专利名称：砂仁或其醇提取物在制备抗乳腺癌细胞增殖药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药及其在制备抗肿瘤细胞增殖药物中的应用。特别涉及一种中药在制备抗乳腺癌细胞增殖药物中的应用，所述的中药为砂仁或其提取物。本发明属于中药领域。
背景技术：
近年来流行病学研究表明，乳腺癌已经成为女性最常见的恶性肿瘤之一，且其发病率和死亡率呈逐年上升趋势。研究发现，在致癌因素的影响下，乳腺导管上皮细胞发生异常增生，最终超越自我修复的极限发展为肿瘤。目前的治疗多以手术切除为主，同时辅以化疗，内分泌治疗和放疗等手段。由于乳腺癌细胞具有较强的侵袭能力，手术难以根除，因此药物治疗扮演着重要的角色。临床上多用紫衫醇，但是由于其来源少，价格昂贵，使用受到限制。因此通过进一步研究乳腺癌细胞的生物学行为，寻找潜在的治疗靶点已受到人们越来越多的关注。虎杖是寥科寥属多年生草本植物poligonum cubipidatum.sieb.et zutcc的根和根茎。其主要的化学成分包括蒽醌类的大黄素，大黄素甲醚；芪类白藜芦醇和白藜芦醇苷以及酚性和黄酮类化合物。其主要的药理活性包括降血脂，改善微循环，增加心肌搏出量，舒张呼吸道平滑肌以及抑菌抗肿瘤的作用。其中对芪类白藜芦醇的研究最为广泛。白藜芦醇属于多酚类化合物，一种可以从多种植物中获得天然化合物，具有抗肿瘤，抗菌，心血管保护等多种活性，已有文献报道，其对乳腺癌细胞的增殖具有明显的抑制作用，其在不同乳腺癌细胞株的抑制增长的分子机制已经有了很大的发展，主要与通过线粒体损伤、干扰细胞周期，使其发生G0/S与S/G2阻滞、p53过度表达、干扰细胞信号转导系统等多种机制有关来介导细胞凋亡、抑制细胞增殖。Angela等发现白藜芦醇可以阻碍人卵巢癌细胞糖代谢引起细胞自噬死亡，发现白藜芦醇可以显著的降低癌细胞对葡萄糖的摄取并引发乳酸盐产物的生成，其诱导的糖利用阻碍效应是产生癌细胞自噬发生的基础，由于糖代谢与脂合成密切相关，多余的糖代 谢产物如乙酰辅酶A可以促进脂肪酸的合成，反之则抑制，这可能是诱发癌细胞死亡的又一条途径。绿茶是当今世界上被广泛饮用的大众饮料，大量科学研究证实绿茶具有抗老化，抑制心血管疾病，抗癌，抗辐射等多种生物活性。经典的抗肿瘤抗氧化化合物是咖啡酸和奎宁酸的缩合产物，含有没食子酸酰基结构的部分，动物实验已经证实绿原酸对胃癌和结肠癌的发生具有预防和抑制作用。咖啡酸酯化合物如咖啡酸锗，该化合属于多酚类化合物且有没食子酸酰基相似的结构。目前的用于治疗乳腺癌的各种药物都无法获得令人满意的疗效，中药治疗副作用小，能够从根本上调节人体各脏腑间的不平衡状况，有利于疾病的控制，但是中药中有效成分含量相对较少，且治疗效果显现慢，因此，急需找到一种能够更有效的治疗乳腺癌的中药药材，而这必将会为广大乳腺癌患者带来福音。
发明内容
针对现有技术中的问题，本发明的发明人在进行了大量研究的基础上，通过严格的药物筛选，最终得到了一种能够有效抗乳腺癌细胞增殖的药物。本发明所要解决的技术问题是通过以下途径实现的:本发明公开了砂仁或其醇提取物在制备抗乳腺癌细胞增殖药物中的应用。更具体的，以上所述的乳腺癌细胞为MCF-7乳腺癌细胞。在本发明中，所述的醇提取物是通过以下方法制备得到的:砂仁粉碎后加入60%的乙醇，室温下超生破碎，离心后得到上清萃取液，减压烘干，即得砂仁的醇提取物。在本发明的具体实施例中，所述的醇提取物是通过以下方法制备得到的:砂仁粉碎后，称取Ig粉碎后的砂仁样品，加入40ml 60%的乙醇，室温下超生破碎30min，4000r/min离心20min，得到上清萃取液，在50°C下减压烘干，即得砂仁的醇提取物。以上所述的方法还可进一步包含将减压烘干后得到的干物质恒重后称量，用60%乙醇溶解，得到萃取液，即得砂仁的醇提取物。本发明还公开了一种抗乳腺癌细胞增殖的药物组合物，其特征在于其有效成分包含以上任一项所述的砂仁或其醇提取物。为了验证本发明的药材——砂仁或其醇提取物在抗乳腺癌细胞增殖中的作用，本发明利用CCK-8法观测了不同浓度的砂仁，虎杖，桂枝以及其主要成分白藜芦醇和肉桂酸作用MCF-7细胞24小时后 对MCF-7细胞增殖的影响。结果发现:桂枝60%乙醇提取物、虎杖60%乙醇提取物、砂仁60%乙醇提取物IC5tl分别为178ug/ml，153.67ug/ml,24.86ug/ml，其中砂仁抑癌活性最强；同时发现用高浓度150ug/ml, 200ug/ml砂仁60%乙醇提取物作用细胞，同100ug/ml相比抑制率反而有所下降；在相同条件下，白藜芦醇的抑癌活性强于虎杖(白藜芦醇IC5tl = 61.75ug/ml)，白藜芦醇苷几乎无作用；桂枝的主要成分之一肉桂酸在低浓度时125ug/ml)抑癌活性强于桂枝，50ug/ml时活性最大，抑制率为32.5%，继续增大浓度抑制率并无改变，桂枝则呈现出明显的浓度依赖性，在200ug/ml抑制率达到54.5%。从上述结果中可以看出，相较于桂枝，虎杖，砂仁的60%乙醇提取物能显著抑制MCF-7细胞生长且呈现出浓度依赖性，当其浓度为100ug/ml时抑制率最大，效果最显著。说明在治疗乳腺癌方面，砂仁具有更好的的应用前景。
图1为不同浓度的虎杖，砂仁，桂枝60%乙醇提取物对MCF-7细胞体外抑制作用；图2为200ug/ml虎杖60%乙醇提取液，白藜芦醇，白藜芦醇苷对MCF-7细胞体外抑制作用；图3为不同浓度的虎杖60%乙醇提取液，白藜芦醇，白藜芦醇苷对MCF-7细胞体外抑制作用；图4为200ug/ml桂枝60%乙醇提取液，肉桂酸对MCF-7细胞体外抑制作用；图5为不同浓度的桂枝60%乙醇提取液，肉桂酸对MCF-7细胞体外抑制作用。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。材料:人类乳腺癌细胞株MCF-7，北京肿瘤医院；改良型RMPI1640培养基，Hyclone公司；新生小牛血清，杭州四季青公司；青链霉素混合液(100X)，Solarbio公司；胰蛋白酶1:250，Solarbio公司；虎杖，砂仁，桂枝，北京同仁堂；白藜芦醇，白藜芦醇苷；CCK_8试剂盒，日本同仁化学研究所。实施例1砂仁提取物的制备砂仁粉碎后，称取Ig粉碎后的砂仁样品，加入40ml 60%的乙醇，室温下超生破碎30min,4000r/min离心20min,得到上清萃取液,在50°C下减压烘干,干物质恒重后称量,用60%乙醇溶解(尽量少)，得到萃取液，即为砂仁的醇提取物。密封保存于_20°C。实施例2砂仁提取物的制备砂仁粉碎后，称取Ig粉碎后的砂仁样品，加入40ml 60%的乙醇，室温下超生破碎30min,4000r/min离心20min,得到上清萃取液,在50°C下减压烘干，即为砂仁的醇提取物。密封保存于_20°C。试验例I砂仁醇提取物在抗乳腺癌细胞增殖中的作用1、实验设计:选取现有技 术中已知的具有乳腺癌细胞增殖的药物以及砂仁作为不同试验组:试验组1:虎杖醇提取物试验组2:桂枝醇提取物试验组3:白藜芦醇试验组4:肉桂酸试验组5:白藜芦醇苷试验组6:砂仁醇提取物2、方法2.1砂仁醇提取物、虎杖醇提取物以及桂枝醇提取物的制备方法按照实施例1的方法制备，得到各样品每毫升微克数的萃取液。密封保存于_20°C。2.2白藜芦醇和肉桂酸临用前DMSO溶解配成lOOmmol/1，无血清培养液稀释至相应浓度，DMSO体积小于0.4%。白藜芦醇苷临用前用PBS溶液60°C水浴避光溶解，无血清培养液稀释至相应浓度。2.3细胞培养MCF-7细胞以2X 106_7/ml密度接种于25cm2培养瓶，内含改良型RMPI1640培养液(含10%新生小牛血清，1%青链霉素混合液)，置于37.0°C，5% CO2饱和湿度培养箱中培养。细胞呈扁平多角形，紧密相连贴壁生长，隔天换液，2-3后传代。取对数生长期的细胞，用0.25%胰蛋白酶消化l_2min，吹打制成细胞悬液，以lX105/ml均匀接种至96孔板内，IOOul/孔。2.4细胞增殖抑制试验
上述培养的细胞6小时后更换为无血清培养基，12小时后分别加入相应的处理因素(虎杖醇提取物、桂枝醇提取物、白藜芦醇、肉桂酸、白藜芦醇苷、砂仁醇提取物)，培养24小时，吸弃原细胞液，PBS润洗细胞，加入CCK-8试剂IOul/孔，继续培养3h后，酶标仪450nm测定每孔的光密度值A，计算抑制率。计算公式如下所示:
权利要求
1.砂仁或其醇提取物在制备抗乳腺癌细胞增殖药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的乳腺癌细胞为MCF-7乳腺癌细胞。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的醇提取物是通过以下方法制备得到的:砂仁粉碎后加入60%的乙醇，室温下超生破碎，离心后得到上清萃取液，减压烘干，即得砂仁的醇提取物。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的醇提取物是通过以下方法制备得到的:砂仁粉碎后，称取Ig粉碎后的砂仁样品，加入40ml 60%的乙醇，室温下超生破碎30min,4000r/min离心20min,得到上清萃取液,在50°C下减压烘干，即得砂仁的醇提取物。
5.如权利要求3或4所 述的应用，其特征在于所述的方法还进一步包含将减压烘干后得到的干物质恒重后称量，用60%乙醇溶解，得到萃取液，即得砂仁的醇提取物。
6.一种抗乳腺癌细胞增殖的药物组合物，其特征在于其有效成分包含权利要求1-5任一项所述的砂仁或其醇提取物。
全文摘要
本发明公开了砂仁或其醇提取物在制备抗乳腺癌细胞增殖药物中的应用。通过对比研究发现乳腺癌细胞对砂仁极为敏感，其抑癌活性甚至超过了白藜芦醇，这为砂仁的临床应用，尤其是针对乳腺癌的治疗，提供了有力的依据，具有重要意义。
文档编号A61K36/9064GK103157057SQ20111041948
公开日2013年6月19日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者赵光, 李珺, 杨捷 申请人:首都医科大学