专利名称：氧化还原相关因子表达促进剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含莰非醇(kaempferol)、五羟黄酮(quercetin)或它们的糖苷、或上述莰非醇、五羟黄酮和它们的糖苷的任意组合作为有效成分的氧化还原相关因子表达促进剂，以及包含银杏叶提取物、山柰提取物或它们的组合作为有效成分的氧化还原相关因子表达促进剂。
背景技术：
生物体为了维持其生存、恒有度而进行氧化还原调节。生物体内的氧化还原调节主要依靠存在于细胞内蛋白质中的半胱氨酸残基上的巯基的可逆氧化还原反应，从而控制各种细胞功能。已知与氧化还原调节相关的因子(氧化还原相关因子)使细胞内保持还原状态、发挥细胞生存所必须的作用，另一方面，在生物体内的活性氧的清除方面也发挥重要的作用。如果上述氧化还原相关因子未正常发挥作用，则生物体内的活性氧过量产生，从而遭受过度的氧化应激。可认为这样的过度氧化应激通过将DNA和/或蛋白质、脂质等生物体高分子氧化而使其受损伤，从而造成各种疾病和/或老化。因此，近年来，作为导致氧化应激的活性氧的清除系统发挥作用的氧化还原相关因子的研究盛行。作为对生物体的氧化应激的防御机构而发挥作用的氧化还原相关因子，已知谷胱甘肽系统。已报告谷胱甘肽是存在于哺乳动物中的三肽，具有以下作用利用其分子内巯基的还原作用、作为辅酶的作用、参与硫醚氨酸的生成和其它解毒机构的作用、保护巯基酶 (thiol enzyme)或其它细胞成分的作用、促进有害物排泄的作用、通过提高胆碱酯酶活性来抗变态反应的作用、酶激活作用。然而，由于谷胱甘肽在制剂中会产生沉淀，而且大多数细胞无法摄入谷胱甘肽，因此用于促进细胞内谷胱甘肽的产生的成分是极其有用的。作为这样的成分，迄今为止报导了 Y-生育酚或S-生育酚，公开了含有这些成分的谷胱甘肽产生促进剂(日本特开2007-284430 (专利文献1))。此外，作为其它氧化还原相关因子，已知硫氧还蛋白系统，硫氧还蛋白系统也是作为对生物体中氧化应激的防御机构而发挥作用(细胞工学Vo 1. 2 5，No. 2，2006， pl43-148(非专利文献1))。此外，还报导了硫氧还蛋白的转基因小鼠变得长寿(Mitsui A, et al =Antioxid Redox Signal (2002) 4 :693_696 (非专利文献 2))、以及硫氧还蛋白对脑梗死、糖尿病具有抵抗性(Takagi Y，et al =Proc Natl Acad Sci USA(1999)96 4131-4136 (非专利文献 3)、Hotta M, et al J Exp Med (1998) 188 1445-1451 (非专利文献4))、对变态反应性皮炎有效(日本特开2007-269671 (专利文献2))，因而硫氧还蛋白作为活性氧清除剂被广泛使用(日本特开平9-157153(专利文献3))。然而，由于硫氧还蛋白系统是高分子蛋白质，因此即使将这些化合物直接给药至对象，这些分子也不能被摄入细胞内。因此，虽然期望促进生物体内硫氧还蛋白系统的表达，但是作为促进它们表达的成分，迄今为止仅仅已知艾草提取物或青紫苏提取物(国际公开号W02006/033351 (专利文献 4))。如上所述，即使将谷胱甘肽系统和/或硫氧还蛋白系统等氧化还原相关因子直接给药至生物体，它们也不能有效地被摄入细胞内，因此有可能不能在生物体内发挥氧化还原调节功能和/或抗氧化功能。虽然已知这些氧化还原相关因子的表达可通过紫外线照射应激被增强，但是安全并有效地作用于生物体的化学物质迄今为止还未被人们所知，生物体内的氧化还原相关因子的表达机制也没有得到详细阐明。因此，依然期待发现用于促进生物体内氧化还原相关因子的表达的安全且有效的成分。专利文献1 日本特开2007-284430专利文献2 日本特开2007-269671专利文献3 日本特开平9-157153专利文献4 国际公开号W02006/033351非专利文献1 细胞工学 Vol. 25，No. 2，2006，pl43_148非专利文献2 =Mitsui A, et al =Antioxid Redox Signal (2002) 4 693~696非专利文献3 =Takagi Y, et al =Proc Natl Acad Sci USA (1999) 96 :4131_4136非专利文献4 =Hotta M, et al J Exp Med (1998) 188 :1445_145
发明内容
本发明的课题是，通过促进生物体内氧化还原相关因子的表达，安全且有效地减少生物体的氧化应激，保持生物体健康，并防止由氧化应激引起的各种疾病和症状。这一次，作为增强生物体内氧化还原相关因子即谷胱甘肽系统和硫氧还蛋白系统的表达和活性的成分，本发明者们发现了属于黄酮醇类的莰非醇(kaempferol)和五羟黄酮(quercetin)。出乎意料的是，上述作用在黄酮醇类中是莰非醇和五羟黄酮特有的，在结构类似的杨梅黄酮中并未观察到上述作用。与直接应用谷胱甘肽系统和/或硫氧还蛋白系统的分子的情况相比，应用莰非醇和/或五羟黄酮能够更有效地促进生物体内的谷胱甘肽系统和/或硫氧还蛋白系统等氧化还原相关因子的表达和活性，因此根据本发明，可以更有力地减轻生物体内的多种氧化应激。莰非醇和/或五羟黄酮等黄酮醇类广泛分布在茶叶的植物中，对生物体是无毒的，可以安全地摄取。这样，通过将莰非醇和五羟黄酮制成用于促进生物体内的氧化还原相关因子的表达的有效成分，能够在不给被应用的生物体带来应激的状态下清除生物体内的过量的活性氧。因此，本申请包含以下发明[1] 一种氧化还原相关因子表达促进剂，其包含莰非醇、五羟黄酮或它们的糖苷、 或上述莰非醇、五羟黄酮和它们的糖苷的任意组合作为有效成分。[2]根据[1]所述的氧化还原相关因子表达促进剂，其特征在于，所述氧化还原相关因子是选自硫氧还蛋白、硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶和谷氧还蛋白中的1种或多种物质。[3] 一种氧化还原相关因子表达促进剂，其包含银杏叶提取物、山柰提取物或它们的组合作为有效成分。[4]根据[3]所述的氧化还原相关因子表达促进剂，其特征在于，所述氧化还原相关因子是选自硫氧还蛋白、硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶和谷氧还蛋白中的1种或多种物质。[5]莰非醇、五羟黄酮或它们的糖苷、或上述莰非醇、五羟黄酮和它们的糖苷的任意组合的用途，用于调制氧化还原相关因子表达促进剂。[6]银杏叶提取物、山柰提取物或它们的组合的用途，用于调制氧化还原相关因子表达促进剂。通过促进生物体内的氧化还原相关因子的表达，可以安全且有效地减少生物体内的活性氧、防御生物体的氧化应激。由此能够保持生物体的健康，并防止由氧化应激引起的各种疾病和症状。
图1是显示莰非醇增强生物体内的氧化还原相关因子的表达的图。图2是显示莰非醇增强皮肤等效模型中的氧化还原相关因子的表达的图。图3是显示将黄酮类化合物增强硫氧还蛋白系统的表达的作用进行比较的图。图4是显示银杏叶提取液和山柰提取液增强硫氧还蛋白还原酶的表达的图。图5是显示莰非醇和五羟黄酮的促进硫氧还蛋白还原酶的活性的效果的图。图6是显示莰非醇以及银杏叶提取液和山柰提取液抑制炎症细胞因子(ILlii)产生的效果的图。
具体实施例方式在本发明的1个实施方式中，提供包含莰非醇、五羟黄酮或它们的糖苷、或上述莰非醇、五羟黄酮和它们的糖苷的任意组合作为有效成分的氧化还原相关因子表达促进剂。在本说明书中，“氧化还原相关因子”意味着与存在于生物体、例如哺乳类、优选为人类体内的蛋白质的半胱氨酸残基的巯基发生氧化或还原反应，使细胞内保持还原状态的因子。认为在细胞的活化和/或信息传导物质的加工、即信号传导机构中，由存在于细胞内的蛋白质中的半胱氨酸残基上的巯基的氧化所引起的蛋白质-蛋白质之间的相互作用中的修饰发挥着特别重要的作用。该半胱氨酸残基上的巯基的氧化/还原(氧化还原)参与基因的转录、蛋白质的细胞内定位、合成、分解的调节、以及细胞的增殖和/或细胞死亡等各种生命现象的调节。作为与这样的生物体内的氧化还原相关的系统，已知谷胱甘肽系统和硫氧还蛋白系统，它们分别由一组分子构成。已知这些氧化还原相关因子还参与在生物体内产生和存在的活性氧的清除。硫氧还蛋白系统特别地由硫氧还蛋白和硫氧还蛋白还原酶等因子构成。硫氧还蛋白(TRX)是作为向大肠杆菌的DNA合成所必须的酶、即核糖核苷酸还原酶提供氢的辅酶而被发现的。TRX是在原核生物和/或人等多种生物体中保守的约12kDa的蛋白质，具有包含 4个β折叠和3个α螺旋的立体结构，具有-Cys-Gly-Pro-Cys-这样的活性部位。TRX存在其活性部位的2个半胱氨酸残基之间形成二硫键的氧化型(S-S)和还原型(-SH，SH-)， 还原型将底物蛋白质的二硫键还原，从而自身变成氧化型。氧化型TRX被NADPH和硫氧还蛋白还原酶还原，从而再生成还原型。作为底物蛋白质的一种，已知被总称为过氧还蛋白 (peroxiredoxin)的过氧化氢酶家族。还原型过氧还蛋白还原H2O2。然后，变成了氧化型的过氧还蛋白作为底物而被硫氧还蛋白还原。变成了氧化型的硫氧还蛋白被硫氧还蛋白还原酶还原。在这样的活性氧的无毒化系统中，硫氧还蛋白系统发挥着重要的作用。谷胱甘肽系统特别地由谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶和谷氧还蛋白等因子构成。谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸形成的三肽，作为非蛋白质性的硫醇成分大量存在于细胞内，作为细胞内的亲水性区域中的主要抗氧化物质为人们所知。谷胱甘肽与活性氧 (例如超氧化物或过氧化氢)反应而形成稳定的谷胱甘肽自由基，变成2聚体(GSSG:氧化型谷胱甘肽)，接下来谷胱甘肽还原酶将来自NADPH的电子转移到GSSG，而生成GSH (还原型谷胱甘肽)。谷氧还蛋白(GRX)具有与硫氧还蛋白同源的-Cys-Pro-Tyr-Cys-这样的活性部位，由于与硫氧还蛋白的同源性而被称为硫氧还蛋白超家族。GRX存在其活性部位的2 个半胱氨酸残基之间形成二硫键的氧化型(S-S)和还原型(-SH，SH-)。与硫氧还蛋白同样地，还原型将底物蛋白质的二硫键还原，从而自身变成氧化型。关于其生物活性还有很多不清楚的地方，但已知与生物体内的氧化还原调节和/或氧化应激应答相关。这样，通过活化硫氧还蛋白、硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶和谷氧还蛋白等氧化还原相关因子或促进它们的表达，可以减少生物体内的过量活性氧，防御生物体的氧化应激。如上所述，这一次，本发明者们获得了如下令人惊讶的认识莰非醇和五羟黄酮活化上述氧化还原相关因子并促进其表达。包含莰非醇和五羟黄酮的黄酮醇类具有如下所示通式，
权利要求
1.一种氧化还原相关因子表达促进剂，其包含莰非醇、五羟黄酮或它们的糖苷、或上述莰非醇、五羟黄酮和它们的糖苷的任意组合作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的氧化还原相关因子表达促进剂，其特征在于，所述氧化还原相关因子是选自硫氧还蛋白、硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶和谷氧还蛋白中的1种或多种物质。
3.一种氧化还原相关因子表达促进剂，其包含银杏叶提取物、山柰提取物或它们的组合作为有效成分。
4.根据权利要求3所述的氧化还原相关因子表达促进剂，其特征在于，所述氧化还原相关因子是选自硫氧还蛋白、硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶和谷氧还蛋白中的1种或多种物质。
全文摘要
本发明的课题是，通过促进生物体内氧化还原相关因子的表达，从而安全且有效地减少生物体的氧化应激，保持生物体健康，并防止由氧化应激引起的各种疾病和症状。本发明涉及包含莰非醇、五羟黄酮或它们的糖苷、或上述莰非醇、五羟黄酮和它们的糖苷的任意组合作为有效成分的氧化还原相关因子表达促进剂，以及包含银杏叶提取物、山柰提取物或它们的组合作为有效成分的氧化还原相关因子表达促进剂。
文档编号A61P37/08GK102361637SQ201180000127
公开日2012年2月22日 申请日期2011年1月28日 优先权日2010年1月29日
发明者S·W·李, 仲西城太郎, 胜田雄治, 菅原美乡 申请人:株式会社资生堂, 综合医院公司