专利名称：预防hiv感染以及对由hiv引起的疾病和hiv相关疾病、包括aids进行预防和治疗的药剂和方法
预防HIV感染以及对由HIV引起的疾病和HlV相关疾病、包括AIDS进行预防和治疗的药剂和方法技术领域
本发明属于药物领域，可用于有效预防HIV感染、以及预防和治疗由HIV引起的疾病和HIV相关疾病(包括AIDS)。
背景技术：
现有技术包括基于极低剂量的抗干扰素抗体的活性形式对感染性疾病(包括病毒性疾病)进行治疗的药剂(RU2192888C1，A61K39/395, 20.11.2002)。然而，这一药剂既对HIV感染的预防无效，也对各种由HIV引起的各种疾病或HIV相关疾病(包括AIDS)的预防和治疗无效。发明内容
本发明针对无明显副作用的复合药剂的开发，所述复合药剂使得能够有效预防HIV感染以及预防和有效治疗由HIV引起的疾病或HIV相关疾病(包括在HIV阳性受试者中的感染和侵染、恶性肿瘤以及AIDS)。
这一问题的解决方案由如下事实提供保障:用于预防HIV感染以及预防和治疗由HIV引起的疾病或HIV相关疾病(包括AIDS)的本发明所述药剂含有针对抗原的、活性强化形式(activated-potentiated form)的抗体；所述抗原为免疫系统的蛋白或多肽,或者主要由免疫系统所产生的蛋白 或多肽；所述蛋白或多肽与HIV进行反应，或者其含量或功能活性在有HIV存在的情况下发生改变。
同时,可使用主要针对溶解性抗原(solved antigen)(或可溶性抗原，即，未结合至免疫细胞外膜的抗原)的、活性强化形式的抗体。
同时，可将细胞因子(cytokines)(除Y -干扰素外)用作可溶性抗原。
除此之外，还可使用主要针对结合至免疫细胞外膜的抗原的、活性强化形式的抗体。
同时,将具有免疫能力的(immunocompetent)细胞受体用作结合至免疫细胞外膜的抗原。
此外,还可将分化簇(clusters of differentiation)(除T淋巴细胞的⑶4分子夕卜)用作结合至免疫细胞外膜的抗原。
可将针对溶解性抗原或针对结合至免疫细胞外膜的抗原的、活性强化形式的抗体以活性强化水溶液或活性强化水-醇溶液的形式使用，所述活性强化水溶液或活性强化水-醇溶液的活性基于以下方法:对处于水或水-醇溶剂中的抗体储备(初始)溶液进行连续多次稀释，且在每次稀释后伴以外部机械作用-竖直震荡。
同时，所要求保护的药剂可被设计以固体剂型作为药物组合物，所述药物组合物含有:技术上所需(有效)量的中性载体，所述中性载体用活性强化形式的抗体的水溶液和水-醇溶液的混合物进行饱和，所述抗体针对溶解性抗原或针对结合至免疫细胞外膜的抗原；以及药学上可接受的添加剂，所述添加剂包括例如乳糖、微晶纤维素和硬脂酸镁。
可通过将抗体储备(初始)溶液进行连续多次稀释、并在每次稀释后伴以外部机械作用-竖直震荡，得到活性强化形式的抗体的水溶液和水-醇溶液，所述抗体针对溶解性抗原或针对结合至免疫细胞外膜的抗原，所述储备溶液的浓度为0.5-5.0mg/mL。
可以不同的顺势疗法稀释液(主要为百倍稀释液)的混合物的形式使用活性强化形式的抗体。
这一问题的解决方案还由如下事实提供保障:在用于本发明中的预防HIV感染以及预防和治疗由HIV引起的疾病和HIV相关疾病(包括AIDS)的方法中，使用针对抗原(免疫系统的蛋白或多肽，或者主要由免疫系统产生的蛋白或多肽)的、活性强化形式的抗体；所述抗原与HIV进行反应,或者其含量或功能活性由HIV感染而改变。
针对溶解性抗原或针对结合至免疫细胞外膜的抗原的、活性强化形式的抗体可以各组分的活性强化水溶液或活性强化水-醇溶液的形式使用，所述活性强化水溶液或活性强化水-醇溶液的活性基于以下方法:对处于水或水-醇溶剂中的抗体储备(初始)溶液进行多次稀释，且在每次稀释后伴以外部机械作用-竖直震荡。
针对溶解性抗原或针对结合至免疫细胞外膜的抗原的、活性强化形式的抗体的水溶液和水-醇溶液主要通过下述步骤得到:将抗体储备(初始)溶液进行连续多次稀释，并在每次稀释后伴以外部机械作用-竖直震荡；所述储备溶液的浓度为0.5-5.0mg/mL。
根据本发明，所述活性强化形式为根据如下强化的顺势疗法技术所制得的抗体形式:通过将抗体储备(初始)溶液进行连续多次稀释，且在每次稀释后伴以外部机械作用-竖直震荡而得以强化；该形式在预防HIV感染以及预防和治疗由HIV引起的疾病或HIV相关疾病(包括AIDS)的药理学模型和/或临床方法中具有活性。
为针对溶解性抗原(例如，针对肿瘤坏死因子_a或人a-干扰素)或针对结合至免疫细胞外膜的抗原(例如，针对CD8受体)的、活性强化形式的抗体所提出的用途产生了意想不到的治疗效果，所述意想不到的治疗效果为药剂在预防HIV感染以及预防和治疗由HIV引起的疾病或HIV相关疾病(包括AIDS)方面更高的疗效。
实验表明，所要求保护的药剂其特征在于对HIV的预防疗效高，所述药剂预防人类免疫缺陷病毒侵入细胞及其胞内复制，因此可用于有效治疗和预防易表现出慢性病程的病毒性疾病，包括HIV-感染的二级预防。
所要求保护的药剂可与抗逆转录病毒剂相结合使用，所述抗逆转录病毒剂包括复合药剂、如逆转录酶抑制剂(例如，齐多夫定衍生物)；这使得抗逆转录病毒剂的剂量减少，同时维持了高的治疗功效，提高了治疗的安全性并降低了不良事件的发生率。
具体实施方式
主要以如下方式制备所述药剂。
为了制备活性强化形式的活性物质，使用单克隆抗体或多克隆抗体(主要)；所述抗体可使用已知的技术获得，尤其是使用例如在Immunological methods, G.Frimel, Μ.主编，‘Meditsina’，1987, p.9-33 [Russian];或在文献 Laffly E., Sodoyer R.，Hum.Antibodies.Monoclonal and recombinant antibodies, 30years after，2005，Vol.14，Nl-2.，P.33-55中所述的技术。
单克隆抗体可使用如杂交瘤技术获得。并且，该方法的初始步骤包括基于已在多克隆抗血清制备过程中开发出的原则进行免疫。这一方法的进一步步骤包括:获得产生具有相同特异性的抗体克隆的杂交瘤细胞。其各自的分离使用与多克隆抗血清分离相同的方法进行。
多克隆抗体可通过动物的主动免疫获得。为了这一目的，使用特别的方案，对动物进行本发明所需物质、抗原或缀合抗原(免疫系统的蛋白或多肽、或者主要由免疫系统产生的蛋白或多肽；所述蛋白或多肽与HIV进行反应，或者其含量和/或功能活性由HIV感染而改变)的一系列注射。作为这一过程的结果，获得用于生产活性强化形式的单特异性抗血清。如果必要的话，例如使用亲和色谱法、盐析法、或离子交换色谱法的方法对存在于抗血清中的抗体进行纯化。
例如，对于所要求保护的药剂的生产，可使用抗肿瘤坏死因子α多克隆抗体，所述抗肿瘤坏死因子α多克隆抗体作为进一步制备活性强化形式的储备(初始)溶液(浓度为 0.5-5.0mg/mL)使用。
优选使用多 克隆抗体来制备所要求保护的药剂；所述多克隆抗体可利用对兔进行如下的免疫作用而获得。
例如，抗肿瘤坏死因子a (TNF- α )多克隆抗体可使用TNF- α的整个分子来获得，所述TNF-α的整个分子具有如下序列:
I MSTESMIRDV ELAEEALPKK TGGPQGSRRC LFLSLFSFLI VAGATTLFCL LHFGVIGPQR
61 EEFPRDLSLI SPLAQAVRSS SRTPSDKPVA HVVANPQAEG QLQffLNRRAN ALLANGVELR
121 DNQLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE
181 TPEGAEAKPff YEPIYLGGVF QLEKGDRLSA EINRPDYLDF AESGQVYFGI IAL
使用例如选白于如下序列的肿瘤坏死因子的多肽片段，可获得抗肿瘤坏死因子-a (TNF- α )多克隆抗体:
84-88:
PSDKP
93-97:
VANPQ
65-199:
RDLSLI SPLAQAVRSS SRTPSDKPVA HVVANPQAEG QLQffLNRRAN ALLANGVELRDNQLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE TPEGAEAKPffYEPIYLGGV
77-93:
RSS SRTPSDKPVA HVV
32-54:
GGPQGSRRC LFLSLFSFLI VAGA
56-73:
IGPQR EEFPRDLSLI SPL
123-160:
QLWPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA
176-190:
PCQRE TPEGAEAKPff
5-45:
SMIRDV ELAEEALPKK TGGPQGSRRC LFLSL
150-184:
V LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE TPEG
77-233:
VRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGV ELRDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQ TKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL.
在采血前7-9天，进行1-3次静脉注射，以提高抗体水平。在免疫过程中，从兔中取出小量的血液样本，以评估抗体的量。第一次注射后40-60天，达到对所注射的大多数抗原的免疫反应的最高水平。在第一个兔免疫周期后，提供30天来使之恢复，然后重复进行包括1-3次静脉注射在内的免疫。为了获得抗血清，从经免疫的兔中将血液收集于容积为50ml的离心试管中。借助于木质药匙，从试管壁清除所形成的凝块，将搅拌棒(stick)放置于试管中心所形成的凝块中。将血液放置于冰箱(温度4°C)中过夜。第二天，将附着至药匙的凝块移除，将剩余液体在13000g下离心lOmin。上清液(沉淀之上的液体)为抗血清。所获得的抗血清应为黄色。可加入20%的NaN3至其终浓度为0.02%，在使用前，将所述抗血清于_20°C的温度下保持冷冻、或者于_70°C的温度下而不加入NaN3时保持冷冻。可按照如下所示的方式从抗肿瘤坏死因子-α的抗血清中分离抗体:
1.将IOml兔抗血清用0.15Μ的NaCl稀释2倍，加入6.26g Na2SO4,混合并在4°C下孵育12-16小时；
2.将所形成的沉淀物通过离心的方式移除，于IOml磷酸盐缓冲液中稀释，然后用相同的缓冲液在室温下透析过夜；
3.通过离心方式移除沉淀物后，将溶液加样至用磷酸盐缓冲液平衡后的DEAE-纤维素柱；
4.通过在280nm处对洗脱液的光密度进行测量来确定抗体馏分。
通过亲和色谱方 法在具有抗原的柱中经由如下方式对抗体进行纯化:将抗肿瘤坏死因子α抗体与抗原(肿瘤坏死因子α )结合，所述抗原连接至柱中的不可溶基质；随后用浓的盐溶液对抗体进行洗脱。
将由这一方法获得的浓度为0.5-5.0mg/ml、优选2.0-3.0mg/ml的抗肿瘤坏死因子α多克隆抗体的缓冲液用作基质(初始)溶液，用于随后制备活性强化形式的抗体。
抗人α -干扰素多克隆抗体可通过上述方法而获得；用于兔免疫的免疫原(抗原)由佐剂和如下序列之一的人α-干扰素的完整分子表示:
人α-干扰素(亚型2):
MALTFALLVA LLVLSCKSSC SVGCDLPQTH SLGSRRTLML LAQMRKISLF SCLKDRHDFG
FPQEEFGNQF QKAETIPVLH EMIQQIFNLF STKDSSAAffD ETLLDKFYTE LYQQLNDLEA
CVIQGVGVTE TPLMKEDSIL AVRKYFQRIT LYLKEKKYSP CAffEVVRAEI MRSFSLSTNL
QESLRSKE
权利要求
1.用于预防Hiv感染以及用于对由HIV引起的疾病或HIV相关疾病、包括AIDS进行预防和治疗的药剂，其特征在于，含有针对免疫系统的蛋白或多肽的、活性强化形式的抗体；所述蛋白或多肽与HIV相互作用，或者其含量和/或功能活性随所述HIV感染而改变。
2.根据权利要求1所述的药剂，其特征在于，使用针对溶解性抗原的、活性强化形式的抗体。
3.根据权利要求2所述的药剂，其特征在于，使用除Y-干扰素以外的抗原细胞因子作为所述溶解性抗原。
4.根据权利要求1所述的药剂，其特征在于，使用针对结合至免疫系统细胞外膜的抗原的、活性强化形式的抗体。
5.根据权利要求4所述的药剂，其特征在于，将具有免疫能力的细胞用作所述结合至免疫系统细胞外膜的抗原。
6.根据权利要求4所述的药剂，其特征在于，将除T淋巴细胞的CD4分子以外的分化簇用作所述结合至免疫系统细胞外膜的抗原。
7.根据权利要求2或4所述的药剂，其特征在于，将针对所述溶解性抗原或针对所述结合至免疫系统细胞外膜的抗原的、活性强化形式的抗体用作活性强化水溶液或活性强化水-醇溶液，所述活性强化水溶液或活性强化水-醇溶液的活性通过下述方法来调节:将处于水或水-醇溶剂中的抗体基质初始溶液进行连续多次稀释，且在每次稀释后伴以外部机械作用-竖直震荡。
8.根据权利要求2或4所述的药剂，其特征在于，所述药剂以固体剂型作为药物组合物生产，所述药物组合物含有:技术上所需量的中性载体，所述中性载体用活性强化形式的抗体的水溶液和水-醇溶液的混合物进行饱和，所述抗体针对溶解性抗原或针对结合至免疫系统细胞外膜的抗原；以及药学上可接受的添加剂。
9.根据权利要求2或4所述的药剂，其特征在于，针对所述溶解性抗原或针对所述结合至免疫系统细胞外膜的抗原的、活性强化形式的抗体的水溶液和水-醇溶液通过下述方式生产:将抗体基质初始溶液进行连续多次稀释，并在每次稀释后伴以外部机械作用-竖直震荡；同时所述基质初始溶液的浓度为0.5-5.0mg/mL。
10.根据权利要求2或4所述的药剂，其特征在于，以不同的顺势疗法稀释液、主要为百倍顺势疗法稀释液的混合物形式使用所述活性强化形式的抗体。
11.根据权利要求8所述的药剂，其特征在于，所述药学上可接受的添加剂包括乳糖、微晶纤维素和硬脂酸镁。
12.预防HIV感染以及对由HIV引起的疾病或HIV相关疾病、包括AIDS进行预防和治疗的方法，其特征在于，使用针对抗原的、活性强化形式的抗体，所述抗原为免疫系统的蛋白或多肽；所述蛋白或多肽与HIV相互作用，或者其含量和/或功能活性随HIV感染而改变。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，将针对溶解性抗原或针对结合至免疫系统细胞外膜的抗原的、活性强化形式的抗体用作活性强化水溶液或活性强化水-醇溶液，所述活性强化水溶液或活性强化水-醇溶液的活性通过下述方法来调节:将处于水或水-醇溶剂中的抗体基质初始溶液进行多次稀释， 且在每次稀释后伴以外部机械作用-竖直震荡。
14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，针对所述溶解性抗原或针对所述结合至免疫系统细胞外膜的抗原的、活性强化形式的抗体的水溶液或水-醇溶液通过下述方式生产:将抗体基质初始溶液进行连续多次稀释，并在每次稀释后伴以外部机械作用-竖直震荡；同时所述基质初始溶液的浓度为0.5-5.0mg/mL。
15.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，使用针对溶解性抗原的、活性强化形式的抗体。
16.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，使用除Y-干扰素以外的细胞因子作为所述溶解性抗原。
17.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，使用针对结合至免疫系统细胞外膜的抗原的、活性强化形式的抗体。
18.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，将具有免疫能力的细胞用作所述结合至免疫系统细胞外膜的抗原。
19.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，将除T淋巴细胞的CD4分子以外的分化簇用作所述结合至免疫系统细 胞外膜的抗原。
全文摘要
用于预防HIV感染以及对由HIV引起的疾病或HIV相关疾病(包括AIDS)进行预防和治疗的药剂，所述药剂包含针对免疫系统的蛋白或多肽的、活性强化形式的抗体；所述蛋白或多肽与HIV相互作用，或者其含量和/或功能活性随HIV感染而改变。同时，在用于预防HIV感染以及用于对由HIV引起的疾病或HIV相关疾病(包括AIDS)进行预防和治疗的方法中，使用针对抗原(即，免疫系统的蛋白或多肽)的、活性强化形式的抗体；所述蛋白或多肽与HIV相互作用，或者其含量和/或功能活性随HIV感染而改变。
文档编号A61P31/18GK103209705SQ201180040388
公开日2013年7月17日 申请日期2011年7月15日 优先权日2010年8月6日
发明者奥列格·伊里奇·爱泼斯坦, 谢尔盖·亚历山德罗维奇·塔拉索夫 申请人:奥列格·伊里奇·爱泼斯坦