专利名称：含有维生素k的纳米乳液组合物的制作方法
技术领域：
在某些实施方案中，本发明涉及有关纳米乳液组合物的组成、方法和用途，所述纳米乳液组合物包含脂溶性维生素K或基本上由脂溶性维生素K组成并可以在治疗上代替美国药典(USP)植物甲萘醌可注射的乳状液。
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背景技术：
维生素K包括一组血液凝固所需的亲脂性疏水维生素。在化学上，它们是2-甲基-1，4-萘醌衍生物。维生素K1还被称为植物甲萘醌(也称为叶绿醌或植物甲萘醌(phytomenadione))。维生素K1主要存在于绿叶蔬菜中，维生素K2存在于肉、蛋、乳以及纳豆(即日本发酵豆)制品中。在成年人中，肠道细菌通常产生大量可用维生素K。在新生儿中，细菌还没有在肠道中建群。因此，在美国，标准的医疗实践是，预防性地给予维生素K注射液，来预防新生儿出血病。同样，经历大剂量抗生素治疗的患者可能发展由于肠菌群的减少而导致的维生素K缺乏症。注射维生素K制剂也可以用于预防或治疗这种类型的维生素K缺乏症。目前在美国可以利用的注射用维生素K制剂，在美国药典中被称为USP植物甲萘醌可注射的乳状液(“PIE-USP”)。其获得FDA的许可，用于治疗血液凝固障碍，包括(I)预防和治疗新生儿出血病；(2)香豆素或茚二酮衍生物引起的抗凝剂诱导的凝血素缺乏症；(3)抗菌疗法所致的低凝血酶原血症；(4)限制维生素K的吸收或合成因子续发的低凝血酶原血症；以及(5)其他药物诱导的低凝血酶原血症。据估算，在美国每年给予8百万剂量的PIE-USP，其中50%-60%的剂量用于新生儿。美国儿科学术营养学会推荐(American Academyof PediatricsCommittee on Nutritio),在出生后随即给予所有新生儿0. 5mg至I. Omg维生素I。因为维生素K不溶于水，因此已经尝试了许多增溶方法，以使其溶解，用于注射。PIE-USP是含有使维生素K溶液的聚氧乙基化脂肪酸的水溶液，聚氧乙基化脂肪酸是强去污剂(也称为Cremophor)。USP植物甲萘醌可注射的乳状液,最初是由Merck&Co研发的，其商标名称为“AquaMFPHYTON ”，不管其名字表示何意，其实际上并不含有任何油，因此其并不是真正的乳状液。还用其他的表面活性剂使维生素K增溶。包括例如HC0-60 (Nikko Chemical Co. , Ltd. , Japan)，其也是与 Cremophor 类似的高HLB (即亲水-亲脂平衡值>7)表面活性剂或去污剂。注射高HLB表面活性剂或去污剂如Cremophor、聚山梨醇酯80或HC0-60可以引起超敏反应，更严重的是可引起过敏症。对于含有Cremophor的药物，如TAXOL 和环孢霉素A,这类间或致命反应的可能性已有详细的文献记录。为此，PIE-USP的说明书具有如下警示，注意如果静脉内或者肌肉内注射，药物可能非常不安全甚至致命的(AquaMFPHYTON 说明书，Merck&Co.，2002 年 2 月)。此外，Cremophor 与儿童期癌症(Golding, J. 1992. BMJ 305:341)和急性淋巴细胞白血病(von Kries, R. 1998. BMJ316:161; Wariyar, U. et al. 2000. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed 82:F64)有关。不必多言，这种关联对于父母和医师而言是令人恐惧的。而且，当皮下或肌肉内注射时，含有Cremophor的PIE-USP有在注射位点弓I起疼痛和刺激的可能性，并且，如果口服，可以引起 胃肠紊乱。这类刺激据信与Cremophor的溶血属性有关。因此，需要更安全的PIE-USP的替代品。然而，在使用PIE-USP许多年后，美国也没有开发出新的且更安全的组合物。与市场规模小有关的投资和资金回报以及为这类新组合物获得上市许可的高成本，是为何仍然未为美国市场研发出新的且更安全的组合物的关键原因。目前PIE-USP的市场规模为约每年2，500万美元，这对于大多数药物开发商而言太小，而不能抵消在美国获得新药物许可的成本(据估计为数亿美元)。这种不利的回报投资比例阻止了药物开发商将更安全的维生素K可注射产品推向市场，而对于患者，包括几乎每一个美国新生儿，将持续面临着Cremophor的潜在严重副作用。本申请公开了新的纳米乳液组合物的实施方案，通过降低研发成本，其使更安全地代替PIE-USP在商业上是可行的。通过具有生物等效特性，即基于个人药代动力学研究证明了它们的生物等效性，所述新组合物易获得FDA的许可。基于药代动力学和生物等效特性的这类简短的许可要求在美国联邦法律(US Federal Law)中被编为法典505 (b) (2)New Drug Application(新药物申请，NDA)。简短且加速的市场许可仅需要约30名患者,这显著降低了研发成本，从而使得研发PIE-USP的更安全的替代品在商业上变得可能。优选地，本文公开的纳米乳液组合物具有几乎与PIE-USP令人吃惊的相同的药代动力学特征(即“生物等效的”)。这种新的组合物在没有使用用于维生素K增溶的Cremophor或任何其他高HLB表面活性剂的情况下实现了这种特性。更优选地，本文公开的纳米乳液组合物不引起任何超敏性或过敏反应，无溶血性的(因此降低注射位点引起疼痛和刺激)，并且稳定性与PIE-USP相当(实施例12)。这些安全和稳定特征，当与生物等效特性联合时，形成了在商业上安全替代PIE-USP的可行性的基础，并且使这些纳米乳的实施方案不同于现有技术中的任何其他组合物。Ohasi等(美国专利第4，840，970号)公开了维生素A、维生素E和维生素K的水溶液组合物，其包含的氢化卵磷脂的量为维生素重量的O. 1-12份。Ohasi公开的组合物是不含油的“水溶液”，因此并不是严格定义的水包油乳状液或纳米乳液。所公开的氢化卵磷脂与维生素K的重量比为O. 1:1-12:1，这比纳米乳液实施方案所用的13:1-25:1的磷脂与维生素K的重量比低得多。此外，Ohasi并未教导实现与PIE-USP的生物等效性的任何方法或组合物。Ida等(美国专利第5，021，570号)公开了另一种水溶液，其包含氢化卵磷脂、甘油与具有8-12个碳的脂肪酸的三酯、甘油与具有8-12个碳的脂肪酸的单酯、甘油与油酸、硬脂酸或棕榈酸的三酯以及水。如此公开的组合物是“水溶液”，因而不是乳状液或纳米乳液。所公开的氢化卵磷脂的浓度为约O. 05-3%，这比本发明的纳米乳液实施方案所用的4-20%的磷脂浓度低得多。此外，示例性纳米乳液实施方案不含有甘油的任何单酯。此外，Ida并未教导实现与PIE-USP的等效性的任何方法或组合物。维生素K是光敏感的，并且遇光分解。Matsuda等(美国专利第5，180，747号)教导了在光下保护维生素K并防止脂溶性维生素K组合物的活性降低的方法，所述组合物包含α-胡萝卜素、Y-胡萝卜素、番茄红素以及角黄素。然而，示例性的纳米乳液实施方案并未含有这些组分中的任何组分。Kaneshiro (JP 11438300)公开了维生素K1和Κ2的水包油乳状液组合物，其包含蛋黄卵磷脂和油，其中磷脂与维生素K的重量比为约O. 5:1-10:1，优选1:1-5: I。本发明的纳米乳液组合物的优选实施方案包含维生素K、磷脂组分和油组分，但其中，磷脂与维生素K的重量比为约13:1-25:1。发明概述在某些实施方案中，本发明提供了维生素K的安全且商业上可行的可注射组合物，其(a)与意图被代替的市场产品(即PIE-USP)生物等效，(b)不含任何变态反应原或刺激性试剂，特别是Cremophor或高HLB值的表面活性剂，(c)足够稳定从而提供可接受的保质期，(d)由小油滴组成，并且可过滤通过O. 2微米的滤器，以及(e)透明或半透明。优选，本发明提出了实现所有上述特性的纳米乳液组合物，其中所述纳米乳液按所述组合物的重量计包含约O. 1%至2%(更优选O. 2%至1%)的维生素K，磷脂与维生素K的重量比为约13:1-25:1，且含油量不超过1%。本文所公开的纳米乳液组合物是水包油乳状液，包含约O. 2-1%的维生素K、约O. 5%至2%的大豆油、约O. 5%至2%的中链甘油三酯、约4%至25%的磷脂以及约10%的蔗糖(所有比例都基于所述组合物的总重量)，其中磷脂与维生素K的重量比为约13:1-25:1，或基本由上述物质组成或者由上述物质组成。本发明的纳米乳液组合物明显不同于现有技术所公开的PIE-USP或其他维生素K可注射的组合物。PIE-USP含有作为稳定剂的Cremophor，并且不含大豆油、中链甘油三酯或磷脂。值得注意的是，本发明的纳米乳液的磷脂浓度(4-20%)或磷脂与维生素K的重量比(13:1至25:1)格外高，并且明显高于现有技术所公开的范围。因此，根据现有技术来看，本发明的纳米乳液组合物具有新颖性。本发明的纳米乳液的高的磷脂浓度或磷脂与维生素K的比，产生了意料不到的与PIE-USP生物等效的药代动力学(PK)特征。确定新的维生素K制剂具有生物等效的药代(PK)特征，对于研发PIE-USP的替代产品非常有利。实际上对于乳状液而言，与含有表面活性剂的组合物如PIE-USP生物等效并不寻常。现有技术并未针对维生素K或其他药物教导实现这一目标的任何乳状液组合物或方法。在某些实施方案中，本发明的纳米乳液通过具有下述特征意料不到地实现了与PIE-USP生物等效(I)高磷脂与药物比(即13:1-25:1)，以及(2)非常低的含油量(即不超过约1%)。具有这两个独特组成特征的纳米乳液，与不具有高磷脂与药物比和低含油量的典型的静脉内注射用乳状液相比，倾向于具有小得多的液滴大小(如约lOOnm，如实施例6所示)。典型的静脉内注射用乳状液的很好的实例是丨)丨PR丨VAN (异丙酚)可注射的乳状液，其磷脂与药物比为I. 2:1 (12mg/mL磷脂和10mg/mL药物)和含油量高(10%)，且平均液滴尺寸为约300-400nm或更大。
并非意图限于任何理论，格外小的乳液油滴在其在血流中的循环和器官分布中可以赋予与溶液相似的行为。典型的毛细血管的直径为约5-10微米，纳米乳液油滴小于200nm，这使得纳米乳液液滴即使在最小的血管中自由循环的程度也与溶液相同。同时，纳米乳液的低含油量也可以消除改变血浆特征或维生素K的组织分解的可能性。油被体内普遍存在的脂酶自然代谢，并且本发明纳米乳液中的小量油在仅仅数分钟内就可以快速分解，这会从油滴中快速释放维生素K。因此，一旦释放，维生素K分子的行为便会与诸如PIE-USP的溶液制剂相似。现有技术中并不存在(I)高磷脂与维生素K比与(2)非常低的含油量的组合。纳米乳液所产生的小液滴还允许组合物穿过O. 2微米的滤器，从而允许无菌过滤，所述乳状液的(I)磷脂与药物比为约13:1-25:1且(2)低含油量不超过约1%。这对于 Ohasi (美国专利第 4，840，970 号)、Ida (美国专利第 5，021，570 号)或 Kaneshiro (JP11438300)所公开的水溶液或其他现有乳状液组合物而言是不可能的，它们由于大的液滴尺寸而不能过滤通过O. 2微米滤器。这种大颗粒乳状液因此仅能依赖高温高压灭菌法。维生素K还易于氧化。因此，高压灭菌法对维生素K组合物而言是不切实际的，且非常可能降解任何维生素K组合物。另外，本发明的纳米乳液透光，其透光率大于20% (在600nm (T600)或750nm (T750)下测量)。相比之下，药物制剂领域公知，大多数乳状液是较浓、不透明的白色组合物(透光率小于5-10%)，这会遮掩细菌和真菌污染物以及来自其他外界颗粒的污染物的视觉检测(Madsen, R.等,2009，Pharmacopeial Forum, Vol. 35:1383) 这类污染物具有潜在的危害性，特别是当将药物制剂静脉内给予患者时。注射的颗粒状物质可以堵塞血管并导致肺栓塞或血栓。本发明的纳米乳液的透明或近于透明(图I)将允许视觉检查，这会大大降低与具有物质有关的安全风险。此外，本发明的纳米乳液非常低的含油量降低了高血脂症的可能性，高血脂症是甘油三酯血液水平升高的严重医疗状况，其可以导致动脉粥样硬化、冠心病和中风。本发明的纳米乳液所用的高磷脂与维生素K比以及非常低的含油量，能形成非常小的油滴，从而形成具有有利的和水溶液一样的药代(PK)和过滤性的独特的透明组合物的基础，任何现有技术中未公开、也未教导或在先使用过这些特性。当阅读下述详细说明和附图
时，这些和其他方面、实施方案和目的会更加清楚。附图简要说明图I根据实施例I制备的纳米乳液的透明外观。图2输注维生素K1纳米乳液(实施例I的Fl)后，兔边缘耳静脉的组织病理图像。具有内皮细胞层的薄静脉壁很容易观察到。血管腔含有红细胞。未观察到静脉壁的水肿，并且周围区域并未发生炎性细胞浸润。图3溶血研究。上图从左到右是试管#10、9、8、7、6、5、4、3、2和I。试管1-8含有F2纳米乳液(分别为O. 04,0. 08,0. 12,0. 16、0· 2、0· 4、0· 6和lmg/mL)，试管9是生理盐水(阴性对照)，而试管#10是水(阳性对照)。溶血现象以红色表示。F2纳米乳液试管中没有一个试管表现出阳性对照的红色，红色表明溶血现象。下图从左到右是试管#1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。试管1_8含有与含有F2纳米乳液的试管中相同的相应浓度的PIE-USP，试管9是生理盐水(阴性对照)，而试管10是水(阳性对照)。PIE-USP在试管4、5、6、7和8中引起溶血现象，其对应于的维生素K1的浓度分别为 O. 16,0. 2,0. 4,0. 6 和 lmg/mL。图4与相同强度下PIE-USP的药代动力学特征相比的F_2纳米乳液(根据实施例10制备)的小鼠药代动力学特征。菱形表示F-I纳米乳液注射后的的小鼠中的血浆维生素K水平，正方形来自PIE-USP注射后的的小鼠。图5与相同强度下PIE-USP制剂相比,2mg/mL和10mg/mL的F-61纳米乳液的小鼠血浆药代动力学特征。菱形表示F-61纳米乳液，而正方形表示PIE-USP特征。发明的详细描述本发明的纳米乳液是微黄、透明或半透明的组合物，其含有平均直径小于200纳米或更优选小于IOOnm的小油滴。纳米乳液稳定，并且具有卓越的长期稳定性(实施例6)。在化学上，其维持维生素K1的完整性，而在物理上，其保持透明或半透明，从而当储存期延长时(例如24个月)，纳米液滴尺寸保持相同，即使在25° C下储存6个月后或在冷融处理后。纳米乳液的特征是，在600/750nm下透光率高，且油滴很小。这种稳定性特性对于商业上可行的药物产品而言非常有利，并且现有技术中的任何水溶液或乳状液组合物并未公开这种稳定性。从生物学角度讲，纳米乳液是非变态反应原的，不引起超敏性或过敏反应，是非溶血性的，且与PIE-USP生物等效。本文所用的术语“纳米乳液”包括水包油乳状液，其所具有的油滴的非常小，SP小于200nm或优选lOOnm，且其具有高透明性，在600nm或750nm下的高透光率(T600/T750)不小于20%优选50%。在某些实施方案中，油滴的尺寸为约75nm-200nm，如75nm_150nm或75nm至115nm。在某些实施方案中，油滴的尺寸为约75nm、80nm、85nm、90nm、95nm、lOOnm、105nm、IIOnm、I15nm、120nm、125nm、130nm、135nm、140nm、145nm、150nm、155nm、160nm、165nm、170nm、175nm、180nm、185nm、190nm、195nm 或 200nmo在某些实施方案中，本发明的纳米乳液可用这些油滴给亲脂性维生素K增溶。在物理上，与常规水包油乳状液相比，纳米乳液具有明显不同。例如，纳米乳液是透明的(即具有高T600/T750透光率值)，并且具有溶液样外观，而常规乳状液是乳白色的、不透明且T600/T750〈20%。纳米乳液的平均液滴尺寸比常规水包油乳状液的平均液滴尺寸低得多，常规水包油乳状液的平均液滴尺寸通常大于300-400nm。并且最后，纳米乳液表现出比常规水包油乳状液好得多的稳定性，在25° C或2-8° C储存6个月或在冻融处理后，透明性或油滴尺寸的变化很小。最令人惊讶的是，在某些优选的实施方案中，本发明的纳米乳液与商业产品PIE-USP生物等效一该特性是没有其他乳状液所不具备的。“USP植物甲萘醌可注射的乳状液”指植物甲萘醌的无菌含水分散体。在2005年2月I日之前，其被称为“USP植物甲萘醌注射液”。默沙东(Merck &Co.)最初以"AquaM HPH Υ Ν ”商标名称研发了 PIE-USP，其含有10mg/mL植物甲萘醌、70mg/mL聚氧乙化脂肪酸衍生物(Cremophor)、37. 5mg/mL、9mg/mL的苯甲醇和水。值得注意的是，USP植物甲萘醌可注射的乳状液的组成中并未含有任何油，并且从技术上讲，不管其名称有何含义，其并不是水包油乳状液。而是根据严格的物理化学定义，PIE-USP应当被定义为水溶液，因为所有组分都溶解于水中。作为水溶液，PIE-USP对冷冻应激敏感。在冷冻和解冻后，AquaMFPHYTON 或其仿制品种的等同物会形成两相，同时析出Cremophor。相分离制剂对于静脉内注射而言是不安全的，因为其较大的液滴可能在毛细管中形成堵塞，从而导致栓塞。因此必须严格控制PIE-USP的存储条件，以防止突发的冷冻。相比之下，在某些优选的实施方案中，本发明的纳米乳液在冷冻-解冻循环后是稳固的，且保持其性质。换言之，本发明纳米乳液的平均液滴尺寸或透光率在冷冻-解冻应激后基本上保持不变。在某些优选的实施方案中，本发明的纳米乳液是水包油乳状液，因此在冷冻和解冻循环后，在组成、物理形式以及稳定性上不同于PIE-USP (实施例12)。本文所用术语“维生素K”包括一组亲脂性疏水维生素，是某些蛋白翻译后的修饰所必须的、主要是血液凝固中是必须的。在化学上，它们是2-甲基-1，4-萘醌衍生物。维生素K1也称为叶绿醌或植物甲萘醌(还称为植物甲萘醌)，且维生素K2还称为甲萘醌或四烯甲萘醌。有三种合成形式的维生素K，即维生素K3、K4和K5，其在许多领域中使用，包括宠物食品工业(维生素K3)以及抑制真菌生长(维生素K5)。本文所用术语“透光率(%) ”是纳米乳液透明性的量度，并被定义为在指定的波长下(即600nm)穿过样品的入射光的分数。其采用下述公式计算Τλ = I^-I0XlOO其中Itl是入射光的强度，I是来自样品的光的强度，而Ta是透光率。在固定波长下，Ta值可以很容易地由UV-可见分光光度计测量。诸如600nm或750nm的可见波长通常用于获得T600或T750值。乳状液的透光率值直接与其油滴尺寸相关，并且可以用于区分本发明的纳米乳液的优选实施方案与常规乳状液。对于诸如静脉内注射用乳状液或脂肪乳状液的常规乳状液，INTRALIPID ，600nm/750nm波长下测量的透光率值通常小于5_10%(如低达O. 5、1、2、3或4% ；或可选地低达5、6、7、8、9或10%)，这是由于这些乳状液的反光白色和不透明的特性所致。然而，本发明的纳米乳液的特征是大于20%的非常高的透光率，并且几乎是透明的(图I)。本文所用术语“Cremophor”是巴斯夫公司(BASF Corp.)为其的聚氧乙化蓖麻油形式注册的商标。其通过使35摩尔的环氧乙烷与每摩尔蓖麻油反应而制备。所得产物是聚氧乙化程度不同的蓖麻油分子的混合物(CAS号61791-12-6)。Cremophor是合成的非离子表面活性剂，并且制药功效来自其使非极性材料的乳状液在含水系统中稳定的能力。Cremophor在药物中是赋形剂或添加剂。已知Cremophor和其它高HLB值的表面活性剂(意即在水中可溶)，如聚山梨醇酯80，当静脉内注射时引起过敏反应或过敏症。对于含有Cremophor或聚山梨醇酯80的许多静脉内给药的药物而言，对于后者而言为如TAX0L，这类变态反应是有详细的文献记载的。本文所用术语“生物等效的”包括与对照药物的PK特征一致的血浆浓度随时间而变的药代动力学(PK)特征。如本文所用，该术语包括本发明某些优选实施方案的维生素K1纳米乳液组合物的一致和几乎相同的PK特征，和允许在所选的动物或人类模型中采用静脉内、肌肉内或皮下注射的PIE-USP的相应PK特征(例如参见图4和5)。本发明的纳米乳液组合物，按乳状液的重量计，包含约0. 1%-2%(如约0. 18%、
0.2%、0· 22%,0. 5%、0· 8%、1· 0%、1· 2%、1· 5%、1· 8% 或 2%)、优选约 0. 2%-1%(如约 0. 18%,0. 2%、
0.22%,0. 3%、0· 4%、0· 5%、0· 6%、0· 7%、0· 8%、0· 9%、1· 0% 或 I. 1%)的维生素 K,磷脂与维生素K 重量比为约 13:1-25:1(如 13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、21:1、22:1、23:1,24:1 或 25:1)的磷脂、以及不超过 1%(如高达约 1%、0. 9%、0. 8%、0. 7%、0. 6%、0. 5%、0.4%、0· 3%、0· 2% 或 O. 1%)的油。本文所用术语“a (—个/种)”、“an (—个/种)”或“the (所述)”不仅包括具有一个成员的方面，还包括具有多个成员的方面。例如，包括“磷脂和甘油三酸酯油”的实施方案，应当理解为提出了具有至少第二种磷脂、至少第二种甘油三酸酯油或两者的方面。本文所用修饰数值的术语“约”表示所述数值周围的限定范围。如果“X”是该数值，则“约X”通常表示O. 8X-1. 2X的值，更优选O. 9X-1. IX。对“约X”的任何引用，都至少具体表示值 Χ、0. 90Χ、0. 91Χ、0· 92Χ、0. 93Χ、0. 94Χ, O. 95Χ、0. 96Χ、0. 97Χ、0· 98Χ、0. 99Χ、1· 01Χ、
1.02Χ、1· 03Χ、1· 04Χ、1· 05Χ、1· 06Χ、1· 07Χ、1· 08Χ、1· 09Χ 以及 I. 10Χ。因此“约 X” 意图为例如“O. 98Χ. ”的权利要求限定教导或提供书面说明支持。当量“X ”仅表示整数值(如“X个碳”)时，“约X”表示(X-I)至(Χ+1)。在这种情况下，本文所用的“约X”至少具体表示值Χ、Χ-1和Χ+1。当“约”应用于数值范围的开始时，其适用于范围的两端。因此“从约5-20%”等于“从约5%至约20%”。当“约”应用于一组值的第一个值时，其适用于该组内的所有值。因此“约7、9或11%”等于“约7%、约9%或约11%”。通常，本文所公开的实施方案包括手性化合物，并且可以包括具有消旋体形式或富集其D-或L-对映异构体的形式的实施方案。本文所用术语“或”通常应当理解为非排斥的。例如，“包含A或B的组合物”通常呈现了具有包含A和B的制剂的方面。然而“或”应当理解为所呈现的不能无矛盾地组合的方面(如PH介于9-10或介于7-8的制剂)。通常，当教导了百分比范围时，其包括位于其间(即该范围边界内)的所有或部分百分比。例如，5%-20%的百分比范围还特别教导了 7. 15%和17%的具体值。约O. 5%_2%的百分比范围还特别教导了 I. 37%、I. 2%和O. 63%的具体值。本文所用术语“大豆油”包括从大豆提取的精制油。对于注射用途，这种油符合某些质量规范，如纯度、微生物和内毒素限制，从而满足某些法定标准，并且必须在符合cGMP标准的设备中制造。在某些实施方案中，油的浓度不超过1%，如约0%、0. 1%、0. 2%、0. 3%、
0.4%、0· 5%、0· 6%、0· 7%、0· 8%、0· 9% 或 I. 0%。在某些实施方案中，也可以使用其他植物油，包括但不限于杏仁油、琉璃苣油、黑醋栗种子油、玉米油、红花油、大豆油、芝麻油、棉籽油、花生油、橄榄油、菜籽油、椰子油、棕榈油、芥花油(canola oil)等。所用的植物油的具体类型(如大豆油、玉米油或红花油等)并不重要，只要其安全、耐受良好、在药物中可接受、化学上稳定，并且可以形成具有期望大小范围的油滴。本文所用术语“中链甘油三酯”(MCT)包括可以来自天然或合成产生的另一类甘油三酯油。MCT由长度通常为约8个至约12个碳的脂肪酸制备。与植物油一样，MCT已经广泛用于可注射的乳状液制剂中，作为需要胃肠外营养的患者的热量来源。这类由可商购获得，以 SASOL GmbH (Germany)的 Miglyol 812、Croda, Inc. (Parsippany, New Jersey)的CR0DAM0L GTCC-PN或PVO International, Inc. (Boonton, New Jersey)的Neobees M_5油。其他低熔点中链油也可以用于本发明中。在某些实施方案中，MCT的浓度不超过1%，例如约0%、0· 1%、0· 2%、0· 3%、0· 4%、0· 5%、0· 6%、0· 7%、0· 8%、0· 9%、1· 0%)。在某些实施方案中，植物油与MCT油的比在约2:1至约1:2范围内(如约2:1、
1.9: I、I. 8: I、I. 7: I、I. 6: I、I. 5: I、I. 4: I、I. 3: I、I. 2: I、I. 1:1 和 1:1)，并优选约 1:1。
本文所用术语“磷脂”包括甘油与两个脂肪酸和一个磷酸盐离子的三酯。可用于本发明的示例性磷脂包括但不限于磷脂胆碱、卵磷脂(磷酸化甘油二酯的胆碱酯的混合物)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、约4至约22个碳原子的磷脂酸，且更通常为约10至约18个碳原子并且不同饱和程度的磷脂酸。本文所用术语“磷脂”可以是单一磷脂或几种磷脂的混合物。可用于本发明的磷脂优选地可以是天然来源，用于提高安全性。天然存在的磷脂包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化的大豆卵磷脂、氢化的蛋黄卵磷脂、鞘氨醇、神经节苷脂和植物鞘氨醇，以及其组合。磷脂也可以合成，并且常见的合成磷脂可包括但不限于二酰基甘油、磷脂酸、磷酸胆碱、磷酸乙醇胺、磷酸甘油、磷酸丝氨酸、溶血磷脂以及聚乙醇化磷脂。在某些实施方案中，磷脂的浓度为4%-25%，如约4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24% 或 25%)。在某些实施方案中，本发明的纳米乳液还含有药物可接受的添加剂，包括但不限于酸化剂、碱化剂、缓冲剂、螯合剂、复合剂以及增溶剂，抗氧化剂和抗微生物防腐剂，悬浮剂和/或粘度改性剂，毒性改性剂，冷冻保护剂，和其他生物相容材料或治疗剂。在某些实施方案中，这类添加剂辅助稳定纳米乳液并使得本发明的组合物具有足够的保质期。在某些实施方案中，本发明的纳米乳液的重量摩尔渗透压浓度为约300m0sm-500m0sm，并且其可以包括氯化钠或氯化钾、海藻糖、蔗糖、山梨醇、甘油、甘露醇、聚乙二醇、丙二醇、白蛋白、氨基酸及其混合物。本文所用术语“抗氧化剂”优选包括安全用于可注射产品的金属离子螯合剂和/还原剂。金属离子螯合剂如同抗氧化剂一样通过结合金属离子发挥作用，并由此降低金属离子对测试物质对氧化反应的催化作用。可以用于本发明某些实施方案的金属螯合剂可以包括EDTA、甘氨酸和柠檬酸或其盐。还原剂通过与氧化剂反应、与测试物质竞争或将氧化的测试物质转变回还原形式的最初的测试物质而实现它们的抗氧化剂作用。可以用于本发明的某些实施方案的还原剂包括但不限于蛋氨酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、抗坏血酸或其盐、抗坏血酸棕榈酸酯、焦亚硫酸钠、没食子酸丙酯、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、生育酚、组氨酸、氨基酸或其盐、还原糖或其任何混合物。本文所用术语“冷冻保护剂”包括任何在冷冻过程中通过将次微米大小的油滴在周围环境中保持分离而保护纳米乳液的安全且生物相容的试剂。可用于本发明的某些实施方案的冷冻保护剂包括但不限于单糖、二糖、多糖、丙二醇、聚乙二醇、甘油、聚醇(poly-ol)、糊精、环状糊精、淀粉、纤维素和纤维素衍生物、蛋白、肽、氨基酸、氯化钠、聚乙烯吡咯酮或其混合物。例如，在某些实施方案中，冷冻保护剂是甘露醇、山梨醇、木糖醇、乳糖、果糖、木糖、蔗糖、海藻糖、甘露糖、麦芽糖、葡萄糖、右旋糖苷(dexstrane)或其混合物。在某些实施方案中，冷冻保护剂是蔗糖、蔗糖与甘露醇的组合或蔗糖与海藻糖的组合。在某些实施方案中，本发明的制剂不包含阿拉伯树胶。本文所用术语“可注射的”包括药物主管部门(如US FDA)已接受组分，允许其用于注射药物中。在某些实施方案中，本发明的组合物在化学和物理上是稳定的。如果组合物中的药物如维生素K在适当的条件下储存至少I个月后基本上没有化学降解，则所述组合物是“化学稳定的”。在某些实施方案中，在适当的储存条件下(如在-20° C、2-8° C或在室温下)至少6个月，组合物中完整维生素K的浓度降低少于约5%。如本文所用，如果纳米乳液组合物可以在合适的条件下储存至少6个月，而其平均油滴大小增加不超过100%或没有明显的相分离、乳液分层或油滴聚集，则所述纳米乳液组合物是“物理上稳定的”。在某些实施方案中，在适当的储存条件下(如在-20° C、
2-8° C或在室温下)至少6个月，本发明组合物油滴的平均尺寸增加不超过约10%、20%、25%、30%、40%、50%、75% 或 100%。治疗用途本文所述组合物特别用于治疗血液凝固障碍，包括(I)预防和治疗新生儿出血病；(2)香豆素或茚二酮衍生物引起的抗凝剂诱导的凝血素缺乏症；(3)抗菌疗法所致的低凝血酶原血症；(4)限制维生素K的吸收或合成因子续发的低凝血酶原血症；以及(5)其他药物诱导的低凝血酶原血症。获得性凝血障碍是诸如维生素K缺乏症、肝疾病、弥散性血管内凝血(DIC)或循环抗凝剂的发展等疾病状况或疾病的结果。血液凝固缺陷是所述疾病状况或疾病引起的凝血因子的续发缺乏的结果。例如，当肝处于疾病状态时，经常影响肝产生凝血因子。连同凝血因子的合成降低，纤维蛋白溶解增加，且血小板减少(血小板缺乏)增加。急性肝炎或妊娠急性脂肪肝也可以导致肝产生的凝血因子降低。这种疾病状况促进血管内凝结，从而消耗可用的凝血因子。本文所提供的组合物可以用于治疗获得性凝血障碍，以便缓解血液凝血因子缺乏。经历了用于治疗诸如血栓栓塞的疾病状况的抗凝剂疗法的患者，在急性给予抗凝剂后可以表现出出血事件，或作为长期应用这类疗法的后果而发展出血性病症。本文所提供的组合物可用于治疗这类出血事件，其通常包括给予促凝血剂。本文所提供的组合物，可用于治疗或控制由于抗凝剂治疗而具有获得性出血病症的患者的出血事件。现在参考下述非限制性实施例，更详细地描述本发明。实施例I.含有维牛素Kl的Fl纳米乳液的制备采用下述组合物和程序，制备含有O. 2%维生素Kl的纳米乳液F-I组合物
权利要求
1.纳米乳液组合物，包含约O.1%至2%(重量比)的维生素K、磷脂以及甘油三酯油，其中所述磷脂与维生素K的重量比为13:1至25:1，且所述油浓度不超过所述纳米乳液重量的1%。
2.如权利要求I所述的组合物，其中所述组合物与USP植物甲萘醌可注射的乳状液生物等效。
3.如权利要求I所述的组合物,其中所述组合物的油滴的平均直径小于200纳米；且其中所述组合物在600nm或750nm的透光率不低于20%。
4.如权利要求I所述的组合物，其中在所述组合物于25°C下储存3个月或经历冻融处理后，所述组合物的油滴的平均直径小于200纳米，且所述组合物在600nm或750nm的透光率不低于20%。
5.如权利要求I所述的组合物，其中所述维生素K选自维生素K1、维生素K2、维生素K3、维生素K4、维生素K5、维生素K6、维生素K7及其组合。
6.如权利要求I所述的组合物，其中所述磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、1，2-二肉豆蘧基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)、1，2-二硬脂酰-sn_甘油基-3-磷酸甘油(DSPG)、I-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(POPC)或其组合或其盐。
7.如权利要求6所述的组合物，其中所述甘油三酯油选自大豆油、芝麻油、中链甘油三酯、甘油三辛酸酯或其组合。
8.如权利要求I所述的组合物，还包含药物可接受的冷冻保护剂、防腐剂或稳定剂。
9.如权利要求8所述的组合物，其中所述冷冻保护剂是蔗糖或甘油；其中所述防腐剂是苯甲醇、乙二胺四乙酸盐或对羟基苯甲酸酯；且其中所述稳定剂是组氨酸、蛋氨酸或维生素E。
10.如权利要求I所述的组合物，其中所述组合物是无静脉刺激性、无溶血性、且非变态反应原的。
11.使用权利要求1-10中任一权利要求所述的组合物预防新生儿出血病的方法。
12.使用权利要求1-10中任一权利要求所述的组合物治疗新生儿出血病的方法。
13.使用权利要求1-10中任一权利要求所述的组合物预防成年人凝血障碍的方法。
14.使用权利要求1-10中任一权利要求所述的组合物治疗成年人凝血障碍的方法。
15.制备权利要求1-10中任一权利要求所述的组合物的方法。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述方法包括(a)将按所述纳米乳液的重量约O.1%至2%的维生素K与包含磷脂和甘油三酯油的油相合并，其中所述磷脂与维生素K的重量比为13:1-25:1，且其中所述油浓度按所述占纳米乳液的重量计不超过1% ;以及(b)使所述油相在含有冷冻保护剂的水相中均化以形成水包油乳状液。
17.包含权利要求1-10中任一权利要求所述组合物的试剂盒。
18.权利要求1-10中任一权利要求所述的组合物在制备用于治疗出血病的药物中的用途。
全文摘要
在某些实施方案中，本发明提供了有关纳米乳液组合物的组成、方法和用途，所述纳米乳液组合物包含脂溶性维生素K，并且在治疗上能够代替美国药典(USP)中的植物甲萘醌可注射的乳状液。
文档编号A61K31/685GK102939077SQ201180027377
公开日2013年2月20日 申请日期2011年6月3日 优先权日2010年6月3日
发明者陈献 申请人:莱迪杜德制药公司