专利名称：一种青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物碱用于预防和治疗肺间质纤维化，特别是涉及青藤碱或其药物可接受的盐用于预防和治疗由于各种慢性炎症病理机制所致的肺间质纤维化。
背景技术：
一、青藤碱的药理作用青藤喊(sinomenine)是从防己科植物青藤Sinomenium acutum(Thunb.) R. etffils.的茎和根中提取的生物碱之一，是一种已知的药用物质。现代药理学研究表明， 青藤碱具有多种药理作用。概括起来讲，目前已经知道的青藤碱的主要药理作用如下抗炎、免疫抑制、降压、抑制中枢、抗心律失常等作用。盐酸青藤碱具有以下药理作用I.抗炎作用可抑制急性渗出和慢性增生性炎症；能显著抑制5-HT血管通透性增加作用，抑制前列腺素的合成与释放；作用于成纤维细胞膜上H2受体，抑制成纤维细胞增生；能明显抑制角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀以及甲醛性和蛋清性关节炎；抑制肉芽组织增生，可明显加速细菌性关节炎的消退。2.镇痛作用对电刺激法、热板法、光刺激法及醋酸扭体法所致小鼠各种疼痛反应均有明显的镇痛作用。3.免疫调节作用可抑制巨噬细胞的吞噬功能并抑制炎症介质IL-1、IL_6、TNF的产生；可抑制抗体溶血素生成、淋巴细胞转化及巨噬细胞合成炎症介质PGE2、LTC4和氮氧化合物；可拮抗T淋巴细胞增殖并抑制其合成IL-2 ;可抑制关节滑膜增殖及滑液分泌；可抑制机体免疫排斥反应，延长移植后的存活时间。4.组胺释放作用可促使肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放组织胺。5.快速降压作用给犬、大白鼠和兔静脉注射盐酸青藤碱有明显的快速降压作用。二、肺间质纤维化的背景知识I、概述肺间质纤维化是由于不同病因所致的肺间质部结缔组织增生，从而造成肺的换气功能障碍及肺的顺应性下降，其特征为弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱，病情进行性发展。 肺间质纤维化为一大类疾病的总称。对病因不明的肺间质纤维化，称为特发性肺间质纤维化，现认为与免疫损伤有关。其余的则按原发病或病因命名。特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis, IPF)按病程有急性、亚急性和慢性之分，临床更多见的则是亚急性和慢性型。本病多为散发，估计发病率3 5/10万/ 年，占所有间质性肺病的65%左右。见于各年龄组，而作出诊断常在50 70岁之间，男女比例I. 5 2 I。进行性加重的呼吸困难，多于6个月内死于呼吸循环衰竭。绝大数IPF 为慢性型(可能尚有介于中间的亚急性型)，虽称慢性，平均生存时间也只有3. 2年。慢性型似乎并非急性型演变而来，确切关系尚不了解.预后不良，早期病例即使对激素治疗有反应，生存期一般也仅有5年。在组织学上，肺由实质和间质两部分组成，实质部分包括各级肺内支气管及肺泡； 间质部分指分布于实质内的结缔组织分隔，该分隔内含有血管及淋巴管等。肺泡是进行气体交换的场所，其细胞由I型肺泡细胞和II型肺泡细胞构成。I型肺泡细胞为气体交换提供了一个完整而菲薄的界面型肺泡细胞主要分泌表面活性物质以降低肺泡表面张力， 同时合成生长因子、细胞因子及炎症介质，参与炎症反应及损伤肺泡的修复。肺泡与肺泡之间称肺泡隔。肺泡隔由密集的毛细血管和薄层结缔组织构成，其间的网状纤维、弹力纤维和胶原纤维构成了肺泡隔的支架，在这些纤维之间存在着肺泡巨噬细胞，肥大细胞和少量的成纤维细胞。肺泡巨噬细胞由单核细胞迁移至肺组织发育而成，可吞噬和清除抗原，是机体抵御外来微生物侵袭肺脏的第一道防线，也参与提呈抗原和免疫调节从病理学的角度来讲，肺纤维化实质上就是肺间质部的成纤维细胞受到各种病理伤害时，会分泌胶原纤维进行肺间质组织的修复，进而造成肺脏纤维化；由于肺组织所受损害的程度、部位及时间段的不同，肺纤维化的过程实质上就是肺组织经历着不同程度的微小的纤维修复过程，也就是说，肺纤维化是人体修复产生的结果。但从病因学及流行病学的观点来看，肺间质纤维化并不是一种独立的疾病，而是一大类疾病的总称，也就是说肺间质纤维化并不是病因，而是许多肺间质部原发性或继发性慢性病损的结果。导致肺间质纤维化的致病因素，可将其归结为以下三大类。(I)、环境及理化因素(2)、肺部原发性或继发性感染(3)、自身免疫性及过敏性疾病此类病变引发的肺间质纤维化并非由一次接触所为，而是由反复发作的外源性过敏性肺泡炎所致。当肺部间质出现纤维化表现之后，如致病因素停止侵害或治疗及时，间质纤维化这一过程可能减缓或停止；反之，间质纤维化过程则持续发展，最终导致患者出现不同程度的缺氧而导致呼吸困难，若病情反复发作，最后患者因呼吸衰竭而死亡。因此，阻断肺间质纤维化的病理发展过程，成为治疗的核心手段和最终目的。人体的组织和细胞在受到外来侵害或自身的免疫攻击以后，其病理修复过程会出现以下三种结局1、受损的组织和细胞恢复自身的功能；2、受损的细胞死亡，当只有少数细胞死亡时，组织或器官的功能并不受到明显的影响，但当细胞死亡增多时，组织或器官的功能会受到影响；3、受损的组织或死亡的细胞被纤维结缔组织所替代而实现纤维修复，若受损的组织或器官病变广泛，其纤维修复的范围必然广泛，其结局则是组织或器官的广泛纤维化。结论I :纤维化的过程是人体受损的组织或死亡的细胞被替代修复的过程。结论2 :肺间质纤维化是肺组织受损后组织修复的结局之一。肺间质纤维化的过程实质上就是肺组织经历着不同程度的微小的纤维修复过程，也就是说，肺间质纤维化是人体修复产生的结果。结论3 :导致肺间质纤维化的病因是多种多样的，总体上由理化因素、病原微生物感染和自身免疫三大类因素所致。2、有关发病机制的研究(I)病理大多数间质性肺疾病都有共同的病理基础过程，肺间质纤维化也不例外。初期损伤之后有肺泡炎，随着炎性-免疫反应的进展，肺泡壁、气道和血管最终都会发生不可逆的纤维化表现。炎症和异常修复导致肺间质细胞增殖，产生大量的胶原和细胞外基质(ECM)。 肺组织的正常结构为囊性空腔所替代，这些囊性空腔有增厚的纤维组织所包绕，此为晚期的“蜂窝肺”。肺间质纤维化和“蜂窝肺”的形成，导致肺泡气体-交换单元持久性的丧失。肺脏损伤后，修复的结果是纤维化还是恢复正常解剖结构，取决于肺泡内渗出物及碎屑能否有效清除。如肺泡内渗出物被及时清除，成纤维细胞和其他炎性细胞的增殖便被阻断，肺泡的气体交换功能便可恢复，纤维化也无法形成；如肺泡内渗出物未被及时清除，成纤维细胞和其他细胞就会侵入并增殖，从而使肺间质纤维化进行性进展。胶原蛋白是肺组织的主要细胞外基质(ECM)蛋白，约占肺脏五分之一。肺脏中何种类型的胶原蛋白与其他类型细胞外基质成分等构成三维网状结构，作为肺组织结构的主要骨架，这些蛋白成分保持肺组织结构的完整性，并对维持肺上皮及内皮细胞分化状态起着十分重要的作用。虽然引起肺间质纤维化的病因或原发病有很大的差异，但归根结底是因为促进纤维化因子生成增多或抗纤维化因子产生相对不足，导致肺间质纤维化过程的细胞外基质代谢异常。一般情况下，肺间质纤维化早期出现肺泡炎，肺泡内有浆液和细胞成分，肺间质内有大量单核细胞，部分淋巴细胞，浆细胞，肺泡巨噬细胞等炎性细胞浸润，肺泡结构完整。随着病情的进一步发展，基于组织修复的需求，成纤维细胞开始大量增殖并分泌大量胶原蛋白。进入晚期，慢性炎症已减轻，肺泡结构为坚实的胶原代替，肺泡壁被破坏，形成扩张的蜂窝肺。在此情况下，肺功能表现为为限制性通气功能障碍和弥散功能下降。病情呈持续性进展，最终因呼吸衰竭而死亡。(2)发病机制综合近年来的研究，关于肺间质纤维化的发病机制及其过程可概括如下①某种未知抗原激活B细胞，产生免疫球蛋白并形成免疫复合物，进而刺激和活化肺泡巨噬细胞。 这一免疫反应在肺局部，如果肺泡壁B淋巴细胞也产生抗体,则肺泡壁的某些成分可能会被错误地识别为异物进而产生自身攻击，即使最初的未知抗原已被消除，这种自身免疫仍然会继续进行。②活化的肺泡巨噬细胞释放多种介质，除蛋白水解酶、胶原酶、反应性氧代谢产物和某些细胞因子直接损伤肺细胞、细胞外基质、基底膜等结构外，尚有与纤维化形成密切相关的介质包括纤维连接蛋白(FN)、肺泡巨噬细胞原性生长因子(AMDGF)、血小板衍生生长因子(TOGF)和胰岛素样生长因子(IGF)等，它们能吸附成纤维细胞，并刺激其增殖， 以及介导胶原基质收缩。③在肺泡巨噬细胞释放的IL-8、TNF等介导下中性粒细胞向着肺泡趋化、聚集和活化，形成以中性粒细胞比率增高(20%)为特征的肺泡炎，而中性粒细胞炎症反应又释放一系列介质，引起或加重肺损伤与纤维化。④成纤维细胞增生和产生胶原是本病的重要环节和结局。正常人成纤维细胞生长存在精确的调控，如前列腺素E2、成纤维细胞移动抑制因子等均属于负调节因子。虽然有人发现肺间质纤维化患者肺间质胶原的合成速度或总量并无显著增加，但I型胶原对II型胶原的比率升高。因为I型胶原是一种高张力强度、低顺应性、呈平行排列的交叉带状纤维，它的增加足以解释肺间质纤维化的形态和生理学改变，而不论胶原总量是否显著增加。结论4 :肺间质纤维化的病理表现为进行性发展的肺间质结缔组织增殖，虽然引起肺间质纤维化的病因或原发病有很大的差异，但归根结底是因为促进纤维化因子生成增多或抗纤维化因子产生相对不足，从而导致纤维化过程的细胞外基质代谢异常。
结论5 :某种未知抗原激活B细胞，产生免疫球蛋白并形成免疫复合物，进而刺激和活化肺泡巨噬细胞是肺间质纤维化发病的启动因素之一。结论6 :成纤维细胞增生和产生胶原是肺间质纤维化的重要环节和结局结论7 :从病理表现及病理机制来看，不同类型的肺间质纤维化却有相同的病理过程。因此，阻断肺间质纤维化的病理发展过程，成为治疗的核心手段和最终目的。3、治疗(I)、药物治疗肺间质纤维化是一种持续发展的疾病，治疗原则主要在于积极控制肺泡炎并使之逆转，进而防止发展为不可逆的间质纤维化，但迄今尚无特效疗法。糖皮质激素仍为首选药物，其次为免疫抑制剂等。激素反应不佳或有禁忌时则加用或改用环磷酰胺。对激素治疗大约有1/5 1/4病人有客观指标改善，半数病人临床症状有所减轻，但激素的长期应用增加了患者罹患感染的可能。激素与免疫抑制剂联合应用可针对单一激素治疗反应不佳者。 肺间质纤维化从肺泡炎演变为蜂窝肺及肺纤维化的各期病理变化可以相互重叠，因此不论确诊时为早期还是晚期，都应立即进行治疗，使新出现的肺泡炎吸收好转，部分纤维化亦可得以改善并可阻止其发展。目前临床上在治疗慢性纤维化疾病中，多注重于控制导致器官功能恶化的危险因素方面，而针对抑制纤维化过程的药物报道很少，尚缺乏真正有效用于临床治疗的药物。事实上，对肺间质纤维化治疗的理想药物应当是能够有效抑制或逆转纤维化进展，同时改善患者的肺功能指标。①糖皮质激素在使用激素治疗时仍有争议。但是由于缺少肯定的或特异性的治疗药物，在肺间质纤维化的活动期，甚至不能确定活动性但无激素禁忌证者，激素仍被许多医生所推荐。许多资料表明，早期应用皮质激素治疗是降低病死率的有效方法，但未被广泛证实。老年病人，发绀、杵状指、低氧血症，胸片示广泛肺纤维化，蜂窝肺者，只对症治疗、吸氧，不宜用糖皮质激素。②免疫抑制剂或细胞毒药物(环磷酰胺、硫唑嘌呤)③受体抑制剂(白三烯受体拮抗剂、肿瘤坏死因子-α抑制剂)④其他药物(秋水仙碱、大环内酯类抗生素、干扰素-Y )⑤基因治疗方法(2)、其他疗法包括对症治疗、氧气疗法、湿化与雾化治疗和呼吸机的应用。结论8 :肺间质纤维化是一种持续发展的疾病，由于缺乏真正有效用于临床治疗的药物，因此，治疗原则主要在于积极控制肺泡炎并使之逆转，进而防止发展为不可逆的间质纤维化，但迄今尚无特效疗法。4、治疗药物的药理及不良反应肺间质纤维化目前仍缺乏令人满意的治疗方法。临床治疗以应用糖皮质激素及免疫抑制药为主。皮质激素通过抑制炎症细胞的作用，从而减少胶原的合成以期阻断肺间质纤维化进程，但激素的应用同时也抑制了胶原酶的产生，因此效果不甚理想，且不良反应明显。此外，长期应用皮质激素可使机体免疫力下降，使“潜伏”的感染灶播散或诱发新的感染，而严重的继发感染又是肺纤维化致死的主要原因之一。以下着重阐述目前临床常用的与抗炎及抗纤维化有关的药物不良反应。
(I)、糖皮质激素的不良反应糖皮质激素在长期大量应用以后会引起以下不良反应①物质代谢和水盐代谢紊乱长期大量应用糖皮质激素可引起物质代谢和水盐代谢紊乱，出现类肾上腺皮质功能亢进综合征，如浮肿、低血钾、高血压、糖尿、皮肤变薄、满月脸、水牛背、向心性肥胖、多毛、痤疮、肌无力和肌萎缩等症状。此外，糖皮质激素由于抑制蛋白质的合成，可延缓创伤病人的伤口愈合。在儿童可因抑制生长激素的分泌而造成负氮平衡，使生长发育受到影响。②诱发或加重感染糖皮质激素可抑制机体的免疫功能，且无抗菌作用，故长期应用常可诱发感染或加重感染，可使体内潜在的感染灶扩散或静止感染灶复燃，故在使用之前应先排除潜在的感染，特别注意对潜在结核病灶的防治。③消化系统并发症糖皮质激素能刺激胃酸、胃蛋白酶的分泌并抑制胃粘液分泌， 降低胃粘膜的抵抗力，故可诱发或加剧消化性溃疡，糖皮质激素也能掩盖溃疡的初期症状， 以致出现突发出血和穿孔等严重并发症，④心血管系统并发症长期应用糖皮质激素，由于可导致钠、水潴留和血脂升高， 可诱发高血压和动脉粥样硬化。⑤骨质疏松及椎骨压迫性骨折骨质疏松及椎骨压迫性骨折是各种年龄患者应用糖皮质激素治疗中严重的合并症。⑥神经精神异常糖皮质激素可引起多种形式的行为异常。如欣快现象常可掩盖某些疾病的症状而贻误诊断。此外，糖皮质激素也可能诱发癫痫发作。⑦白内障和青光眼糖皮质激素能诱发白内障，全身或局部给药均可发生。糖皮质激素还能使眼内压升高，诱发青光眼或使青光眼恶化，全身或局部给药均可发生。(2)环磷酰胺的药理及不良反应环磷酰胺为各种免疫抑制剂中作用最强的药物之一。该药对淋巴细胞选择作用较强，与其他细胞毒药物相比，其免疫作用强而持久，其机制是抑制细胞的增殖，非特异性地杀伤抗原敏感性小淋巴细胞，限制转化为免疫母细胞。在抗原刺激后给予最为有效。该药对B淋巴细胞的作用更显著，但实际上对受抗原刺激进入分裂期的B细胞和T细胞有相等作用，对体液免疫和细胞免疫均有抑制作用。环磷酰胺的不良反应①胃肠道反应如恶心呕吐、胃肠道黏膜溃疡等，但比氮芥轻。②抑制骨髓造成白细胞显著下降。③出血性膀胱炎该药较特殊的不良反应，与其代谢物丙烯醛自尿中排出有关，较为严重且有血尿。④病人还可出现脱发、肝功能损害、皮肤色素沉着、心肌损害等。⑤环磷酰胺有致癌、致畸和致突变作用。(3)秋水仙碱的药理及不良反应秋水仙碱可抑制中性粒细胞的趋化、粘附和吞噬作用；减少单核细胞和中性粒细胞释放前列腺素和白三烯；抑制局部细胞产生白介素6，从而达到控制关节局部的疼痛、肿胀及炎症反应的作用。近年发现，秋水仙碱还具有抗纤维化作用(秋水仙碱的临床新用途 陈源浩，中国药师，2009年第12卷第2期241-242)。但秋水仙碱有剧毒，常见恶心、呕吐、腹泻、腹痛、胃肠反应是严重中毒的前驱症状，症状出现时即行停药，肾脏损害可见血尿、少尿、对骨髓有直接抑制作用、引起粒细胞缺乏、再生障碍性贫血。尚可引起肝脏损害及脱发， 皮肤过敏和精神抑郁等。结论9 :目前临床应用的治疗肺间质纤维化的已知常见药物均有不同程度的器官或组织损害，而这些不良反应是影响其长期临床应用的主要障碍。5、青藤碱药理作用及不良反应相关研究青藤碱作为结构明确的单体生物碱，在治疗风湿类疾病(李晓娟等.青藤碱抗炎抗风湿作用机理研究.广州中医药大学学报，2004，21(1) :34)、肾病(梁瑞燕等.青藤碱抗炎作用机理研究.广州中医药大学学报，2007，24 (2) =141-143)和眼科疾病(孙旭光等.青藤碱在制备治疗眼科免疫性疾病药物中的应用，中国专利CN 1199623A)中的疗效，已被医学界所公认，与目前临床实际应用中的抗风湿类疾病的合成药物相比，青藤碱的长期毒副作用十分轻微，疗效肯定，是一种有广阔发展前景的生物碱。从中文文献检索可知，目前已有超过1000余篇的青藤碱相关研究文献公开发表，足见临床医生对该药的重视程度。但在临床应用中，该药复杂而独特的不良反应，成了制约其临床广泛使用的最大困难。青藤碱不良反应的根源何在，现有的相关研究表明(胡永红等.正清风痛宁治疗骨关节炎的疗效及副作用.中国康复，2001,6(16)2:85-88。傅绍萱等.青藤碱的药理作用 II，毒性及一般药理.药学学报，1963，10:673-676。王耐勤等.青藤碱的药理作用IV，青藤碱降压机制的研究.1965，12 (2) :86-91。莫志贤等.)，组胺释放和快速血压下降是引发大多数不良反应的主要因素。组胺释放青藤碱是目前所知植物药中最强的促组胺释放剂之一。组胺释放是由于肥大细胞脱颗粒所致，实验证明，青藤碱可使肥大细胞90%脱颗粒(季宇彬.中药有效成份药理与应用(M).哈尔滨，黑龙江科学技术出版社，1995:427-431。刘强等.青藤碱研究概况(J).中草药，1997，28 (4) =247-249) 0 一般认为，诱发肥大细胞脱颗粒、释放组胺的方式主要有免疫性刺激(如特异性抗原)和非免疫性刺激(如CP48/80)两种类型。免疫性刺激主要由特异性抗原引起，通过抗原抗体反应诱发肥大细胞脱颗粒释放组胺。肥大细胞的非免疫性刺激是通过与免疫反应不同的机制触发组胺释放。青藤碱引起组胺释放是属于非免疫性刺激方式(青藤碱组胺释放作用与抗组胺收缩肠管作用研究.中药药理与临床， 2006,22(6) :16-19)。组胺释放后的临床表现主要有面部潮红、瘙痒、皮疹风团和组织水肿等，而这些现象正好与青藤碱临床应用中的不良反应相一致。快速血压下降青藤碱快速降压的药理现象在上世纪60年代已通过多种动物实验得到证实，给狗、大白鼠和兔静脉注射盐酸青藤碱后，皆可产生肯定的降压作用，且抗组胺药物不能影响其降压效果(王耐勤等.青藤碱的药理作用IV，青藤碱降压机制的研究.1965,12(2) :86-91) 0另一研究，说明青藤碱的快速降压作用并非由组胺释放引发，而是一独立的药理作用。严重快速降压的直接后果在临床上表现为过敏性休克。从以上研究可以看出，由于该药具有迅速的组胺释放及快速血压下降这两个导致各种不良反应的药理作用，阻碍了该药在全身多关节、多脏器、多部位疾病中的临床研究及临床应用。所以如何有效控制组胺迅速释放和快速血压下降并且可以持续给药是临床亟待解决的问题。为避免或有效减低以上不良反应，相关研究(李蕴麟青藤碱静脉输液制剂中国专利200810212102. 4)已有效地解决了如何避免严重不良反应及持续给药这一难题。其它有关青藤碱不良反应的临床及实验研究均未见在治疗剂量范围内长期使用该药导致主要器官或组织受损的报道，从而反证了该药的临床安全性问题。
发明内容
本发明人出人意料地发现，在对骨性关节炎、腰椎间盘突出症、类风湿性关节炎及强直性脊柱炎等慢性疼痛性疾病的患者使用青藤碱进行治疗时，合并有肺间质纤维化的患者的肺部症状得到了明显改善。在进一步深入的研究后发现，对另外的一组肺间质纤维化的患者单用青藤碱进行治疗时，可以收到明显的临床疗效。本发明的目的是提供一种青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗疾病的新用途，本发明的具体目的是青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途。本发明所指的肺间质纤维化包括各种原因不明的特发性肺间质纤维化(IPF)、非特异性间质性肺炎、结缔组织相关的肺间质纤维化、药物性弥漫性肺间质纤维化、理化因素相关的肺间质纤维化等。本发明所指青藤碱治疗肺间质纤维化的给药途径包括静脉、肌注、口服、透皮吸收、雾化吸入及支气管肺泡灌洗。本发明所指青藤碱治疗肺间质纤维化的青藤碱制剂包括静脉输液制剂、肌肉注射剂、口服片剂或胶囊制剂、透皮吸收制剂、雾化吸入制剂及肺泡灌洗液。本发明所指的青藤碱包括青藤碱或其可药用盐，例如其酸加成盐，如盐酸青藤碱。本发明所指的青藤碱的有效治疗剂量中，优选范围为O. l-100mg/kg/d,更优选为
O.5-50mg/kg/d,尤其优选为 Ι-lOmg/kg/d,最优选为 L5_5mg/kg/d。本发明所指青藤碱的给药方式最优选的是从小剂量开始递增剂量给药至最佳治疗剂量。本发明所指青藤碱的静脉给药方式优选每日1-3次或持续静脉泵入，最优选每日1-2次及持续静脉泵入。静脉给药的药物浓度优选为O. 02-0. IOwt %，尤其优选为
O.03-0. 06wt %，最优选为 O. 04-0. 05wt %。本发明所指青藤碱的肌注给药方式优选每日2-4次，每次50mg。每次注射间隔时间应大于40分钟。本发明所指青藤碱的口服给药方式肠溶片或胶囊优选每日3次，每次60_80mg ； 缓释片优选每日2次，每次120-180mg ;最优选每日2次，每次180mg。本发明所指青藤碱的给药剂量为成人剂量，儿童给药以公斤体重计算。在临床常规给药方式中，本发明所指的最优选给药方式为静脉滴注给药，其次为口服给药，再其次为肌肉注射给药。在以上给药方式中，静脉滴注给药尤其适合于住院患者及重症患者；口服给药尤其适合于维持治疗患者。对同一个患者，静脉给药、口服给药和肌注给药方式可两种或三种结合方式给药。 同时，也可以用此三种给药方式的任何一种与透皮吸收、雾化吸入或灌洗方式结合使用。本发明在应用于肺间质纤维化的治疗后可实现下列效果I.可有效阻止肺间质纤维化的发生和发展。2.在疗效方面与公认的有效治疗药物糖皮质激素疗效相当，但长期使用并没有糖皮质激素的各项不良反应。3.对糖皮质激素有禁忌症的患者亦可使用。4.可持续给药以达到有效的治疗剂量或分时段多次给药或精确控制剂量给药，从 而消除药物的峰值变化所造成的不利影响。本发明的目的是通过以下技术方案实现的本发明青藤碱治疗肺间质纤维化的给药方式为逐渐增加的给药剂量直至达到最 佳治疗剂量，从不同剂量的全身反应来看，高剂量和低剂量两组均无组织器官的损伤表现， 说明该药在已知的常规剂量范围内安全有效。静脉输液是避免短暂血药高浓度峰值的最佳 给药方式，且可以在一天之内多次给药，从而有效地避免了该药短暂大剂量入血所造成的 组胺释放及快速血压下降这两类主要的不良反应，而这两类不良反应正是影响该药广泛使 用的难以克服的现实障碍。该研究表明，以静脉输液方式给药所引发的不良反应发生率最 低，在优选范围内，没有引发严重不良反应过敏性休克的病例，与肌肉注射剂相比，完全避 免了过敏性休克的发生，临床安全性好。二次给药，不良反应更是明显降低。本发明适合于肺间质纤维化各种类型的治疗，且有效地解决了目前治疗肺间质纤 维化的其它药物无法长期用药或长期用药后不良反应无法克服的难题。本发明的主要优点还包括，青藤碱是已知的，临床药用主要成份青藤碱，其化学结 构明确，临床应用广泛且具有数十年的临床应用历史，治疗有效性和药品安全性好。
图1为空白对照组第14天小鼠肺组织，HE染色，低倍放大；图2为肺纤维化模型组第14天小鼠肺组织，HE染色，低倍放大；图3为地塞米松组第14天小鼠肺组织，HE染色，低倍放大；图4为青藤碱低剂量组第14天小鼠肺组织，HE染色，低倍放大；图5为青藤碱高剂量组第14天小鼠肺组织，HE染色，低倍放大；图6为空白对照组第28天小鼠肺组织，Masson染色，低倍放大；图7为肺纤维化模型组第28天小鼠肺组织，Masson染色，低倍放大；图8为地塞米松组第28天小鼠肺组织，Masson染色，低倍放大；图9为青藤碱低剂量组第28天小鼠肺组织，Masson染色，低倍放大；图10为青藤碱高剂量组第28天小鼠肺组织，Masson染色，低倍放大；图11为空白对照组第28天小鼠肺组织TGF-0 1蛋白表达，SABC染色，高倍放大；图12为肺纤维化模型组第28天小鼠肺组织TGF- ^ 1蛋白表达，SABC染色，高倍 放大；图13为地塞米松组第28天小鼠肺组织TGF-M蛋白表达，SABC染色，高倍放大；图14为青藤碱低剂量组第28天小鼠肺组织TGF-0 1蛋白表达，SABC染色，高倍 放大；图15为青藤碱高剂量组第28天小鼠肺组织TGF-0 1蛋白表达，SABC染色，高倍 放大；图16为空白对照组第28天小鼠肺组织a -SMA蛋白表达，SABC染色，高倍放大；图17为肺纤维化模型组第28天小鼠肺组织a -SMA蛋白表达，SABC染色，高倍放大；图18为地塞米松组第28天小鼠肺组织a -SMA蛋白表达，SABC染色，高倍放大；图19为青藤碱低剂量组第28天小鼠肺组织a -SMA蛋白表达，SABC染色，高倍放大；图20为青藤碱高剂量组第28天小鼠肺组织a -SMA蛋白表达，SABC染色，高
具体实施例方式实验例青藤碱对博来霉素致小鼠肺纤维化的影响及其机制肺纤维化是以特发性肺间质纤维化(IPF)为代表的各种异质性间质性肺疾病的共同病理改变，是导致这类疾病不可逆发展致呼吸衰竭而死亡的主要原因。发病机制仍不明确。传统的皮质激素及免疫抑制剂治疗弥漫性肺间质纤维化不仅疗效欠佳且不良反应较多。目前除肺移植外，尚无有效的治疗手段。青藤碱是从我国传统药用植物青风藤中提取的生物碱单体，研究发现其具有抗炎、抗氧化、免疫抑制、镇痛等作用，在风湿类疾病如类风湿关节炎的治疗中得到广泛应用(Zhou H, Wong Y, Wang J, et al. Sinomenine ameliorates arthritis via MMPs,TIMPs,and cytokines in rats [J]. Biochem Biophys Res Cammun, 2008,376 :352-7. Wang Q,Li XK. Immunosuppressive and anti-inflammatory activities of sinomenine [J]. IntImmunopharmacoI, 2011,11 :373-6.)近年来研究还发现青藤喊具有治疗肾病及可能具有抗肾纤维化的作用(程悦，郭东阳，张凡，等.盐酸青藤碱对体外培养的系膜增生性肾炎患者外周血淋巴细胞相关因子表达的调节作用[J].中华肾脏病杂志，2010,26 :474-475.),但其对肺纤维化的作用国内外尚未见报道。本发明人虽然出人意料地发现了青藤碱对风湿类疾病合并有肺间质纤维化的患者有明确的治疗作用，且对单纯肺间质纤维化的患者单用青藤碱进行治疗时亦可以收到明显的临床疗效，为了明确青藤碱的这一临床治疗作用及其可能的作用机制，故设计本实验以验证之。本项研究所采用的博来霉素动物造模方式为研究肺纤维化的经典造模方法，该方法可代表临床肺间质纤维化病理过程及病理生理表现，对照组采用地塞米松干预为目前公认的具有抗肺间质纤维化的代表药物。本研究通过观察青藤碱对博来霉素致小鼠肺纤维化的影响，旨在为临床治疗肺纤维化提供新的思路。材料与方法一、材料SPF级8周龄雄性BAL B/c小鼠购自兰州大学医学院动物中心。博来霉素购自日本化药株式会社，青藤碱购自南京泽朗医药科技有限公司，地塞米松购自江苏涟水制药有限公司；小鼠抗大鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)单克隆抗体、兔抗小鼠组织转化生长因子-β iCTGF-β J多克隆抗体、生物素化羊抗小鼠IgG、生物素化羊抗兔IgG、DAB显色试剂盒均购自武汉博士德公司。羟脯氨酸(HYP)测试试剂盒购自南京建成生物工程研究所。实时荧光定量PCR试剂盒购自日本TaKaRa公司，小鼠TGF- β ^ a -SMA及β -actin引物由大连宝生物工程有限公司设计合成。二、方法I.实验动物分组及动物模型的建立SPF级雄性BAL B/c小鼠150只，体重 18-22g，采用随机数字表法分为正常对照组(A组)、博莱霉素组(B组)、地塞米松组(C组，2mg/kg)、青藤碱低剂量组(D组，40mg/kg)、青藤碱高剂量组(E组，80mg/kg),每组30只。 参照Szapiel等M的方法，B、C、D、E组于实验当天气管内一次性注入盐酸博来霉素(5mg/ kg)复制肺纤维化模型，A组气管内注入等体积的生理盐水。自造模后第一天起各组分别给予干预药物地塞米松2mg/kg (C组)、青藤碱40mg/kg (D组)、青藤碱80mg/kg (E组)和生理盐水(A组和B组)灌胃。分别于实验第7、14、28天每组各处死10只小鼠。2.标本的收集与处理戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉小鼠后开胸，行气管插管， 用I ml磷酸盐缓冲液(PBS)行支气管肺泡灌洗(BAL) 4次，回收率约85%，离心肺泡灌洗液(BLAF)后弃上清行细胞计数及分类。取左肺组织投入液氮中保存，用以检测肺组织中 a -SMA和TGF-β iinRNA的表达及HYP的含量；右肺用中性甲醛固定，石蜡包埋并组织切片行 HE和Masson染色以及免疫组织化学染色。3. BALF中细胞计数及分类取O. Iml BALF于血细胞计数板中测定细胞总数，余 BALF于1000r/min离心IOmin,用沉淀涂片,Wright-Giemsa染色后进行细胞分类(至少计数200个细胞)，计算中性粒细胞百分比。4.肺组织病理分析肺组织经梯度酒精脱水，石蜡包埋及切片后，分别行HE和 Masson 染色,光镜下观察病理改变。根据 Szapiel (Szapiel SV, Elson NA, Fulmer JD, et al. Bleomycin induced interstitial pulmonary disease in the nude，athymicmouse. American Review of Respiratory Disease，1979，120 :893-9)等方法确定肺泡炎和肺纤维化程度。5.肺组织a-SMA和TGF-^mRNA的表达采用实时荧光定量PCR法检测肺组织中TGF-β i和a -SMA mRNA的表达。取经液氮冻存的肺组织80mg，用RNA提取液提取总RNA，按cDNA合成试剂盒说明配置反应体系，经37°C、15min，85°C 5s逆转录合成cDNA， 以此为模板分别加入TGF-βρ α-SMA、β-actin引物及荧光染料在荧光定量PCR仪上进行扩增，扩增条件为95 V预变性30s，95 °C变性5s，60 V退火20s, 72 V延伸30s,共40 个循环。TGF- β丨引物序列上游引物5 ' -GTGTGGAGCAACATGTGGAACTCTA-3 '，下游引物5 ' -TTGGTTCAGCCACTGCCGTA-3 '，扩增长度为143bp。a -SMA引物序列上游引物 5' -CTCCTCAGGACGACAATCGACA-3'，下游引物 5' -CCTTTCCACAGGGCTTTGTTTG-3'，扩增长度为 150bp。β -act in 引物序列上游引物 5' -CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC-3'，下游引物Y -ATGGAGCCACCGATCCACA-3;，扩增长度为300bp。利用检测到的荧光信号，每份标本分别得到扩增曲线和熔点曲线，检测反应的特异度并得出各自的循环阈值(Ct值)。基因表达分析采用^^法，正常对照组作为基准，基准值定为I，模型组及各干预组mRNA的表达量均表达成基准值的 η 倍(Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and 2 (-Delta Delta C (T)). Method Ethods,2001, 25 :402-408.)。6.免疫组织化学SABC法检测肺组织中a -SMA, TGF- β丨蛋白的表达石蜡切片常规脱蜡、水化、阻断内源性过氧化物酶，抗原修复，5%牛血清白蛋白封闭，滴加小鼠抗大鼠 a-SMA单克隆抗体、兔抗小鼠TGF-P1多克隆抗体(I 100稀释)，滴加二抗，DAB显色，常规苏木精复染，盐酸酒精分化，返蓝，脱水，透明，封片。应用01ympusDP71(XD图像采集分析系统进行图像采集分析，阳性结果为细胞膜或细胞浆显棕黄色。随机选取5个视野进行吸光度(A)值测量，以此5个区域的平均A值作为该切片的最后结果。
7.肺组织HYP含量测定将保存的肺组织制成组织匀浆后，采用碱水解法测定肺组织中HYP的含量，具体操作步骤参照试剂盒说明书进行。8.统计学处理采用SPSS17.0软件进行统计学分析，数据以均数土标准差 G ±5)表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，以P < O. 05为
差异有统计学意义。三、结果I. BALF细胞计数及分类博来霉素组在第7、14、28天各时间点的细胞总数及中性粒细胞比例均明显高于正常对照组(t值为11. 69 26. 92，P均< O. 01);地塞米松组、青藤碱低、高剂量组在各时间点的细胞总数及中性粒细胞比例均较博莱霉素组明显降低(t 值为3. 78 25. 20，P均< O. 01);青藤碱低、高剂量组第7天及14天的细胞总数及中性粒细胞比例高于地塞米松组(t值为5. 78 14. 93，P均< O. 01)，青藤碱低、高剂量组间无差异。第28天细胞总数及中性粒细胞比例地塞米松组、青藤碱低、高剂量组间均无差异，见表I。2.肺病理组织学改变及评分光学显微镜下观察正常对照组未出现明显的肺泡炎和纤维化表现，参见图I和图6，其中，图I为空白对照组第14天小鼠肺组织；肺泡壁薄，结构正常，无肺泡炎表现(HE染色，低倍放大)。图 6为空白对照组第28天小鼠肺组织；未见代表胶原纤维的蓝色沉积，无明显纤维化表现。 (Masson染色,低倍放大)。博莱霉素组第7天肺间质及肺泡内有少量巨噬细胞和淋巴细胞浸润并伴有轻度充血，肺泡间隔增宽;第14天成纤维细胞明显增生；第28天以肺纤维化为主，肺泡炎程度减轻，大量成纤维细胞增生，肺泡间隔明显增厚，大量胶原纤维沉着，部分肺泡破坏融合，表明造模成功。见图2和图7，其中，图2为肺纤维化模型组第14天小鼠肺组织，可见肺泡壁明显增厚，有明显肺泡炎表现(HE染色，低倍放大)。图7为肺纤维化模型组第28天小鼠肺组织，可见大量蓝色沉积，肺纤维化明显(Masson染色，低倍放大)。地塞米松组、青藤碱低、高剂量组三组与博莱霉素组比较出现了相似的病理过程， 但各个时间点的肺泡炎及肺纤维化程度均较肺纤维化模型组明显减轻，见图3、4、5、8、9、 10。其中，图3为地塞米松组第14天小鼠肺组织，肺泡炎程度较模型组明显减轻，(HE染色， 低倍放大)。图4为青藤碱低剂量组第14天小鼠肺组织，肺泡炎程度较模型组明显减轻(HE 染色，低倍放大)。图5为青藤碱高剂量组第14天小鼠肺组织，肺泡炎程度较模型组明显减轻(HE染色，低倍放大)。图8为地塞米松组第28天小鼠肺组织，肺纤维化程度较模型组明显减轻(Masson染色，低倍放大)。图9为青藤碱低剂量组第28天小鼠肺组织，肺纤维化程度较模型组明显减轻，(Masson染色，低倍放大)。图10为青藤碱高剂量组第28天小鼠肺组织，肺纤维化程度较模型组明显减轻(Masson染色，低倍放大)。此外，图11至图15涉及小鼠肺组织TGF-β I蛋白表达实验结果图片，图11为空白对照组第28天小鼠肺组织TGF-β I蛋白表达，可见TGF-β I表达较少(SABC染色，高倍放大)。图12为肺纤维化模型组第28天小鼠肺组织TGF-β I蛋白表达，TGF-β I蛋白大量表达(SABC染色，高倍放大)。图13为地塞米松组第28天小鼠肺组织TGF-β I蛋白表达， 可见TGF- β I少量表达，表达水平均明显低于肺纤维化模型组(SABC染色，高倍放大)。图14为青藤碱低剂量组第28天小鼠肺组织TGF-β I蛋白表达，可见TGF-β I少量表达，表达水平均明显低于肺纤维化模型组(SABC染色，高倍放大)。图15为青藤碱高剂量组第28天小鼠肺组织TGF-β I蛋白表达，可见TGF-β I少量表达，表达水平均明显低于肺纤维化模型组(SABC染色，高倍放大)。图16至图20涉及小鼠肺组织a-SMA蛋白表达实验结果图片，图16为空白对照组第28天小鼠肺组织a -SMA蛋白表达，可见a -SMA蛋白表达较少(SABC染色，高倍放大)。 图17为肺纤维化模型组第28天小鼠肺组织a -SMA蛋白表达，TGF-β I蛋白大量表达(SABC 染色，高倍放大)。图18为地塞米松组第28天小鼠肺组织a -SMA蛋白表达，可见a -SMA 少量表达，表达水平均明显低于肺纤维化模型组(SABC染色，高倍放大)。图19为青藤碱低剂量组第28天小鼠肺组织α-SMA蛋白表达，可见a-SMA少量表达，表达水平均明显低于肺纤维化模型组(SABC染色，高倍放大)。图20为青藤碱高剂量组第28天小鼠肺组织 a-SMA蛋白表达的，可见a-SMA少量表达，表达水平均明显低于肺纤维化模型组(SABC染色高倍放大)。地塞米松组、青藤碱低、高剂量组肺泡炎评分在各个时间点均较博莱霉素组明显降低(t值为7. 14 13.85，？均<0.01);而青藤碱低、高剂量组在第7、14天时肺泡炎评分高于地塞米松组(t值为5. 00 6. 15，P均< O. 01)，青藤碱低、高剂量组无明显差异。 第28天肺泡炎评分地塞米松组、青藤碱低、高剂量组间无明显差异。地塞米松组、青藤碱低、高剂量组肺纤维化评分在各个时间点均较博莱霉素组明显降低(t值为5. 63 7. 69， P均< O. 01)，而此三组间各时间点纤维化评分均无明显差异，见表2。3.肺组织中TGF-β i和a -SMA mRNA的表达博莱霉素组各个时间点TGF-β i 和a -SMAmRNA的表达均显著高于正常对照组组(t值为8. 34 16. 45，P均< O. 01);地塞米松组、青藤碱低、高剂量组各时间点均低于博莱霉素组(t值为5. 28 18. 51，均P < 0.01);而各个时间点地塞米松组、青藤碱低、高剂量组无明显差异，见表3。4.肺组织中TGF-P1和a-SMA蛋白表达博莱霉素组各个时间点TGF-P1和 a -SMA的蛋白表达均高于正常对照组(t值为7. 78 64. 74，P均< O. 01);而地塞米松组、青藤碱低、高剂量组TGF-P1和a-SMA蛋白表达各个时间点均显著低于博莱霉素组(t 值为3. 51 30. 21，均？ < O. 01);而各个时间点地塞米松组、青藤碱低、高剂量组无显著差异，见表4。5.肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)含量在第7、14、28天博莱霉素组肺组织HYP含量均高于正常对照组(t值为6. 23 29. 00, P均< O. 01);在第14天和28天，地塞米松组、青藤碱低、高剂量组HYP含量明显低于博莱霉素组(t值为7. 68 13. 83，P均<0. 01)。 在第7天、14天肺组织HYP含量青藤碱低、高剂量组较地塞米松组高(t值为2. 35-13. 79， P < O. 01，P < O. 05)，第7天青藤碱组与博莱霉素组无差异，见表5。四、讨论以IPF为代表的肺纤维化是最常见也是对人类健康危害最严重的一种间质性肺疾病。美国IPF的患病率为42. 7/10万，每年的发病率为16. 3/10万(Raghu G，Weycker D，Edelsbe J，et al. Incidence and prevalence of idiopathic pulmonary fibrosis. Am J Respir Crit Care Med，2006，174 :810-816.)。我国十几家大型综合医院调查研究显示，1990至2000年住院的间质性肺疾病患者与同期呼吸科病房、全院病房住院患者的比例呈明显的上升趋势(康健，朱元珏.特发性间质性肺炎临床研究的新动向.中华结核和呼吸杂志，2007,30 :241-242)。IPF对目前采用的糖皮质激素和细胞毒性药物治疗效果差， 患者的5年生存率< 50%,中位生存期为2. 8年(Olmn AL, Swigris JJ, Lezotte DC, et al. Mortality from pulmonary fibrosis increased in the United States from 1992 to 2003. Am JRespir Crit Care Med, 2007，176 :277-284.)。因此，寻找新的安全、有效的治疗药物及方法成为目前间质性肺疾病研究的热点。青藤碱是青风藤中提取的有效成分，具有抗炎、抗增殖及免疫调节作用，在类风湿性关节炎和肾脏疾病中得到广泛应用，具有效果确切、毒副作用少的优势。近年来研究还发现青藤喊具有抗组织重塑的作用(Mark ff, Schneeberger S, Seiler R, et al. Sinomenine blocks tissue remodel ing in a rat model of chronic cardiac allograft rejection. Transplantation, 2003, 75 :940-5.)，对心脏移植慢性排斥反应有抑制作用，而慢性排斥反应的组织学特点为实质的纤维化和血管周围与间质的炎性浸润、平滑肌细胞增殖和内膜过度增生。近年来研究还显示，青藤碱可抑制血管粘附分子(VCAM-I)、肿瘤坏死因子-a (TNF- α )等多种炎症因子的产生，具有重要的抗炎活性(Chen DP,ffong CK7Leung PC, et al. Anti-inflammatory activities of Chinese herbal medicine sinomenine and Liang Miao San on tumor necrosis factor-a -activated human fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis. J EthnopharmacoI, 2011,137 :457-68.),而炎症损伤是纤维化形成的重要机制，由此可推断，青藤碱可能有抗纤维化作用。本研究通过博来霉素诱导小鼠建立肺纤维化模型，在肺纤维化形成阶段给予青藤碱干预，研究其对肺纤维化的治疗作用及可能机制。博来霉素致大鼠肺纤维化可分为早期(1-7天)的肺泡炎阶段和后期(14-28天) 炎性损伤过度修复的肺纤维化阶段，其中第7天肺泡炎症反应最为明显。本研究结果也证实博来霉素组在3个时间点中以第7天的肺泡炎最为明显，随后逐渐减轻，而肺纤维化程度以第7天最轻，然后逐渐加重。给予青藤碱干预后，肺泡炎及纤维化程度均较博来霉素组降低，提示青藤碱能抑制博来霉素所致的小鼠肺泡炎和纤维化，且在肺泡炎后期和整个纤维化形成期青藤碱的抑制作用和地塞米松均无明显差异，其抗纤维化的作用强于抗肺泡炎。TGF-P1是促进肺纤维化发生发展的关键因子，也是迄今发现的最强的细胞外基质沉积促进剂及组织纤维化过程中始发的致纤维化因子，它作用于胶原的转录和翻译过程，诱导前胶原的产生，促进胶原蛋白的形成和沉积，同时还可抑制基质降解蛋白酶的合成，减少细胞外基质降解，在肺纤维化的发展过程中起重要作用。TGF-β i可由多种细胞分泌，如肺泡巨噬细胞、内皮细胞、上皮细胞、成纤维细胞等，TGF-^可促进成纤维细胞增殖和聚集，同时促使成纤维细胞表型向肌成纤维细胞表型转化，而肌成纤维细胞是肺纤维化中最主要的效应细胞。Ahn 等(Ahn JY, Kim MH, Lim MJ, et al. The inhibitory effect of ginsan on TGF-beta mediated fibrotic process. J Cell Physiol,2011, 226 :1241-7), Gao 等(Gao J, Huang Y, Li P, et al. Antifibrosis effects of total glucosides of Danggui-Buxue-Tang in a rat model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. J Ethnopharmacol，2011，136 :21-6.)的研究显示抑制肺组织中TGF-β i的表达及其信号通路，能有效的抑制肺纤维化的进展。本研究结果显示，青藤碱高低剂量干预组能明显降低博来霉素所致肺组织中TGF-^mRNA和蛋白的表达，提示青藤碱抗肺纤维化的作用可能是通过抑制TGF-P1实现的。a -SMA是肌成纤维细胞的标志蛋白，IPF的病理特征之一是形成成纤维细胞灶， 成纤维细胞灶主要由表达a -SMA的肌成纤维细胞构成，是造成细胞外基质异常沉积的主要效应细胞。高蔚等Μ研究显示博来霉素诱导的肺间质纤维化模型大鼠肺组织分离培养的成纤维细胞高度表达 α-SMA15Hu等(Hu Y,Peng J,Feng D, et al. Role of extracellular signal-regulated kinase, p38 kinase, and activator protein-1 in transforming growth factor-betal-induced alpha smooth muscle actin expression in human fetal lung fibroblasts in vitro. Lung, 2006,184 :33-42.的研究显不下调 TGF-β 诱导的肺成纤维细胞a -SMA表达，可阻止成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化，从而抑制肺纤维化的发生和发展。其它研究还发现青藤碱可显著下调IL-I β诱导的肾小管上皮细胞a-SMA基因和蛋白的表达，并呈剂量依赖性，对预防肾间质纤维化和保护肾功能具有重要作用(杨汝春，王永钧，林京莲，等.青藤碱对白介素1β诱导的肾小管上皮细胞骨架变化和明胶酶活性的影响.中华肾脏病杂志，2006,22 :499-502.)。本研究显示博来霉素造模后肺组织中 a -SMA基因和蛋白表达较正常对照组显著增高，给予青藤碱干预后a -SMA的表达显著降低，说明青藤碱可抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞转化，从而发挥抗纤维化的作用。HYP是机体胶原蛋白的一种特有的氨基酸，几乎所有HYP都存在于胶原中，其含量可代表胶原的合成量，而胶原是器官纤维化时细胞外基质的主要成分，故组织中HYP含量能反映器官纤维化的程度(Bowler RP,Crapo JD. Oxidative stress in airways :is there a role for extracellular superoxide dismutase. Am J Respir Crit Care Med,2002, 166 S38-43.)。本研究结果显示，博莱霉素组各时间点肺组织中HYP的含量均高于正常对照组，而给予青藤碱干预后，肺组织中HYP含量逐渐下降，在第14和28天与地塞米松无明显差异，说明在纤维化形成期其抗纤维化作用与地塞米松相当，提示青藤碱具有明显的抗纤维化作用。总之，青藤碱能抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化形成，抑制纤维化的作用和地塞米松无显著差异，抑制肺泡炎的作用弱于地塞米松，其作用可能是通过抑制TGF-β I和 a -SMA的表达和HYP的合成实现的。青藤碱能够减轻博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的肺泡炎和纤维化程度，可能是通过抑制TGF-β :和a -SMA的表达和HYP的含量实现的。表；1_5表I各组BALF中细胞总数及中性粒细胞比例比较
权利要求
1.一种青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途，其特征在于由青藤碱或其药物可接受的盐作为活性成分配以辅剂制备的药物，用作预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途。
2.根据权利要求I所述的青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途，其特征在于所述药物的制剂为静脉输液制剂、肌肉注射剂、口服片剂或胶囊制剂、透皮吸收制剂、雾化吸入制剂或肺泡灌洗液。
3.根据权利要求I或2所述的青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途，其特征在于所述药物使用量为O. l-100mg/kg/d。
4.根据权利要求3所述的青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途，其特征在于所述药物使用量为O. 5-50mg/kg/d。
5.根据权利要求3所述的青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途，其特征在于所述药物使用量为l-10mg/kg/d。
6.根据权利要求3所述的青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途，其特征在于所述药物使用量为I. 5-5mg/kg/d。
7.根据权利要求I或2所述的青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途，其特征在于所述药物采用静脉给药方式，静脉给药的药物浓度优选为O.02-0. IOwt %，尤其优选为 O. 03-0. 06wt %，最优选为 O. 04-0. 05wt %。
8.根据权利要求I或2所述的青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途，其特征在于所述药物采用肌注给药方式，肌注给药方式为每日2-4次，每次50mg，每次注射间隔时间应大于40分钟。
9.根据权利要求I或2所述的青藤碱或其药物可接受的盐作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途，其特征在于所述药物采用口服给药方式肠溶片或胶囊优选每日3次，每次60-80mg ;缓释片优选每日2次，每次120-180mg ;最优选每日2次，每次180mg。
全文摘要
本发明涉及青藤碱作为预防和治疗肺间质纤维化的药物的用途，所述药物以青藤碱或其药物可接受的盐作为活性剂，与其它辅剂组成的药物。所述药物的给药途径包括静脉滴注、肌肉注射、口服、透皮吸收、雾化吸入及支气管肺泡灌洗。实验表明，青藤碱对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化形成的抑制作用和地塞米松对照组无显著差异，证明青藤碱能够减轻博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的肺泡炎和纤维化程度，机理可能是通过抑制TGF-β1和α-SMA的表达和HYP的含量实现的。
文档编号A61P11/00GK102579445SQ20121005342
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月2日 优先权日2012年3月2日
发明者李蕴麟 申请人:李蕴麟