一种河豚毒素口服液态制剂及其制备方法

专利名称：一种河豚毒素口服液态制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及ー种河豚毒素ロ服液态制剂及其制备方法，属于医药技术领域。
背景技术：
近几年来，国内外对河豚毒素新药的研发十分火热。但是，迄今为止，尚未见有河豚毒素新药能够正式应用于临床。究其原因，可能与単一的河豚毒素不具有镇痛效果相关。国外有研究者发现，単一的河豚毒素水针剂用于镇痛很难见效，在临床试验中还经常出现受试者有中毒反应或局部疼痛的现象。现有技术中，有关河豚毒素软胶囊制剂主要是黄致强申请的发明专利，名称为“河飩毒素油相制剂的制备方法”，专利号为“ZL 200410080557. 7”。
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根据试验，现有技术存在以下不足之处
I)现有技术是将河豚毒素溶入动植物的油脂，因为河豚毒素被油脂包裹，无法完全从中分离出来，因而无法对有效物质的使用剂量进行检测，产品质量难以控制。本发明因为河豚毒素是溶入水溶性的物质，可以直接通过HPLC对有效物质进行含量检测，使产品的质量控制具有可操作性。2)现有技术是利用了脂溶性物质具有快速穿透血脑屏障(BBB)的特征，将河豚毒素溶入油脂。本发明是利用尿素、丙三醇、甘露醇、こ醇、半乳糖、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、乳酰胺等高滲透性物质能够打开血脑屏障(BBB)的特征，同样能够提高河豚毒素对血脑屏障(BBB)的穿透性。3)现有技术虽然具有良好的药效，但由于河豚毒素受到油脂包裹，在油剂中只能缓慢释放，造成河豚毒素起效较慢。本发明不存在这个问题，因此起效较快。

发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供ー种河豚毒素ロ服液态制剂及其制备方法。本发明的河豚毒素ロ服液态制剂，所述的ロ服液态制剂包含河豚毒素、助溶剂、增溶剂、抗氧化剂、防腐剤、开放血脑屏障的高滲透物质和辅料。所述的助溶剂选自醋酸、磷酸或柠檬酸及其钠盐。所述的增溶剂选自聚こ烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧こ烯氢化蓖麻油HEL-40、聚氧こ烯氢化蓖麻油HEL-20中的ー种或多种。所述的抗氧化剂选自还原型谷胱甘肽、こニ胺四こ酸ニ钠、植酸、抗坏血酸及其钠盐或异抗坏血酸及其钠盐。所述的防腐剂选自苯甲酸及其盐类、山梨酸及其盐类、脱氢こ酸及其钠盐、双こ酸钠、丙酸钙、乳酸钠或生物食品防腐剤。所述的开放血脑屏障的高滲透物质选自尿素、丙三醇、甘露醇、こ醇、半乳糖、果糖、葡萄糖、阿拉伯糖或乳酰胺。
所述的辅料为可食用非油脂类物质。所述的可食用非油脂类物质选自液体聚乙二醇、丙三醇、甘油明胶、果胶、蜂胶、海藻胶或琼脂。所述的液体聚乙二醇选自PEG-200、PEG-300、PEG-400、PEG-600。本发明的河豚毒素口服液态制剂的制备方法，包括以下步骤将河豚毒素通过助溶剂、增溶剂充分溶解，添加抗氧化剂、防腐剂，以及开放血脑屏障的高渗透物质，然后溶入辅料，制成河豚毒素口服液态制剂。本发明的河豚毒素口服液态制剂，在以下实验的基础上得出
I.河豚毒素在酸性水溶液中对小鼠不具有显著的镇痛作用。
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试验I.小鼠热板添足试验小鼠4组，其中3个给药组分别使用河豚毒素，含量为0. I ii g/ml、0. 2 u g/ml和0. 4 y g/ml，用量0. 2ml/只(ip)，I个对照组使用生理盐水，用量0.2ml/只(ip)。给药I小时后，采用小鼠热板添足试验法，观察并比较小鼠的痛阈值。结果显示，给药组给药后与给药前无显著差异(P > 0. 05)，与对照组也无显著差异(P >
0.05)。试验2.小鼠醋酸扭体试验小鼠4组，其中3个给药组分别使用河豚毒素，含量为0. I ii g/ml、0. 2 u g/ml和0. 4 y g/ml，用量0. 2ml/只(ip)，I个对照组使用生理盐水，用量0.2ml/只(ip)。给药I小时后，以0.6%醋酸溶液0.2ml注射各小鼠(ip)，观察小鼠15分钟内的扭体次数。结果显示，给药组与对照组无显著差异(P > 0. 05)。上述试验结果与蔡志基等人的试验结果一致。(蔡志基，黄致强，潘心富《国产河豚毒素的药理研究摘要》河北水产科技，1983，I :1-3)
可以得出单一的河豚毒素在酸性水溶液中对小鼠镇痛无显著作用。上述情况表明，河豚毒素水溶液不能镇痛的原因在于它不能穿透血脑屏障，只有让它透过血脑屏障进入大脑和中枢神经，才能产生治疗神经性疾病的效果。河豚毒素在油剂中镇痛效果很好，但质量控制非常困难。黄致强的发明专利，其名称为“河飩毒素油相制剂的制备方法”，专利号为“ZL200410080557. 7”，是将河豚毒素溶入动植物油脂制成口服河豚毒素制剂。该制剂具有非常显著的镇痛效果。该专利解决了河豚毒素穿透血脑屏障的难题，为河豚毒素的广泛应用创造了良好的开端。但是，按照该专利的方法制备的河豚毒素油相制剂质量控制非常困难，原因在于溶入油脂中的河豚毒素不能完全回收，搁置时间越长，回收的得率越低，尽管该专利产品的药效没有降低，但是产品中有效物质的含量很难得到准确的定量分析。上述情况表明，河豚毒素软胶囊的研制既要注重它的有效性，又要注重产品中河豚毒素含量检测的可操作性。本发明将河豚毒素的有效性与质量可控性结合起来。文献表明，河豚毒素通过酸性水溶液进入小鼠体内30min后，分布状况为血液10. 2%,肺 20. 2%,小肠 9. 0%,胃 5. 0%,肝 4. 0%,大肠 3. 4%,肾 5. 0%,心脏 0. 5%,脾 0. 2%,脑
0.09%。由此可见，河豚毒素在大脑中的分布只占总量的0. 09%，说明单一的河豚毒素在水剂中的很难透过血脑屏障(BBB)。(刘敏，赵创新等《河豚毒素在小鼠体内分布及代谢动力学》中国药理学通报2006 Apr =22-4-507-8)
本发明的发现，河豚毒素不但在油相制剂中能够穿透血脑屏障(BBB)，它在与尿素、丙三醇、甘露醇、乙醇、半乳糖、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、乳酰胺等具有高渗透特点的物质共溶后，同样可以穿透血脑屏障(BBB)，并随同这类物质透过大脑毛细血管，进入中枢神经系统，发挥药效。本发明所使用的河豚毒素载体均为水溶性物质，因此，能够比较容易地将河豚毒素从其中分离出来，不但保证河了豚毒素能够透过血脑屏障(BBB)，而且保证了河豚毒素含量的可控性和可检测性。本发明的河豚毒素口服制剂可用于镇痛和戒除药物依赖性，具有起效迅速、药效持久，安全性强等特征，产品质量控制具有可操作性，与现有技术相比，本发明具有如下技术效果
I)现有技术(即ZL 200410080557. 7)是将河豚毒素溶入动植物的油脂，本发明是将河豚毒素溶入非油脂类的物质。前者因为河豚毒素被油脂包裹，无法完全从中分离出来，因而无法对有效物质的使用剂量进行检测，产品质量难以控制。后者因为河豚毒素是溶入水溶·性物质，可以直接通过HPLC对有效物质进行含量检测，使产品的质量控制具有可操作性。2)现有技术(即ZL 200410080557. 7)是利用了脂溶性物质具有快速穿透血脑屏障(BBB)的特征，将河豚毒素溶入油脂。本发明是利用聚氧乙烯氢化蓖麻油P-40 (或HEL-40)包合药物所形成的乳粒能穿透血脑屏障(BBB)的特点，或同时利用尿素、丙三醇、甘露醇、乙醇、半乳糖、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、乳酰胺等物质的高渗透性，从而能增加河豚毒素进入中枢神经的比例，提高河豚毒素的生物利用度。3)现有技术(即ZL 200410080557. 7)研制的产品具有很好的药效，本发明研制的产品其药效与现有技术产品相同。但是，由于本发明产品中的河豚毒素未受到油脂的包裹，因此，药效的释放比现有技术的产品来得快。
具体实施例方式实施例I制备含量为2. 5微克/粒的河豚毒素软胶囊制剂
①取河豚毒素纯品50 mg,朽1檬酸94. 5 mg,朽1檬酸钠155. 5 mg,置入IOOml小烧杯中，加入纯水100ml，溶解，至澄清，取聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 5克，溶入河豚毒素水溶液中，搅
动，至澄清，备用。②取纯水100ml，置500ml烧杯中，溶入葡萄糖100 g，溶入谷胱甘肽100g，溶入山梨酸钾20g，常温下搅拌，边搅拌边将上述河豚毒素水溶液IOOml完全注入，再注入无水乙醇200ml，继续搅拌，备用。③取聚乙二醇(400) 1500ml，置2000ml烧杯中，加热，恒温60 °C，搅拌，至稀释状，停止加热，至常温后，边搅拌，边将含有上述含有河豚毒素、葡萄糖和乙醇的溶液完全注入，添加聚乙二醇(400)适量，调节总量至2000ml，继续搅拌，得河豚毒素种子制剂2000ml，备用。④取聚乙二醇(400) 2000ml，平分，置5000 ml烧杯，加热，恒温60 °C，搅拌至稀
释状，停止加热，至常温后，边搅拌边将上述河豚毒素种子制剂完全注入，继续搅拌，直至进入软胶囊生产线。⑤将上述河豚毒素制剂4000ml通过胶囊机制成软胶囊20000粒，每粒胶囊的装量为0. 2ml,河豚毒素的含量为2. 5微克/粒。
实施例2制备含量为2. 0微克/支的河豚毒素糖浆制剂
①取河豚毒素纯品5 mg,朽1檬酸9. 45 mg,朽1檬酸钠15. 55 mg,聚乙烯卩比咯烧酮(PVP)
5mg,置5ml西林瓶,加入医用纯水3ml,溶解,至澄清,备用。②取聚氧乙烯氢化蓖麻油HEL-40 5_10 ml，置IOOml烧杯，搅拌，加热，恒温60V，边搅拌，边将河豚毒素溶液3ml完全滴入，搅拌，至透明，得TTX/P40溶液。③取聚氧乙烯氢化蓖麻油HEL-20 10-30 ml，完全滴入上述TTX/P40溶液中，恒温60 V，搅拌，至透明，得TTX/P40 + P7溶液。④取纯水200 ml，置入250ml烧杯中，常温下搅拌，边搅拌，边将TTX/P40 + P7溶液完全注入，继续搅拌，使其乳化，得河豚毒素乳化液，备用。⑤取纯水24千克，置入30千克搅拌桶，搅拌，同时加入甘露醇2千克，葡萄糖4·千克，半乳糖2千克，边搅拌，边溶入抗坏血酸及其钠盐20克，溶入山梨酸钾20g，制成葡萄糖糖浆，备用。⑥将河豚毒素乳化液完全注入上述正在搅拌的葡萄糖糖浆中，继续搅拌，使其充分混合，同时,添加纯水,使其总量达到25千克。⑦将上述河豚毒素葡萄糖糖浆25千克进行分装，灌装入口服液专用小瓶，每瓶装量10 ml，制得河豚毒素口服糖浆2500支，河豚毒素的含量为2. 0微克/支。实施例3制备含量为2. 0微克/粒的河豚毒素软胶囊制剂
①取河豚毒素纯品40 mg，柠檬酸75. 6 mg，柠檬酸钠124. 4 mg，置入IOml称量瓶中，加纯水5ml，溶解，至澄清，得河豚毒素水溶液，备用。②取乙烯吡咯烷酮(PVP) 15g，置IOOml烧杯中，加纯水75ml，常温搅拌，至全溶，边搅拌，边将上述称量瓶中的河豚毒素水溶液完全滴入，再加入抗坏血酸10g，山梨酸钾IOg,食用色素适量，继续搅拌，至全溶，备用。③取丙三醇250ml，置入500ml烧杯中，加热至55 °C，恒温，边搅拌，边将上述TTX
水溶液完全注入，继续搅拌，得河豚毒素丙三醇溶液，备用。④取葡萄糖2000克，置5000ml烧杯，加纯水1500ml，至全溶，搅拌，加热至550C，恒温，加入丙三醇2000ml，搅拌，将上述河豚毒素丙三醇溶液完全注入，边搅拌边添加丙三醇，使其总量达到4000ml，继续搅拌，直至进入胶囊机。⑤将上述河豚毒素制剂4000ml通过胶囊机制成软胶囊20000粒，每粒胶囊的装量为0. 2ml,河豚毒素的含量为2. 0微克/粒。实施例4制备含量为I. 0微克/粒的河豚毒素软胶囊制剂
①取河豚毒素纯品20 mg，柠檬酸37. 8mg，柠檬酸钠62. 2mg，置入IOml称量瓶中，加纯水5ml，溶解，至澄清，得河豚毒素水溶液，备用。②取乙烯吡咯烷酮(PVP) 15g，置IOOml烧杯中，加纯水75ml，常温搅拌，至全溶，边搅拌，边将上述称量瓶中的河豚毒素水溶液完全滴入，再加入抗坏血酸10g，山梨酸钾IOg,食用色素适量，继续搅拌，至全溶，备用。③取无水乙醇150ml，置IOOOml烧杯中，常温下搅拌，边搅拌边将上述河豚毒素溶液完全注入，搅拌，边搅拌，边加入聚乙二醇(400)，使其总量达到1000ml，得河豚毒素种子溶液，备用。④取聚乙二醇(400)1000ml，置2000ml烧杯，加热至55 °C，恒温，搅拌，边搅拌边将上述河豚毒素种子溶液完全注入，得河豚毒素制剂2000ml，备用。⑤将上述河豚毒素制剂4000ml通过胶囊机制成软胶囊20000粒，每粒胶囊的装量为0. 2ml，河豚毒素的含量为I. 0微克/粒。实施例5河豚毒素口服液态制剂的药用效果检测
将以实施例1-3制备的河豚毒素制剂给志愿者食用，结果如下
I)徐某，男，59岁，肺癌晚期，疼痛不堪，每天注射3-5次杜冷丁仍不能完全镇痛。服用本发明的产品(含量为2. 0微克/粒的河豚毒素软胶囊)，起初3天，每天3次，每次3粒，后来逐渐减少，同时，杜冷丁的使用次数随之减少，10天后，每天服胶囊改为2次，每次服用I粒，每天注射杜冷丁降为2次。持续服药30天后，杜冷丁停止使用，疼痛得到控制。2)王某，女，61岁，类风湿性关节炎，手指关节肿大，双手各有3指弯曲，早晨疼痛比较严重，常年服用强的松，疼痛仍不能受到控制。服用本发明产品(含量为1.0微克/粒·的河豚毒素软胶囊)，持续30天，每天早晚各服I粒，强的松的用量从每天服3粒减少为每天服I粒，疼痛得到了完全控制。3)某肿瘤医院住院部有晚期癌症患者17人，其中有志愿者11人愿意服用本发明的产品。其中肺癌转移4人，肝癌转移2人，食道癌名胃癌转移3人，骨癌I人，淋巴癌I人。志愿者中，疼痛不停者5人，剧痛不停者6人；使用吗啡针剂4人，使用杜冷丁针剂5人，月艮用吗啡2人。给11名志愿者服用本发明的产品(河豚毒素含量为2. 5微克/粒的软胶囊)，同时还继续使用原来的镇痛方法，并逐渐以本发明产品取代原来使用的吗啡和杜冷丁。30天后，有2人无痛而终，有I人继续使用杜冷丁，从每天6次降为I次，其余8人都继续服用本发明产品，不再使用吗啡和杜冷丁针剂。4)温某，男，43岁，吸毒史10年，多使用海洛因一类毒品，间断注射苯丙胺类毒品，多次戒毒无效。后来，在使用丁丙诺啡(与微量河豚毒素共用)戒毒时，同时服用本发明产品(含量为2. 5微克/粒的河豚毒素软胶囊)，一个星期以后，停止注射丁丙诺啡，继续服用本发明产品，至今毒瘾未见复发，也未出现无法忍受的戒断反应。5)叶某，男，35岁，吸食海洛因5年，在戒毒所使用丁丙诺啡戒毒多次，形成丁丙诺啡依赖性，产生了戒了又吸，吸了又戒的后果。后来，在使用丁丙诺啡戒毒时服用本发明产品(河豚毒素含量为I微克/粒的软胶囊)，在戒断后继续服用，经过一年时间观察，至今未出现复发现象，心瘾同样消失。6)曹某，女，48岁，风湿性关节炎，浑身疼痛，四肢尤其严重，每天服用泼尼松3粒，疼痛仍无法缓解。后来，给服本发明产品河豚毒素糖浆(含量为2. 0微克/支)，3天后，泼尼松降为每天I粒，疼痛缓解，全身轻松，30天以后，疼痛完全消除，至今仍然服用本发明产品。
权利要求
1.一种河豚毒素口服液态制剂，其特征在于，所述的口服液态制剂包含河豚毒素、助溶齐U、增溶剂、抗氧化剂、防腐剂、开放血脑屏障的高渗透物质和辅料。
2.根据权利要求I所述的河豚毒素口服液态制剂，其特征在于，所述的助溶剂选自醋酸、磷酸或柠檬酸及其钠盐。
3.根据权利要求I所述的河豚毒素口服液态制剂，其特征在于，所述的增溶剂选自聚乙烯吡咯烷酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油ffiL-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油HEL-20中的一种或多种。
4.根据权利要求I所述的河豚毒素口服液态制剂，其特征在于，所述的抗氧化剂选自还原型谷胱甘肽、乙二胺四乙酸二钠、植酸、抗坏血酸及其钠盐或异抗坏血酸及其钠盐。
5.根据权利要求I所述的河豚毒素口服液态制剂，其特征在于，所述的防腐剂选自苯甲酸及其盐类、山梨酸及其盐类、脱氢乙酸及其钠盐、双乙酸钠、丙酸钙、乳酸钠或生物食品防腐剂。
6.根据权利要求I所述的河豚毒素口服液态制剂，其特征在于，所述的开放血脑屏障的高渗透物质选自尿素、丙三醇、甘露醇、乙醇、半乳糖、果糖、葡萄糖、阿拉伯糖或乳酰胺。
7.根据权利要求I所述的河豚毒素口服液态制剂，其特征在于，所述的辅料为可食用非油脂类物质。
8.根据权利要求I所述的河豚毒素口服液态制剂，其特征在于，所述的可食用非油脂类物质选自液体聚乙二醇、丙三醇、甘油明胶、果胶、蜂胶、海藻胶或琼脂。
9.根据权利要求I所述的河豚毒素口服液态制剂，其特征在于，所述的液体聚乙二醇选自 PEG-200、PEG-300、PEG-400 或 PEG-600。
10.根据权利要求1-9中任意一项所述的河豚毒素口服液态制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤将河豚毒素通过助溶剂、增溶剂充分溶解，添加抗氧化剂、防腐剂，以及开放血脑屏障的高渗透物质，然后溶入辅料，制成河豚毒素口服液态制剂。
全文摘要
本发明提供了一种河豚毒素口服液态制剂及其制备方法，所述的口服液态制剂包含河豚毒素、助溶剂、增溶剂、抗氧化剂、防腐剂、开放血脑屏障的高渗透物质和辅料。所述的制备方法包括将河豚毒素通过助溶剂、增溶剂充分溶解，添加抗氧化剂、防腐剂，以及开放血脑屏障的高渗透物质，然后溶入辅料，制成河豚毒素口服液态制剂。本发明的河豚毒素口服液态制剂可用于镇痛和戒除药物依赖性，具有起效迅速、药效持久，安全性强等特征，产品质量控制具有可操作性。
文档编号A61P25/30GK102784102SQ20121030953
公开日2012年11月21日 申请日期2012年8月28日 优先权日2012年8月28日
发明者汤波澜, 赵继红 申请人:汤波澜, 赵继红