专利名称：一种治疗脂肪肝的药物组合物及其质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及其制剂、制备方法和质量检测方法，具体涉及一种治疗脂肪肝的药物组合物及其制剂、制备方法和质量检测方法，属制药技术领域。
背景技术：
近年来，随着人们生活水平的不断提高和饮食结构的改变，脂肪肝的发病率呈明显上升趋势。脂肪肝的发病主要与肝脂质代谢异常、肥胖、长期大量饮酒、糖尿病、病毒性肝炎等有关，可逐渐进展为肝硬化、肝癌等终末期肝病。目前对脂肪肝的治疗以合理饮食、禁酒、增加运动为主的生活方式的干预较为有效，但患者依从性不够。临床上尚缺乏疗效较为理想的抗脂肪肝药，已报道的考来烯胺、烟酸肌醇酯、苯扎贝特、吉非罗齐等药物虽然可以从不同环节抑制脂肪肝，但不良反应多、疗程长、故临床应用受到限制。中医认为脂肪肝病因为酒食不节、或感受湿邪，或嗜食肥甘等而致肝失疏泄，湿热蕴结，血脉瘀阻而形成，在治疗脂肪肝方面具有明显优势。
发明内容
本发明目的在于提供一种治疗脂肪肝的药物组合物及其制剂，本发明第二个目的在于提供该药物组合物的制备方法，本发明第三个目的在于提供该药物组合物的质量检测方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的。本发明药物组合物的原料药组成为茵陈50 250重量份、龙胆40 200重量份、桅子15 85量份、大黄3 18重量份、白苟10 50重量份、甘草10 50重量份、二七14 70重量份、蛇胆I 6重量份、 牛黄I 4重量份、人工磨香O. 5 2. 5重量份。本发明药物组合物的原料药组成优选为茵陈150重量份、龙胆120重量份、桅子50重量份、大黄10重量份、白苟30重量份、甘草30重量份、三七42. 5重量份、蛇胆3. 5重量份、牛黄2. 5重量份、人工磨香I. 5重量份。本发明药物组合物的原料药组成优选为茵陈60重量份、龙胆190重量份、桅子18重量份、大黄16重量份、白苟12重量份、 甘草48重量份、三七15重量份、蛇胆6重量份、牛黄I重量份、人工麝香2. 5重量份。本发明药物组合物的原料药组成优选为茵陈240重量份、龙胆50重量份、桅子82重量份、大黄4重量份、白苟48重量份、 甘草12重量份、三七68重量份、蛇胆I重量份、牛黄4重量份、人工麝香O. 5重量份。本发明药物组合物的原料药组成优选为茵陈90重量份、龙胆170重量份、桅子30重量份、大黄14重量份、白苟18重量份、 甘草42重量份、三七25重量份、蛇胆4重量份、牛黄I. 5重量份、人工麝香2重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为茵陈210重量份、龙胆70重量份、桅子70重量份、大黄7重量份、白苟42重量份、 甘草18重量份、三七58重量份、蛇胆3重量份、牛黄3. 5重量份、人工麝香I重量份。本发明药物组合物的原料药组成优选为
茵陈120重量份、龙胆140重量份、桅子40重量份、大黄12重量份、白苟24重量份、甘草36重量份、三七35重量份、蛇胆5重量份、牛黄2重量份、人工麝香I. 5重量份。本发明药物组合物的原料药组成优选为茵陈180重量份、龙胆100重量份、桅子60重量份、大黄9重量份、白苟36重量份、 甘草24重量份、三七48重量份、蛇胆2重量份、牛黄3重量份、人工麝香I. 5重量份。取本发明中药组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的各种制剂包括但不限于散剂、片剂、茶剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、滴丸、丸剂、蜜丸、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、控释制剂、速释制剂、口服液体制剂或注射制剂。本发明中药组合物的制备方法包括如下步骤A.取大黄、白芍、三七粉碎得细粉1，取蛇胆、牛黄、人工麝香，粉碎得细粉2 ;B.取茵陈、龙胆、桅子、甘草等四味药材经过常规的中药水提、醇沉工艺，得稠膏；C.在稠膏中加入细粉I、细粉2及及常规辅料制备成临床可接受的制剂。所述步骤B具体可以为茵陈、龙胆、桅子、甘草四味药材加入水提取I 3次， 每次加5 10倍量水，每次I 3小时，滤过，合并滤液浓缩至40°C 50°C时相对密度为I. 200 I. 230;加乙醇使药液含醇量达70%，静置，取上清液，回收乙醇并继续浓缩至 900C- 100°C时相对密度为I. 25 - I. 30的稠膏。所述步骤C具体可以为在稠膏中加入细粉I、细粉2及及常规辅料，混合，制粒，干燥，制成口服固体制剂片剂、颗粒剂、胶囊剂、茶剂、散剂、丸剂。优选地，本发明中药组合物片剂的制备方法为A.取大黄、白芍、三七粉碎得细粉1，取蛇胆、牛黄、人工麝香，粉碎得细粉2 ;B.取茵陈、龙胆、桅子、甘草等四味药材加入水提取2次，第一次加8倍量水，第二次6倍量水，每次2小时，滤过，合并滤液浓缩至40°C 50°C时相对密度为I. 200 一 I. 230， 加乙醇使药液含醇量达70%，静置，取上清液，回收乙醇并继续浓缩至90°C — 100°C时相对密度为I. 25 - I. 30的稠膏；C.在稠膏中加入细粉I、细粉2及适量辅料混合制粒，干燥，压片，每片O. 5g，即得。本发明中药组合物制剂的质量检测方法包括如下鉴别方法中的一种或几种。a.取本发明药物组合物制剂日服用成品量的1/2，加甲醇20ml，加热回流30分钟， 滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使其溶解，作为供试品溶液；另取桅子苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含O. 5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各
6μ 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以10 30 :1 3 :1的醋酸乙酯一甲醇一水为展开齐U，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视； 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。b.取鉴别a项下的样品溶液，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8 μ 1，对照品溶液6 μ I,分别点于同一娃胶G薄层板上，以10 30 :1 3 :1的醋酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。所述的取对照品适量按中华人民共和国药典常规取样量而定。本发明药物组合物以清利湿热的要药茵陈为君药；龙胆可助茵陈清热燥湿、泻火解毒，为其臣药；桅子、蛇胆、大黄清热泻火解毒，牛黄清心泻火，加强君臣药清泻肝胆实火之功；肝为刚脏，喜条达而恶抑郁，故在苦寒之中加入苦酸微寒的白芍以养血、柔肝止痛； 以甘微苦温之田七、辛温之麝香活血消瘀，防苦寒伤中之弊，温性药物与苦寒药相伍又温而不燥，共为佐药。甘草甘平，助白芍缓急止痛，缓和药性且防苦寒之品伤胃，为使药。全方配伍合理，用药相宜，共奏清肝利胆，利湿退黄、活血消瘀的功效。本发明组合物制剂的鉴别方法通过对各药材的筛选，选择出鉴别药材，确定鉴别方法，实验结果显示样品斑点清晰，分离效果好，且阴性对照无干扰，可以达到对产品质量进行有效控制的目的。本发明中药组合物具有清肝利胆，消炎镇痛的功能。药效学比较试验表明能显著的降低脂肪肝模型大鼠血液中胆固醇(TC)和肝组织中胆固醇及脂质过氧化产物(MDA)的含量，对防治脂肪肝有一定的作用，可用于治疗急慢性肝炎、肝硬变。 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例I本发明组合物制剂对大白鼠实验性脂肪肝的药效比较试验一、实验目的观察本发明组合物制剂对大鼠脂肪肝(FLD)模型的作用，为本发明组合物制剂具有防治脂肪肝作用提供药效学实验依据。二、实验材料(一)实验动物清洁级大白鼠，SD, ，120 140g，110只，合格证0023665，上海斯莱克实验动物有限责任公司。(二)试验药物本发明组合物片剂(商品名片仔癀肝宝，按实施例I方法制备):未制剂原粉，呈黄褐色颗粒，每克含生药2. 916g,批号0608001。试验时用蒸懼水配制。(三)其他药品及试剂I、胆固醇白色结晶，生化试剂，北京奥博星生物技术责任有限公司，批号 20060911。2、脱氧胆酸钠类白色粉末，生化试剂，北京奥博星生物技术责任有限公司，批号 20060931。3、丙硫氧嘧啶片50mgX100片，南通精华制药有限公司，生产批号060201。4、吐温一80 :500ml，CP，天津市博迪化工有限公司，生产日期同批号2006年9月8曰。5、1,2-丙二醇500ml，AR，天津市博迪化工有限公司，生产日期同批号2006年9
月30日。6、无水乙醇500ml，AR，上海振兴化工一厂，批号20060830。7、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒南京建成生物研究所，批号20061107。8、丙二醛(MDA)试剂盒南京建成生物研究所，批号20061107。9、羟脯氨酸(HPY)试剂盒南京建成生物研究所，批号20061107。
10、甘油三酯(TG)试剂盒中生北控生物科技股份有限公司，批号061081。11、总胆固醇(TC)试剂盒中生北控生物科技股份有限公司，批号060281。12、丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒赖氏改良法,北京北化康泰临床试剂有限公司，批号060906o13、天门冬氨基转氨酶(AST)试剂盒赖氏改良法，北京北化康泰临床试剂有限公司，批号060904o14、三氯甲烷500ml，AR，汕头市达濠精细化学品公司，批号20060310。15、甲醇500ml，AR，上海振兴化工一厂，批号200609014。16、冰醋酸500ml，AR，上海振兴化工一厂，批号试一2005 — 11 — 01。17、东宝甘泰(复方蛋氨酸胆碱片):0. 43g/片(含药量0. 21g/片)，通化东宝药业、 有限公司，批号 060107。(四)主要仪器I、迈瑞BA-88半自动生化分析仪。2、分光光度计UV-9200。3、电子天平AL204梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司。4、恒温磁力搅拌器H01-3上海梅颖浦仪器仪表有限公司。三、实验方法(一)实验分组和剂量动物购进先适应性饲养一周。按体重分层随机分成9组，正常对照组10只，其余每组11只。临床用量样品均为lg，每日三次，换算为公斤剂量=3. 0 + 60kg=0. 05g/kg。大鼠剂量样品均选用lg/kg, 2g/kg和4g/kg三个剂量，即相当于人临床用量的 20,40和80倍，各组灌胃容量均为15ml/kg。I、正常对照组不造模，生理盐水灌胃；2、脂肪肝病模组造模+生理盐水灌胃；3、阳性对照组造模+东宝甘泰l.Og/kg。7、片仔癀肝宝高剂量组造模+肝宝 4. 0g/kgo8、片仔癀肝宝中剂量组造模+肝宝2. 0g/kgo9、片仔癀肝宝低剂量组造模+肝宝I. 0g/kgo(二)模型制作用酒精合并高脂饮食建立脂肪肝大鼠模型，采用脂肪乳灌胃法。脂肪乳配制取猪油25g放入烧杯中，磁力搅拌加热至100°C，加胆固醇10g，溶化， 再加入丙基硫氧喃唳lg，搅勻，加入20ml吐温一 80制成油相。另取一烧杯,加入50%乙醇 25ml,再加1.2 —丙二醇20ml,加热至60°C,然后再加入2g脱氧胆酸钠,搅拌全溶,制成水相。将水相缓慢加入油相，边加边混匀，即成脂肪乳100ml。冷藏备用，用时温热溶化。(三)给药方法与造模同时开始，每天上午灌胃给药，下午给脂肪乳15ml/kg灌胃(ig)，连续四周。(四)观察指标
I、一般情况观察包括精神状态、活动、毛发、大小便、食量(每日测饲料消耗量)、 每周测体重一次，并按体重计算脂肪乳量和药量灌胃。2、血清生化指标测定28天实验结束时，给水禁食12h，称重。断头取血3_4ml，一 30°C保存，测血清TC(总胆固醇)，TG (甘油三酯)，ALT (丙氨酸氨基转移酶)，AST(天门冬氨酸转氨酶)。3、肝脏外观观察和肝指数测定观察并记录肝色泽、质地，称肝重，计算肝指数(肝
重/体重比)。4、肝 TC、TG 的测定 取肝右叶组织O. 5g，用4. 5ml氯仿甲醇(2: 1，V: V)，抽取脂质，不时摇动，放置过夜，4000r/min，离心lOmin，取上清液可溶部分，用迈瑞BA-88半自动生化分析仪测定TC、 TG05、肝 MDA、SOD, HPY 的测定10%匀浆的制备同一部位取肝组织I. Og,加l_2ml冰生理盐水作匀浆后定容至 IOml。(I)SOD测定1%肝组织匀浆30 μ I，按SOD测试盒说明书操作；(2) MDA测定10%肝组织匀浆O. Iml，按MDA试剂盒说明书操作。(3)肝蛋白测定0. 5%肝组织匀浆50 μ 1，按考马斯亮兰试剂盒说明书操作。(4)羟脯氨酸测定(样本碱水解法)按羟脯氨酸测试盒说明书VI操作。实验数据用SPSS13. O统计软件处理，比较组间差异的显著性。四、实验结果(一)一般情况试验期间，正常组大鼠精神状态好，活动正常，毛发光泽，肤色红润，大小便正常，体重持续增长。模型组大鼠，造模一周后出现精神萎靡、活动减少，毛发无光泽，灌脂肪乳时显挣扎易怒现象，饲料消耗量比正常组少，体重增长较慢。第三周后出现稀软的大便，甚至溏便， 稀软便持续至第四周实验结束，且食量减少，体重增长缓慢。给肝宝大鼠一般情况比模型组稍好，第二周也出现毛发松脏，嗜睡，灌脂肪乳时呈现反抗挣扎的易怒现象，大鼠体重的增长，随着给药剂量的增加而减慢，其中高剂量组大鼠体重增长较病模组慢(ρ〈0. 05)。实验期间有的组出现个别动物死亡，结果见表I。表I实验期间大鼠体重(g)的变化(F 土 S )
权利要求
1.一种治疗脂肪肝的药物组合物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法中的一种或几种a.取药物组合物制剂日服用成品量的1/2，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使其溶解，作为供试品溶液；另取桅子苷对照品适量，加甲醇制成每 Iml含O. 5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6 μ 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以10 30 :1 3 :1的醋酸乙酯一甲醇一7jC为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；b.取鉴别a项下的样品溶液，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每 Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8 μ 1，对照品溶液 6 μ 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以10 30 :1 3 :1的醋酸乙酯一甲醇一7Κ为展开齐U，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视； 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；所述药物组合物制剂的原料药组成和制备方法为茵陈50 250重量份、龙胆40 200重量份、桅子15 85量份、大黄3 18重量份、白芍10 50重量份、甘草10 50重量份、二七14 70重量份、蛇胆I 6重量份、牛黄I 4重量份、人工磨香O. 5 2. 5重量份，取原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的制剂。
2.如权利要求I所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于该药物组合物片剂的质量检测方法中所述药物组合物制剂的原料药组成为茵陈60重量份、龙胆190重量份、桅子18重量份、大黄16重量份、白芍12重量份、甘草48重量份、三七15重量份、蛇胆6重量份、牛黄I重量份、人工磨香2. 5重量份。
3.如权利要求I所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于茵陈240重量份、龙胆50重量份、桅子82重量份、大黄4重量份、白芍48重量份、甘草 12重量份、三七68重量份、蛇胆I重量份、牛黄4重量份、人工磨香O. 5重量份。
4.如权利要求I所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于所述药物组合物制剂的原料药组成为茵陈90重量份、龙胆170重量份、桅子30重量份、大黄14重量份、白芍18重量份、甘草42重量份、三七25重量份、蛇胆4重量份、牛黄I. 5重量份、人工麝香2重量份。
5.如权利要求I所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于所述药物组合物制剂的原料药组成为茵陈210重量份、龙胆70重量份、桅子70重量份、大黄7重量份、白芍42重量份、甘草 18重量份、三七58重量份、蛇胆3重量份、牛黄3. 5重量份、人工磨香I重量份。
6.如权利要求I所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于所述药物组合物制剂的原料药组成为茵陈120重量份、龙胆140重量份、桅子40重量份、大黄12重量份、白芍24重量份、甘草36重量份、三七35重量份、蛇胆5重量份、牛黄2重量份、人工麝香I. 5重量份。
7.如权利要求I所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于所述药物组合物制剂的原料药组成为茵陈180重量份、龙胆100重量份、桅子60重量份、大黄9重量份、白芍36重量份、甘草24重量份、三七48重量份、蛇胆2重量份、牛黄3重量份、人工麝香I. 5重量份。
8.如权利要求1-7任一所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于所述药物组合物制剂由如下方法制成A.取大黄、白芍、三七粉碎得细粉1，取蛇胆、牛黄、人工麝香，粉碎得细粉2;B.取茵陈、龙胆、桅子、甘草等四味药材经过常规的中药水提、醇沉工艺，得稠膏；C.在稠膏中加入细粉I、细粉2及及常规辅料制备成临床可接受的制剂；所述步骤B具体可以为茵陈、龙胆、桅子、甘草四味药材加入水提取I 3次，每次加5 10倍量水，每次I 3小时，滤过，合并滤液浓缩至40°C 50°C时相对密度 为I. 200 I. 230 ;加乙醇使药液含醇量达70%，静置，取上清液，回收乙醇并继续浓缩至90°C — IOO0C 时相对密度为I. 25 - I. 3 0的稠膏；所述步骤C具体可以为在稠膏中加入细粉I、细粉2及及常规辅料，混合，制粒，干燥，制成口服固体制剂片剂、颗粒剂、胶囊剂、茶剂、散剂、丸剂。
9.如权利要求8所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于所述药物组合物制剂由如下方法制成A.取大黄、白芍、三七粉碎得细粉1，取蛇胆、牛黄、人工麝香，粉碎得细粉2;B.取茵陈、龙胆、桅子、甘草等四味药材加入水提取2次，第一次加8倍量水，第二次6 倍量水，每次2小时，滤过，合并滤液浓缩至40°C 50°C时相对密度为I. 200 — I. 230，加乙醇使药液含醇量达70%，静置，取上清液，回收乙醇并继续浓缩至90°C — 100°C时相对密度为I. 25-1. 30的稠膏；C.在稠膏中加入细粉I、细粉2及适量辅料混合制粒，干燥，压片，每片O.5g，即得。
10.如权利要求1-9任一所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法中的一种或几种a.取药物组合物制剂日服用成品量的1/2，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使其溶解，作为供试品溶液；另取桅子苷对照品适量，加甲醇制成每 Iml含O. 5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以25 2 1的醋酸乙酯一甲醇一水为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；b.取鉴别a项下的样品溶液，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每 Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8 μ 1，对照品溶液 6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以25 2 1的醋酸乙酯一甲醇一水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
全文摘要
本发明公开了一种治疗脂肪肝的药物组合物的质量检测方法，通过对各原料药材的筛选，选择出鉴别药材，确定鉴别方法采用照薄层色谱法试验，以醋酸乙酯—甲醇—水(2021)为展开剂，实验结果显示样品斑点清晰，分离效果好，且阴性对照无干扰。所述药物组合物的原料药组成为茵陈50～250重量份、龙胆40～200重量份、栀子15～85量份、大黄3～18重量份、白芍10～50重量份、甘草10～50重量份、三七14～70重量份、蛇胆1～6重量份、牛黄1～4重量份、人工麝香0.5～2.5重量份。
文档编号A61K36/744GK102692477SQ201210197570
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月14日 优先权日2012年6月14日
发明者于娟, 洪绯, 潘杰, 黄进明 申请人:漳州片仔癀药业股份有限公司