉苁蓉Y. C. MA提取物的组合物”专利(03809500. 9)中，提出荒漠肉苁蓉提取物具有有效的神经元细胞保护活性，可以作为用于治疗和预防神经退化性大脑疾病的治疗或保健食品；杭州天力药业有限公司屠鹏飞等人在“来源于管花肉苁蓉的含有苯乙醇苷的制剂及其制备方法和用途”(03119204. 1)保护了一种从管花肉苁蓉获得的含有苯乙醇苷的制剂， 包含10-70%松果菊苷(echinacoside)及1_40%类叶升麻苷(acteoside)，该制剂可作为活性成分在制备预防和治疗老年痴呆症药物中的应用及在制备抑制血小板聚集药物中的应用；新疆医科大学堵年生等人在“肉苁蓉总苷的抑制皮肤色素沉着和增白美容作用” (200510U6563.6)中提出了肉苁蓉苯乙醇总苷具有抑制酪氨酸酶活性，用于色素增加性皮肤病的预防和治疗或外用化妆品的增白祛斑功能。在加工方面，新疆医科大学堵年生等在“肉苁蓉饮片加工技术”(200510006594. 8) 中提出一种肉苁蓉质茎饮片制作工艺，用多种方式抑制植物酶活性保护有效成分苯乙醇苷类成分，提高肉苁蓉饮片的内在质量；杏辉天力(杭州)药业有限公司雷丽等在“一种提高新鲜中药肉苁蓉中苯乙醇苷类成分含量的加工方法”(20081005^82. 7)提出利用蒸汽或微波持续加热，以破坏植物体内的苷类水解酶方法稳定苯乙醇苷。和田帝辰医药生物科技有限公司黄利兴等在“应用膜分离技术从肉苁蓉中生产含有苯乙醇苷的原料及其制备方法”(200710102756.7)中采用选料、提取、微滤、超滤、纳滤、干燥等工艺过程，提取的苯乙醇总苷毛蕊花糖苷含量> 40%，使肉苁蓉活性成分毛蕊花糖苷得到有效富集；另外中山大学刘昕等在“一种利用新鲜肉苁蓉生产毛蕊花糖苷的方法”(200910041646. 3)中以β-葡萄糖苷酶工业酶制剂固定化酶作为催化剂，催化水解苯乙醇总苷中松果菊苷使葡萄糖基配体末端断裂、定向转化为高活性的毛蕊花糖苷单体化合物，获得毛蕊花糖苷成分含量达 38. 6% 89. 2%粉状物或干燥物，随后又提出多项专利“一种提升苯乙醇苷类化合物含量的肉苁蓉加工方法”(200710032802. 0)、“一种萃取富含松果菊苷及毛蕊花糖苷活性物质的方法”(200710032803. 5)、“一种肉苁蓉提取物的生产方法”(20071003^06.9)，采用细胞破碎、浆液萃取、膜分离或大孔树脂吸附或层析分离提纯、高温灭酶、喷雾干燥等工艺的集成技术，实现在30 80分钟内将新鲜肉苁蓉原料自投料至获取富含松果菊苷及毛蕊花糖苷等活性物质的工艺过程，克服不良处理方法引发酶解造成苯乙醇苷类化合物等活性成分降解损失，得到的苯乙醇总苷中松果菊苷含量15% -49. 6 %，毛蕊花糖苷含量5% -26. 7%. 江苏省农业科学院玄国东等在专利“肉苁蓉药材有效成份的提取工艺”(200810025392. 1) 提出了一种肉苁蓉药材有效成份的提取工艺，利用提取、浓缩、结晶、得甘露醇，残液利用大孔树脂吸附、洗脱、浓缩、干燥得肉苁蓉苯乙醇苷类，残渣继续加入蒸馏水加热提取，经醇沉、干燥得肉苁蓉多糖，完成三种肉苁蓉功效成分的提取。目前苯乙醇苷类化合物被认为是肉苁蓉属最重要的活性成分，然而苯乙醇苷成分化学结构含有咖啡酸与糖形成的咖啡酸酯键，该酯键稳定性差，易发生酶解和化学水解，以及苯乙醇苷的咖啡酰基与苯乙醇基团中含有的邻二酚基团也易被氧化，在加工和应用时苯乙醇苷损失严重，
肉苁蓉苯乙醇苷成分化学结构含有咖啡酸与糖羟基形成咖啡酸酯键，该酯键稳定性低，在PH大于5的条件下易发生水解，导致活性成分损失，以及肉苁蓉苯乙醇苷成分化学结构含有的咖啡酰基与苯乙醇基团中含有邻二酚羟基，在PH大于5的条件下易于发生氧化， 导致产品色泽加深；采用加热灭活酶方法只能抑制酶解和褐变，无法解决加工过程中的化学条件变化导致的肉苁蓉苯乙醇苷分解与氧化，目前公开的技术只进行局部解决，例如对鲜肉苁蓉只采用加热灭活酶方法避免了饮片或粗提加工时酶分解苯乙醇苷，而没有涉及加工过程或制剂应用时因化学环境变化导致的苯乙醇苷分解的问题，从而引起肉苁蓉产品功效变化。
发明内容
本发明目的在于，提供一种肉苁蓉苯乙醇总苷的制备方法，该方法是由肉苁蓉粉碎、浸提、吸附树脂吸附、洗脱、浓缩等步骤完成；在肉苁蓉苯乙醇苷提取与稳定性研究中， 利用肉苁蓉苯乙醇苷在PH为2-4弱酸性的条件下稳定性明显提高，在该条件下从肉苁蓉中提取的肉苁蓉苯乙醇苷组成主要以松果菊苷与毛蕊花糖苷为主，其中在肉苁蓉苯乙醇总苷中松果菊苷与毛蕊花糖苷含量比例合计大于90%，通过该方法提取的肉苁蓉苯乙醇总苷的含量要明显高于其它提取方法，所获得的肉苁蓉提取物有效成分含量稳定，色泽相对浅，避免了肉苁蓉苯乙醇苷的分解与氧化，有利于产品的稳定。本发明所述的一种肉苁蓉苯乙醇总苷稳定性的制备方法，按下列步骤进行
a、将肉苁蓉用微波或水蒸汽或热水加热灭活肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块，破碎时加入弱酸，再加入浓度为95%乙醇或水，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液pH2-4，其中弱酸的用量为肉苁蓉的重量比1-10%;
b、将步骤a细浆液在温度80°C进行浸提，时间2小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液经薄膜减压浓缩或膜过滤浓缩后得浓缩液，回收乙醇，再将浓缩液用水稀释，稀释液PH为3;
d、将步骤c稀释液上HPD300吸附树脂柱进行吸附，用弱酸调节pH为3-4的水洗涤，再用弱酸调节PH为3-4的20-50%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩后，烘干、喷雾干燥或冷冻干燥，即可得到含有稳定剂弱酸的肉苁蓉苯乙醇总苷。步骤a所述的肉苁蓉品种为盐生肉苁蓉或荒漠肉苁蓉或管花肉苁蓉。步骤a所述的弱酸为甲酸、乙酸、羟基乙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、富马酸、葡萄糖醛酸、抗坏血酸、肉桂酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸或磷酸。
具体实施例方式
实施例1
a、将新鲜盐生肉苁蓉2公斤，用微波加热20分钟灭活鲜肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块，破碎时加入重量比乙酸30克，随后加入浓度为95%的乙醇8升，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液PH为3;
b、将步骤a细浆液在温度80°C下浸提，时间2小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液经薄膜减压浓缩，回收乙醇，得1公斤浓缩液，浓缩液用水稀释至2 升，稀释液PH为3;
d、将步骤c稀释液上装有1升HPD300的吸附树脂柱进行吸附，用柠檬酸调节的pH为 3的水2升洗涤，再用柠檬酸调节的pH为3的浓度为40%乙醇液洗脱，洗脱液减压浓缩后， 减压烘干，即可得到含有稳定剂柠檬酸的盐生肉苁蓉苯乙醇总苷77. 3克。实施例2
a、将新鲜荒漠肉苁蓉2公斤，用100°C水加热15分钟灭活鲜肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块，破碎时加入重量比磷酸40克，再加入6升水，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液pH为 2 ；
b、将步骤a细浆液在温度80°C下浸提，时间1小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液用截留200-300工业膜浓缩至2升；
d、将步骤c浓缩液上装有1升HPD300吸附树脂柱吸附，用苹果酸调节pH为4的水3 升洗涤，再用苹果酸调节PH为4的浓度为20%乙醇液洗脱，洗脱液减压浓缩后，喷雾干燥， 即可得到含有稳定剂苹果酸的荒漠肉苁蓉苯乙醇总苷53. 2克。实施例3
a、将新鲜盐生肉苁蓉2公斤，用110°C蒸汽加热10分钟灭活鲜肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块，破碎时加入重量比甲酸20克，再加入浓度为95%的乙醇8升，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液PH为2;b、将步骤a细浆液在温度80°C进行浸提，时间2小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液膜过滤浓缩，回收乙醇，得1公斤浓缩液，再将浓缩液用水稀释至2 升，稀释液PH为3;
d、将步骤c稀释液上装有1升HPD300吸附树脂柱吸附，用咖啡酸调节的pH为4的水 2升洗涤，再用咖啡酸调节的pH为4的浓度为30%乙醇液洗脱，洗脱液减压浓缩后，冷冻干燥，即可得到含有稳定剂咖啡酸的盐生肉苁蓉苯乙醇总苷74. 8克。实施例4
a、将新鲜管花肉苁蓉2公斤，用110°C蒸汽加热10分钟灭活鲜肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块，破碎时加入重量比40克乳酸，再加入浓度为95%的乙醇8升，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液PH为3;
b、将步骤a细浆液在温度80°C进行浸提，时间2小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液经薄膜减压，回收乙醇，得1公斤浓缩液，再将浓缩液用水稀释至2 升，稀释液PH为3;
d、将步骤c稀释液上装有1升HPD300吸附树脂柱吸附，用阿魏酸调节的pH为4的水 2升洗涤，再用阿魏酸调节的pH为4的浓度为50%乙醇液洗脱，洗脱液减压浓缩后，烘干，即可得到含有稳定剂阿魏酸的管花肉苁蓉苯乙醇总苷68. 1克。实施例5
a、将新鲜管花肉苁蓉2公斤，用110°C蒸汽加热10分钟灭活鲜肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块，破碎时加入重量比30克酒石酸，再加入浓度为95%的乙醇8升，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液PH为2 ；
b、将步骤a细浆液在温度80°C进行浸提，时间2小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液膜过滤浓缩，回收乙醇，得1公斤浓缩液，再将浓缩液用水稀释至2 升，稀释液PH为3;
d、将步骤c稀释液上装有1升HPD300吸附树脂柱吸附，用没食子酸调节的pH为4的水2升洗涤，再用没食子酸调节的pH为4的浓度为30%乙醇液洗脱，洗脱液减压浓缩后，冷冻干燥，即可得到含有稳定剂没食子酸的管花肉苁蓉苯乙醇总苷63. 7克。实施例6
a、将新鲜盐生肉苁蓉2公斤，用微波加热20分钟灭活鲜肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块，破碎时加入重量比10克羟基乙酸，再加入浓度为95%的乙醇8升，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液PH为4;
b、将步骤a细浆液在温度80°C进行浸提，时间2小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液经薄膜减压浓缩，回收乙醇，得0.6公斤浓缩物，再将浓缩液用水稀释至2升，稀释液pH为3;
d、将步骤c稀释液上HPD300吸附树脂柱进行吸附，用葡萄糖醛酸调节pH为4的水2 升洗涤，，再用葡萄糖醛酸调节PH为4的浓度为20%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩后，烘干， 即可得到含有稳定剂葡萄糖醛酸的盐生肉苁蓉苯乙醇总苷78. 4克。实施例7
a、将新鲜管花肉苁蓉2公斤，用100°C热水加热10分钟灭活鲜管花肉苁蓉中植物酶，置凉破碎成块，破碎时加入重量比10克柠檬酸，再加入2升水，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液PH约为4 ；
b、将步骤a细浆液在温度80°C进行浸提，时间2小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液经膜过滤浓缩后得1公斤浓缩液，回收乙醇，再将浓缩液用水稀释， 稀释液PH为3;
d、将步骤c稀释液上HPD300吸附树脂柱进行吸附，用抗坏血酸调节pH为3的水2升洗涤，再用抗坏血酸调节PH为3的浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩后，喷雾干燥， 即可得到含有稳定剂抗坏血酸的管花肉苁蓉苯乙醇总苷66. 2克。实施例8
a、将荒漠肉苁蓉2公斤用微波加热20分钟灭活肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块，破碎时加入重量比磷酸40克，再加入浓度为95%乙醇8升，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液pH3 ；
b、将步骤a细浆液在温度80°C进行浸提，时间2小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液经薄膜减压浓缩得1公斤浓缩液，回收乙醇，再将浓缩液用水稀释， 稀释液PH为4 ；
d、将步骤c稀释液上HPD300吸附树脂柱进行吸附，用对羟基苯甲酸调节pH为3的水 2升洗涤，再用对羟基苯甲酸调节pH为3的浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩后，喷雾干燥，即可得到含有稳定剂对羟基苯甲酸的肉苁蓉苯乙醇总苷58. 8克。实施例9
a、将管花肉苁蓉用110°C水蒸汽加热10分钟灭活肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块， 破碎时加入重量比10克羟基乙酸，再加入6升水，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液pH为2 ；
b、将步骤a细浆液在温度80°C下浸提，时间1小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液用截留200-300工业膜浓缩至2升；
d、将步骤c稀释液上HPD300吸附树脂柱进行吸附，用苯甲酸调节pH为3的水3升洗涤，再用苯甲酸调节PH为3的浓度为40%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩后，喷雾干燥，即可得到含有稳定剂苯甲酸的肉苁蓉苯乙醇总苷62. 9克。实施例10
a、将管花肉苁蓉用100°C热水加15分钟热灭活肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块，破碎时加入重量比阿魏酸30克，再加入浓度为95%乙醇8升，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液 PH4 ；
b、将步骤a细浆液在温度80°C进行浸提，时间2小时，冷却，过滤分离出提取液；
c、将步骤b提取液经薄膜减压浓缩后得1公斤浓缩液，回收乙醇，再将浓缩液用水稀释，稀释液PH为3;
d、将步骤c稀释液上HPD300吸附树脂柱进行吸附，用富马酸调节pH为4的水3升洗涤，再用富马酸调节PH为4的浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩后，喷雾干燥，即可得到含有稳定剂富马酸的肉苁蓉苯乙醇总苷65. 4克。
权利要求
1.一种肉苁蓉苯乙醇总苷的制备方法，其特征在于按下列步骤进行a、将肉苁蓉用微波或水蒸汽或热水加热灭活肉苁蓉中植物酶，置凉后破碎成块，破碎时加入弱酸，再加入浓度95%乙醇或水，用磨浆机粉碎成细浆，细浆液PH2-4，其中弱酸的用量为肉苁蓉的重量比0. 5%-2% ；b、将步骤a细浆液在温度80°C进行浸提，时间2小时，冷却，过滤分离出提取液；C、将步骤b提取液经薄膜减压浓缩或膜过滤浓缩后得浓缩液，回收乙醇，再将浓缩液用水稀释，稀释液PH为3;d、将步骤c稀释液上装HPD300吸附树脂柱进行吸附，用弱酸调节pH为3-4的水洗涤， 再用弱酸调节PH为3-4的20-50%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩后，烘干、喷雾干燥或冷冻干燥，即可得到含有稳定剂弱酸的肉苁蓉苯乙醇总苷。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a所述的肉苁蓉品种为盐生肉苁蓉或荒漠肉苁蓉或管花肉苁蓉。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤a所述的弱酸为甲酸、乙酸、羟基乙酸、 乳酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、富马酸、葡萄糖醛酸、抗坏血酸、肉桂酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸或磷酸。
全文摘要
本发明涉及一种肉苁蓉苯乙醇总苷的制备方法，该方法是由肉苁蓉粉碎、浸提、吸附树脂吸附、洗脱、浓缩等步骤完成；在肉苁蓉苯乙醇苷提取与稳定性研究中，利用肉苁蓉苯乙醇苷在pH为2-4弱酸性的条件下稳定性明显提高，在该条件下从肉苁蓉中提取的肉苁蓉苯乙醇苷组成主要以松果菊苷与毛蕊花糖苷为主，其中在肉苁蓉苯乙醇总苷中松果菊苷与毛蕊花糖苷含量比例合计大于90%，通过该方法提取的肉苁蓉苯乙醇总苷的含量要明显高于其它提取方法，所获得的肉苁蓉提取物有效成分含量稳定，色泽相对浅，避免了肉苁蓉苯乙醇苷的分解与氧化，有利于产品的稳定。
文档编号A61P39/06GK102441040SQ201110402048
公开日2012年5月9日 申请日期2011年12月7日 优先权日2011年12月7日
发明者吴成, 赵丽君, 赵文军, 阿吉艾克拜尔·艾萨 申请人:中国科学院新疆理化技术研究所