专利名称：基于病毒颗粒的鼻内流感疫苗的制作方法
技术领域：
本发明涉及，例如，用于灭活流感疫苗的组合物以及给药方式，其中，单次鼻内或吸入给药获得了与临床保护正相关的全身性免疫应答。
背景技术：
通过鼻内或口咽途径及使用灭活流感抗原针对流感进行免疫的多种设想已作为皮下或肌肉内免疫的非注射(无针头needle-less)替代途径被研究。已在动物模型中产生了支持非注射手段的实验数据。得到动物数据支持的、使用灭活流感抗原(例如化学方式灭活的完整病毒粒子，或者被进一步加工的病毒组分，例如被切开的病毒，或者经纯化的表面抗原血细胞凝集素(HA)和/或神经氨酸酶(NA))经鼻内途径进行免疫的思路包括使用佐剂或免疫刺激剂(immune stimulator)与灭活流感抗原组合,或者需要多次免疫。佐剂是能增强与其混合的抗原的免疫原性的任何物质。在人类中，通过鼻内途径抵抗流感的成功疫苗接种仅报道过(a)活的(冷适应性的株)流感疫苗(FluMist ,MedImmune Vaccines Inc)(参考文献1、2、3)，(b)病毒颗粒型流感疫苗，其佐有大肠杆菌(E. coli)的热不稳定毒素(NasalFlu, Berna Biotech Ltd)(参考文献4)或(C)使用高剂量抗原并且重复疫苗接种(参考文献5、10、11)。虽然活疫苗能诱导满意的免疫应答，但其能变成活病毒的特定性质带来了额外的安全顾虑，而且由于需要在上呼吸道附近的病毒复制，因此有可能会诱导出副作用。此外，所需的贮藏条件也限制了这些产品的商业化。使用大肠杆菌HLT作为佐剂的鼻内流感疫苗与面瘫(Bell’ s Palsy)之间的强烈相关性导致佐有HLT的病毒颗粒疫苗从市场撤出(参考文献6)。流感疫苗在给定人群中的疗效可通过下述方法来评估评定与接种后产生的抗流感抗体的数量相关的免疫原性参数。这些免疫原性参数通常被称为CHMP标准，其用于对灭活流感疫苗进行每年重新许可认证(参考文献7)。至今为止，通过使用灭活疫苗的一次单次鼻内施予，不加佐剂(其是疫苗中的附加成分，其不来自将用疫苗来预防的感染性试剂， 并且是为了增强对抗原的免疫应答的目的被加入到疫苗制剂中)，就符合这些免疫学要求或者CHMP标准(参考文献7)的、对人类抵抗流感的成功免疫尚未有记载。因此，人们认识到，在本领域中仍有对下述灭活流感疫苗组合物的需求，所述组合物能在单次鼻内给药之后诱导满意的全身性免疫反应，并且不含佐剂，且通过所述单次给药能符合CHMP标准(参考文献7) ο所述“CHMP标准”按照下文所述被定义。在CHMP(Committee for Medicinal Products for Human Use)的 Note for Guidance on Harmonisation of Requirements for Influenza Vaccines中，定义了下述血清学参数，以评定灭活流感疫苗的免疫原性-血清保护率，其中血清保护被定义为红血球凝聚抑制(Haemagglutination Inhibition, HI)效价> 40,
-血清转化率，其中血清转化被定义为接种前HI效价<10，接种后HI效价> 40， 或者，接种前HI效价> 10以及HI效价至少4倍的增加，-平均倍数增加值，这是对受试者内增加的几何平均值(即，接种后HI效价/接种前HI效价)。针对流感疫苗免疫原性的CHMP要求是对于疫苗中三种病毒株中的每种而言，符合下述标准中的至少一项本发明还适用于儿童，从他们显示出，他们以与成年人相当的方式作出免疫应答 (参考文献8)。本发明还适用于老年受试者。老年人为超过60岁的。发明描述本发明涉及I.包含流感病毒颗粒的组合物，所述病毒颗粒包含所述病毒的重构包膜，其中所述病毒包膜完全从流感病毒粒子获得，其中没有从外源向所述重构病毒颗粒加入脂类，其中所述病毒颗粒包含所述流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物，其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和/或免疫刺激剂，并且其中所述组合物作为鼻内或吸入给药制剂来设计，所述组合物特征在于所述制剂向人类的单次鼻内或吸入给药能诱导抵抗所述流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物的全身性免疫应答和/或局部免疫应答。2.如项目I所述的组合物，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素剂量低于或等于30 μ g。3.如项目I或2中任意一项所述的组合物，其中所述制剂的单次鼻内或吸入给药还能诱导细胞毒性淋巴细胞应答。4.如项目I至3中任意一项所述的组合物，其中所述免疫应答符合针对流感疫苗的CHMP标准。5.如项目4所述的组合物，其中所述免疫应答提供下述中的一种或多种对成年人而言> 70%和/或对老年人而言> 60%的血清保护率，针对成年人> 40%和/或针对老年人> 30%的血清转化率，以及针对成年人> 2. 5和/或针对老年人> 2. O的平均倍数增加。6.如项目2至5中任意一项所述的组合物，其中，每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于25 μ go7.如项目2至5中任意一项所述的组合物，其中，每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于20 μ go8.如项目2至5中任意一项所述的组合物，其中，每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于15 μ go9.如项目2至5中任意一项所述的组合物，其中，每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于10 μ go10.如项目2至5中任意一项所述的组合物，其中，每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于5 μ g。11.如项目I至10中任意一项所述的组合物，其中，所述组合物是包含用于鼻内或吸入给药的药物载体的疫苗制剂。12.包含所述病毒的重构包膜的流感病毒颗粒用于制备用于鼻内或吸入给药的组合物的用途，其中所述病毒包膜完全从流感病毒粒子获得，其中没有从外源向所述重构病毒颗粒加入脂类，其中所述病毒颗粒包含流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物，其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和/或免疫刺激剂，所述组合物特征在于所述组合物向人类的单次鼻内或吸入给药足以诱导抵抗所述流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物的全身性免疫应答和/或局部免疫应答。13.如项目12所述的用途，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素剂量等于或低于30 μ g。14.如项目12或13中任意一项所述的用途，其中所述制剂的单次鼻内或吸入给药还诱导细胞毒性淋巴细胞应答。15.如项目12至14中任意一项所述的用途，其中所述免疫应答符合针对流感疫苗的CHMP标准。16.如项目15所述的用途，其中所述免疫应答提供下述中的一种或多种对成年人而言> 70%和/或对老年人而言> 60%的血清保护率，针对成年人> 40%和/或针对老年人> 30%的血清转化率，以及针对成年人> 2. 5和/或针对老年人> 2. O的平均倍数增加。17.如项目13至16中任意一项所述的用途，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于25 μ go18.如项目13至16中任意一项所述的用途，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于20 μ go19.如项目13至16中任意一项所述的用途，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于15 μ go20.如项目13至16中任意一项所述的用途，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于10 μ go21.如项目13至16中任意一项所述的用途，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于5 μ g。22.如项目12至21中任意一项所述的用途，其中制备的组合物是疫苗制剂。23.包含流感病毒颗粒的组合物的疫苗制剂，所述病毒颗粒包含所述病毒的重构包膜，其中所述病毒包膜完全从流感病毒粒子获得，其中没有从外源向重构病毒颗粒加入脂类，其中病毒颗粒包含流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物，其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和/或免疫刺激剂，该疫苗特征在于针对向人类的单次鼻内或吸入给药来设计所述疫苗，并且其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素剂量等于或低于30 μ go24.如项目23所述的疫苗制剂，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于25 μ g。25.如项目23所述的疫苗制剂，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于20 μ g。26.如项目23所述的疫苗制剂，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于15 μ g。27.如项目23所述的疫苗制剂，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于10 μ g。28.如项目23所述的疫苗制剂，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的剂量低于或等于5 μ g。29.如项目23至28中任意一项所述的疫苗制剂，其中所述制剂的单次鼻内或吸入给药能在所述人类中诱导免疫应答，所述免疫应答包括抵抗流感抗原血细胞凝集素和/ 或神经氨酸酶或其衍生物的全身性免疫应答，抵抗流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物的局部免疫应答，以及细胞毒性淋巴细胞介导的免疫应答中的一项或多项。30.如项目29所述的疫苗制剂，其中所述免疫应答符合针对流感疫苗的CHMP标准。31.如项目30所述的疫苗制剂，其中，所述免疫应答提供下述中的一种或多种对成年人而言> 70 %和/或对老年人而言> 60 %的血清保护率，针对成年人> 40 %和/或针对老年人> 30%的血清转化率，以及针对成年人> 2. 5和/或针对老年人> 2. O的平均倍数增加。32.用于鼻内或吸入给药的装置，所述装置包含根据项目23至31中任意一项所述的疫苗制剂。33.如项目32所述的装置，其中，所述装置包含一定量的用于单次鼻内或吸入给药的疫苗制剂。34.如项目32或33述的装置，其中，所述装置是一次性的。令人吃惊地，与临床前啮齿类数据和关于人类临床经历的文献相反，我们发现，对于18-60岁年龄组而言，用包含重构流感病毒包膜的灭活流感疫苗进行单次鼻内接种后， 人类的免疫应答符合针对流感疫苗疗效的全部三个CHMP标准。一次单次鼻内施予是为符合针对灭活流感疫苗免疫原性的上述CHMP标准，通过一个或两个鼻孔进行疫苗制剂的接种，而无需重复施予疫苗制剂。一次单次疫苗施予(通过鼻、吸入、口服、皮下或肌内途径) 通常是下述接种安排，其不包括在本领域作为初次(priming)和强化(boosting)而已知的、以数天或数周的时间间隔对疫苗的多次施予。被设计为鼻内或吸入给药制剂的制剂包含一种或多种活性组分和赋形剂的混合物，是按照允许鼻内或吸入给药的方式制备的。本发明提供了一种方法，用于诱导符合CHMP标准的全身性免疫应答(循环的免疫球蛋白或产生抗体的B细胞)，有利地，所述方法用对病毒颗粒流感疫苗的单次鼻内或吸入给药来进行。本发明还提供了一种方法，用于诱导局部或粘膜免疫应答，所述应答包括粘膜膜表面上作为IgA已知的分泌免疫球蛋白的增加，有利地，所述方法用对病毒颗粒流感疫苗的单次鼻内或吸入给药来进行。鼻内施予之后对特异性IgG和IgA应答的诱导涉及鼻腔中淋巴组织的活性(参考文献12)。此类组织作为鼻相关淋巴组织(NALT)已知，其还被显示为用于细胞免疫应答的粘膜诱导位点(参考文献13)。因为已知病毒颗粒具有诱导细胞内免疫应答的可能性(参考文献14、15)，因此本发明还提供了诱导特异性细胞毒性淋巴细胞(CTL) 的方法。病毒颗粒(virosome)是含有病毒糖蛋白的脂质双层。通常通过用去垢剂从带包膜病毒提取膜蛋白和脂类，接着通过除去所述去垢剂来重构特征性双层来生产病毒颗粒。 本发明还提供了流感病毒颗粒的组合物，其包含重构的流感病毒包膜(具体而言，不再加脂类，并且不加免疫刺激剂(通常称为佐剂)的免疫调节剂而重构)，用于通过气溶胶进行接种，所述气溶胶通过一个或两个鼻孔施予鼻咽或口咽的粘膜，以获得抵抗流感的全身性和局部免疫性。通过吸入进行的单次施予也是可行的。单次口服粘膜施予也是可行的。可从灭活病毒来制备重构流感病毒颗粒，可以用不可透析的去垢剂对灭活病毒加以溶解，通过吸附到疏水珠粒上来除去所述去垢剂。制备物可包含一种或多种流感抗原的经过纯化的悬浮液，所述流感抗原选自血细胞凝集素(HA)、神经氨酸酶(NA)、血细胞凝集素的衍生物和神经氨酸酶的衍生物。可以在病毒脂类(含有低水平的内毒素和卵清蛋白) 构成的膜中，对病毒膜蛋白血细胞凝集素和神经氨酸酶进行重构(见参考文献9)。血清凝集素和/或神经氨酸酶的衍生物是具有经修饰的氨基酸序列和/或结构的血细胞凝集素和 /或神经氨酸酶分子。氨基酸可例如被删除、替换或添加到序列中。此外，糖基化方式可被改变。衍生物保留有导入宿主时诱导免疫应答的能力。可在例如含有胚胎的鸡蛋中，或在附着的细胞或悬浮液中的细胞的细胞培养物中培养用于制备重构病毒颗粒的流感病毒。病毒例如可以是野生型的或重配的 (reassortant)或经过遗传修饰的株。病毒类型可例如是任何流感A或B亚型，包括流行性的株。本发明还提供疫苗。术语疫苗应被理解为具有免疫活性的药物制备物。在某些实施方式中，疫苗可包含病原性微生物的无害变体或衍生物，例如，刺激免疫系统产生针对真实病原体的抵抗。在某些实施方式中，当疫苗施予宿主时例如能诱导适应性免疫。疫苗可含有病原体或病原体组分的已死亡或削弱形式，例如病原体的抗原性组分。疫苗制备物可还含有药物载体，所述药物载体可针对疫苗将被施予的特定模式加以设计，例如针对鼻内或吸入给药设计的药物载体。流感疫苗可包含一种或多种未变性流感抗原，其一种或多种能诱导流感特异的免疫应答。本发明提供了含流感病毒颗粒的组合物，所述流感病毒颗粒包含所述病毒的重构包膜，其中所述组合物被设计为鼻内或吸入给药制剂。本发明还提供了其中病毒颗粒包含流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物的所述组合物。本发明还提供了其中病毒包膜完全从病毒粒子获得的所述组合物。本发明还提供了其中没有脂类从外源向重构病毒颗粒加入的所述组合物。本发明还提供了其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和/ 或免疫刺激剂的所述组合物。本发明还提供了其中对受试者的单次鼻内或吸入给药能诱导全身性免疫应答的所述组合物。本发明还提供了其中对受试者的单次鼻内或吸入给药还能诱导局部免疫应答的所述组合物。本发明还提供了对受试者的单次鼻内或吸入给药还能诱导细胞毒性淋巴细胞应答的所述组合物。本发明还提供了其中在人类中显示诱导全身性免疫应答和/或局部免疫应答和/或细胞毒性淋巴细胞应答的能力的所述组合物。本发明还
7提供了其中免疫应答包含针对流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物的免疫应答的所述组合物。在一种优选的实施方式中，本发明还提供了其中免疫应答符合用于流感疫苗的CHMP标准的所述组合物。本发明还提供了其中免疫应答提供下述中的一种或多种的所述组合物对成年人而言> 70%和/或对老年人而言> 60%的血清保护率，针对成年人> 40%和/或针对老年人> 30%的血清转化率，以及针对成年人> 2. 5和/或针对老年人> 2. O的平均倍数增加。在一种特别优选的实施方式中，本发明还提供了其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素剂量等于或低于30 μ g的所述组合物。最后， 本发明还提供了其中组合物是包含用于鼻内或吸入给药的药物载体的疫苗制剂的所述组合物。本发明还提供了包含所述病毒的重构包膜的流感病毒颗粒用于制备用于鼻内或吸入给药的组合物的用途。本发明还提供了这样的所述用途其中，流感病毒颗粒包含流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物。本发明还提供了这样的所述用途其中病毒包膜完全从流感病毒粒子获得。本发明还提供了这样的所述用途其中没有脂类从外源加入到重构病毒颗粒。本发明还提供了这样的所述用途其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和/或免疫刺激剂。本发明还提供了这样的所述用途其中向受试者的单次鼻内或吸入给药足以诱导全身性免疫应答。本发明还提供了这样的所述用途其中向受试者的单次鼻内或吸入给药还诱导局部免疫应答。本发明还提供了这样的所述用途其中向受试者的单次鼻内或吸入给药还诱导细胞毒性淋巴细胞应答。本发明还提供了这样的所述用途其中接受给药的受试者是人类。本发明还提供了这样的所述用途诱导的免疫应答包含针对流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物的免疫应答。在一种优选的实施方式中，本发明还提供了这样的所述用途，其中组合物诱导符合针对流感疫苗的CHMP标准的免疫应答。本发明还提供了这样的所述用途，其中免疫应答提供下述中的一种或多种 对成年人而言> 70%和/或对老年人而言> 60%的血清保护率，针对成年人> 40%和/或针对老年人> 30%的血清转化率，以及针对成年人> 2. 5和/或针对老年人> 2. O的平均倍数增加。在一种特别优选的实施方式中，本发明还提供了这样的所述用途，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的施予剂量等于或低于30 μ g。最后，本发明还提供了其中制备的组合物是疫苗制剂的所述用途。因此，在一种实施方式中，本发明提供了包含所述病毒的重构包膜的流感病毒颗粒的组合物，其中所述病毒包膜完全从流感病毒粒子获得，其中没有从外源向重构病毒颗粒加入脂类，其中病毒颗粒包含流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物，其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和/或免疫刺激剂，以及其中所述组合物作为鼻内或吸入给药制剂来设计，所述组合物特征在于所述制剂向人类的单次鼻内或吸入给药能诱导抵抗所述流感抗原的全身性免疫应答和/或局部免疫应答，所述全身性应答能符合用于流感疫苗的CHMP标准，以及其中，每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素剂量等于或低于30 μ go根据另一种实施方式，本发明提供了包含所述病毒的重构包膜的流感病毒颗粒用于制备用于鼻内或吸入给药的组合物的用途，其中所述病毒包膜完全从流感病毒粒子获得，其中没有从外源向重构病毒颗粒加入脂类，其中病毒颗粒包含流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物，其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和/或免疫刺激剂，所述流感病毒颗粒用于制备用于鼻内或吸入给药的组合物的用途的特征在于，所述组合物向人类的单次鼻内或吸入给药足以诱导抵抗所述流感抗原的全身性免疫应答和/或局部免疫应答，所述应答能符合针对流感疫苗的CHMP标准，以及其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素剂量等于或低于30 μ g0根据另一种实施方式，本发明提供了一种包含流感病毒颗粒的组合物的疫苗制剂，所述病毒颗粒包含所述病毒的重构包膜，其中，所述病毒包膜完全从流感病毒粒子获得，其中没有从外源向重构病毒颗粒加入脂类，其中病毒颗粒包含流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物，其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和/或免疫剌激剂， 其中疫苗特征在于针对向人类的单次鼻内或吸入给药来设计疫苗，并且，其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素剂量等于或低于30 μ g。有利地，所述制剂的所述单次鼻内或吸入给药能在所述人类中诱导全身性和/或局部免疫应答。根据本发明还提供了包含一定量的用于单次鼻内或吸入给药的所述疫苗制剂的装置。每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素的根据本发明的应用剂量还可以低于或等于 25 μ g、20 μ g、15 μ g、10 μ g 或 5 μ g。引用的文献(I)Maassab HF. Adaptation and growth characteristics of influenza virus at 25°C, Nature 213,612-14(1967)(2)Maassab HF. Bryant MLThe development of live attenuated cold-adapted influenza virus vaccine for humans. Rev. Med. Virol. 1999 Oct-Dec ；9 (4) :237-44(3)Keitel W, Piedra PA. Live cold-adapted, reassortant in influenza vaccines(USA). In Textbook of Influenza. Nicholson KG，Webster RG，Hay AJ (Ed)， Blackwel Science Oxford，UK，373-390(1998)(4)Gluck U， Gebbers JO, Gluck R， Phase I evaluation of intranasal virosomal influenza vaccine with and without Escherichia coli heat-labile toxin in adult volunteers. J Virol. 1999 Sep ；73(9) :7780-6(5) Samdal HH, Bakke H，Of tung F，Holst J，Haugen IL, Korsvold GE， Kristoffersen AC，Krogh G，Nord K，Rappuoli R，Berstad AKH，Haneberg B，Anon-Living Nasal Influenza Vaccine Can Induce Major Humoral and Cellular Immune Responses in Humans without the Need for Adjuvants. Human Vaccines I : 2,85-90 ；March/April 2005(6) Mutsch M，Zhou W, Rhodes P，Bopp M，Chen RT, Linder T，Spyr C，Steffen R. Use of the inactivated intranasal influenza vaccine and the risk of Bell^ s palsy in Switzerland. N Engl J Med,2004 Feb 26 ；350 (9) :896-903(7)Note for Guidance on Harmonisation of Requirements for Influenza Vaccines. EMEA/CpMP/BWP/214/96(8) Daubeney, P.，Taylor, C. J.，McGaw, J.，Brown, Brown, E. M.，Ghosal，S.， Keeton，B. R.，Palache，B.，Kerstens，R. Immunogenicity and tolerability of a trivalent influenza subunit vaccine (InfluvacR) in high-risk children aged 6 months to 4 years. BJCP 1997 March,51(2) :87-90
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实施例实施例I在8周龄的BALB/C小鼠中的LPP病毒颗粒疫苗；次优HA剂量水平上，对多种HA/LPP比例的鼻内比较流感血清阴性雌性Balb/c小鼠组成的组(每组10只)通过鼻内施予获得LPP (脂肽)_病毒颗粒疫苗，其HA/LPP比例为I I. 5,1 O. 7,1 0.4,1 O (即没有LPP)，并且每份剂量具有2 μ g的HA。此外，10只雌性小鼠的对照组接受O μ g HA/剂量(载体的鼻内施予)。制备含有LPP的病毒颗粒的四种制备物。简言之，通过离心对30-40%蔗糖溶液中的灭活流感病毒进行沉淀。重新悬浮病毒，溶解于含有去垢剂八聚乙二醇单十二烷基醚 (Octaethylene glycol monododecyl ether) (OEG)的缓冲液中。随后，通过超离心除去病毒核壳体。将含有OEG的上清液分为4等分体积，加入不同量的含OEG缓冲液中的脂肽 P3CSK4 (P3CSK4 N-棕榈酰-S- [2，3-双(棕榈酰氧)-(2RS) _丙基]_ [R] _半胱氨酰_ [S]-丝氨酰-[S]-赖氨酰-[S]-赖氨酰-[S]-赖氨酰-[S]-赖氨酸)。用含OEG的缓冲液调节体积。通过吸附到疏水树脂上除去0EG。这导致了含LPP的病毒颗粒的形成，一种在它们膜中含有HA和NA以及(可选地)在它们膜中含有LPP的重构的病毒小泡。OEG去除之后，将病毒颗粒经孔径为0. 22 μ m的PVDF膜过滤。
起始原料为20mg的HA，其来自甲型流感/Wyoming/3/2003X_147 (类A/ Fujian/411/200 (H3N2)株)，含有2521. U.内毒素/IOOyg HA0溶解后，按照表I所概述的制备4批。表I病毒颗粒的制备
权利要求
1.用于向人类的单次鼻内或吸入给药以及能诱导抵抗流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶的全身和/或局部免疫应答的组合物，所述组合物包含由所述病毒的重构包膜形成的流感病毒颗粒，其中 所述病毒包膜完全从流感病毒粒子获得， 没有从外源向所述重构病毒颗粒加入脂类， 所述病毒颗粒包含流感血细胞凝集素和/或神经氨酸酶， 每单次鼻内或吸入给药的每种病毒株的血细胞凝集素的剂量为5 μ g至30 μ g，其特征在于没有向组合物中加入附加的佐剂和/或免疫刺激剂，并且其中所述制剂的单次鼻内或吸入给药还能诱导细胞毒性淋巴细胞应答。
2.根据权利要求I的组合物，其中所述免疫应答符合针对流感疫苗的CHMP标准。
3.根据权利要求I或2的组合物，其中所述免疫应答提供了下述中一种或多种对于成年人> 70%和/或对于老年人> 60%的血清保护率，对于成年人> 40%和/或对于老年人> 30%的血清转化率，和对于成年人> 2. 5和/或对于老年人> 2. O的平均倍数增加。
4.由所述病毒的重构包膜形成的流感病毒颗粒在制备用于向人类的单次鼻内或吸入给药并且能诱导抵抗流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶的全身和/或局部免疫应答的组合物的用途，所述组合物包含由所述病毒的重构包膜形成的流感病毒颗粒，其中 所述病毒包膜完全从流感病毒粒子获得， 没有从外源向所述重构病毒颗粒加入脂类， 所述病毒颗粒包含流感血细胞凝集素和/或神经氨酸酶， 每单次鼻内或吸入给药的每种病毒株的血细胞凝集素的剂量为5 μ g至30 μ g，其特征在于没有向组合物中加入附加的佐剂和/或免疫刺激剂，并且其中所述制剂的单次鼻内或吸入给药还能诱导细胞毒性淋巴细胞应答。
5.根据权利要求4的用途，其中所述免疫应答符合针对流感疫苗的CHMP标准。
6.根据权利要求4或5的用途，其中所述免疫应答提供了下述中一种或多种对于成年人> 70%和/或对于老年人> 60%的血清保护率，对于成年人> 40%和/或对于老年人 > 30%的血清转化率，和对于成年人> 2. 5和/或对于老年人> 2. O的平均倍数增加。
7.根据权利要求4至6中任意一项的用途，其中所述制备的组合物是疫苗制剂。
8.包含根据权利要求I至3中任意一项的组合物的疫苗制剂。
9.用于鼻内或吸入给药的包含根据权利要求8的所述疫苗制剂以及用于所述疫苗雾化的机制的装置。
10.根据权利要求9的装置，其中所述装置包含一定量用于单次鼻内或吸入给药的疫苗制剂。
11.根据权利要求9或10的装置，其中所述装置是一次性的。
全文摘要
本发明提供了流感病毒颗粒的组合物，所述病毒颗粒包含所述病毒的重构包膜，其中所述病毒包膜完全从流感病毒粒获得，其中没有从外源向重构病毒颗粒加入脂类，其中病毒颗粒包含流感抗原血细胞凝集素和/或神经氨酸酶或其衍生物，其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和/或免疫刺激剂，并且其中所述组合物作为鼻内或吸入给药制剂来设计，所述组合物特征在于所述制剂向人类的单次鼻内或吸入给药足以诱导抵抗所述流感抗原的全身性免疫应答和/或局部免疫应答和/或细胞毒性淋巴细胞应答，所述全身性应答能符合针对流感疫苗的CHMP标准，并且其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素剂量等于或低于30μg。本发明还提供了重构的流感病毒颗粒用于制备所述组合物的用途，以及由此制备的疫苗制剂。
文档编号A61P31/16GK102580077SQ20121004953
公开日2012年7月18日 申请日期2007年3月21日 优先权日2006年3月22日
发明者A·J·克斯坦, D·H·范蕾内科莱希思, J·J·P·瑙塔, L·杰勒兹, P·J·舍恩 申请人:索尔瓦生物学有限公司