专利名称：纳米颗粒混悬液包油－油包纳米药物制备微球的方法
技术领域：
本发明涉及药物微球制剂的制备方法，具体地说，是一种纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物(Ν/0/Ν)制备微球的方法，属于制药技术领域。
背景技术：
制药行业从药物发现，到临床的应用，最后一个环节是药物制剂。其中有一部分药物需要长期给药才能治愈，还有一部分需要靶向等局部给药。要达到这些目的，原料药必须要制备成相应的剂型。例如需要长期给药但在体内的半衰期短的药物，宜制备成缓释或控释剂型；对于一些肿瘤的治疗，需要一些药物靶向于病灶，例如靶向于肿瘤血管的栓塞微球制剂等。
关于微球制剂的制备方法，Shi等[Double walled POE/PLGA microspheres:encapsulation of water-soluble and water-insoluble proteins and their releaseproperties, Journal of Controlled Release,89 (2003):167 - 177]利用 W/0/W 方法把牛血清白蛋白(BSA)和环孢霉素A (CyA)包封在P0E/PLGA壳一核微球里，该方法利用最常见的W/0/W复乳法来制备双层微球，而该复乳的油水界面是公认的蛋白杀手，容易导致水溶性的蛋白在该界面聚集，同样致使包封率不高，存在不完全释放和突释等缺陷。Morita 等[Protein encapsulation into biodegradable microspheres by a novel S/0/ff emulsion method using poly (ethylene glycol) as a protein micronizationadjuvant, Journal of Controlled Release,69 (2000):435-444]用聚乙二醇(PEG)作为蛋白微粉化的赋形剂，即表面活性剂，然后用水包油一油包固体的方法把蛋白微囊包在生物可降解的微球里，该文献虽然利用新的s/0/w乳化法制备载蛋白微球，但只是改变了表面活性剂，将以前报道较多的聚乙烯醇(PVA)改为聚乙二醇(PEG)，这种改变仍不能克服包封率低，疏水性表面易引起局部微囊化及炎症的缺点。用常规的S/0、S/0/W和S/0/0方法制备的微球，由于表面疏水，容易导致体内组织微囊化及炎症等副作用，且药物突释易造成药物本身的毒副作用。关于纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物(Ν/0/Ν)制备微球的方法，目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物(Ν/0/Ν)制备微球的方法，以解决现有技术中微球制剂包封率低，不完全释放和突释，疏水性表面会引起局部微囊化及炎症的缺点。为实现上述目的，本发明采取的技术方案是
一种纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，包括以下步骤
(O将药物和药用辅料制备成纳米药物，所述药物在纳米药物中的重量百分比为0. 1% - 90%,药用辅料在纳米药物中的重量百分比为0% - 20 % ；
(2)将步骤(I)制备的纳米药物按照1:1 一 1:10的重量比分散在重量百分比浓度为O.5% - 80%聚合物的有机溶剂混合溶液中，形成均匀的混悬液，即油包纳米药物混悬液；
(3)将步骤(2)形成的油包纳米药物混悬液加入到含重量百分比为1%— 80%纳米颗粒的水混悬液或含重量百分比为1% - 80%纳米颗粒和重量百分比为O. 5% - 5%表面活性剂的水混悬液中，进行乳化，形成纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物复乳；
(4)将所述纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物复乳转移到含重量百分比为1%— 10%无机盐的水溶液中固化I一 4小时；
(5)将步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并洗涤所得微球，之后冻干，得到表面自组装有纳米颗粒且内部含有纳米药物的微球。步骤(I)中所述的纳米药物的制备包括以下步骤
将药物和药用辅料溶解在水中，然后加入多孔纳米颗粒，搅拌使得药物和药用辅料充分吸附在多孔纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成纳米药物；或
将药物和药用辅料溶解在水中形成药物水溶液，然后将药物水溶液转移到聚乙二醇水溶液中，充分混匀后于冰箱中预冻，之后冻干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并离心除去聚乙二醇得到纳米药物。所述的药物包括小分子药物和大分子药物，所述的小分子药物为化学药物，可选自肿瘤化疗类药物、治疗血管瘤的药物或抗生素类药物中的一种，所述的大分子药物为生物大分子药物，可选自蛋白大分子药物、疫苗、抗体、核酸或脂质体药物中的一种或几种，所述的药用辅料为注射用药用辅料。所述的肿瘤化疗类药物选自阿霉素、环磷酰胺、更生霉素、博莱霉素、柔红霉素、表阿霉素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡钼、卡莫司汀、司莫司汀、顺钼、依托泊苷、喜树碱及其衍生物、苯芥胆留醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、长春碱、长春新碱、它莫西芬、哌泊舒凡、环磷酰胺或氟他胺及其衍生物中的一种，所述的治疗血管瘤的药物选自泼尼松、普萘洛尔或雷帕霉素中的一种，所述的抗生素类药物选自环孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星或盐酸依匹斯汀中的一种。所述的生物大分子药物选自促红细胞生成素、重组人粒细胞集落刺激因子、粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子、疫苗、干扰素、生长激素、胰岛素、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、转化生长因子、胰岛素生长因子、血管内皮细胞生长因子、血小板生长因子、内皮生长因子、神经生长因子、骨衍生性生长因子、骨形成蛋白、组织多肽抗原、抗体、凝血因子VIII、凝血因子IX、遗传因子、反义核苷酸、小分子RNA或基因中的一种或几种。步骤(2)中所述的有机溶剂混合溶液中还添加有重量百分比为O. 1% - 20%的聚乙二醇或泊洛沙姆。步骤(2)中所述的有机溶剂混合溶液中聚合物重量百分比浓度为5% - 30%，所述的聚合物选自聚己内酯、聚乳酸、聚乳酸一羟基乙酸、聚乳酸一聚乙二醇、聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇或聚己内酯一聚乙二醇中的一种或几种，所述的有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮中的一种或几种。步骤(3)中所述的纳米颗粒重量百分比浓度为20% - 70%，所述的纳米颗粒为有机纳米颗粒或无机纳米颗粒，可选自聚苯乙烯纳米颗粒、交联葡聚糖纳米颗粒、二氧化娃纳米颗粒、二氧化钛纳米颗粒、轻基磷灰石纳米颗粒、四氧化三铁纳米颗粒、三氧化二铁颗粒、金纳米颗粒、三氧化二铝纳米颗粒、碳酸钙纳米颗粒、磷酸钙纳米颗粒、碳酸镁纳米颗粒、氢氧化镁纳米颗粒或银纳米颗粒中的一种或几种，所述的表面活性剂选自聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚山梨醇、乙基纤维素或吐温中的一种或几种。所述微球的粒径为I 一 500 Mffl，其表面自组装有一层纳米颗粒，所述微球中，药物的重量百分比为O. 01% - 40%，纳米颗粒的重量百分比为O. 01% - 96%，聚合物的重量百分比为3. 65% - 99. 98%，药用辅料的重量百分比为0% — 30%。所述微球的粒径为10 - 100 Mm。本发明的有益效果在于
I、本发明选择了合适的聚合物材料和制备微球的方法，制备的微球包封率高达80%以上，并且这种表面自组装有一层纳米颗粒的微球具有增强细胞黏附的作用，以及减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。2、采用本发明方法制备的微球，其粒径大小可以根据不同需要从I μ m到500 μπι进行调控，且制备过程不污染环境。3、本发明方法制备的微球，大大降低了药物突释，药物几乎完全释放，可以达到零级释放，释放的纳米药物可以局部高效被病变细胞摄取，从而减少药物本身的毒副作用，同时可以使药物在整个制备过程和治疗过程中保持高活性即不失活。4、采用本发明方法制成的微球制剂，其微粒表面光滑圆整，颗粒规整无粘连，其冻干粉剂为白色细腻、疏松的粉体，不会塌陷、不粘连，再分散性良好，可以运用到各种药物缓释或控释微球的制备及疫苗的佐剂制备中。
附图I是本发明实施例I制备所得微球的扫描电镜(SEM)照片。附图2是本发明实施例I制备所得微球的体外释放曲线。附图3是本发明实施例I制备所得微球的抗菌作用效果曲线。附图4是本发明实施例I制备所得微球的抗癌作用效果曲线。附图5是本发明实施例I制备所得微球与用S/0/W方法制备微球的体内组织相容性扫描电镜(SEM)照片。附图6是本发明实施例3制备所得微球的扫描电镜(SEM)照片。附图7是本发明实施例3制备所得微球的体外释放曲线。附图8是本发明实施例3制备所得微球的药效作用曲线。附图9是本发明实施例3制备所得微球与用S/0/W方法制备微球的体内组织相容性情况。附图10是本发明实施例5制备所得微球的体外释放曲线。附图11是本发明实施例5制备所得微球的药效作用曲线。附图12是本发明实施例7制备所得微球的药效作用曲线。附图13是本发明实施例9制备所得微球的药效作用曲线。附图14是本发明实施例13制备所得微球的药效作用曲线。附图15是本发明实施例15制备所得微球的药效作用曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例并参照附图对本发明作详细说明。应该理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用于限定本发明的保护范围。在实际应用中本领域技术人员根据本发明做出的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。需要说明的是，本发明技术方案中，所述的小分子药物为化学药物，可以是肿瘤化疗类药物、治疗血管瘤的药物或抗生素类药物中的一种，其中肿瘤化疗类药物选自阿霉素、环磷酰胺、更生霉素、博莱霉素、柔红霉素、表阿霉素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡钼、卡莫司汀(BCNU)、司莫司汀、顺钼、依托泊苷、喜树碱及其衍生物、苯芥胆留醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、长春碱、长春新碱、它莫西芬、哌泊舒凡、环磷酰胺或氟他胺及其衍生物等中的一种；治疗血管瘤的药物选自泼尼松、普萘洛尔或雷帕霉素等中的一种；抗生素类药物选自环孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星或盐酸依匹斯汀等中的一种。所述的大分子药物为生物大分子药物，选自蛋白大分子药物、疫苗 、抗体、核酸或脂质体药物中的一种或几种，具体指选自促红细胞生成素(ΕΡ0)、重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、疫苗、干扰素(IFN)、生长激素(GH)、胰岛素(Insulin)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子(TGF-β )、胰岛素生长因子(IGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板生长因子(TOGF)、内皮生长因子(EGF)、神经生长因子(NGF)、骨衍生性生长因子(BDGF)、骨形成蛋白(BMP),组织多肽抗原(TPA)、抗体(Antibody)、凝血因子VIII、凝血因子IX、遗传因子、反义核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA或基因(DNA)等中的一种或几种。所述的药用辅料为注射用药用辅料，可以是小糖类(如蔗糖、海藻糖、葡萄糖、麦芽糖或乳糖等)、多羟基类化合物(如甘露醇、山梨醇、甘油、1，2 —丙二醇、赤鲜糖醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚环氧乙烷或聚吡咯烷酮等)、多糖类化合物(如葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、淀粉、纤维素或环糊精等)、氨基酸化合物(如甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸或组氨酸等)或无机盐类物质(如锌盐、钙盐、铜盐、镁盐或钥盐等)中的一种或任意组合。所述的聚合物选自聚己内酯(PCL)、聚乳酸(PLA)、聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)、聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)、聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA — PEG)或聚己内酯一聚乙二醇(PCL - PEG)中的一种或几种。制备微球的步骤(2)中，所述的聚合物有机溶剂混合溶液中还添加有重量百分比为O. 1% - 20%的聚乙二醇(PEG)或泊洛沙姆(Poloxamer)。所述的有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮中的一种或几种，其中以二氯甲烷、乙酸乙酯或乙腈中的一种或几种有机溶剂为佳。所述的纳米颗粒为有机纳米颗粒或无机纳米颗粒，具体指选自聚苯乙烯纳米颗粒、交联葡聚糖纳米颗粒、二氧化娃纳米颗粒、二氧化钛纳米颗粒、轻基磷灰石纳米颗粒、四氧化三铁纳米颗粒、三氧化二铁颗粒、金纳米颗粒、三氧化二招纳米颗粒、碳酸韩纳米颗粒、磷酸钙纳米颗粒、碳酸镁纳米颗粒、氢氧化镁纳米颗粒或银纳米颗粒等中的一种或多种。制备微球的步骤(3 )中，所述的表面活性剂选自聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、泊洛沙姆(PoIoxamer)、聚山梨醇、乙基纤维素(EC)或吐温中的一种或几种。制备微球的步骤(2)中，所述的分散方式可选择乳化、涡旋或超声等，分散时间优选为I 一 5分钟。
制备微球的步骤(3)中，所述的加入方式可选择滴加、一次性加入、喷雾方式加入或倒入等；所述的乳化方式可选择乳化、涡旋或超声等，乳化时间为O. 1 — 5分钟。制备微球的步骤(4)中，所述的无机盐可选自氯化钠、氯化钾、硝酸钾或碳酸钠等；所述的转移方式可为滴加、一次性加入、喷雾方式加入或倒入等。制备微球的步骤(5)中，洗涤时可采用水、乙醇或乙醇一水混合液洗涤3 — 5次。一种纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备的微球，所述微球的粒径为1 一.500 Mm，较佳地为10 - 100 Mm，其表面组装有一层纳米颗粒；其中所述微球中，药物的重量百分比为O. 01% - 40%，纳米颗粒的重量百分比为O. 01% - 96%，聚合物的重量百分比为.3. 65% - 99. 98%，药用辅料的重量百分比为0% — 30%。实施例I载有小分子药物阿霉素微球的制备(一)
阿霉素具有抗菌作用和抗癌作用，载有阿霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的制备，包括如下步骤
(1)取20mg阿霉素溶解到O. 5 ml的水中，然后和多孔二氧化娃纳米颗粒20 mg搅拌.24小时，使得阿霉素充分吸附在多孔的二氧化硅纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤.3次，然后冻干形成阿霉素纳米药物；
(2)把上述阿霉素纳米药物和浓度为20%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比.1:9混合并超声5分钟形成均匀的混悬液，即油包阿霉素纳米药物(N/0)混悬液；
(3)把步骤(2)所得油包阿霉素纳米药物(N/0)混悬液滴加到50ml浓度为10% Cw/w)的银纳米颗粒水混悬液中，搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包阿霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包阿霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有阿霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球。本实施例所制得的微球中，药物的重量百分比为O. 35%，纳米颗粒的重量百分比为.96%，聚合物的重量百分比为3. 65%，药用辅料的重量百分比为0%。对本实施例制备的载有阿霉素的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球进行形貌表征、释放曲线测试、抗菌测试、抗癌测试及在体内组织相容性测试,并将其抗菌性、抗癌性及组织相容性与用S/0/W方法(详见李志平，李云富，张振亚，刘燕，曲燕燕，梅兴国，干扰素A-2b缓释微球的制备及影响因素考察，军事医学科学院院刊，2007，31 (5) :451-455)制备的微球进行对比，其中抗癌作用的测试条件为一次给药，总剂量与对照组水溶液组每天一次的共.15天的总剂量相同；组织相容性测试中，以微球注射部位出现纤维化的时间为标准计算时间。图1是本实施例中载有阿霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的扫描电镜(SEM)照片，其中，A为微球的扫描电镜图，B为微球的表面放大图，从图中可以看出，所制备的微球形态好，其表面自组装有一层银纳米颗粒，粒径在I 一 50 μπι。图2是本实施例中载有阿霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的体外释放曲线，从图中可以看出，所制备的微球几乎达到100%的药物释放率，突释非常小，几乎完全释放，基本可以达到零级释放，其体外释放性能符合要求。微球中阿霉素相对于其原始投加量的包封率为92. 0%(计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)。图3是本实施例中载有阿霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的抗菌作用曲线，所制备微球的抗菌效果从图中看，其抗菌作用比对照组的好。图4是本实施例中载有阿霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的抗癌作用曲线，所制备微球的抗癌作用效果比对照组的好，本实施例制备的微球约为100%，而对照组仅为80%。图5是本实施例中载有阿霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的相容性扫描电镜(SEM)照片，可看出用S/0/W方法制备的微球(图5A)在治疗后的3 — 6个月出现纤维化组织；而本实施例用Ν/0/Ν方法制备的微球(图5B)在治疗一年后也没有纤维组织的出现，即注射部位的微囊化不出现，从而克服了微囊化的产生。以本实施例方法制备的小分子药物微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞等。这种方法制备的微球包封率高，可以达到80%以上，且这种表面具有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。
实施例2载有小分子药物阿霉素微球的制备(二)
载有阿霉素纳米药物的聚己内酯(PCL)微球的制备，包括如下步骤
(1)取20mg阿霉素溶解到O. 5 ml的水中，然后和多孔二氧化钛纳米颗粒20 mg搅拌24小时，使得阿霉素充分吸附在多孔的二氧化钛纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤3次，然后冻干形成阿霉素纳米药物；
(2)把上述阿霉素纳米药物和浓度为O.5% (w/w)的PCL的乙酸乙酯溶液按照重量比1:10混合并超声5分钟形成均匀的混悬液，即油包阿霉素纳米药物(N/0)混悬液；
(3)把步骤(2)所得油包阿霉素纳米药物(N/0)混悬液滴加到50ml含10% (w/w)银纳米颗粒和1% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性剂的水混悬液中,搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包阿霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包阿霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为1% (w/w)的氯化钾水溶液中固化3小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有阿霉素纳米药物的聚己内酯(PCL)微球。本实施例所得的微球中，药物的重量百分比为O. 47%，纳米颗粒的重量百分比为83%，聚合物的重量百分比为16. 53%，药用辅料的重量百分比为0%。本实施例中载有阿霉素纳米药物的聚己内酯(PCL)微球形态好，其表面自组装有一层银纳米颗粒，粒径在10 - 100 μπι。微球的药物体外释放率几乎达到100%，突释非常小，几乎完全释放，基本可以达到零级释放，其体外释放性能符合要求。微球中阿霉素相对于其原始投加量的包封率为93. 5% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)。所制备微球的抗菌、抗癌效果较好，另外，采用Ν/0/Ν方法制备的微球在治疗一年后也没有纤维组织的出现，即注射部位的微囊化不出现，从而克服了微囊化的产生。实施例3载有大分子药物生长激素微球的制备(一)
生长激素具有细胞黏附作用和促进生长或延缓衰老作用，载有生长激素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的制备，包括如下步骤(1)取10mg生长激素和10 mg葡聚糖溶解到O. 4 ml的水中形成药物水溶液，然后把上述溶液转移到3. 2 ml浓度为5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混匀，然后在一 80°C冰箱预冻12小时，再用冻干机冻干，然后用二氯甲烷溶解PEG并离心除去PEG得到生长激素纳米药物；
(2)把上述生长激素纳米药物和浓度为30%(w/w)的PLGA的乙腈溶液按照重量比为1:8混合，并超声I分钟形成均匀的混悬液，即油包生长激素纳米药物(N/0)混悬液；
(3)把步骤(2)所得油包生长激素纳米药物(N/0)混悬液滴加到40ml浓度为20% (w/w)的轻基磷灰石纳米颗粒水混悬液中并超声O. I分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包生长激素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包生长激素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到浓度为10% (w/w)的氯化钠水溶液中固化4小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用乙醇洗涤5次，冻干后得到载有生长激素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球。本实施例中所制得微球中，药物的重量百分比为O. 17%，纳米颗粒的重量百分比为84. 45%，聚合物的重量百分比为15. 17%，药用辅料的重量百分比为O. 21%。对本实施例制备的载有生长激素的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA )微球进行形貌表征、释放曲线测试、药效测试及在体内组织相容性测试，并将其药效及组织相容性与用s/0/w方法制备的微球进行对比，其中药效测试条件为一次给药，总剂量与对照组水溶液组每天一次的共15天的总剂量相同。图6是本实施例中载有生长激素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的扫描电镜(SEM)照片，其中，A为微球的扫描电镜图，B为微球的表面放大图，从图中可以看出，所制备的微球形态好，其表面自组装有一层羟基磷灰石纳米颗粒，粒径在10 — 120 μπι。图7是本实施例中载有生长激素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的体外释放曲线，从图中可以看出，所制备的微球几乎达到100%的药物释放率，突释非常小，几乎完全释放，基本可以达到零级释放(各条曲线代表不同PLGA材料制备的微球，可以调控药物的不同释放时间，其中各个PLGA分别为2Α50/50:羟基乙酸-乳酸=1:1和分子量为20000_30000Da、 2A65/35:羟基乙酸-乳酸=0. 65:0. 35和分子量为20000-30000Da、3A50/50:羟基乙酸-乳酸=1:1和分子量为30000-47000Da、3A65/35:羟基乙酸-乳酸=0. 65:0. 35和分子量为30000-47000Da)，其体外释放性能符合要求。微球中生长激素相对于其原始投加量的包封率为91. 0% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)。图8是本实施例中载有生长激素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的药效作用曲线，微球组为本实施例方法制备的微球，对照组为用S/0/W方法制备的微球，空白组为不含药物的微球，可以看出，使用本实施例所制备的微球，体重增加比对照组的体重增加快，药效更好。图9是本实施例中载有生长激素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的组织相容性情况，从图中可以看出，所制备的微球(Ν/0/Ν组)的相容性比对照组的好，在治疗期间，在动物组织内没有出现注射部位的微囊化或纤维化。以本实施例方法制备的微球包封率高，最少可以达到80%，突释非常小，几乎完全释放，基本可以达到零级释放，同时由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与羟基磷灰石纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定，可以使生物大分子药物在整个制备过程和治疗过程中保持高活性，即不失活。而且这种表面具有纳米颗粒的生物大分子药物微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。本实施例方法制备的生物大分子药物微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。实施例4载有大分子药物生长激素微球的制备(二)
载有生长激素纳米药物的聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)微球的制备，包括如下步骤
(1)取10mg生长激素和10 mg纤维素溶解到O. 4 ml的水中形成药物水溶液，然后把上述溶液转移到3. 2 ml浓度为5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混匀，然后 在一 80°C冰箱预冻12小时，再用冻干机冻干，然后用二氯甲烷溶解PEG并离心除去PEG得到生长激素纳米药物；
(2)把上述生长激素纳米药物和浓度为5%(w/w)的PLA - PEG的二氯甲烷溶液按照重量比为1:5混合，并超声I分钟形成均匀的混悬液，即油包生长激素纳米药物(N/0)混悬液；
(3)把步骤(2)所得油包生长激素纳米药物(N/0)混悬液滴加到40ml含有20% (w/w)羟基磷灰石纳米颗粒和O. 5% (w/w)聚乙二醇(PEG)表面活性剂的水混悬液中并超声O. I分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包生长激素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包生长激素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化I小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用乙醇水溶液洗涤5次，冻干后得到载有生长激素纳米药物的聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)微球。本实施例中所制得微球中，药物的重量百分比为O. 17%，纳米颗粒的重量百分比为74. 15%，聚合物的重量百分比为25. 47%，药用辅料的重量百分比为O. 21%。本实施例中载有生长激素纳米药物的聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)微球形态好，其表面自组装有一层羟基磷灰石纳米颗粒，粒径在12 - 180 μπι。微球的药物体外释放率几乎达到100%，突释非常小，几乎完全释放，基本可以达到零级释放，其体外释放性能符合要求。微球中阿霉素相对于其原始投加量的包封率为94. 7%(计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)。所制备微球的药效较好，在治疗期间，在动物组织内没有出现注射部位的微囊化或纤维化。这种表面具有纳米颗粒的生物大分子药物微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与羟基磷灰石纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定，可以使大分子药物在整个制备过程和治疗过程中保持高活性，即不失活。实施例5载有大分子药物干扰素微球的制备(一)
干扰素具有抗菌作用和抗病毒效果，载有干扰素纳米药物的聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球的制备，包括如下步骤
(I)将5 mg干扰素和5 mg甘氨酸溶解到O. 2 ml的水中形成药物水溶液，然后把上述溶液转移到3. 2 ml的浓度为5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混匀，然后在一 80°C冰箱预冻12小时，再用冻干机冻干，然后用二氯甲烷溶解PEG并离心除去PEG得到干扰素纳米药物；
(2)把上述干扰素纳米药物和浓度为80%(w/w)的PLGA — PEG的乙腈溶液按照重量比为1:1混合并超声I分钟形成均匀的混悬液，即油包干扰素纳米药物(N/0)混悬液；
(3)把步骤(2)所得油包干扰素纳米药物(N/0)混悬液滴加到4ml浓度为20% (w/w)的二氧化钛纳米颗粒水混悬液中并超声2分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包干扰素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包干扰素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为10% (w/w)的氯化钠水溶液中固化4小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤4次，冻干后得到载有干扰素纳米药物的聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为O. 51%，纳米颗粒的重量百分比为89. 89%，聚合物的重量百分比为9. 04%，药用辅料的重量百分比为O. 56%。对本实施例制备的微球进行形貌表征，结果显示，制备的微球形态好，其表面自组装一层二氧化钛纳米颗粒，粒径在10 - 150 Mffl ;微球中干扰素相对于其原始投加量的包封率为95. 07% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)。本实施例所制得的微球的体外释放曲线如图10，可看出药物在体外释放几乎达到零级释放。微球的药效曲线如图11，Ν/0/Ν组为本实施例方法制备的微球，对照组为用S/0/W方法制备的微球，可看出本实施例微球抗病毒作用优于对照组。
这种方法制备的微球包封率高，可以达到80%以上，突释非常小和几乎完全释放，可以达到零级释放。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与二氧化钛纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定，可以使大分子药物在整个制备过程和治疗过程中保持高活性，即不失活。这种方法制备的干扰素微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，如肝炎；可以减少注射的频率和减轻病人的痛苦。实施例6载有大分子药物干扰素微球的制备(二)
载有干扰素纳米药物的聚己内酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球的制备，包括如下步骤
(1)将5mg干扰素和5 mg甘油溶解到O. 2 ml的水中形成药物水溶液，然后把上述溶液转移到3. 2 ml的浓度为5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混匀，然后在一80°C冰箱预冻12小时，再用冻干机冻干，然后用二氯甲烷溶解PEG并离心除去PEG得到干扰素纳米药物；
(2)把上述干扰素纳米药物和浓度为10%(w/w)的PCL - PEG的庚烷溶液按照重量比为1:8混合并超声I分钟形成均匀的混悬液，即油包干扰素纳米药物(N/0)混悬液，庚烷溶液中还含有O. 1% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步骤(2)所得油包干扰素纳米药物(N/0)混悬液滴加到4ml含50% (w/w) 二氧化钛纳米颗粒和5% (w/w)聚乙烯吡咯烷酮表面活性剂的水混悬液中并超声2分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包干扰素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包干扰素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为8% (w/w)的氯化钠水溶液中固化4小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用乙醇洗涤4次，冻干后得到载有干扰素纳米药物的聚己内酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为O. 51%，纳米颗粒的重量百分比为49.89 %，聚合物的重量百分比为49.04 %，药用辅料的重量百分比为O. 56%。本实施例制备的微球形态好，其表面自组装一层二氧化钛纳米颗粒，粒径在5 -260 Mm ;微球中干扰素相对于其原始投加量的包封率为93. 87% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)。本实施例所制得的微球在体外释放几乎达到零级释放，微球抗病毒和抗菌作用均优于对照组。这种方法制备的微球包封率高，突释非常小和几乎完全释放，可以达到零级释放。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与二氧化钛纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定，可以使大分子药物在整个制备过程和治疗过程中保持高活性，即不失活。这种方法制备的干扰素微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，如肝炎，可以减少注射的频率和减轻病人的痛苦。实施例7载有大分子药物EPO微球的制备(一)
促红细胞生成素(EPO)具有抗菌作用和治疗贫血作用，载有EPO纳米药物的聚己内酯(PCL)和聚乳酸(PLA)微球的制备，包括如下步骤
(1)将5mg EPO和5 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成药物水溶液，然后把上述溶液转移到3. 2 ml的浓度为5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混匀，然后在一80°C冰箱预冻12小时，再用冻干机冻干，然后用二氯甲烷溶解PEG并离心除去PEG得到EPO纳米药物；
(2)把上述EPO纳米药物和浓度为10%(w/w)的PCL和10% (w/w) PLA的氯仿溶液按照重量比为1:9混合并超声I分钟形成均匀的混悬液，即油包EPO纳米药物(N/0)混悬液；
(3)把步骤(2)所得油包EPO纳米药物(N/0)混悬液滴加到5ml浓度为20% (w/w)的轻基磷灰石纳米颗粒水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包EPO纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包EPO纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为1% (w/w)的氯化钠水溶液中固化I小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有EPO纳米药物的聚己内酯(PCL)和聚乳酸(PLA)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为O. 30%，纳米颗粒的重量百分比为71. 79%，聚合物的重量百分比为27. 55%，药用辅料的重量百分比为O. 36%。对本例制备的微球进行形貌表征，结果显示，所制备微球形态好，其表面自组装有一层羟基磷灰石纳米颗粒，粒径在50 - 220 Mm ;微球中EPO相对于其原始投加量的包封率为93. 33% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)，且实验表明其体外释放曲线也符合要求。本实施例制备的微球的药效曲线见图12，由图中可看出，本实施例制备的微球抗贫血效果和抗菌效果较好，与普通的药物颗粒治疗70天相比，效果都非常好。这种方法制备的微球包封率高，可以达到80%以上，突释非常小和几乎完全释放，可以达到零级释放。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与羟基磷灰石纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定，同时可以使EPO药物在整个制备过程和治疗过程保持高活性，即不失活。且这种表面具有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。本实施例方法制备的EPO微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗各种原因引起的贫血如肿瘤治疗引起的肾衰贫血，可以减少注射的频率和减轻病人的痛苦。实施例8载有大分子药物EPO微球的制备(二)
载有EPO纳米药物的聚己内酯(PCL)和聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA — PEG)微球的制备，包括如下步骤
(1)将5mg EPO和5 mg山梨醇溶解到O. 2 ml的水中形成药物水溶液，然后把上述溶液转移到3. 2 ml的浓度为5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混匀，然后在一80°C冰箱预冻12小时，再用冻干机冻干，然后用二氯甲烷溶解PEG并离心除去PEG得到EPO纳米药物；
(2)把上述EPO纳米药物和浓度为20%(w/w)的PCL和60% (w/w)的PLGA — PEG的丙 酮溶液按照重量比为1:2混合并超声2分钟形成均匀的混悬液，即油包EPO纳米药物(N/0)混悬液；
(3)把步骤(2)所得油包EPO纳米药物(N/0)混悬液滴加到5ml含有40% (w/w)羟基磷灰石纳米颗粒和5% (w/w)泊洛沙姆表面活性剂的水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包EPO纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包EPO纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为1% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有EPO纳米药物的聚己内酯(PCL)和聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为O. 36%，纳米颗粒的重量百分比为41. 79%，聚合物的重量百分比为57. 49%，药用辅料的重量百分比为O. 36%。对本例制备的微球形貌表征，结果显示所制备微球形态好，其表面自组装有一层羟基磷灰石纳米颗粒，粒径在40 - 250 Mm ;微球中EPO相对于其原始投加量的包封率为89. 8% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)，且实验表明其体外释放曲线也符合要求。本实施例制备的微球抗贫血效果和抗菌效果较好，与普通的药物颗粒治疗70天相比，效果都非常好。这种方法制备的微球包封率高，可以达到80%以上，突释非常小和几乎完全释放，可以达到零级释放。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与羟基磷灰石纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定，同时可以使EPO药物在整个制备过程和治疗过程保持高活性，即不失活。且这种表面具有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。本实施例方法制备的EPO微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗各种原因引起的贫血如肿瘤治疗引起的肾衰贫血，可以减少注射的频率和减轻病人的痛苦。实施例9载有大分子药物G-CSF微球的制备(一)
粒细胞集落刺激因子(G-CSF)具有抗菌作用和粒细胞增加作用，载有G-CSF纳米药物的聚己内酯(PCL)微球的制备，包括如下步骤
(I)将5 mg G-CSF和5 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成药物水溶液，然后把上述溶液转移到3. 2 ml的浓度为5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混匀，然后在一 80°C冰箱预冻12小时，再用冻干机冻干，然后用二氯甲烷溶解PEG并离心除去PEG得到G-CSF纳米药物；
(2)把上述G-CSF纳米药物和浓度为20%(w/w)的PCL的乙腈溶液按照重量比为1:9混合并超声5分钟形成均匀的混悬液，即油包G-CSF纳米药物(N/0)混悬液，乙腈溶液中还含有20% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步骤(2)所得油包G-CSF纳米药物(N/0)混悬液滴加到Iml浓度为70% (w/w)的羟基磷灰石纳米颗粒水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包G-CSF纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包G-CSF纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用乙醇洗涤3次，冻干后得到载有 G-CSF纳米药物的聚己内酯(PCL)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为O. 70%，纳米颗粒的重量百分比为44. 03%，聚合物的重量百分比为54. 72%，药用辅料的重量百分比为O. 55%。对本实施例制备的微球进行形貌表征，结果显示，制备的微球形态好，其表面自组装有一层羟基磷灰石纳米颗粒，粒径在I 一 500 Mm ;微球中G-CSF相对于其原始投加量的包封率为91. 8%(计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)，且实验表明其体外释放曲线也符合要求。该实施例微球的药效曲线如图13，其中Ν/0/Ν组为本实施例方法制备的微球，对照组为用S/0/W方法制备的微球，空白组为不含药物的微球，从图中可以看出，本实施例微球的药效明显优于对照组。本实施例方法制备的G-CSF微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗各种原因引起的白细胞减少症，可以减少注射的频率和减轻病人的痛苦。种方法制备的微球包封率高，可以达到80%以上，突释非常小和几乎完全释放，可以达到零级释放。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与羟基磷灰石纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定，同时可以使EPO药物在整个制备过程和治疗过程中保持高活性，即不失活。且这种表面具有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。实施例10载有大分子药物G-CSF微球的制备(二)
载有G-CSF纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的制备，包括如下步骤
(1)将5mg G-CSF和5 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成药物水溶液，然后把上述溶液转移到3. 2 ml的浓度为5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混匀，然后在一 80°C冰箱预冻12小时，再用冻干机冻干，然后用二氯甲烷溶解PEG并离心除去PEG得到G-CSF纳米药物；
(2)把上述G-CSF纳米药物和浓度为20%(w/w)的PLGA的二氯甲烷-乙酸乙酯(1: 1，v/v)溶液按照重量比为1:9混合并超声5分钟形成均匀的混悬液，即油包G-CSF纳米药物(N/0)混悬液，二氯甲烷-乙酸乙酯溶液中还含有O. 1% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步骤(2)所得油包G-CSF纳米药物(N/0)混悬液滴加到Iml含有20% (w/w)羟基磷灰石纳米颗粒和2% (w/w)聚山梨醇表面活性剂的水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包G-CSF纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包G-CSF纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有G-CSF纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为I. 70%，纳米颗粒的重量百分比为43. 03%，聚合物的重量百分比为54. 12%，药用辅料的重量百分比为I. 15%。对本例制备的微球进行形貌表征，结果显示微球形态好，其表面自组装有一层羟基磷灰石纳米颗粒，粒径在I 一 450 Mm ;微球中G-CSF相对于其原始投加量的包封率为89. 9% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)，且实验表明其体外释放曲线也符合要求，微球的药效较好。本实施例方法制备的G-CSF微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗各种原因引起的白细胞减少症，可以减少注射的频率和减轻病人的痛苦。这种方法制备的微球包封率高，可以达到80%以上，突释非常小和几乎完全 释放，可以达到零级释放。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与轻基磷灰石纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定，同时可以使G-CSF药物在整个制备过程和治疗过程中保持高活性，即不失活。且这种具有纳米颗粒表面的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。实施例11载有小分子药物普萘洛尔微球的制备(一)
普萘洛尔具有抗菌作用和抗癌效果，载有普萘洛尔纳米药物的聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球的制备，包括如下步骤
(1)取20mg普萘洛尔溶解到O. 5 ml的水中，然后和20 mg多孔二氧化硅纳米颗粒搅拌24小时，使得普萘洛尔充分吸附在多孔的二氧化硅纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤3次，然后冻干形成普萘洛尔纳米药物；
(2)把上述普萘洛尔纳米药物和浓度为20%(w/w)的PLGA — PEG的二氯甲烷溶液按照重量比1:9混合并超声5分钟形成均匀的混悬液，即油包普萘洛尔纳米药物(N/0)混悬液；
(3)把步骤(2)所得油包普萘洛尔纳米药物(N/0)混悬液滴加到50ml浓度为10% (w/w)的银纳米颗粒水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包普萘洛尔纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包普萘洛尔纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有普萘洛尔纳米药物的聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为O. 35%，纳米颗粒的重量百分比为96%，聚合物的重量百分比为3. 65%，药用辅料的重量百分比为0%。对本实施例制备的微球进行形貌表征，结果显示，制备的微球形态好，表面自组装一层银纳米颗粒，粒径在20 - 450 Mffl ;微球中普萘洛尔相对于其原始投加量的的包封率为90% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)，且实验表明其体外释放曲线也符合要求。本实施例方法制备的普萘洛尔纳米药物微球可以适用于婴幼儿血管瘤治疗，可以减少注射的频率和减轻病人的痛苦。这种方法制备的微球包封率最少可以达到80%，突释非常小和几乎完全释放，可以达到零级释放。由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，且这种具有纳米颗粒表面的微球具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。实施例12载有小分子药物普萘洛尔微球的制备(二)
载有普萘洛尔纳米药物的聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球的制备，包括如下步骤
(1)取45mg普萘洛尔溶解到O. 5 ml的水中形成药物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅纳米颗粒搅拌24小时，使得普萘洛尔充分吸附在多孔的二氧化硅纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤3次，然后冻干形成普萘洛尔纳米药物；
(2)把上述普萘洛尔纳米药物和浓度为20%的PLGA- PEG的二氯甲烷溶液按照重量比I 10混合并超声5分钟形成均匀的混悬液，即油包普萘洛尔纳米药物(N/0)混悬液，二氯甲烷溶液中还含有20% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步骤(2)所得油包普萘洛尔纳米药物(N/0)混悬液滴加到50ml含浓度为10%(w/w)银纳米颗粒和5% (w/w)乙基纤维素表面活性剂的水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包普萘洛尔纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包普萘洛尔纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时； (5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有普萘洛尔纳米药物的聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为14.5%，纳米颗粒的重量百分比为
60.18%，聚合物的重量百分比为25. 32%，药用辅料的重量百分比为0%。对本例制备的微球进行形貌表征，结果显示，本实施例制备的微球形态好，其表面自组装有一层银纳米颗粒，粒径在10 - 400 Mffl ;微球中普萘洛尔相对于其原始投加量的包封率为93. 90% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)，且实验表明其体外释放曲线也符合要求。以本实施例方法制备的小分子药物微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞等。这种方法制备的微球包封率高，可以达到80%以上，且这种表面具有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。实施例13载有小分子药物泼尼松微球的制备
载有泼尼松纳米药物的聚己内酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球的制备，包括如下步骤
(1)取20mg泼尼松溶解到O. 5 ml的水中，然后和20 mg多孔二氧化娃纳米颗粒搅拌24小时，使得泼尼松充分吸附在多孔的二氧化硅纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤3次，然后冻干形成泼尼松纳米药物；
(2)把上述泼尼松纳米药物和浓度为30%(w/w)的PCL - PEG的二氯甲烷溶液按照重量比为1:9混合并超声I. 5分钟形成均匀的混悬液，即油包泼尼松纳米药物(N/0)混悬液；
(3)把步骤(2)的油包泼尼松纳米药物(N/0)混悬液滴加到Iml浓度为60% (w/w)羟基磷灰石纳米颗粒和1% (w/w)吐温表面活性剂的水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包泼尼松纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包泼尼松纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钾水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤5次，冻干后得到载有泼尼松纳米药物的聚己内酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为I. 29%，纳米颗粒的重量百分比为51. 72%，聚合物的重量百分比为46. 99%，药用辅料的重量百分比为0%。对本例制备的微球进行形貌表征，结果显示，本实施例制备的微球形态好，其表面自组装有一层羟基磷灰石纳米颗粒，粒径在I 一 400 Mffl ;微球中泼尼松相对于其原始投加量的包封率为81. 23% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)，且实验表明其体外释放曲线也符合要求。本实施例制备的泼尼松纳米药物聚己内酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球药效曲线如附图14，其中Ν/0/Ν组为本实施例方法制备的微球，对照组为用S/0/W方法制备的微球，从图中可见，本实施例微球的治疗效果明显优于对照组。 这种方法制备的泼尼松纳米药物微球可以适用于婴幼儿血管瘤的治疗，可以减少注射的频率和减轻病人的痛苦。本方法制备的微球包封率高最少可以达到80%，突释非常小和几乎完全释放，可以达到零级释放。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与羟基磷灰石纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定。且这种表面自组装有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。实施例14载有大分子药物乙肝疫苗微球的制备
载有乙肝疫苗纳米药物的聚己内酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球的制备，包括如下步
骤
(1)将5mg乙肝疫苗和10 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成药物水溶液，然后把多孔三氧化铝纳米颗粒20 mg加入上述溶液中搅拌24小时，使得乙肝疫苗及葡聚糖充分吸附在多孔的三氧化铝纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤3次，然后冻干形成乙肝疫苗纳米药物；
(2)把上述乙肝疫苗纳米药物和含有浓度为15%(w/w)的PCL - PEG的二氯甲烷溶液按照重量比为I: I混合并超声I. 5分钟形成均匀混悬液，即油包乙肝疫苗纳米药物(N/0)混悬液，二氯甲烷溶液中还含有10% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步骤(2)的油包乙肝疫苗纳米药物(N/0)混悬液滴加到Iml含有浓度为80% (w/w)交联葡聚糖纳米颗粒和O. 5% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性剂的水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包乙肝疫苗纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得纳米颗粒混悬液包油一油包乙肝疫苗纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用乙醇洗涤5次，冻干后得到载有乙肝疫苗纳米药物的聚己内酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为6. 15%，纳米颗粒的重量百分比为
61.54%，聚合物的重量百分比为7. 69%，药用辅料的重量百分比为24. 62%。对本实施例制备的微球进行形貌表征，结果显示，本实施例制备的微球形态好，其表面自组装有一层交联葡聚糖纳米颗粒，粒径在50 - 300 μ ;微球中乙肝疫苗相对于其原始投加量的包封率为82. 74% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)，且实验表明其体外释放曲线也符合要求，药用效果明显。这种方法制备的乙肝疫苗纳米药物微球可以适用于乙肝的防治，可以减少注射的频率和减轻病人 的痛苦；本方法制备的微球包封率高，最少可以达到80%，突释非常小和几乎完全释放，可以达到零级释放。这种表面自组装有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。实施例15载有小分子药物雷帕霉素微球的制备(一)
雷帕霉素具有抗菌作用和抗癌效果，载有雷帕霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)和聚乳酸(PLA)微球的制备，包括如下步骤
(1)取20mg雷帕霉素溶解到O. 5 ml的水中，然后和20 mg多孔二氧化娃纳米颗粒搅拌24小时，使得雷帕霉素充分吸附在多孔的二氧化硅纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤3次，然后冻干形成雷帕霉素纳米药物；
(2)把上述雷帕霉素纳米药物和浓度为12.5% (w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比为1:4混合并搅拌2. 5分钟，形成均匀的混悬液，再把I. 6 ml浓度为12. 5% (w/w)的PLA的乙酸乙酯溶液加到上述混悬液中，再搅拌2分钟形成均匀混悬液，即油包雷帕霉素纳米药物(N/0)混悬液；
(3)把步骤(2)的油包雷帕霉素纳米药物(N/0)混悬液滴加到2ml含浓度为10% (w/w)羟基磷灰石纳米颗粒和2% (w/w)聚乙二醇表面活性剂的水混悬液中并超声O. 5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包雷帕霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包雷帕霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钾水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有雷帕霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)和聚乳酸(PLA)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为I. 58%，纳米颗粒的重量百分比为60. 20%，聚合物的重量百分比为38. 22%，药用辅料的重量百分比为0%。对本实施例制备的微球进行形貌表征，结果显示，制备的微球形态好，其表面自组装有一层轻基磷灰石纳米颗粒，粒径在10 — 200 Mm ;微球中雷帕霉素纳米药物相对于其原始投加量的包封率为91. 84% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率)，且实验表明其体外释放曲线也符合要求。本实施例制备的雷帕霉素纳米药物聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)和聚乳酸(PLA)微球药效曲线如附图15，其中Ν/0/Ν组为本实施例方法制备的微球，对照组为用S/0/W方法制备的微球，从图中可见，本实施例微球的药效明显优于对照组。本实施例方法制备的微球可以适用于儿童血管瘤的治疗，可以减少注射的频率和减轻病人的痛苦。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与羟基磷灰石纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定。同时表面自组装有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。
实施例16载有小分子药物雷帕霉素微球的制备(二)
载有雷帕霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的制备，包括如下步骤
(1)取0.5mg雷帕霉素溶解到0.5 ml的水中形成药物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅纳米颗粒搅拌24小时，使得雷帕霉素充分吸附在多孔的二氧化硅纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤3次，然后冻干形成雷帕霉素纳米药物；
(2)把上述雷帕霉素纳米药物和浓度为20%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比1:9混合并超声5分钟形成均匀的混悬液，即油包雷帕霉素纳米药物(N/0)混悬液，二氯甲烷溶液中还含有10% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步骤(2)所得油包雷帕霉素纳米药物(N/0)混悬液滴加到50ml含有10% (w/w)银纳米颗粒和2% (w/w)聚乙烯吡咯烷酮表面活性剂的水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米 颗粒混悬液包油一油包雷帕霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包雷帕霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有雷帕霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为4. 17%，纳米颗粒的重量百分比为35. 71%，聚合物的重量百分比为60. 12%，药用辅料的重量百分比为0%。对本实施例制备的微球进行形貌表征，结果显示，本实施例制备的微球形态好，其表面自组装有一层银纳米颗粒，粒径在50 - 200 Mm ;微球中雷帕霉素相对于其原始投加量的包封率为98. 90% (计算方法为实际包封在微球的药/投入的药量X 100%=药物的包封率),且实验表明其体外释放曲线也符合要求。本实施例方法制备的小分子药物微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞等。这种方法制备的微球包封率高，最少可以达到80%。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与羟基磷灰石纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定。且这种表面具有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。实施例17载有小分子药物雷帕霉素微球的制备(三)
载有雷帕霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的制备，包括如下步骤
(1)取O.01 mg雷帕霉素溶解到O. I ml的水中形成药物水溶液,然后和20 mg多孔二氧化硅纳米颗粒搅拌24小时，使得雷帕霉素充分吸附在多孔的二氧化硅纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤3次，然后冻干形成雷帕霉素纳米药物；
(2)把上述雷帕霉素纳米药物和浓度为10%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比1:10混合并超声5分钟形成均匀的混悬液，即油包雷帕霉素纳米药物(N/0)混悬液，二氯甲烷溶液中还含有1% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步骤(2)所得油包雷帕霉素纳米药物(N/0)混悬液滴加到O.I ml浓度为1% (w/w)银纳米颗粒和2% (w/w)乙基纤维素表面活性剂的水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包雷帕霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包雷帕霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用乙醇洗涤3次，冻干后得到载有雷帕霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为O. 01%，纳米颗粒的重量百分比为O. 01%，聚合物的重量百分比为99. 98%，药用辅料的重量百分比为0%。本实施例方法制备的小分子药物微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如血管瘤等。由于纳米颗粒在材料降解产生的酸可以与羟基磷灰石纳米颗粒发生反应，从而中和酸，以保证微球的内环境相对稳定。这种方法制备的微球包封率高，可以达到80%以上，且这种表面具有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料 引起的炎症及微囊化的作用。实施例18载有小分子药物雷帕霉素微球的制备(四)
载有雷帕霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的制备，包括如下步骤
(1)取4mg雷帕霉素溶解到O. 2 ml的水中形成药物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅纳米颗粒搅拌24小时，使得雷帕霉素充分吸附在多孔的二氧化硅纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤3次，然后冻干形成雷帕霉素纳米药物；
(2)把上述雷帕霉素纳米药物和浓度为1%(w/w)的PLGA的乙腈溶液按照重量比1:1混合并超声5分钟形成均匀的混悬液，即油包雷帕霉素纳米药物(N/0)混悬液，乙腈溶液中还含有1% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步骤(2)所得油包雷帕霉素纳米药物(N/0)混悬液滴加到O.Iml浓度为4% (w/w)银纳米颗粒和1% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性剂和1% (w/w)聚山梨醇表面活性剂的水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包雷帕霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包雷帕霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有雷帕霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为4 O %，纳米颗粒的重量百分比为40%，聚合物的重量百分比为20%，药用辅料的重量百分比为0%。本实施例方法制备的小分子药物微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞等。这种方法制备的微球包封率高，可以达到80%以上，且这种表面具有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。实施例19载有小分子药物雷帕霉素微球的制备(五)
载有雷帕霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球的制备，包括如下步骤
(1)取3mg雷帕霉素和3 mg聚乙二醇溶解到O. 2 ml的水中形成药物水溶液,然后和20 mg多孔二氧化硅纳米颗粒搅拌24小时，使得雷帕霉素充分吸附在多孔的二氧化硅纳米颗粒里，离心去上清液，再充分洗涤3次，然后冻干形成雷帕霉素纳米药物；
(2)把上述雷帕霉素纳米药物和浓度为5%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比1:3混合并超声5分钟形成均匀的混悬液，即油包雷帕霉素纳米药物(N/0)混悬液，二氯甲烷溶液中还含有5% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步骤(2)所得油包雷帕霉素纳米药物(N/0)混悬液滴加到O.I ml含20% (w/w)银纳米颗粒和2% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性剂的水混悬液中并搅拌5分钟形成纳米颗粒混悬液包油一油包雷帕霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳；
(4)把步骤(3)所得的纳米颗粒混悬液包油一油包雷帕霉素纳米药物(Ν/0/Ν)复乳滴加到1000 ml浓度为5% (w/w)的氯化钠水溶液中固化2小时；
(5)把步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并用水洗涤3次，冻干后得到载有雷帕霉素纳米药物的聚乳酸一羟基乙酸(PLGA)微球。本实施例中所得微球中，药物的重量百分比为30%，纳米颗粒的重量百分比为20%，聚合物的重量百分比为20%，药用辅料的重量百分比为30%。
本实施例方法制备的小分子药物微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如血管瘤等。这种方法制备的微球包封率高，最少可以达到80%，且这种表面具有纳米颗粒的微球，由于表面亲水性材料的组织相容性比疏水性材料的好，具有增强细胞黏附、减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
权利要求
1.一种纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)将药物和药用辅料制备成纳米药物，所述药物在纳米药物中的重量百分比为O.1% - 90%，药用辅料在纳米药物中的重量百分比为0% - 20 % ； (2)将步骤(I)制备的纳米药物按照1:1一 1:10的重量比分散在重量百分比浓度为O.5% - 80%聚合物的有机溶剂混合溶液中，形成均匀的混悬液，即油包纳米药物混悬液； (3)将步骤(2)形成的油包纳米药物混悬液加入到含重量百分比为1%— 80%纳米颗粒的水混悬液或含重量百分比为1% - 80%纳米颗粒和重量百分比为O. 5% - 5%表面活性剂的水混悬液中，进行乳化，形成纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物复乳； (4)将所述纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物复乳转移到含重量百分比为1%— 10%无机盐的水溶液中固化I 一 4小时； (5)将步骤(4)所得样品进行离心，收集微球，并洗涤所得微球，之后冻干，得到表面自组装有纳米颗粒且内部含有纳米药物的微球。
2.根据权利要求I所述的纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，其特征在于，步骤(I)中所述的纳米药物的制备包括以下步骤 将药物和药用辅料溶解在水中，然后加入多孔纳米颗粒，搅拌使得药物和药用辅料充分吸附在多孔纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成纳米药物；或 将药物和药用辅料溶解在水中形成药物水溶液，然后将药物水溶液转移到聚乙二醇水溶液中，充分混匀后于冰箱中预冻，之后冻干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并离心除去聚乙二醇得到纳米药物。
3.根据权利要求I所述的纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，其特征在于，所述的药物包括小分子药物和大分子药物，所述的小分子药物为化学药物，可选自肿瘤化疗类药物、治疗血管瘤的药物或抗生素类药物中的一种，所述的大分子药物为生物大分子药物，可选自蛋白大分子药物、疫苗、抗体、核酸或脂质体药物中的一种或几种，所述的药用辅料为注射用药用辅料。
4.根据权利要求3所述的纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，其特征在于，所述的肿瘤化疗类药物选自阿霉素、环磷酰胺、更生霉素、博莱霉素、柔红霉素、表阿霉素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡钼、卡莫司汀、司莫司汀、顺钼、依托泊苷、喜树碱及其衍生物、苯芥胆留醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、长春碱、长春新碱、它莫西芬、哌泊舒凡、环磷酰胺或氟他胺及其衍生物中的一种，所述的治疗血管瘤的药物选自泼尼松、普萘洛尔或雷帕霉素中的一种，所述的抗生素类药物选自环孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星或盐酸依匹斯汀中的一种。
5.根据权利要求3所述的纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，其特征在于，所述的生物大分子药物选自促红细胞生成素、重组人粒细胞集落刺激因子、粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子、疫苗、干扰素、生长激素、胰岛素、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、转化生长因子、胰岛素生长因子、血管内皮细胞生长因子、血小板生长因子、内皮生长因子、神经生长因子、骨衍生性生长因子、骨形成蛋白、组织多肽抗原、抗体、凝血因子VIII、凝血因子IX、遗传因子、反义核苷酸、小分子RNA或基因中的一种或几种。
6.根据权利要求I所述的纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的有机溶剂混合溶液中还添加有重量百分比为O. 1% - 20%的聚乙二醇或泊洛沙姆。
7.根据权利要求I所述的纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的有机溶剂混合溶液中聚合物重量百分比浓度为5% — 30%，所述的聚合物选自聚己内酯、聚乳酸、聚乳酸一羟基乙酸、聚乳酸一聚乙二醇、聚羟基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇或聚己内酯一聚乙二醇中的一种或几种，所述的有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮中的一种或几种。
8.根据权利要求I所述的纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的纳米颗粒重量百分比浓度为20% - 70%，所述的纳米颗粒为有机纳米颗粒或无机纳米颗粒，可选自聚苯乙烯纳米颗粒、交联葡聚糖纳米颗粒、二氧化娃纳米颗粒、二氧化钛纳米颗粒、轻基磷灰石纳米颗粒、四氧化三铁纳米颗粒、三氧化二铁颗粒、金纳米颗粒、三氧化二铝纳米颗粒、碳酸钙纳米颗粒、磷酸钙纳米颗粒、碳酸镁纳米颗粒、氢氧化镁纳米颗粒或银纳米颗粒中的一种或几种，所述的表面活性剂选自聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚山梨醇、乙基纤维素或吐温中的一种或几种。
9.根据权利要求I所述的纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，其特征在于，所述微球的粒径为I 一 500 Mffl，其表面自组装有一层纳米颗粒，所述微球中，药物的重量百分比为O. 01% - 40%，纳米颗粒的重量百分比为O. 01% - 96%，聚合物的重量百分比为3. 65% - 99. 98%，药用辅料的重量百分比为0% — 30%。
10.根据权利要求9所述的纳米颗粒混悬液包油一油包纳米药物制备微球的方法，其特征在于，所述微球的粒径为10 - 100 Mm。
全文摘要
本发明公开了一种纳米颗粒混悬液包油－油包纳米药物制备微球的方法，该方法将药物和药用辅料制备成纳米药物，将所述纳米药物加到含有聚合物的有机溶剂混合溶液中进行乳化，然后将油包纳米药物混悬液加到含纳米颗粒或含纳米颗粒和表面活性剂的水混悬液中进行乳化得到纳米颗粒混悬液包油－油包纳米药物复乳，最后将所得复乳固化，离心收集微球，所制得的微球包括药物、纳米颗粒、聚合物和药用辅料。本发明选择了合适的聚合物材料和微球制备方法，制备的微球包封率高，其表面自组装的一层纳米颗粒具有增强细胞黏附作用，以及减少局部过酸和疏水材料引起的炎症及微囊化的作用，本发明方法可以运用到各种药物缓释或控释微球的制备中。
文档编号A61K47/34GK102885784SQ20121036163
公开日2013年1月23日 申请日期2012年9月26日 优先权日2012年9月26日
发明者袁伟恩, 陈英辉 申请人:复旦大学附属金山医院