专利名称：5-羟色胺2受体拮抗剂或转运体抑制剂治疗脂肪肝或高脂血症的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，具体涉及5-羟色胺2受体拮抗剂或转运体抑制剂治疗脂肪肝或高脂血症的用途。
背景技术：
非酒精性脂肪肝(Nonalcoholicfatty liver disease,NAFLD),即通常所说的脂肪肝，是一种病变主体发生在肝小叶，以肝细胞脂肪变性和脂肪堆积为病理特征但无过量饮酒史的临床综合征，主要与肥胖、高脂血症有关。根据其疾病发展的不同阶段主要分为单纯脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化和脂肪性肝硬化四个病理过程。肥胖者多数具有NAFLD，肥胖及其所引起的疾病已成为现代人健康及死亡的第一杀手。饮食无节制，经常摄入高脂肪、高蛋白食物而致热量过剩导致肥胖，进而导致脂肪肝的形成。NAFLD时肝细胞 中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)含量明显增加，低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL)的合成与排泄出现不均衡，可能导致血液中TG、TC、LDL、VLDL, FFA浓度升高、HDL浓度下降，即出现血脂紊乱，其中TC、TG、LDL浓度升高及HDL浓度下降是血脂紊乱的主要表现。这将使得发生动脉粥样硬化、高血压等心脑血管疾病、2型糖尿病等疾病的概率大增。NAFLD治疗药物大致分类为增加胰岛素敏感性及减轻IR药物，代表药物有噻唑烷二酮类药物和双胍类药物等；抗氧化剂，代表药物有维生素E、维生素C和水飞蓟素等；降低血脂的药物，代表药物有普伐他汀、辛伐他汀、普罗布考及氯贝特等。5-HT2受体又可分为5_HT2A，2B，2C受体三个亚型，外周和中枢均有分布的是5_HT2A，2B受体，5-HT2C受体仅存在于中枢神经系统。肝脏上分布有5-HT2A，2B受体。已知5-HT2A受体具有收缩血管、促血小板聚集、加快心率和介导神经内分泌的功能，血浆5-HT浓度升高与高血压、冠状动脉粥样硬化及心血管事件有关，5-HT2A受体的活化还能刺激某些激素分泌(如促肾上腺皮质激素、皮质酮、肾素等);5-HT2B受体的激活能够使基底平滑肌收缩，5-HT2B受体的活化也参与某些心血管疾病的发展变化。5-HT转运体(serotonin transporter,SERT)在5-HT的降解及再摄取中起着重要作用，在数量和作用时间上对5-HT能神经传递进行精细的调控。SERT属于Na+/Cl_依赖性神经地址转运蛋白基因家族，包括单胺类(NE、DA、5_HT)、抑制性氨基酸(gamma aminobutyric acid, GABA)转运蛋白，通过吸收胞外释放的神经递质从而阻止神经递质对细胞外受体的作用。SERT主要分布于5-HT神经细胞处，除此之外，也分布于各类非神经细胞处，包括肺血管内皮细胞、心肌细胞、上皮细胞、肝细胞等。SERT在5-HT能系统中的功能是运输5-HT到大脑、血液和外周器官的同源和异源受体，若其发生改变，则5-HT和5-HT受体的合成、清除以及功能都将受到很大的影响，肝脏是外周5-HT清除的主要器官。目前，5-HT2受体与SERT在NAFLD中发挥着什么样的作用尚不清
λ·Μ
/E. ο5-HT2受体拮抗剂有很多，如麦角二乙胺(lysergide，LSD)、溴麦角二乙胺(bromolysergide, BOL)、美舍吉特(methysergide)、赛庚唳(cyproheptadine,也是一种抗组胺药)、苯噻唆(pizotifen)、节甲色胺(benanserin)、凯他舍林(ketanserin)和多种吩噻嗪类药物等[刘善慧，刘炳学，房泽岱主编；徐叔云，马传庚主审.英汉药理学辞典.北京中国医药科技出版社.1993.第519页.]。而选择性阻断5-HT2受体的拮抗剂有酮舍林(ketanserine)、辛那舍林(cinaserine)、米胺舍林(mianserine)、利坦舍林(ritanserine)和米氮平(mirtazapine)等。米氮平属于NA能和特异性5-HT能抗抑郁药，可阻断5-HT2和5-HT3受体，能选择性兴奋5-HT1受体。目前，米氮平临床主要用于抑郁症、焦虑躯体化症状、伴有睡眠障碍的抑郁症、伴有 自杀意念的抑郁、老年期抑郁症、共病躯体疾病患者、广泛性焦虑和惊恐障碍、创伤后应激障碍和精神分裂症等[左津淮.米氮平的临床作用[J]·天津药学，2004，16 (6) :53-6.]。选择性δ-ΗΤ 再摄取抑制剂(selective serotonin reuptake inhibitor, SSRI)主要是对5-HT转运体产生抑制作用，能有效地通过与5-HT转运体结合而抑制中枢神经系统突触前膜从突触间隙摄取5-HT，增加间隙中可供实际利用的5-HT，从而治疗抑郁。上市的主要有氟西汀(Fluoxetine)、帕罗西汀(Paroxetine)、西酞普兰(Citalopram)、舍曲林(Sertraline)、氟伏沙明(Fluvoxamine)、草酸S-西酞普兰(Escitalopram oxalate)等，广泛应用于临床抑郁症的治疗[张石革.选择性5-羟色胺再摄取抑制剂应用与评价.中国医院用药评价与分析.2007,7(3)，172-1751.]。另外，米氮平也具有5-HT再摄取抑制剂活性。目前尚无有关5-HT2受体拮抗剂和选择性5-HT再摄取抑制剂用于治疗非酒精性脂肪肝合并高脂血症等方面的研究报道。
发明内容
我们的研究首次发现肝细胞5-HT2A，2B受体、SERT在NAFLD形成中起明显作用，用5-HT2A；2B受体阻断剂或SERT抑制可有效治疗因高脂饲料导致的大鼠NAFLD及血脂紊乱。我们选取了米氮平、酮舍林作为非选择性及选择性5-HT2受体拮抗剂代表药物，米氮平、氟西汀作为非选择性及选择性5-HT再摄取抑制剂代表药物，发现米氮平、酮舍林和氟西汀对高脂饲料引起的大鼠NAFLD有明显治疗作用、也能明显减轻血脂紊乱状态，同时对肝细胞5-HT2A，2B受体、SERT基因表达有明显影响；用脂肪酸建立原代培养肝细胞脂质沉积模型，米氮平、酮舍林和氟西汀对肝细胞脂质沉积模型有明显的降低细胞内甘油三酯含量的作用。下面是本发明的部分试验过程及结果I. 5-HT2受体拮抗剂(如酮舍林)、转运体抑制剂(如氟西汀)及兼有两种作用的药物(如米氮平)治疗高脂饲料引起的脂肪肝及高血脂研究结果I. I实验方法40只雄性Wistar大鼠随机分为5组对照组(control group);高脂饲料组(high fat-diet，HFD，高脂饲料配方2%胆固醇+25%猪油+5%蔗糖+68%基础饲料)；高脂饲料+米氮平给药组(the high fat-diet+mirtazapine, MIR);高脂饲料+酮舍林给药组(the high fat-diet+ketanserin, KET);高脂饲料 + 氟西汀给药组(the highfat-diet+fluoxetine, FLX),每组动物各8只。动物单独笼养于普通鼠笼或刺激笼中(鼠笼大小与普通鼠笼相同)。各组间性别、体重无差别。保持室温、光照控制保证12h明、暗条件，普通水喂养。高脂饲料喂养组首先用高脂饲料喂养4周，然后各给药组在高脂饲料喂养的同时再经口给药各种药物。连续给药四周后取血、处死动物、取相应脏器并进行指标测量。I. 2给药剂量米氮平给药剂量10. Omg/kg.天,酮舍林给药剂量6mg/kg.天,氟西汀给药剂量
6.Omg/kg.天。给药体积1. 0ml/100g，所有药物均用O. 5% CMC-Na溶液配成所需浓度的混悬液，对照组及高脂饲料喂养组给以相同体积的O. 5% CMC-Na溶液。I. 3观察指标 大鼠体重和进食量；肝指数(HI)及内脏肥胖指数(VOI)测定(计算公式分别为HI (g/g) =肝脏重量(g)/体重(g)*100% ;V0I(g/g)=内脏脂肪重量(g)/体重(g)*100% )；肝脏指标TC含量、TG含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力、丙二醒(malonaldehyde, MDA)含量；肝组织相关因子基因表达逆转录PCR技术检测肝脏X受体a (LXRa )、过氧化物酶体增生物激活受体a (PPARa)及y (PPAR Y )、5-HT2A受体(5_HT2AR)、5_HT2B受体(5-HT2BR)和5-HT转运体(SERT)mRNA表达。其中，LXRa、PPARa、PPARy为核受体，与肝脂质沉积密切相关。引物LXR a 上游引物 5’GTACAACCCTGGGAGTGAGA 3’下游引物 5’ TAGCATCCGTGGGAACAT 3’PPARa 上游引物 5’ GTTCGCAGCTGTTTTGTGGG 3’下游引物 5’ CTTCAGTCTTGGCTCGCCTC 3’PPAR Y 上游引物 5’GACCACTCCCATTCCTTT 3’下游引物 5’GCTCTACTTTGATCGCACT 3’5-HT2AR 上游引物 5，GGATTTACCTGGATGTGC 3'下游引物 5’TGGATGGACCGTTGGAAG 3’5-HT2BR 上游引物 5’CAGCAGCAGAGGAAATGA 3’下游引物 5’ ATCCAGGGAAATGGCACA 3’SERT上游引物 5’CCCAACTGGCAGAAACTC 3’下游引物 5’ AAGATGATGGCAAAGAACG 3’内参GAPDH 上游引物 5’TATCGGACGCCTGGTTAC 3’下游引物 5’TGCTGACAATCTTGAGGGA 3’ ；肝组织病理切片观察；血清TC、TG、LDL、HDL、游离脂肪酸(FFA)、MDA浓度及SOD活力。I. 4研究结果所有数据统计学检测都用组间Student-t检测，p〈0. 05表示有明显统计学差异，p〈0. 01表示有非常明显统计学差异。下列所有表中数据用均值土标准差(歹± SD)表示，Ν=8 ;*ρ〈0· 05，#ρ〈0· 01与对照组比较；$Ρ<0. 05，$$ρ〈0· 01与模型组比较。I. 4. I体重和进食量结果
由图I和图2可见MIR、KET、FLX治疗，对HFD喂养大鼠的体重、进食量无明显影响(p>0. 05，与HFD模型组比较)。I. 4. 2肝指数HI和内脏肥胖指数VOI由图3和图4可见，MIR、KET、FLX治疗，对HFD喂养大鼠的肝脂数、内脏肥胖指数没有明显影响(P>0. 05,与HFD模型组比较)。I. 4. 3肝组织脂质及氧化应激指标表I药物对“高脂饲料致大鼠NAFLD”肝脂质及氧化应激的影响试验结果(SD，N=8)
权利要求
1.5-肌2受体拮抗剂或选择性5-HT再摄取抑制剂用于制备治疗非酒精性脂肪肝或非酒精性脂肪肝合并有高脂血症的药物的用途。
2.权利要求I的用途，其中5-HT2受体拮抗剂是米氮平或酮舍林。
3.权利要求I的用途，其中5-HT再摄取抑制剂是氟西汀或米氮平。
全文摘要
本发明涉及医药领域，具体涉及5-羟色胺2受体拮抗剂或转运体抑制剂治疗脂肪肝或高脂血症的用途。药理试验证明，5-羟色胺2受体拮抗剂或转运体抑制剂可有效治疗因高脂饲料导致的大鼠非酒精性脂肪肝及血脂紊乱，有望将5-羟色胺2受体拮抗剂或转运体抑制剂临床用于治疗脂肪肝或高脂血症。
文档编号A61P3/06GK102657868SQ20121017569
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月30日 优先权日2012年5月30日
发明者傅继华, 孙星, 李强, 胡梦云, 莫凌峰, 袁晓玲, 韩雪, 高思远 申请人:中国药科大学